Protokolümüz önemlidir çünkü kalite kontrol kontrolü olarak saflığı sağlar. Ayrıca laktik asit bakteri fermantasyonunda ciddi fermantasyon performansını ve verim tutarlılığını teşvik eder. Bu tekniğin temel avantajı, laktik asit bakterilerinin fermantasyon performansını hücre saflığı, canlılığı ve işlevselliği yoluyla artırabilmesidir.
Bu teknik kullanıcı dostudur ve birçok teknik gereksinim olmadan sadece temel ekipmanların kullanılması nedeniyle herhangi bir kişi tarafından kolayca gerçekleştirilebilir. Philip Yeboah lisansüstü araştırma asistanımızdır ve prosedürü gösterecektir. Başlamak için, eksi 80 santigrat derece ultra düşük dondurucudan iki mililitre santrifüj tüplerinde laktik asit bakterilerinin veya LAB suşlarının hazırlanmış gliserol stokunu alın.
Kullanmadan önce çözülmelerine izin vermeyin. Santrifüj tüplerinin açıklığını% 70 alkol ve kullanmadan önce hafifçe vorteks ile temizleyin ve dezenfekte edin. Santrifüj tüplerinden taze iki mililitrelik MRS test tüplerine kadar stok LAB kültürünün yaklaşık 250 mikrolitresini pipetleyin.
Test tüplerini nazikçe vorteksleyin, parafilm haline getirin ve 12 ila 16 saat boyunca gece boyunca 42 santigrat derecede anaerobik olarak inkübe edin. Daha sonra, iki mililitrelik MRS test tüplerinden taze yedi mililitrelik MRS test tüplerine kadar bir gecede yetiştirilen kültürlerden yaklaşık 500 mikrolitre alın, vorteksin ve 12 ila 16 saat boyunca 42 santigrat derecede gece boyunca anaerobik olarak inkübe edin. UV görünür spektrofotometre ile 610 nanometrede kültürlerin optik yoğunluğunu veya büyümesini ölçerek mikrobiyal büyümeyi değerlendirin ve 0.7 ila 0.9 arasında kabul edilebilir sonuçlar kaydedin.
Gece kültürlerini yedi mililitrelik MRS tüplerinden MRS ve MRCMPYR agar plakalarına çizin ve 42 santigrat derecede 72 saat boyunca anaerobik olarak inkübe edin. İzole edilmiş kolonileri agar plakalarından seçin, taze yedi mililitrelik MRS test tüplerine, hafifçe girdaba aktarın ve 12 ila 16 saat boyunca 42 santigrat derecede gece boyunca anaerobik olarak inkübe edin. İzole edilmiş suşları içeren agar plakalarını buzdolabında bir hafta boyunca buzdolabında dört santigrat derecede saklayın.
Daha sonra, 610 nanometrede çizgili plakalardan izole edilen LAB kültürlerinin yedi mililitrelik MRS test tüplerinden optik yoğunluğu ölçün ve onaylayın ve bunları ilgili tüm deneyler için çalışma kültürleri olarak kullanın. 1 ila 10 oranı elde etmek için son yedi mililitrelik MRS test tüplerinden yetiştirilen LAB kültürlerinin on kat kirliliğini gerçekleştirmek için dokuz mililitre pepton suyu kullanın. Tüm fermantasyon deneyleri için uygun seri sanrılardan yaklaşık 250 mikrolitre alın ve suşları içeren suyu taze yedi mililitrelik MRS suyuna aktararak ve 16 saat boyunca 42 santigrat derecede anaerobik olarak inkübe ederek aktive edin.
LAB kültürlerinden canlı ve üstün hücre büyümesini sağlamak için adımları tekrarlayın. Kalite kontrol protokolü ile yetiştirilen S9 ve LB6 lactobacillus bulgaricus suşlarının ve kalite kontrol protokolü olmadan yetiştirilen S9 lactobacillus bulgaricus suşlarının hücre morfolojisi büyümesi burada gösterilmiştir. Suşlar üçlü olarak çizgilendi ve 72 saat boyunca 42 santigrat derecede anaerobik olarak inkübe edildi.
Bu prosedürü denerken, çapraz kontaminasyonu önlemek için stok kültür tüplerini dondurucudan% 70 alkol ile dezenfekte ettiğinizden emin olun. Büyüme kültürlerinin optik yoğunluk ölçümü her zaman 0.7 ile 0.9 arasında olmalıdır. Bu protokolü takiben, üstün kültür kullanımı ile verimli LAB fermantasyonları veya biyoişleme operasyonları elde edilebilir.
