Saha desteği için Ordu Tıp Üniversitesi İkinci Bağlı Hastanesi Beyin ve Sinir Cerrahisi Anabilim Dalı'na teşekkür ederiz. Finansman: Bu çalışma Çin Doğa Bilimleri Vakfı (82104696) tarafından desteklenmiştir.

Bu çalışmadaki deneyler, hayvan etiğinin "3R" ilkesine uygundur ve Ordu Tıp Üniversitesi (AMUWEC20234543) Laboratuvar Hayvanları Refahı ve Etnik Komitesi tarafından onaylanmıştır.
1. Kemirgen vücut sabitleme cihazının hazırlanması
<ol><li>Çin faydalı model patentine dayalı küçük bir hayvan tutucu tasarlayın9.</li>
	<li>Cihazı 3D baskı teknolojisi ile üretin.</li>
	<li>2 m uzunluğunda bir ip hazırlayın ve 6 ipe bölün. Bu 6 ipi fiksatördeki deliklerden geçirin. Halat uçlarını sabitlemek için yaylı tokayı kullanın, bu da döngü boyutu ayarını kolaylaştırır. NOT: Fiksatör, bir tasarım çizimine dayalı olarak 3D baskı teknolojisi ile donatılmış herhangi bir şirket tarafından üretilebilir. Cihazın tasarım çizimi Şekil 1'de gösterilmiştir. Bu çalışmada kullanılan fiksatör, kaynaşmış filament üretimi (FFF) olarak da bilinen kaynaşmış biriktirme modellemesi (FDM) adı verilen bir baskı yöntemiyle bir 3D yazıcı tarafından üretilmiştir10. Bu eklemeli üretim yöntemi, malzemeyi önceden belirlenmiş bir yolda eritilmiş formda seçici olarak biriktirerek tasarımın parçalarını katman katman yazdırır. İşlem, nihai fiziksel yapıyı oluşturmak için filamentler halinde gelen termoplastik polimerleri kullanır. Bu çalışmada kullanılan immobilizasyon aparatı, aynı anda üç hayvanı sabitleyebilir, altı halat gerektirir ve her hayvan bir çift halat gerektirir: biri boyun ve diğeri gövde için.</li>
</ol>2. Kemirgenlerin hazırlanması
<ol><li>3 Sprague-Dawley sıçanı (10-40 g, 7-45 günlük) ve 3 C57 BL / C faresi (5-40 g) satın alın.</li>
	<li>Hayvanları 12 saatlik gündüz/gece döngüsü, 21-23 °C ortam sıcaklığı ve %45-60 nem oranına sahip bir odada yetiştirin. Beslenme ortamını düzenli olarak dezenfekte edin ve havalandırın, hayvanların özgürce yiyip içmesine izin verin.</li>
</ol>3. Kemirgenlerin fiksatöre sabitlenmesi (yüzüstü pozisyon)
<ol><li>Kemirgenin başını, kemirgen yüzüstü pozisyonda olacak şekilde fiksatörün önündeki U şeklindeki deliğe yerleştirin. Kemirgenin vücudunu iki ip halkasından geçirin.</li>
	<li>İpleri kemirgenin boynuna ve karnına sabitleyin, kaçmamasını sağlayın, ancak solunum sıkıntısına ve ölüme neden olacak kadar sıkı değil.<ol><li>Anahtar adım, boynu yerine sabitlemektir. Kemirgenin boynu ile ip arasında 2-5 mm boşluk bırakın. İpin hayvanların boğulması için çok sıkı veya kaçamayacak kadar gevşek olmadığından emin olun.</li>
	</ol></li>
	<li>Diğer kemirgenleri de aynı şekilde cihaza sabitleyin.</li>
	<li>Fiksasyon prosedürünün neden olduğu potansiyel stres tepkisini en aza indirmek için yukarıdaki fiksasyon adımlarını (3.1-3.2) 3 gün boyunca tekrarlayın. Fiksasyon prosedürünü art arda 3 gün boyunca tekrarlayın ve her seans günde 5 dakika sürer. NOT: Sabitleme prosedürü sırasında kemirgenlerin aşırı gerilmediğinden emin olmak için prosedürü art arda 3 gün tekrarladık. Her seans günde 5 dakika sürdü ve farelerin veya sıçanların prosedüre alışması için yeterli zaman sağladı ve olası rahatsızlıkları en aza indirdi.</li>
	<li>4. Günden itibaren Strat EA.</li>
	<li>Hastalığın yayılmasını önlemek için, steril bir pamuklu çubuğu veya topu% 75 alkole batırın ve her kullanımdan önce ve sonra temizlemek ve dezenfekte etmek için tutucuyu iyice silin. Kemirgenleri tutarken olası sağlık risklerinden kaçınmak için eldiven ve diğer koruyucu ekipmanları kullanın.</li>
</ol>4. Farelerde veya genç sıçanlarda EA gerçekleştirme (MS6)
<ol><li>0,25 mm x 13 mm tek kullanımlık steril akupunktur iğneleri seçin.</li>
