Name: maintaining aedes aegypti mosquitoes infected with wolbachia
Uploaded: 2017-08-14T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia at JoVE.com

Nous reconnaissons Heng Lin Yeap, Chris Paton, Petrina Johnson et Clare Doig pour leur contribution au développement de méthodes d’entretien de notre colonie et trois évaluateurs anonymes pour leurs suggestions qui ont contribué à améliorer le manuscrit. Notre recherche est supporté par un programme de subventions et de bourses à l’AAH de la santé nationale et Conseil de recherches médicales et une traduction accordent du Wellcome Trust. NOMINALE est récipiendaire d’une bourse du programme formation de recherche gouvernement australien.

Sang alimentant des moustiques sur des êtres humains a été approuvé par l’Université de Melbourne le Comité éthique humaine (approbation #: 0723847). Tous les bénévoles fournis a informé consentement écrit.
1. larvaire d’élevage
NOTE : Les moustiques sont maintenus à 26 ± 0,5 ° C et 50-70 % d’humidité relative, avec une photopériode de h (lumière : obscurité) 12:12 pour le protocole d’entretien de cette colonie. Ces conditions sont similai...

Selon le protocole présenté ici pour la maintenance de Wolbachia-infectés Ae. aegypti devraient garantir que les moustiques sains d’une qualité constante sont produites pour des expériences et ouvrir le champ communiqués. Contrairement aux autres protocoles qui donner la priorité à la production de grandes quantités de moustiques (voir référence57), les méthodes sont axés sur la maximisation de leur remise en forme, tant au sein des générations en mettant en plac...

Les moustiques Aedes aegypti sont chargés de transmettre certains de l’arbovirus plus importants dans le monde, y compris la Zika, dengue et chikungunya1. Ces virus deviennent une menace croissante pour la santé mondiale comme la généralisation de l' Ae. aegypti dans les tropiques continue à s’étendre de2,3,4. Femelles Ae. aegypti préférentiellement se nourrissent de sang humain5 et donc ont tendance à vivre à proximité de l’homme, en particulier dans les zones urbaines où les populations sont plus denses. Grâce à cette étroite association avec les humains, ils se sont également adaptés pour se reproduire dans des habitats artificiels, y compris les pneus, les pots, les gouttières et les eau réservoirs6,7. AE. aegypti aussi facilement s’adapter à des environnements de laboratoire où elles peuvent être maintenues sans toute exigence particulière après recueillie directement dans le champ, à la différence d’autres espèces dans le genre Aedes la8, 9,10. Leur facilité d’entretien les a vus a étudié largement au laboratoire dans un large éventail de domaines, en fin de compte visant à contrôler les moustiques maladies peut-être transmettre.
Traditionnellement, les arbovirus contrôle s’appuie fortement sur l’utilisation d’insecticides pour réduire les populations de moustiques. Cependant, il y a un intérêt croissant dans les approches où les moustiques modifiés sont élevés en laboratoire et ensuite rejetés dans les populations naturelles. Libéré de moustiques peuvent être modifiés génétiquement11,12,13, biologiquement14,15, par irradiation16, traitement chimique17,18, ou pour l’ensemble des techniques de19 pour réprimer les populations de moustiques ou remplacez-les par des moustiques qui sont réfractaires à arbovirus transmission20.
Wolbachia sont des bactéries qui sont actuellement utilisés comme agent de lutte biologique pour les arbovirus. Plusieurs souches de Wolbachia ont été récemment introduits dans Ae. aegypti expérimentalement à l’aide de microinjection embryonnaires21,22,23,24. Ces souches réduisent la capacité des arbovirus à diffuser et à reproduire dans le moustique, diminuant leur transmission potentielle23,25,26,27,28 . Les infections de Wolbachia sont transmises de la mère à la progéniture, mais certaines souches induisent la stérilité, lorsque les hommes infectés s’accoupler avec les femelles infectées22. Wolbachia-mâles infectés peuvent donc être libérés en grande quantité pour réprimer les populations de moustiques naturels, comme l’a récemment démontrées à l’autre de15,espèces Aedes 29. Toutefois, étant donné que Wolbachia aussi inhiber la transmission arbovirue dans Ae. aegypti, moustiques peuvent être libérés pour remplacer les populations indigènes par les vecteurs les plus pauvres. Ae. aegypti infectés expérimentalement par Wolbachia sont maintenant libérés sur le terrain dans plusieurs pays à l’aide de cette dernière approche14,30,31.
Wolbachia-approches basées pour contrôle arboviru reposent sur une bonne compréhension des interactions entre le Wolbachia, les moustiques et l’environnement. Wolbachia sont présents naturellement dans un large éventail d’insectes, et les souches introduites dans les moustiques sont variés dans leurs effets32. Nouveaux types d’infection de Wolbachia sont introduit dans Ae. aegypti24, il est nécessaire de caractériser chaque souche pour leurs effets sur l’aptitude de moustique, de reproduction et de brouillage arboviru dans un éventail de conditions. Une expérimentation rigoureuse en laboratoire est donc nécessaire d’évaluer le potentiel des souches de Wolbachia réussir dans le domaine.
Rejets de plein champ de Ae. aegypti et les infections de Wolbachia peuvent souvent nécessiter des milliers, des dizaines de milliers de moustiques par zone de libération à être élevés chaque semaine14,30,31. Le succès des versions initiales peuvent être amélioré en libérant des moustiques d’une grande taille afin de maximiser leur fécondité33 et accouplement succès34,35. Les moustiques doivent également être adaptées aux conditions qu'ils vivront dans le champ, élevage de laboratoire cependant à long terme peut causer des changements dans le comportement et la physiologie qui pourrait avoir une incidence champ performance36,37, 38.
Les auteurs décrivent un protocole simple pour l’élevage des Ae. aegypti en laboratoire au moyen de l’équipement de base. Ce protocole est convenable pour les deux sauvage et Wolbachia-infectée de moustiques, laquelle peut nécessitent une attention particulière, comme certaines souches de Wolbachia ont des effets importants sur les moustiques démographiques caractéristiques39, 40. les conditions d’élevage éviter le surpeuplement et la compétition pour la nourriture produire des moustiques d’une taille cohérente, qui est cruciale pour la compétence vectorielle et expériences de remise en forme et veille à ce que les moustiques sont sains pour la libération de champ41 . Nous avons également prendre des précautions pour minimiser l’adaptation de laboratoire et d’endogamie en réduisant les pressions sélectives et veiller à ce que la prochaine génération est prélevé dans une grande piscine au hasard. Cependant, des environnements de laboratoire sont distinctement différentes de conditions sur le terrain, et une maintenance à long terme dans des conditions détendues pourrait réduire l’aptitude des moustiques leur libération dans la zone37,,42,43 . Nous traversons donc femelles de lignes laboratoire récoltés sur le terrain des mâles périodiquement, résultant dans les colonies qui sont génétiquement similaires pour les comparaisons expérimentales et qui sont adaptés à la population de zone cible39. Les méthodes ne requièrent pas de n’importe quel équipement spécialisé et peuvent évoluer vers le haut à l’arrière des dizaines de milliers de personnes par semaine pour les rejets de champ. Le protocole a aussi priorise l’aptitude des moustiques dans et entre les générations, une considération importante pour les insectes destinés à la mise en place dans les populations naturelles. Le protocole est adapté pour la plupart des laboratoires nécessitant une maintenance d' Ae. aegypti, en particulier pour les comparaisons expérimentales où la qualité uniforme de moustiques et narrabilité sur le terrain sont importantes.

