Zebra Balıklarında Omurgalı Segmentasyonunu İncelemek için 3-D Kuyruk Eksplant Kültürü

3-B zebra balığı kuyruğu eksplantları, zebra balığı embriyolarının şeffaflığını somite gelişimi ve omurgalı segmentasyonu sırasında tam olarak kullanalım. Boş bir çiftleşme tankını balık sistemi suyu ile doldurun. Süzgeci sistem suyu ile temizleyin.

Çiftleşme çiftleri arasındaki engelleri kaldırın. Balık çiftini seçici olarak tatlı su deposuna taşıyın. Boş bir tankla su transferleri yoluyla süzgeçteki embriyoları toplayın.

Toplanan embriyoları balık sistemi suyuyla durulayın ve bir Petri kabına çevirin. Etanol-sır diseksiyon aletleri. Slaytlarda iki kat teyp yapın.

Derin odaların yatay kenarlarını kesin. Dikey kenarlı komple oda kesimleri. Bandı oda yüzeyinden soyun.

Hücre kültürü medyalarını bir tüpe dökün. Kalsiyum klorür 2.8 milimolar son konsantrasyonu karıştırın. Antibiyotik çözeltisi ekleyin.

Ayrı bir tüpte aliquot diseksiyon ortamı. Doku kültürünü orta hale getirmek için fetal sığır serumu iltifat. Embriyoları iğnelerle ilişkilendirin.

Embriyoları tatlı su kabında durulayın ve çıkarma için toplayın. Embriyoyu iğne ile stabilize edin ve yok etmeye başlayın. Kalan dokuları kesin.

Eksplantları kapak kapağına aktarın. Dokuyu düzleştirin ve fazla medyayı pipetle emin. Kapak kapağını slayt odası içeren büyüme ortamına koyun.

Explant dokuyu bir doku mendilinin üzerine koy. Hedefe daldırma yağı uygulayın. Slayt odasını mikroskop üzerine monte edin.

Görüntü alımı için lazer kanallarını ayarlayın. Örneğin z katmanı sınırlarını kontrol edin. Zaman görüntüleme ve z katmanlarını ayarlayın.

3-B kuyruk eksplant sistemi, tüm embriyolar gibi kuyruk tomurcuklarına ve fazla uzamaya hücre entegrasyonunu sağlam tutar. Ayrıca tip bir kolajen ile yüzeyi kimyasal olarak aktive ederek fazla uzamayı durdurmak mümkündür. 3-B zebra balığı kuyruk eksplantları sistemi, yüksek çözünürlüklü ve neredeyse objektif mikroskopi görüntüleri almamızı izin vererek zebra balığı embriyolarının şeffaflığını kullanmamızı sağlar.

Bunun yanı sıra, morfojen sinyalizasyonundan fazla uzamayı ayırmamızı ve ayrıca morfojen sinyal kaynaklarını basit diseksiyon yöntemleriyle kontrol etmemizi sağlar.