	<li>Akupunktur noktalarını anatomik konuma göre bulun ve akupunktur noktasındaki yerleştirme derinliğini onaylayın. NOT: MS6, başın yan tarafında bulunur. Baştaki bu bölge, anterior parietal (Du21) olarak da bilinen Shencong (Ex-hn1) ve Xuanli (GB6) arasındaki bağlantıdan geçer. MS6, kafa derisindeki serebral korteksin presantral girusunun ekspresyonuna karşılık gelir. Ex-hn1 başın ön-arka orta hattının orta noktasının 0,5 cm gerisinde bulunur. GB6, kulağın ön kısmının orta noktasında ve gözün uç açısında bulunur. Superior supratroklenar sinir, supraorbital sinir, oksipital sinir ve aurikülotemporal sinir içinde dağılmıştır. MS6 esas olarak motor bozukluklar gibi inme ve ensefalopatiyi tedavi etmek için kullanılır.</li>
	<li>Steril iğneleri yavaşça bükün ve sırasıyla 3 kemirgende subkutan boyunca anterior Shenchong'dan (Exhn1) Xuanli'ye (GB6) kadar 3/5 derinlikte MS6'ya yerleştirin.</li>
	<li>Bağlantı kablosunun bir tarafını EA cihazına bağlayın.</li>
	<li>Pozitif ve negatif EA klipslerini içeren bağlantı kablosunun diğer tarafını sol ve sağ MS6'daki akupunktur iğnesi saplarına bağlayın.</li>
	<li>EA enstrümanını açın.<ol><li>Frekansı ve işlev modunu ayarlamak için düğmeyi (İşlev/ Anahtar Seç) çevirin.</li>
		<li>Frekansı 10 Hz'e ayarlayın ve bir Sürekli Dalga modu seçin.</li>
		<li>Yoğunluğu ayarlamak için ilgili düğmeyi (Yoğunluğu Ayarla) çevirin. Her ayar yoğunluğu düğmesi, altına bağlı telin kemirgenlerinin mevcut gücünü kontrol eder. Akım yoğunluğunu, genellikle 1-2 mA olan ve 5 dakika süren kabul edilebilir kemirgen aralığına ayarlayın. NOT: Herhangi bir sıkıntı veya rahatsızlık yaşamadıklarından emin olmak için işlem sırasında kemirgenlerin nefes almalarını ve davranışlarını izlemek önemlidir. Sıçan mücadele ediyor veya acı çekiyor gibi görünüyorsa, prosedür derhal durdurulmalıdır.</li>
	</ol></li>
</ol>5. Kemirgenlerin fiksatöre sabitlenmesi (sırtüstü pozisyon)
<ol><li>Kemirgenin başlarını, kemirgen yüzüstü pozisyonda olacak şekilde fiksatörün önündeki U şeklindeki deliğe yerleştirin. Kemirgenin vücudunu iki ip halkasından geçirin.</li>
	<li>İpi kemirgenin boynuna ve karnına sabitleyin, kaçamayacağından emin olun, ancak solunum sıkıntısına ve ölüme neden olacak kadar sıkı değil. NOT: Sabitleme sırasında dikkat edilmesi gereken noktalar adım 3.2'deki ile aynıdır.</li>
	<li>Diğer kemirgenleri de aynı şekilde sabitleyin.</li>
	<li>Adım 3.4'te olduğu gibi, kemirgenlerin stres tepkisini azaltmak için yukarıdaki sabitleme adımlarını 3 gün boyunca tekrarlayın.</li>
	<li>4. Günden itibaren Strat EA. NOT: Dezenfeksiyon işlemi adım 3.6'da belirtildiği gibi gerçekleştirilir.</li>
</ol>6. EA (ST25) Gerçekleştirme
<ol><li>0,25 mm x 13 mm tek kullanımlık steril akupunktur iğneleri seçin.</li>
	<li>Akupunktur noktalarını anatomik konuma göre bulun ve akupunktur noktasındaki yerleştirme derinliğini onaylayın. NOT: ST25 göbek hizasında bulunur. Bu noktayı kemirgenlerde konumlandırmak, önce kemirgen pençesinin uzunluğunu ölçmeyi gerektirir. ST25, göbeğin yanındaki pençe uzunluğunun 2 / 3'ünde bulunur. Örneğin, kemirgenin ölçülen pençesi 0,6 cm ise, ST25 göbek deliğinin 0,4 cm sağında ve solunda bulunur.</li>
	<li>Steril iğneleri sırasıyla 3 kemirgen üzerinde 4-8 mm derinlikte ST25 bilateral içine yavaşça bükün ve nüfuz ettirin.</li>
	<li>Bağlantı kablosunun bir tarafını EA cihazına bağlayın.</li>
	<li>Pozitif ve negatif EA klipslerini içeren bağlantı kablosunun diğer tarafını sol ve sağ ST25'teki akupunktur iğnesi uçlarına bağlayın.</li>
	<li>EA enstrümanını açın.<ol><li>Frekansı ve işlev modunu ayarlamak için düğmeyi (İşlev/ Anahtar Seç) çevirin.</li>
		<li>Frekansı 10 Hz'e ayarlayın ve Sürekli Dalga Modu'nu seçin.</li>
		<li>Yoğunluğu ayarlamak için ilgili düğmeyi (Yoğunluğu Ayarla) çevirin. Her ayar yoğunluğu düğmesi, altına bağlı telin sıçanının mevcut gücünü kontrol eder. Akım yoğunluğunu, genellikle 1-2 mA olan ve 5 dakika süren kabul edilebilir kemirgen aralığına ayarlayın. NOT: Gözlemler adım 4.6'dakiyle aynıydı.</li>
	</ol></li>
</ol>

