本日は、マウスにおける糸球体濾過またはtGFRの経皮測定の手法を実演する。私は言及する価値があると思うこの方法の機能の数があります。まず、現在のtGFRは、マウスの腎機能を評価する最も正確な方法です。
第二に、tGFRは、麻酔の合併症を回避するように、意識的で自由に動くマウスで行われる。第三に、一度技術を習得したら、1日で30〜40 tGFR測定を行うことができるのが妥当です。最後に、tGFR測定は、インビトロマウスで繰り返し行うことができる。
これは、急性および慢性疾患の設定で腎機能の連続測定を行うことができるということです。この技術の主な利点は、研究者が高精度と感度で意識的で自由に動くマウスで糸球体濾過率またはGFRを測定できることです。tGFR測定の1~2日前に、つまみつまみへの応答の欠如を確認した後、ヒートパッド上の起こりやすい位置に麻酔マウスを置く。
電気剃毛を使用して、成長の方向に対してトリミングして、後ろ足の上から首まで、肋骨を横切って、マウスの背中の片側から毛皮のほとんどを取り除きます。綿棒を使用して、露出した皮膚に脱毛クリームの薄い層を成長の方向に適用して、クリームができるだけ皮膚に近い状態で塗布され、清潔な綿棒と温水で1〜3分後にクリームを取り除きます。手順の日に、パッチの背面を剥がし、透明な窓のすぐ上に配置された発光ダイオードでパッチの接着側にデバイスを貼り付ける前に、GFRデバイスのサイズに6%3センチメートルの粘着パッチをトリミングします。
その後、バッテリーにパッチの小片を貼り付けます。モニターを取り付けるには、麻酔を受けたマウスを起こしやすい位置に置き、70%エタノールで剃り込んだ皮膚をきれいにし、それを縦に引き裂くことによって約12センチメートルのテープの幅を調整します。測定後の配置と取り外しが容易なために、動物の片側に2センチメートルのマウスを置き、テープの右側の1つの端にテープを折りたたみます。
次に、バッテリをデバイスに接続し、バッテリからバッキングを取り外し、バッテリをデバイスにしっかりと配置します。デバイスは使用する準備が整い、青色のLEDが点滅し始めるとデータ収集が開始されます。デバイスのパッチからバッキングを取り外し、LEDを露出する窓がテープでデバイスの右側を固定するリブの上になるように、デバイスを剃ったスキンに置きます。
マウスの移動性を制限したり、皮膚に過度の圧力をかけたりすることなく、デバイスの安全なアタッチメントを確保することが重要です。次に、テープの左側をマウスとデバイスの周りにしっかりと巻き付けます。デバイスが 3 分間、安定したバックグラウンド読み取りを記録できるようにします。
その間、ヘッドパッドで尾を温め、最も近い10マイクロリットルに丸められた注射のためのFITC-sinistrinの適切な実験量でインスリン注射器をロードする。FITC-シニストリンを静脈内に1つの滑らかなが急速なボーラスで投与する。ユーザーが正常にクリアランス曲線の複数のピークをもたらすいくつかの試みではなく、1つのボーラスでFITC-sinistrinを管理する必要があるとして、IV注射に慣れていることが重要です.
tGFRを測定するには、完全な収量まで監視して独自のケージにマウスを置き、FITC-sinistrinクリアランスを1.5時間記録できるようにします。測定期間の終わりに、ケージの上のワイヤーラックにマウスを置き、マウスが金属棒をつかむできるように、1つの迅速な滑らかな動きで腹の下からテープを引っ張ります。次に、デバイスからテープを取り出し、皮膚からパッチを取り出し、バッテリーがデバイスから切り離されないようにして、マウスをケージに戻します。
データを評価するには、バッテリを慎重に取り外し、USB ケーブルを使用してデバイスをコンピュータに接続します。読み取りソフトウェアを開き、[接続]、[読み取り]、[名前変更]、[保存] の順にクリックします。その後、プログラムを終了し、プロセスを終了し、製造元の指示に従って分析ソフトウェアのデータを評価します。
FITC-シニストリンは、健康なマウスの循環から急速にクリアされますが、このクリアランスは、急性腎障害を有するマウスにおいて劇的に遅れる。非常に重度の急性腎障害を有するマウスでは、糸球体濾過の完全な欠如を示す90分間の測定期間中にFITC-シニストリン蛍光のクリアランスが非常に少ないか、まったくない可能性があります。経皮GFR測定は、低侵襲であり、したがって、複数の時点にわたって個々の動物の腎機能の変化を監視するために使用することができる。
実際、この代表的な実験では、虚血再灌流傷害の後、1、2、および4日後に腎機能の変化を示した。このマウス慢性腎臓病モデルにおいて、FITC-シニストリン半減期とGFRの逆関係は、これらの動物に認められる腎機能障害と直接相関することができる。実際、FITC-シニストリン半減期は、損傷していないマウスおよび虚血再灌流傷害誘発急性腎障害の異なる絶え間ないマウスにおけるGFR測定の全範囲にわたる管状損傷の半定量的組織学的評価と密接に相関している。
対照的に、血清クレアチニンと血尿素窒素は、経皮的GFR測定が血清クレアチニンまたは血液尿素窒素よりも腎損傷のより信頼性の高い尺度を提供していることを示すFITC-シニストリンクリアランスとの正だが弱い相関関係を示す。GFRの経皮測定は、クレアチニンやBUNなどの従来のバイオマーカーよりも腎機能の感度の高い尺度です。これは、前臨床研究における腎臓病の新しい治療法の有効性のより正確な評価を提供する。
この方法で最も重要なステップは、マウスの背面にデバイスの適切な接続とFITC-sinistrinの正常なIV投与です。これらのステップは、マウスにおけるGFRの正確な評価を得るために不可欠である。
