Bu protokolde kullanılan yöntemler ve görüntüleme modaliteleri, klinik çalışmalara geçmeden önce iskemik kalpte gen tedavisinin güvenilirliği ve etkinliğinin mükemmel bir görüntüsünü oluşturmaktadır. Bu tekniğin temel avantajları, iskemi modelinin düşük invazivliği, aynı zamanda gen terapisinin kalbin hipokinetik ancak hala uygulanabilir bölgelerine kesin olarak hedeflenmesidir. Saptanabilir herhangi bir perikardiyal sıvıyı değerlendirmek ve miyokard suşunu belirlemek için iskemi operasyonu, gen transferi ve ötenaziden önce transtorasik ekokardiyografi yaparak başlayın.
Dönüştürücüyü, mitral kapak seviyesinde, papiller kas ve apikal seviyelerde parasternal kısa eksen görünümlerine erişmek için domuzun sternumuna işaret eden bir işaretleyici ile domuzun koltuk altının altındaki üçüncü veya dördüncü interkostal boşluğa yerleştirin. Ardından bir klibi kaydetmek için acquire tuşuna basın. İskemi ameliyatından hemen önce koroner anjiyografinin yapılması için, sağ koroner arteri, sol yükselen koroner arteri ve sol ön inen arteri görüntülemek için iyot kontrast madde ile floroskopik kılavuzluk altında 6-F kateter kullanın.
Otoenjektörde sinema görüntülemesi için, bolus süresini üç saniyeye ve toplam hacmi 21 mililitreye ayarlayın ve ardından 5-F pigtail kateteri aracılığıyla sol ventriküle iyot kontrast madde uygulamak için tek ve evet tuşlarına basın. İstirahatte hayvanın sine-görüntülemesini yapın ve daha sonra stres indüksiyonu için intravenöz olarak dobutamin ve artan dozlar uygulayın. Dakikada 160 atımlık hedef kalp atış hızına ulaşıldığında, sine, görüntüleme yapar ve pigtail kateterini çıkarır.
Ejeksiyon fraksiyonunu hesaplamak için ölçüm yazılımını açın, söz konusu görüntünün ventriküler analizini seçin. Biri diyastolde, diğeri sistolde olmak üzere bir zaman dilimi seçmek için görüntüyü kaydırın ve ardından her zaman diliminin ventriküler ana hatlarını çizmek için bir araç seçin. Kronik miyokard iskemisini indüklemek için, gen transferinden 14 gün önce, sol koroner artere bir bobin yerleştirin ve darboğaz stentini sol koroner artere kaydırın ve stentleri distal olarak ilk diyagonale yerleştirin.
Darboğazı yerine sabitlemek için stent-lümen oranı 1.3 olan bir indeflatör kullanarak stentleri arterdeki nominal basınca kadar şişirin. Ek bir 15 saniye sonra, stentin söndürülmesi, ekipmanın arterden geri çekilmesi ve anjiyografi ile darboğaz stentinin doğru yerleştirilmesini sağlayın. Floroskopik kılavuzluk altında anjiyografi ve fonksiyonel ölçümlerden sonra, elektro anatomik haritalama için femoral kılıf aracılığıyla sol ventriküle bir haritalama kateteri sokunur ve sol ventrikülden en az 100 puan toplanır ve bir noktayı onaylamak için kabul et'e tıklayın.
Son haritada, uygulanabilirlik için, kriter olarak beş milivoltun üzerinde tek kutuplu bir voltaj kullanın. Hipokinezi için, mümkün olduğunca düşük, en az% 12 kadar düşük, ancak tercihen% 6'nın altında yerel bir doğrusal kısaltma seçinHayvanı ötenazi yaptıktan sonra, kalbi göğüs boşluğundan toplayın. Hasat edilen kalp durulandıktan sonra, aort kapağının üzerine 18 gauge'lik bir iğne yerleştirin ve iğneyi bir perfüzyon pompasına takın.
Kalbi 750 mililitre% 1 paraformaldehit ile perfüze edin. Kalbi bir santimetre kalınlığında dilimlemek için keskin bir bıçak kullanın ve gen transfer alanından örnekleri% 4 paraformaldehit ve sıvı azot halinde toplayın. Numuneleri% 4 paraformaldehit içinde dört santigrat derecede 48 saat boyunca boyamak üzere saklayın.
Gen tedavisinin etkinliği, 15O-su PET taraması ile çevresel suş, ejeksiyon fraksiyonu ve miyokard perfüzyonu ölçülerek analiz edildi. Doku örnekleri, kalbi elektro anatomik haritayla karşılaştırarak doğrudan gen transfer alanından toplanabilir. Transgen ekspresyonu ve terapötik anjiyogenez, Beta-galaktosidaz boyaması sonrası pozitif hücre sayısı analiz edilerek immün histolojik analiz ile ve trombosit/endotel hücre adezyon molekülü-1 boyaması sonrası miyokard kılcal bölgesi analiz edilerek değerlendirildi.
Darboğaz stentinin anjiyogram yoluyla yerleştirildiğini doğrulamak ve gen transfer alanından örnek almak önemlidir, bu da kalbi elektroanatomik haritayla karşılaştırarak doğrulanabilir. Genel olarak, tüm ölçümleri en tekrarlanabilir şekilde yapmak çok önemlidir.