Küçük hayvanlarda toplu elektroakupunktur için 3D baskılı bir tutucu kullanma

<ol>
	<li>Lee, S., Kim, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+acupuncture+on+modulating+inflammatory+cytokines+in+rodent+animal+models+of+respiratory+disease:+A+systematic+review+and+meta-analysis.">The effect of acupuncture on modulating inflammatory cytokines in rodent animal models of respiratory disease: A systematic review and meta-analysis.</a> Frontiers in Immunology. 13, 878463 (2022).</li><li>Xin, Y. Y., Wang, J. X., Xu, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroacupuncture+ameliorates+neuroinflammation+in+animal+models.">Electroacupuncture ameliorates neuroinflammation in animal models.</a> Acupuncture in Medicine: Journal of the British Medical Acupuncture Society. 40 (5), 474-483 (2022).</li><li>Mengzhu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroacupuncture+at+Tianshu+(ST25)+and+Zusanli+(ST36)+alleviates+stress-induced+irritable+bowel+syndrome+in+mice+by+modulating+gut+microbiota+and+corticotropin-releasing+factor.">Electroacupuncture at Tianshu (ST25) and Zusanli (ST36) alleviates stress-induced irritable bowel syndrome in mice by modulating gut microbiota and corticotropin-releasing factor.</a> Journal of traditional Chinese medicine. 42 (5), 732-740 (2022).</li><li>Xu, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+attempt+of+re-mapping+acupoint+atlas+in+the+rat.">A new attempt of re-mapping acupoint atlas in the rat.</a> Acupuncture Research. 44 (1), 62-65 (2019).</li><li>Yin, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+proposed+transpositional+acupoint+system+in+a+mouse+and+rat+model.">A proposed transpositional acupoint system in a mouse and rat model.</a> Research in Veterinary Science. 84 (2), 159-165 (2008).</li><li>Cao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effectiveness+of+acupuncture+for+Parkinson's+disease:+An+overview+of+systematic+reviews.">The effectiveness of acupuncture for Parkinson's disease: An overview of systematic reviews.</a> Complementary Therapies in Medicine. 50, 102383 (2020).</li><li>Yang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+warming+moxibustion+Tianshu+(ST+25,+bilateral)+and+Qihai+(CV+6)+for+the+treatment+of+diarrhea-dominant+irritable+bowel+syndrome:+a+patient-blinded+pilot+trial+with+orthogonal+design.">Effect of warming moxibustion Tianshu (ST 25, bilateral) and Qihai (CV 6) for the treatment of diarrhea-dominant irritable bowel syndrome: a patient-blinded pilot trial with orthogonal design.</a> Journal of Traditional Chinese Medicine. 37 (4), 538-545 (2017).</li><li>Delcour, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+movement+restriction+leads+to+maladaptive+plasticity+in+the+sensorimotor+cortex+and+to+movement+disorders.">Early movement restriction leads to maladaptive plasticity in the sensorimotor cortex and to movement disorders.</a> Scientific Reports. 8 (1), 16328 (2018).</li><li>Zhifeng, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fixing+device+for+mice+body.">A fixing device for mice body.</a> China Patent. , (2023).</li><li>Ismail, K. I., Yap, T. C., Ahmed, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D-printed+fiber-reinforced+polymer+composites+by+fused+deposition+modelling+(FDM):+Fiber+length+and+fiber+implementation+techniques.">3D-printed fiber-reinforced polymer composites by fused deposition modelling (FDM): Fiber length and fiber implementation techniques.</a> Polymers. 14 (21), 4659 (2022).</li><li>Lu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+electroacupuncture+with+different+frequencies+in+the+treatment+of+chemotherapy-induced+peripheral+neuropathy:+A+study+protocol+for+a+randomized+controlled+trial.">Efficacy of electroacupuncture with different frequencies in the treatment of chemotherapy-induced peripheral neuropathy: A study protocol for a randomized controlled trial.</a> Frontiers in Neurology. 13, 843886 (2022).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+colonic+function+in+irritable+bowel+syndrome+rats+by+electroacupuncture+at+ST25+and+the+neurobiological+links+between+ST25+and+the+colon.">Modulation of colonic function in irritable bowel syndrome rats by electroacupuncture at ST25 and the neurobiological links between ST25 and the colon.</a> Frontiers in Neuroscience. 16, 930489 (2022).</li><li>Wang, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-inflammation+mechanism+of+electro-scalp+acupuncture+in+treatment+of+ischemic+stroke+based+on+IL-12+mediated+JAK/STAT+signaling+pathway.">Anti-inflammation mechanism of electro-scalp acupuncture in treatment of ischemic stroke based on IL-12 mediated JAK/STAT signaling pathway.</a> Chinese Acupuncture &amp; Moxibustion. 42 (10), 1137-1144 (2022).</li><li>Ren, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+design+of+a+plate+for+posterolateral+tibial+plateau+fractures+through+traditional+anterolateral+approach.">A novel design of a plate for posterolateral tibial plateau fractures through traditional anterolateral approach.</a> Scientific Reports. 8 (1), 16418 (2018).</li><li>Wu, L., Dong, Y., Zhu, C., Chen, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+and+mechanism+of+acupuncture+on+Alzheimer's+disease:+A+review.">Effect and mechanism of acupuncture on Alzheimer's disease: A review.</a> Frontiers in Aging Neuroscience. 15, 1035376 (2023).</li><li>Wu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroacupuncture+for+spinal+cord+injury:+A+scientific+study+of+traditional+medicine.">Electroacupuncture for spinal cord injury: A scientific study of traditional medicine.</a> Neurospine. 19 (3), 770-772 (2022).</li><li>Gozzi, A., Zerbi, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+brain+dysconnectivity+in+rodents.">Modeling brain dysconnectivity in rodents.</a> Biological Psychiatry. 93 (5), 419-429 (2023).</li><li>Denic, A., Macura, S. I., Mishra, P., Gamez, J. D., Rodriguez, M., Pirko, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRI+in+rodent+models+of+brain+disorders.">MRI in rodent models of brain disorders.</a> Neurotherapeutics. 8 (1), 3-18 (2011).</li><li>Cong-hui, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+observation+of+long-retaining+scalp+acupuncture+plus+interactive+training+for+upper-extremity+dysfunction+after+cerebral+stroke.">Efficacy observation of long-retaining scalp acupuncture plus interactive training for upper-extremity dysfunction after cerebral stroke.</a> Journal of Acupuncture and Tuina Science. 19, 43-48 (2021).</li><li>Kvist, L. J., Hall-Lord, M. L., Rydhstroem, H., Larsson, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomised-controlled+trial+in+Sweden+of+acupuncture+and+care+interventions+for+the+relief+of+inflammatory+symptoms+of+the+breast+during+lactation.">A randomised-controlled trial in Sweden of acupuncture and care interventions for the relief of inflammatory symptoms of the breast during lactation.</a> Midwifery. 23 (2), 184-195 (2007).</li><li>Boram, L., Chan-Young, K., Sun Haeng, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effectiveness+and+safety+of+auriculotherapy+for+breastfeeding:+a+systematic+review.">Effectiveness and safety of auriculotherapy for breastfeeding: a systematic review.</a> Journal of Traditional Chinese Medicine. 40 (5), 721-737 (2020).</li></ol>

