İnatçı Bitkilerin Planta Dönüşümü için Vakumla Zorla Agroinfiltrasyon: Bir Vaka Çalışması Olarak Kakao

Tropikal çok yıllık türlerde ve bahçe ağacı bitkilerinde genlerin biyolojik işlevini incelemek için in vivo genetik yöntemler gereklidir. Bununla birlikte, bu türlerin çoğu her nesilde dönüşüme karşı inatçıdır. Bu araştırmanın kapsamı, büyük boyutlu bitkilere uygulanabilen basit ve etkili bir genetik dönüşüm yöntemi geliştirmektir.

Olayları örnekleyeceğim. Dokulara sızması zor olan bitkilerin agrobakteri aracılı genetik dönüşümü, bir vakum pompası kullanılarak zorla sızma ile mümkün olmuştur. Bununla birlikte, şu anda kullanımda olan protokoller, büyük boyutlu bitkileri bir vakum odasına göndermenin fiziksel ve ekonomik kısıtlamaları nedeniyle küçük boyutlu bitkilerle sınırlıdır.

Genellikle laboratuvar dessikatörleri olan vakum odalarının boyutu, tropikal odunsu bitkilerde olduğu gibi dessikatörlere sığamayacak kadar büyük bitkilerin vakum sızmasını önler. Tropikal odunsu bitkilerin verimli lokalize vakum infiltrasyonu için bir protokol geliştirdik ve büyük bitki türlerinin in vivo genetik transformasyon çalışmalarını mümkün kıldık. Bu protokol, kakao ve avokado gibi bahçe ağacı bitkilerinde Agrobacterium aracılı vakum infiltrasyonu için bitki boyutu sınırlamalarının üstesinden gelmemizi sağladı.

Lokalize vakum infiltrasyonu ile bağlı yaprakların doku kültürü içermeyen Agrobacterium aracılı dönüşümü, halihazırda vakum infiltrasyonu kullanan laboratuvarlar tarafından hızlı, basit ve uygun maliyetli bir şekilde gerçekleştirilebilir, çünkü aynı pompa ve vakum kabı maliyetli ekipman eklemeye gerek kalmadan kullanılabilir.