Hücre Döngüsünün G1 Fazında Tek Sarmallı DNA Odaklarının Görselleştirilmesi

DNA hasar tepkisi yaşam için vazgeçilmezdir. DNA sürekli olarak çeşitli zararlı motorlara maruz kaldığından, onarımlarının olmaması genomların kararsızlığına ve hastalıklara yol açar. Farklı hücre döngüsü aşamalarında DNA onarımı sırasında tek iplikli DNA yolunu görselleştirmek için RPA2'nin biyolojik özelliğine dayalı bir yöntem geliştirdik.

Tek sarmallı DNA tespiti için geleneksel yöntem BrdU antikorlarını kullanır. Bu yaklaşım, hücreleri aktif olarak çoğaltmak için kullanılabilir. Ek olarak, bu antikor, diğer nükleotid analogları ile çapraz reaksiyona girme eğilimindedir ve kullanımlarını sınırlar.

BRDU'dan farklı olarak, yaklaşımımız daha yüksek bir sinyal-gürültü oranına sahiptir ve bu da onu her döngü aşamasında kullanılabilir hale getirir. Çeşitli hücre döngüsü aşamalarında ve potansiyel olarak çoğalmayan hücrelerde farklı DNA onarım yollarının etkisini anlamak çok önemlidir. Protokolümüz, BrdU kullanan klasik yaklaşımların sınırlı olduğu tek sarmallı DNA odaklarını görselleştirmek için yeni bir yaklaşım ve araç sağlar.

DNA onarım süreçlerinin kapsamlı bir şekilde anlaşılması, kanser, yaşlanma ve nörolojik hastalıkları tedavi etmek için terapötik hedefler olarak hizmet edebilir. Hücrelerimizin çoğu terminal olarak farklılaşmıştır ve bu nedenle çoğalmaz ve bölünmez. Bu hücrelerin çeşitli DNA lezyonlarını nasıl onardığını daha iyi anlamak çok önemlidir.

Bu nedenle, laboratuvarımız esas olarak replikasyon sonrası DNA onarım süreçlerine odaklanacak ve bunları incelemek için yeni araçlar geliştirecektir.