Yazarlar, birbiriyle rekabet eden herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan etmişlerdir.

Elektroakupunktur (EA), akupunktur iğneleri üzerinde elektriksel stimülasyonun kullanılmasını içeren bir akupunktur şeklidir11. Bu teknik, akupunktur noktalarını uyarmak ve gelişmiş terapötik etkiler elde etmek için belirli yoğunluk ve frekansta mikro darbe akımlarının kullanılmasını içerir3. Bununla birlikte, EA'nın iyileşme mekanizması sınırlıdır ve 1,2,3'ü<sup class="xref"...

<a href="https://app.jove.com/t/6632">This corrects</a> the article <a href="https://dx.doi.org/10.3791/65648">10.3791/65648</a>

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65648">Bulk Electroacupuncture Operation for Mice or Young Rats</a>. Figure 3 was updated.

Erratum: Bulk Electroacupuncture Operation for Mice or Young Rats

Elektroakupunktur (EA) tedavisi, akupunktur iğnelerinin kafa derisine sokulduğu ve belirli noktaları uyarmak için bir elektro makineye bağlandığı benzersiz bir yöntemdir1. Manuel stimülasyondan farklı olarak, EA, optimal terapötik etkiler elde etmek için belirli frekansları ve dalga formlarını stabilize ederek stimülasyonun daha iyi kontrol edilmesini sağlar2. Bir ankete göre, Çin'deki tıbbi kurumların %81.2'si serebral palsi, nevralji, yüz felci ve diğer durumları tedavi etmek için EA veya manuel akupunktur kullanıyor. Popülerliğine rağmen, EA'nın spesifik etkinlik mekanizması hala bilinmemektedir, bu da nörolojik hastalıkların rehabilitasyon tedavisinde tanıtımını ve uygulanmasını engellemiştir 1,2,3. EA'nın etkinlik mekanizmasını tam olarak anlamak ve nörolojik hastalıkların rehabilitasyon tedavisinde kullanımını teşvik etmek için daha fazla araştırmaya ihtiyaç vardır.
Akupunkturun etkisi dünya çapında genişledikçe, birçok çalışma, sıçan veya fare modellerigibi kemirgen modellerinde gerçekleştirilen EA mekanizmalarını araştırmıştır 1,2,3. EA'nın kemirgen deneylerinde sıklıkla çeşitli sorunlarla karşılaşılır. Birincisi, uyanık denekler üzerinde yapılan akupunktur klinik uygulamayı daha iyi yansıttığından, kemirgenlerin anestezi olmadan nasıl hareketsiz hale getirileceğidir. Ek olarak, bazı deneyler tedavi etkilerini gözlemlemek için hayvanların uyanık olmasını gerektirir 2,3. Diğer bir zorluk, insanlardakilere karşılık gelen farelerde veya sıçanlarda akupunktur noktalarını doğru bir şekilde bulmaktır. Deneysel kemirgenlerde akupunktur noktalarının kesin lokalizasyonu şu anda birçok bilim adamı tarafından incelenmektedir 4,5. Bu protokolde, insan anatomik lokalizasyonunun dönüşümü ile kemirgenlerde açıkça tanımlanmış olan MS6 ve ST25 seçilmiştir. MS6, Parkinson hastalığı6 gibi bazı beyin hastalıklarının tedavisinde yaygın olarak kullanılır. ST25 genellikle ishal7 gibi gastrointestinal problemleri tedavi etmek için kullanılır. Bu iki akupunktur noktası, öncelikle kemirgenlerin hem sırtüstü hem de yüzüstü pozisyonlarda nasıl etkili bir şekilde hareketsiz hale getirilebileceğini göstermek için seçilmiştir. Ayrıca, bu akupunktur noktaları kapsamlı bir şekilde incelenmiştir ve araştırma amaçları için önemli bilgiler sunmaktadır 6,7.
Deneyler için tek bir fareyi hareketsiz hale getirmenin önceki yöntemi sadece zaman alıcı değil, aynı zamanda tek bir kişi tarafından idare edilmesi de zordur8. Ek olarak, hayvanların işbirliği yapmaması nedeniyle, pratikte başarı oranı nispeten düşüktür. Bu nedenle, deney verimliliğini artırmak için kararlı özelliklere sahip, kolayca kurulmuş bir hayvan modeli oluşturmaya kritik bir ihtiyaç vardır. Bu makalede, birden fazla kemirgeni kolayca hareketsiz hale getirebilen ve motor kısıtlamasına yol açabilen küçük hayvanlar için 3D baskılı bir tutucu tanıtıldı. Bu makalenin amacı, farelerin toplu olarak kısıtlanması, MS6 ve ST25 akupunktur noktalarının tanımlanması ve uyarılması stratejilerine odaklanarak, bir grup genç sıçan veya fareye EA tedavileri uygulamaktır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3D printing batch mice fixator</td>
			<td>MESH INVENT</td>
			<td>Custom made</td>
			<td>The fixator produced by 3D printer. The printing method is called fused deposition modeling (FDM), also known as fused filament fabrication (FFF).&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electroacupuncture instrument</td>
			<td>Hwato, Suzhou Medical Appliance Factory</td>
			<td>SDZ-III</td>
			<td>www.Hwato-med.com</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable sterile acupuncture needle</td>
			<td>Suzhou Medical Appliance Factory</td>
			<td>N/A</td>
			<td>0.25 mm x 13 mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bulk electroacupuncture operation for mice or young rats

