Denna metod kan bidra till att producera en idealisk modell som nära efterliknar den naturliga utvecklingen av benmetastaser av prostatacancerceller in vivo. Denna teknik har fördelen av en benmetastas och representerar den naturliga benmetastasprocessen för prostatacancerceller in vivo. Denna teknik gynnar utforskningen av de molekylära mekanismerna och undersökningen av in vivo terapeutiska effekter för prostatacancer benmetastaser.
På injektionsdagen, ta 80 till 90% konfluenta luciferasmärkta PC3-celler odlade i en 10 centimeter cellodlingsskål och börja förbereda cellerna för injektion genom att tvätta dem två gånger med kall steril PBS. Trypsinisera de tvättade cellerna med 1,5 ml 0,25% trypsin i tre minuter, varefter trypsinet släcks genom att tillsätta sex milliliter F12-medium innehållande 10% serum och samla cellerna i ett 15 ml centrifugrör. Överför 20 mikroliter av den uppsamlade cellsuspensionen till en cellräkningsplatta och beräkna cellkoncentrationen med hjälp av en automatisk cellräknare.
Centrifugera sedan cellerna vid rumstemperatur i fem minuter vid 800 G.Kassera supernatanten med en pipett och suspendera cellpelleten i F12-medium för att uppnå önskad slutlig celldensitet. Bär nu cellerna till operationsrummet och utför cellinjektionen inom två timmar. Håll cellerna på is tills injektion.
För att påbörja operationen, placera den bedövade musen i ryggläge och immobilisera båda övre extremiteterna genom att vinkelrätt sträcka dem bort från mittlinjen. Använd kirurgisk tejp, immobilisera musen från buken ner utan att trycka hårt och förskjuta de inre organen. Desinficera bröstkorgens hud med en 70% etanolpinne.
Palpera sedan ner mitten av den främre bröstväggen för att lokalisera musxiphoidprocessen i fördjupningen vid den lägsta änden av mitten av bröstbenet. Märk den mest underlägsna punkten i xiphoidprocessen. Sedan genom att palpera upp från mitten av den främre bröstväggen, lokalisera mushalshacket i den centrala fördjupningen vid manubriumets övre kant och markera den mest underlägsna punkten i halsskåran.
Leta nu upp och markera mittpunkten mellan de två föregående märkena, något åt höger och strax över hjärtat i det tredje interkostala utrymmet. Detta är injektionspunkten. Blanda cellsuspensionen noggrant innan du laddar 200 mikroliter av suspensionen i en en en milliliter spruta monterad med en 26 gauge nål.
Lämna lite luft i sprutan mellan kolven och suspensionen så att pulserande blod kan komma in under injektionen. För att utföra injektionen, sätt in nålen vertikalt genom injektionsstället. Om nålspetsen är korrekt införd i vänster kammare kommer ljusrött pulserande blod att synas i nålnavet.
Försök att injicera igen om blodpulsering inte syns eller om blodet koagulerar. När nålen är ordentligt införd, injicera 100 mikroliter av cellsuspensionen mycket långsamt under 40 till 60 sekunder med en stabil hand. Efter avslutad injektion, dra tillbaka nålen medan du trycker på injektionsstället med en torr bomullspinne i 15 sekunder för att säkerställa hemostas.
Sätt tillbaka musen till den rena buret och övervaka djuret tills det helt återhämtar sig från anestesi. Bioluminiscensavbildning utförd 24 timmar efter injektion av luciferasmärkta PC3-celler i musen visade signaler från hela djurets kropp som indikerar närvaron av cancerceller i den systemiska cirkulationen. Metastatiska lesioner uppträdde i musens bakben två veckor efter injektionen.
De metastatiska lesionerna blev större med tiden och började dyka upp på andra platser. De prostatacancercellinducerade metastatiska lesionerna i benen upptäcktes vidare med hjälp av röntgenavbildning som visade benförstöring i djurets proximala skenben. Detsamma bekräftades också genom mikro-CT-skanning.
De metastaserande lesionerna bekräftades ytterligare i paraffininbäddade vävnader genom hematin- och eosinfärgning. Korrekt injektionsställe är mycket viktigt för att säkerställa framgångsgraden för denna modell. Detta kan uppnås genom övning.
