Yapısal ve biyokimyasal çalışmalar için insan çözünen taşıyıcılarının yüksek verimli ekspresyonu ve saflaştırılması

Çözünen taşıyıcılar veya SLC'ler, besinlerin alınmasından sorumludur ve insan hastalıklarında rol oynar. Bununla birlikte, SLC'leri hedef alan çok az ilaç vardır, çünkü bunlar yeterince çalışılmamıştır. SLC'leri klonlamak, ifade etmek ve saflaştırmak için verimli yaklaşımlar geliştirdik.

İş akışımız saf proteinler üreterek biyokimyasal ve yapısal çalışmalara olanak tanır ve nihayetinde ilaç keşif kampanyaları için içgörüler sağlar. Biyolojik süreçler, hastalık ve ilaç dağıtımındaki sayısız rolleri ile SLC'ler giderek daha fazla dikkat çekmiş ve çekici terapötik hedefler haline gelmiştir. Özel, halka açık ReSOLUTE IMI projeleri, SLC fonksiyonu, fizyolojisi, patolojisi ve terapötik hedeflemesinde yeni keşifler sağlamak için açık erişimli kaynaklar ve veriler üretti.

Geleneksel olarak, SLC'ler, çeşitli substratlara ve çeşitli taşıma mekanizmalarına sahip integral membran proteinleri oldukları için çalışmak zordu. Son zamanlarda, Cryo-EM, BacMam ekspresyon sistemi ve yeni çözündürme reaktifleri, karakterizasyonlarında bir adım değişikliğine yol açmıştır. Biyokimyasal ve yapısal çalışmalar için saf protein örneklerine ihtiyaç vardır.

İnsanda çözünen madde taşıyıcıları, aşırı eksprese edildiğinde genellikle düşük verime ve saflaştırıldığında kararsızlığa sahiptir. Bu nedenle, geçmişte, her hedef, sonraki uygulamalar için protein numunesi üretmek üzere bireysel yapılar geliştirmek için yıllar gerektiriyordu. Yöntemimiz, birden fazla hedefin veya tek bir hedefin yapılarının paralel ve uygun maliyetli çalışması için optimize edilmiştir.

Bu nedenle, deneysel esneklik, maliyet, zaman ve laboratuvar kaynaklarını dikkatli bir şekilde dengeler. Ayrıca, bu makaledeki ve ReSOLUTE web portalındaki tüm protokollerimize ve kaynaklarımıza açık erişim sunuyoruz.