Bu protokol, farelerde 10 haftaya kadar kronik sırt ağrısını indüklemek için invaziv olmayan bir yöntemi ana hatlarıyla belirtir ve bu, minimum eğitimle hızlı ve güvenilir bir şekilde gerçekleştirilebilir. Bu tekniğin en zor yönü, enjekte edilen bağın enjekte edilen kaslara karşı nasıl hissettiğini anlamaktır. Temas halinde direnç hissetmek bağ enjeksiyonunu gösterir.
Direnç olmaması, iğnenin kas veya karın boşluğunda olabileceği anlamına gelir. Başlamak için, fareyi yerleştirmek için steril düz bir yüzey alın. Ardından, enjeksiyondan hemen sonra fareleri transfer etmek için ameliyat kurulumunun yanına bir ısıtma yastığı kurtarma istasyonu yerleştirin.
Sonra, ürokinaz ve bir Hamilton şırıngası hazırlayın. Farenin anestezi altında geçirdiği süreyi en aza indirmek için çözeltiyi önceden çizin. Fareyi uyuşturduktan sonra, göğüs kafesinin altındaki L2 ve L3'teki lomber omurilik segmentlerini bulmak ve enjeksiyon bölgesini doğrulamak için iki parmağınızı kullanın.
Hamilton şırıngasının ucunu omurganın yanına yerleştirin. Şırıngayı yaklaşık 45 derecelik açıyla kemiğin hemen bitişiğindeki bağa yerleştirin. İğne ucunu nazikçe, ancak sıkıca bağa sokun ve beş mikrolitrenin tümü enjekte edilene kadar yavaşça enjekte edin.
İğneyi nazikçe ve yavaşça çıkarın. Ardından, fareyi uyanana ve mobil hale gelene kadar ısı geri kazanım istasyonuna yerleştirin. Tüm normal motor fonksiyonlarının devam ettiğinden emin olmak için ameliyattan sonra fareleri bir saat kontrol edin.
Ameliyattan sonra, herhangi bir enfeksiyon veya komplikasyonu önlemek için farelerin kilosunu ve enjeksiyon bölgesini bir hafta boyunca günlük olarak kontrol edin. Testten önce, her hayvanı test masasında bir ekran üstü olan ayrı bir şeffaf kabine taşıyın. Ardından, dört gram kuvvet ortaya çıkaran 3.61 Von Frey filamenti ile ayak pedini uyarın.
Üç ila beş uyaranın ayak çekilmesi olumlu bir yanıt olarak kabul edilir. Şimdi, hayvan mekanik stimülasyona yanıt vermeyi bırakana kadar serideki bir sonraki zayıf filamenti uygulayın. Bir yanıt ortaya çıkana kadar daha yüksek filamenti kullanın, ardından alt filamente geri dönün.
Bir eğri uydurma algoritması kullanarak, zamanın %50'sinde bir yanıt ortaya çıkarmak için gereken minimum kuvvet miktarı olan mekanik geri çekilme eşiğini hesaplayın. Hargreaves Testini gerçekleştirmek için, fareleri aşağıdan bir kızılötesi yayıcı tarafından ısıtılan bir cam yüzey üzerindeki kabinlere yerleştirin. Farenin arka pençesine kızılötesi ışık uyarıcısı uygulanmasından ayak gecikmesi olarak geri çekilmeye kadar geçen süreyi ölçün.
Soğuk Plaka Testi için fareleri eksi dokuz santigrat dereceye kadar soğutulmuş soğuk plaka aparatına yerleştirin. Farenin aparata yerleştirildikten sonra ayağını kaldırması için geçen süreyi, ayağı geri çekme gecikmesi olarak kaydedin. Anksiyete Testini gerçekleştirmek için, her hayvanı iki oda arasında bir geçiş yolu olan yer tercihi test kutusuna yerleştirin.
Bir aparat odası parlak bir şekilde aydınlatılmalı, karşı taraf ise karanlık kalmalıdır. Bir bilgisayar kullanarak, 10 dakikalık bir test sırasında hayvanın aydınlık ve karanlık doluluk sürelerini ve geçişlerini izleyin. Ardından, model kemirgenleri veya saf hayvanları sıfır labirentine yerleştirin veya iki odacıklı açık veya koyu yer tercih testini kullanın.
Bir kronometre kullanarak labirentin kapalı ve açık alanlarında geçirilen zamanı değerlendirin. Sükroz Sıçrama Depresyon Testi için, sırt koduna %10 ila %30'luk bir sükroz solüsyonu püskürtün ve 10 dakika boyunca tımarlamanın sıklığını, süresini ve gecikmesini puanlayın. Yeni nesne testleri yapmak için, fareleri ayrı ayrı bir saat boyunca üstü açık şeffaf plastik bir kafese alıştırın.
Beş dakika boyunca kafesin zıt köşelerine birbirinin aynısı iki oyuncak mini figür ekleyin. Test gününde hayvanları bir saat boyunca iklimlendirin ve iki özdeş mini figürü ev kafesine geri göndermeden önce beş dakika boyunca kafesin aynı konumlarına yerleştirin. Ardından, orijinal figürlerden birini belirgin şekilde farklı bir yeni nesneyle değiştirin.
Dört saat sonra, fareleri test kafesine geri koyun ve nesneleri keşfetmek için harcanan zamanı kaydedin. Motor fonksiyon değerlendirmesi için, bir kenarı uzunlamasına kesilmiş bir kağıt havlu tüpünden bir tünel oluşturun. Tüneli temiz bir yazıcı kağıdına yayın.
Fareleri sakinleşene kadar nazikçe tutun. Bir farenin pençelerine toksik olmayan Hindistan mürekkebini bir mürekkep kuyusuna, damga pedine yerleştirerek veya pamuklu çubuk kullanarak uygulayın. Tünel girişindeki fareleri serbest bırakın.
Tünelden geçmelerine ve sonunda onları yakalamalarına izin verin. Pati izlerini adım uzunluğuna, adım genişliğine ve parmak açıklığına göre puanlayın. Mekanik ve termal aşırı duyarlılık deneyleri, kronik sırt ağrısı farelerinin, naif kontrollere kıyasla mekanik, sıcak ve soğuk duyarlılığını önemli ölçüde artırdığını göstermiştir.
Anksiyete analizi, aydınlık ve karanlık kutunun ışık odasında geçirilen toplam sürenin ve yetiştirme olaylarının sayısının, kronik sırt ağrısı olan farelerde önemli ölçüde daha düşük olduğunu ve anksiyeteyi gösterdiğini gösterdi. Sükroz Sıçrama Testi sırasında, kronik sırt ağrısı olan fareler, daha düşük tımar süresi ve tımar sayısı sergiledi. Bununla birlikte, tımar başlamadan önceki süre önemli ölçüde artmıştır.
Kronik sırt ağrısı olan fareler ile naif fareler arasındaki adım uzunluğu önemli ölçüde farklıydı. Bu prosedürü denerken hatırlanması gereken en önemli şey, kası değil, omurga çevresindeki bağları hedeflediğinizdir. Kronik sırt ağrısı modeli, çeşitli yeni araştırmaları, farmakolojik ve diğer potansiyel terapötikleri değerlendirmek için güvenilir bir araç sağlar.