<table width="1661">
	<tbody>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">Wild type Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:1087px;">Collected from field locations in Queensland, Australia, see Yeap and others39 for details</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w Mel-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to Walker and others23 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w AlbB-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to Xi and others21 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="width:287px;height:24px;">w MelPop-infected Aedes aegypti</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided by Monash University. Refer to McMeniman and others22 for information on the strain</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Instant dried yeast</td>
			<td style="width:168px;">Lowan</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Stimulates egg hatching. Found in general grocery stores. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">5 L plastic tub</td>
			<td style="width:168px;">Quadrant</td>
			<td style="width:119px;">Q110950</td>
			<td>Used for hatching and rearing larvae. Other products may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Fish Food (Tetramin Tropical Tablets)</td>
			<td style="width:168px;">Tetra</td>
			<td style="width:119px;">16152</td>
			<td>Provided to larvae as a source of food. Web address: https://www.amazon.com/Tetra-16152-TetraMin-Tropical-10-93-Ounce/dp/B00025Z6SE</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Plastic containers</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for rearing larvae. Any plastic container above 500 mL should be suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Glass pipette</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for transferring larvae and pupae between containers. Web address: https://www.aliexpress.com/item/10Pcs-Durable-Long-Glass-Experiment-Medical-Pipette-Dropper-Transfer-Pipette-Lab-Supplies-With-Red-Rubber-Cap/32704471109.html?spm=2114.40010308.4.2.py4Kez</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Clicker counter</td>
			<td style="width:168px;">RS Pro</td>
			<td style="width:119px;">710-5212</td>
			<td>Used to assist in the counting of larvae, pupae and eggs. Web address: http://au.rs-online.com/web/p/products/7105212/?grossPrice=Y</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Rearing trays</td>
			<td style="width:168px;">Gratnells</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for rearing larvae. Web address: http://www.gratnells.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Nylon mesh</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used to transfer larvae and pupae to containers of fresh water. Other brands may be used. Web address: https://www.spotlightstores.com/fabrics-yarn/specialty-apparel-fabrics/nettings-tulles/nylon-netting/p/BP80046941001-white</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Cages</td>
			<td style="width:168px;">BugDorm</td>
			<td>DP1000</td>
			<td>Houses adult mosquitoes. Alternative products may be used. Web address: http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">35 mL plastic cup</td>
			<td style="width:168px;">Huhtamaki</td>
			<td style="width:119px;">AA272225</td>
			<td>Used to provide water or sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">35 mL plastic cup lid</td>
			<td style="width:168px;">Huhtamaki</td>
			<td>GB030005</td>
			<td>Used to provide sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Cotton wool</td>
			<td style="width:168px;">Cutisoft</td>
			<td style="width:119px;">71841-13</td>
			<td>Moist cotton wool is provided as a source of water to adults. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">White Sugar</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Provided as a source of sugar to adult mosquitoes. Found in general grocery stores</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Rope</td>
			<td style="width:168px;">M Recht Accessories</td>
			<td>C323C/W</td>
			<td>Used to provide sucrose solution to adults. Other brands may be used. Web address: https://mrecht.com.au/haberdashery/braids-cords-and-tapes/cords/plaited-cord/cotton/</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Plastic cup (large)</td>
			<td style="width:168px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used as an oviposition container. Any plastic cup that holds 100 mL of water should be suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Sandpaper</td>
			<td style="width:168px;">Norton Master Painters</td>
			<td>CE015962</td>
			<td>Provided as an oviposition substrate. Alternative products may be used, but we use this brand because it is relatively odorless. Lighter colors are used for contrast with eggs. Web address: https://www.bolt.com.au/115mm-36m-master-painters-bulk-roll-p80-medium-p-9396.html</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Filter paper</td>
			<td style="width:168px;">Whatman</td>
			<td style="width:119px;">1001-150</td>
			<td>Used as an alternative oviposition substrate. Other brands may be used</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="width:287px;height:21px;">Latex gloves</td>
			<td style="width:168px;">SemperGuard</td>
			<td>Z560979</td>
			<td>Prevents mosquito bites on hands when blood feeding. Other brands may be used. Web address: http://www.sempermed.com/en/products/detail/semperguardR_latex_puderfrei_innercoated/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

