Yazar Spotlight: Tetramerler Kullanarak Fare Akciğerlerinde Antijene Özgü T Hücrelerini Tespit Etmek için Optimize Edilmiş Protokol

Laboratuvarımız, farklı tolerans ve bağışıklık bağlamlarında CD4 T hücrelerinin gelişimini incelemektedir. Projelerimizde, öncelikle antijen maruziyetinin, kendisine toleransı veya patojenlere karşı bağışıklığı artırabilen bağışıklık hafızası oluşturan fenotipik T hücresi alt kümelerinin gelişimini nasıl yönlendirdiğiyle ilgileniyoruz. Son zamanlarda, akciğer dokusunda bulunan düzenleyici ve bellek T hücresi alt kümelerinin geliştirilmesine odaklandık.

Bu dokuda yerleşik T hücreleri, doku hasarı sırasında kendi antijenlerine toleransı güçlendirmede veya yeniden enfeksiyon sırasında patojenlere karşı inflamatuar yanıtları teşvik etmede önemli bir rol oynar. Laboratuvarımız, antijene özgü T hücrelerinin, ancak özel peptit MHC tetramer reaktiflerinin doğrudan çalışmasında uzmanlaşmıştır. Bu, bu T hücrelerini, TCR transgenik modelleri veya deneysel artefaktlara neden olduğu bilinen diğer deneysel manipülasyonları kullanmadan incelememize izin verir.

Antijene özgü T hücrelerini tetramerlerle kolayca tanımlayabilsek de, bu T hücreleri genellikle çok düşük frekanslarda, özellikle de saf veya hafıza durumunda olduklarında bulunurlar. Bu T hücrelerini, bir bağışıklık tepkisini takiben sıklıkla bulundukları lenfoid olmayan dokulardan izole etmek de zordur. Fare akciğerlerinden T hücrelerini izole etmek için birkaç yerleşik protokol olsa da, burada sunduğumuz protokol, tetramer boyama ile düşük frekanslı antijene özgü T hücrelerinin daha sonra tespiti için optimize edilmiştir.

Bu protokol kapsamında, kütüphane kaynaklarına daha iyi uyum sağlamak için doku ilişkilendirmesi için iki seçenek de ekledik. Protokolümüz, araştırmacıların tetramerlerin kullanımını akciğer dokusundaki antijene özgü T hücrelerine genişletmelerine yardımcı olacaktır. Bu durum, bu alanda yoğun ilgi gören konular olan dokuda yerleşik bellek T hücresi gelişimi ve fonksiyonu ile ilgili daha güçlü in vivo çalışmalara yol açacaktır.