Elektroakupunktur (EA), çeşitli sağlık durumlarını tedavi etmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Bununla birlikte, EA tedavisinin altında yatan mekanizma belirsizliğini korumakta ve bu da tanıtımını engellemektedir. Mekanik çalışma, bu sorunu çözmek için fare veya sıçan modelleri gerektirir. Bununla birlikte, bu hayvanlar zaman alıcı olan deneysel sürece itaatkar değildir. Bu sorunları çözmek için, EA'nın hayvan deneylerinin verimliliğini artırmak için 3D baskılı küçük hayvan vücudu toplu fiksatörü tasarladık. Bu videoda, farelerde veya genç sıçanlarda toplu EA gerçekleştirmek için fiksatörün nasıl kullanılacağı ayrıntılı olarak gösterilmektedir. Akupunktur noktalarının seçimi için, fiksasyon cihazının yüzüstü konumlandırma ve sırtüstü konumlandırma ile etkisini doğrulamak için verteks temporal (MS6 başı) ve Tianshu noktasının (ST25 göbek) anterior eğik çizgisi seçildi. 3D baskılı küçük hayvan tutucunun kullanılması, birden fazla kemirgenin aynı anda hareketsiz hale getirilmesine ve tedavi edilmesine olanak tanıyarak deney için gereken zamanı ve kaynakları azaltır. Bu teknik, farklı boyutlarda 3D baskı ile diğer hayvan modellerine uygulanabilir ve potansiyel olarak çeşitli sabitleme koşulları için kullanılabilir. Cihaz, EA'da deneysel bilimsel araştırmaların tanıtımı için faydalıdır.

Tasarladığımız hayvan vücudu fiksatörünün kat planı Şekil 1'de gösterilmiştir. Ek olarak, tasarımın kapsamlı bir görünümünü sağlamak için bu fiksatörün bir 3D grafik modeli sunulmuştur (Ek Dosya 1). Bu, 3 kemirgenin hareketsiz hale getirilmesine ve aynı anda EA gerçekleştirmesine izin veren bir cihazdır. Sıçanlar ve fareler uyanık durumda fiksatörle sınırlıydı ve hem yüzüstü hem de sırtüstü pozisyonlar kemirgenlere zarar vermeden s?...

Watch this Scientific Journal Video about Bulk Electroacupuncture Operation for Mice or Young Rats at JoVE.com

Yazar Spot Işığı: Eşzamanlı Çoklu Elektroakupunktur İşlemi için 3D Baskılı Bir Tutucu Kullanma

Burada, üç boyutlu (3D) baskılı bir tutucu kullanarak farelerde veya genç sıçanlarda verimli ve hızlı elektroakupunktur (EA) için bir protokol sunuyoruz. Bu teknik, birden fazla hayvan üzerinde aynı anda çalışmaya izin verir, zamandan tasarruf sağlar ve deneysel verimliliği artırır.

Fareler veya Genç Sıçanlar için Toplu Elektroakupunktur Operasyonu

Electroacupuncture (EA) is widely used to treat various health conditions. However, the underlying mechanism of EA treatment remains unclear, hindering ...

Bu videoda, elektroakupunkturu birden fazla uyanık fare veya sıçan üzerinde kullanmanın etkili bir yolunu sunuyoruz. Vezikal araştırmalarda, hayvan idrar yapıyor, ancak işbirlikçi değiller ve akupunktur sadece zaman alıyor. Bir diğer konu ise akupunkturun klinik olarak uygulanamayacağı anestezi ile ilgilidir.Bu sorunları ele almak için, 3D baskılı tutucu kullanarak birden fazla uyanık fare veya sıçan üzerinde elektroakupunktur gerçekleştirmenin etkili bir yöntemini gösteriyoruz. Protokolümüz, birden fazla hayvanı aynı anda tutmanın daha verimli ve daha güvenli bir yolunu göstermektedir, bu da immobilizasyonu immobilize eden diğer yöntemlerin aksine, bu yöntem sadece zaman kazandırmakla kalmaz, aynı zamanda deneysel başarı oranlarını da artırır. Ek olarak, cihaz, bir kişi tarafından çalıştırılabilen, kullanımı kolay olacak şekilde tasarlanmıştır.ProTech ve cihaz, elektroakupunkturda deneysel bilimsel araştırmaların tanıtımı için faydalıdır.

bulk-electroacupuncture-operation-for-mice-or-young-rats

Research

JoVE Journal

Biology

Bulk Electroacupuncture Operation for Mice or Young Rats

538 Görüntüleme.  Army Medical University. Bu videoda, elektroakupunkturu birden fazla uyanık fare veya sıçan üzerinde kullanmanın etkili bir yolunu sunuyoruz. Vezikal araştırmalarda, hayvan idrar yapıyor, ancak işbirlikçi değiller ve akupunktur sadece zaman alıyor. Bir diğer konu ise akupunkturun klinik olarak uygulanamayacağı anestezi ile ilgilidir.Bu sorunları ele almak için, 3D baskılı tutucu kullanarak birden fazla uyanık fare veya sıçan üzerinde elektroakupunktur gerçekleştirmenin etkili bir yönt...