maintaining aedes aegypti mosquitoes infected with wolbachia

Les moustiques Aedes aegypti infectés expérimentalement par Wolbachia sont utilisés dans des programmes pour lutter contre la propagation des arbovirus telles que la dengue, chikungunya et Zika. Wolbachia-moustiques infectés peuvent être rejetées dans le champ soit réduire la taille des populations par le biais de croisements incompatibles ou de transformer les populations de moustiques qui sont réfractaires à la transmission du virus. Pour ces stratégies réussir, les moustiques libérées dans le domaine du laboratoire doivent être compétitives avec les moustiques indigènes. Cependant, maintenir les moustiques en laboratoire peut entraîner consanguinité, dérive génétique et l’adaptation de laboratoire qui peut réduire leur aptitude dans le domaine et peut-être entraîner des résultats d’expériences. Pour tester la pertinence des différentes infections de Wolbachia pour le déploiement sur le terrain, il est nécessaire de maintenir des moustiques dans un environnement de laboratoire contrôlées à travers plusieurs générations. Les auteurs décrivent un protocole simple pour maintenir les moustiques de l’Ae. aegypti dans le laboratoire, qui convient à la fois Wolbachia-moustiques infectés et sauvage. Les méthodes minimiser l’adaptation de laboratoire et mettre en œuvre les croisements pour améliorer la pertinence des expériences aux moustiques de champ. En outre, les colonies sont maintenus dans des conditions optimales afin de maximiser leur ADEQUATION a communiqués de plein champ.

Figure 4 illustre les effets de la nutrition sous-optimaux sur le développement des larves de Ae. aegypti . Quand conteneurs sont équipés de 0,25 mg de nourriture par larves par jour ou moins, le temps de développement augmente pour les mâles et les femelles, et est moins synchrone que dans des contenants fournie avec 0,5 mg de nourriture. Si une alimentation adéquate n’est pas fournie pendant toute la durée du développement larvaire, cela ...

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Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Maintenir les moustiques Aedes aegypti infectés par Wolbachia

Les moustiques Aedes aegypti infectés par Wolbachia sont libérés dans les populations naturelles de supprimer la transmission des arbovirus. Nous décrivons des méthodes arrière Ae. aegypti Wolbachia infections en laboratoire pour des expériences et sortie de terrain, prendre des précautions pour réduire au minimum la sélection et l’adaptation de laboratoire.

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

Research

JoVE Journal

Biology

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

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Recherche

Biologie

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