Video: Yazar Spot Işığı: Eşzamanlı Çoklu Elektroakupunktur İşlemi için 3D Baskılı Bir Tutucu Kullanma

The Microfluidic Probe: Operation and Use for Localized Surface Processing

Microfluidic devices allow assays to be performed using minute amounts of sample and have recently been used to control the microenvironment of cells. Microfluidics is commonly associated with closed microchannels which limit their use to samples that can be introduced, and cultured in the case of cells, within a confined volume. On the other hand, micropipetting system have been used to locally perfuse cells and surfaces, notably using push-pull setups where one pipette acts as source and the other one as sink, but the confinement of the flow is difficult in three dimensions. Furthermore, pipettes are fragile and difficult to position and hence are used in static configuration only. 
The microfluidic probe (MFP) circumvents the constraints imposed by the construction of closed microfluidic channels and instead of enclosing the sample into the microfluidic system, the microfluidic flow can be directly delivered onto the sample, and scanned across the sample, using the MFP. . The injection and aspiration openings are located within a few tens of micrometers of one another so that a microjet injected into the gap is confined by the hydrodynamic forces of the surrounding liquid and entirely aspirated back into the other opening. The microjet can be flushed across the substrate surface and provides a precise tool for localized deposition/delivery of reagents which can be used over large areas by scanning the probe across the surface. 
In this video we present the microfluidic probe1 (MFP). We explain in detail how to assemble the MFP, mount it atop an inverted microscope, and align it relative to the substrate surface, and finally show how to use it to process a substrate surface immersed in a buffer.

In this video we present the microfluidic probe1 (MFP). We explain in detail how to assemble the MFP, mount it atop an inverted microscope, and align it relative to the substrate surface, and finally show how to use it to process a substrate surface immersed in a buffer solution.

Mikroakışkan Probe: Çalışma ve Yerelleştirilmiş Yüzey İşleme için kullanın

Microfluidic devices allow assays to be performed using minute amounts of sample and have recently been used to control the microenvironment of cells. ...

Biyoloji

Fabrication and Operation of an Oxygen Insert for Adherent Cellular Cultures 

Oxygen is a key modulator of many cellular pathways, but current devices permitting in vitro oxygen modulation fail to meet the needs of biomedical research. The hypoxic chamber offers a simple system to control oxygenation in standard culture vessels, but lacks precise temporal and spatial control over the oxygen concentration at the cell surface, preventing its application in studying a variety of physiological phenomena. Other systems have improved upon the hypoxic chamber, but require specialized knowledge and equipment for their operation, making them intimidating for the average researcher. A microfabricated insert for multiwell plates has been developed to more effectively control the temporal and spatial oxygen concentration to better model physiological phenomena found in vivo. The platform consists of a polydimethylsiloxane insert that nests into a standard multiwell plate and serves as a passive microfluidic gas network with a gas-permeable membrane aimed to modulate oxygen delivery to adherent cells. The device is simple to use and is connected to gas cylinders that provide the pressure to introduce the desired oxygen concentration into the platform. Fabrication involves a combination of standard SU-8 photolithography, replica molding, and defined PDMS spinning on a silicon wafer. The components of the device are bonded after surface treatment using a hand-held plasma system. Validation is accomplished with a planar fluorescent oxygen sensor. Equilibration time is on the order of minutes and a wide variety of oxygen profiles can be attained based on the device design, such as the cyclic profile achieved in this study, and even oxygen gradients to mimic those found in vivo. The device can be sterilized for cell culture using common methods without loss of function. The device's applicability to studying the in vitro wound healing response will be demonstrated.

Fabrication and Operation of an Oxygen Insert for Adherent Cellular Cultures

Fabrication and validation of an add-on platform that offers enhanced control over the spatial and temporal oxygenation in a 6-well plate. The device is adaptable to a number of culture systems and can be used to investigate the effects of oxygen on wound healing.

İmalat ve Operasyon yapışkan Hücresel Kültürler Oksijen Ekle

Oxygen is a key modulator of many cellular pathways, but current devices permitting in vitro oxygen modulation fail to meet the needs of biomedical ...

Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats

Being able to safely and effectively restrain mice and rats is an important part of conducting research. Working confidently and humanely with mice and rats requires a basic competency in handling and restraint methods. This article will present the basic principles required to safely handle animals. One-handed, two-handed, and restraint with specially designed restraint objects will be illustrated. Often, another part of the research or testing use of animals is the effective administration of compounds to mice and rats. Although there are a large number of possible administration routes (limited only by the size and organs of the animal), most are not used regularly in research. This video will illustrate several of the more common routes, including intravenous, intramuscular, subcutaneous, and oral gavage. The goal of this article is to expose a viewer unfamiliar with these techniques to basic restraint and substance administration routes. This video does not replace required hands-on training at your facility, but is meant to augment and supplement that training.

Working safely and humanely with research rodents requires a core competency in handling and restraint methods. This article will present the basic principles required to safely handle and effectively administer compounds to mice and rats.

Manuel Tutucu ve Fare ve Sıçanlarda Ortak Bileşik İdaresi Rotalar

Being able to safely and effectively restrain mice and rats is an important part of conducting research.  Working confidently and humanely with mice and ...

Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice

There are multiple sample types that may be collected from a euthanized animal in order to help diagnose or discover infectious agents in an animal colony. Proper collection of tissues for further histological processing can impact the quality of testing results. This article describes the conduct of a basic gross examination including identification of heart, liver, lungs, kidneys, and spleen, as well as how to collect those organs. Additionally four of the more difficult tissue/sample collection techniques are demonstrated. Lung collection and perfusion can be particularly challenging as the tissue needs to be properly inflated with a fixative in order for inside of the tissue to fix properly and to enable thorough histologic evaluation. This article demonstrates the step by step technique to remove the lung and inflate it with fixative in order to achieve optimal fixation of the tissue within 24 hours. Brain collection can be similarly challenging as the tissue is soft and easily damaged. This article demonstrates the step by step technique to expose and remove the brain from the skull with minimal damage to the tissue. The mesenteric lymph node is a good sample type in which to detect many common infectious agents as enteric viruses persist longer in the lymph node than they are shed in feces. This article demonstrates the step by step procedure for locating and aseptically removing the mesenteric lymph node. Finally, identification of infectious agents of the respiratory tract may be performed by bacterial culture or PCR testing of nasal and/or bronchial fluid aspirates taken at necropsy. This procedure describes obtaining and preparing the respiratory aspirate sample for bacterial culture and PCR testing.

This article describes the procedures for conducting a basic postmortem examination of a mouse or rat, and the collection of basic organs, as well as more challenging sample types from for histological, microbiological, and PCR evaluation.

Tanı Otopsi ve Sıçanlar ve Fareler Seçilmiş Doku ve Örnek Toplama

There are multiple sample types that may be collected from a euthanized animal in order to help diagnose or discover infectious agents in an animal ...

Ovariectomy and 17&beta;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration

Estrogens are a family of female sexual hormones with an exceptionally wide spectrum of effects. When rats and mice are used in estrogen research they are commonly ovariectomized in order to ablate the rapidly cycling hormone production, replacing the 17&beta;-estradiol exogenously. There is, however, lack of consensus regarding how the hormone should be administered to obtain physiological serum concentrations. This is crucial since the 17&beta;-estradiol level/administration method profoundly influences the experimental results1-3. We have in a series of studies characterized the different modes of 17&beta;-estradiol administration, finding that subcutaneous silastic capsules and per-oral nut-cream Nutella are superior to commercially available slow-release pellets (produced by the company Innovative Research of America) and daily injections in terms of producing physiological serum concentrations of 17&beta;-estradiol4-6. Amongst the advantages of the nut-cream method, that previously has been used for buprenorphine administration7, is that when used for estrogen administration it resembles peroral hormone replacement therapy and is non-invasive. The subcutaneous silastic capsules are convenient and produce the most stable serum concentrations. This video article contains step-by-step demonstrations of ovariectomy and 17&beta;-estradiol hormone replacement by silastic capsules and peroral Nutella in rats and mice, followed by a discussion of important aspects of the administration procedures.

Ovariectomy and 17&amp;#946;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration

Ovariectomy and subsequent replacement of 17&beta;-estradiol by means of silastic capsules and peroral Nutella are demonstrated in rats and mice.

Sıçan ve Farelerde Ovariektomi ve 17β-östradiol Değiştirme: Görsel Gösteri

Estrogens are a family of female sexual hormones with an exceptionally wide spectrum of effects. When rats and mice are used in estrogen research they are ...

Efficient Generation Human Induced Pluripotent Stem Cells from Human Somatic Cells with Sendai-virus

A few years ago, the establishment of human induced pluripotent stem cells (iPSCs) ushered in a new era in biomedicine. Potential uses of human iPSCs include modeling pathogenesis of human genetic diseases, autologous cell therapy after gene correction, and personalized drug screening by providing a source of patient-specific and symptom relevant cells. However, there are several hurdles to overcome, such as eliminating the remaining reprogramming factor transgene expression after human iPSCs production. More importantly, residual transgene expression in undifferentiated human iPSCs could hamper proper differentiations and misguide the interpretation of disease-relevant in vitro phenotypes. With this reason, integration-free and/or transgene-free human iPSCs have been developed using several methods, such as adenovirus, the piggyBac system, minicircle vector, episomal vectors, direct protein delivery and synthesized mRNA. However, efficiency of reprogramming using integration-free methods is quite low in most cases.
Here, we present a method to isolate human iPSCs by using Sendai-virus (RNA virus) based reprogramming system. This reprogramming method shows consistent results and high efficiency in cost-effective manner.

Here, we present our established method to reprogram human somatic cells into transgene-free human iPSCs with Sendai virus, which shows consistent outcome and enhanced efficiency.

Sendai-virüs ile İnsan Somatik Verimli Üretimi İnsan uyarılmış pluripotent kök hücrelerin

A few years ago, the establishment of human induced pluripotent stem cells (iPSCs) ushered in a new era in biomedicine. Potential uses of human iPSCs ...

Profiling Individual Human Embryonic Stem Cells by Quantitative RT-PCR

Heterogeneity of stem cell population hampers detailed understanding of stem cell biology, such as their differentiation propensity toward different lineages. A single cell transcriptome assay can be a new approach for dissecting individual variation. We have developed the single cell qRT-PCR method, and confirmed that this method works well in several gene expression profiles. In single cell level, each human embryonic stem cell, sorted by OCT4::EGFP positive cells, has high expression in OCT4, but a different level of NANOG expression. Our single cell gene expression assay should be useful to interrogate population heterogeneities.

Single cell gene expression assay is needed for understanding stem cell heterogeneities.

Kantitatif RT-PCR ile Bireysel İnsan Embriyonik Kök Hücreleri profilleme

Heterogeneity of stem cell population hampers detailed understanding of stem cell biology, such as their differentiation propensity toward different ...

Simple Bulk Readout of Digital Nucleic Acid Quantification Assays

Digital assays are powerful methods that enable detection of rare cells and counting of individual nucleic acid molecules. However, digital assays are still not routinely applied, due to the cost and specific equipment associated with commercially available methods. Here we present a simplified method for readout of digital droplet assays using a conventional real-time PCR instrument to measure bulk fluorescence of droplet-based digital assays.
We characterize the performance of the bulk readout assay using synthetic droplet mixtures and a droplet digital multiple displacement amplification (MDA) assay. Quantitative MDA particularly benefits from a digital reaction format, but our new method&#160;applies to any digital assay. For established digital assay protocols such as digital PCR, this method serves to speed up and simplify assay readout.
Our bulk readout methodology brings the advantages of partitioned assays without the need for specialized readout instrumentation. The principal limitations of the bulk readout methodology are reduced dynamic range compared with droplet-counting platforms and the need for a standard sample, although the requirements for this standard are less demanding than for a conventional real-time experiment. Quantitative whole genome amplification (WGA) is used to test for contaminants in WGA reactions and is the most sensitive way to detect the presence of DNA fragments with unknown sequences, giving the method great promise in diverse application areas including pharmaceutical quality control and astrobiology.

We describe an endpoint digital assay for quantifying nucleic acids with a simplified (analog) readout. We measure bulk fluorescence of droplet-based digital assays using a standard qPCR machine rather than specialized instrumentation and confirm our results by microscopy.

Dijital Nükleik Asit Kantifikasyon Tahliller Basit Toplu Saati

Digital assays are powerful methods that enable detection of rare cells and counting of individual nucleic acid molecules. However, digital assays are ...

The Lactate Dehydrogenase Sequestration Assay &#8212; A Simple and Reliable Method to Determine Bulk Autophagic Sequestration Activity in Mammalian Cells

Bulk autophagy is characterized by the sequestration of large portions of cytoplasm into double/multi-membrane structures termed autophagosomes. Here a simple protocol to monitor this process is described. Moreover, typical results and experimental validation of the method under autophagy-inducing conditions in various types of cultured mammalian cells are provided. During bulk autophagy, autophagosomes sequester cytosol, and thereby also soluble cytosolic proteins, alongside other autophagic cargo. LDH is a stable and highly abundant, soluble cytosolic enzyme that is non-selectively sequestered into autophagosomes. The amount of LDH sequestration therefore reflects the amount of bulk autophagic sequestration. To efficiently and accurately determine LDH sequestration in cells, we employ an electrodisruption-based fractionation protocol that effectively separates sedimentable from cytosolic LDH, followed by measurement of enzymatic activity in sedimentable fractions versus whole-cell samples. Autophagic sequestration is determined by subtracting the proportion of sedimentable LDH in untreated cells from that in treated cells. The advantage of the LDH sequestration assay is that it gives a quantitative measure of the autophagic sequestration of endogenous cargo, as opposed to other methods that either involve ectopic expression of sequestration probes or semi-quantitative protease protection analyses of autophagy markers or receptors.

The Lactate Dehydrogenase Sequestration Assay &amp;#8212; A Simple and Reliable Method to Determine Bulk Autophagic Sequestration Activity in Mammalian Cells

Here a simple and well-validated protocol for measuring bulk autophagic sequestration activity in mammalian cells is described. The method is based on quantifying the proportion of lactate dehydrogenase (LDH) in sedimentable cell fractions compared to total cellular LDH levels.

Laktat dehidrogenaz haciz tahlil — Toplu Autophagic haciz etkinliğini memeli hücreleri belirlemek için basit ve güvenilir Yöntem

Bulk autophagy is characterized by the sequestration of large portions of cytoplasm into double/multi-membrane structures termed autophagosomes. Here a ...

Loop-Mediated Isothermal Amplification for Screening Salmonella in Animal Food and Confirming Salmonella from Culture Isolation

Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) has emerged as a powerful nucleic acid amplification test for the rapid detection of numerous bacterial, fungal, parasitic, and viral agents. Salmonella is a bacterial pathogen of worldwide food safety concern, including food for animals. Presented here is a multi-laboratory-validated Salmonella LAMP protocol that can be used to rapidly screen animal food for the presence of Salmonella contamination and can also be used to confirm presumptive Salmonella isolates recovered from all food categories. The LAMP assay specifically targets the Salmonella invasion gene (invA) and is rapid, sensitive, and highly specific. Template DNAs are prepared from enrichment broths of animal food or pure cultures of presumptive Salmonella isolates. The LAMP reagent mixture is prepared by combining an isothermal master mix, primers, DNA template, and water. The LAMP assay runs at a constant temperature of 65 &#176;C for 30 min. Positive results are monitored via real-time fluorescence and can be detected as early as 5 min. The LAMP assay exhibits high tolerance to inhibitors in animal food or culture medium, serving as a rapid, reliable, robust, cost-effective, and user-friendly method for screening and confirming Salmonella. The LAMP method has recently been incorporated into the U.S. Food and Drug Administration&#8217;s Bacteriological Analytical Manual (BAM) Chapter 5.

Loop-Mediated Isothermal Amplification for Screening Salmonella in Animal Food and Confirming Salmonella from Culture Isolation

Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) is an isothermal nucleic acid amplification test (iNAAT) that has attracted broad interest in the pathogen detection field. Here, we present a multi-laboratory-validated Salmonella LAMP protocol as a rapid, reliable, and robust method for screening Salmonella in animal food and confirming presumptive Salmonella from culture isolation.

Hayvansal Gıdalarda Salmonella Taramak ve Salmonella'yı Kültür İzolasyonundan Doğrulamak için Döngü Aracılı İzotermal Amplifikasyon

Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) has emerged as a powerful nucleic acid amplification test for the rapid detection of numerous bacterial, ...