Detta arbete stöds av bidrag från Kinas National Key R&D Program (2018YFC1704300 och 2020YFE0201600), National Nature Science Foundation (81973877 och 82174408), forskningsprojekten inom budgeten för Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (2021LK047) och Shanghai Collaborative Innovation Center of Industrial Transformation of Hospital TCM Preparation.

Sex till åtta veckor gamla BALB/c-atymiska hanmöss (n = 10) inhystes i individuellt ventilerade mössburar (5 möss/burar) i ett specifikt patogenfritt (SPF) djurrum under förhållandena i 12 timmars ljus/mörk cykel, med fri tillgång till SPF-foder och sterilt vatten. Möss matades adaptivt i en vecka före experimenten. Alla djurförsök godkändes av djurskyddskommittén vid Shanghai University of Traditional Chinese Medicine.
1. Förberedelse av celler
<ol><li>På da...

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Fuchs, H. E., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+Cancerstatistics,+2021.">Cancer Cancerstatistics, 2021.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (1), 7-33 (2021).</li><li>Sung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+cancer+statistics+2020:+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries.">Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).</li><li>Coleman, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+complications+of+malignancy.">Skeletal complications of malignancy.</a> Cancer. 80, 1588-1594 (1997).</li><li>Macedo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+metastases:+An+overview.">Bone metastases: An overview.</a> Oncology Reviews. 11 (1), 321 (2017).</li><li>Rea, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+in+prostate+cancer+translational+research:+From+xenograft+to+PDX.">Mouse models in prostate cancer translational research: From xenograft to PDX.</a> BioMed Research International. 2016, 9750795 (2016).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+GFP+intravital+imaging+of+the+differences+in+cellular+and+angiogenic+behavior+of+subcutaneous+and+orthotopic+nude-mouse+models+of+human+PC-3+prostate+cancer.">Real-time GFP intravital imaging of the differences in cellular and angiogenic behavior of subcutaneous and orthotopic nude-mouse models of human PC-3 prostate cancer.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 117 (11), 2546-2551 (2016).</li><li>Stephenson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+model+for+human+prostate+cancer+using+orthotopic+implantation+in+nude+mice.">Metastatic model for human prostate cancer using orthotopic implantation in nude mice.</a> Journal of the National Cancer Institute. 84 (12), 951-957 (1992).</li><li>Simmons, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+bone+metastasis.">Animal models of bone metastasis.</a> Veterinary Pathology. 52 (5), 827-841 (2015).</li><li>Jenkins, D. E., Hornig, Y. S., Oei, Y., Dusich, J., Purchio, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioluminescent+human+breast+cancer+cell+lines+that+permit+rapid+and+sensitive+in+vivo+detection+of+mammary+tumors+and+multiple+metastases+in+immune+deficient+mice.">Bioluminescent human breast cancer cell lines that permit rapid and sensitive in vivo detection of mammary tumors and multiple metastases in immune deficient mice.</a> Breast Cancer Research: BCR. 7 (4), 444-454 (2005).</li><li>Corey, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+osseous+prostate+cancer+models:+intra-tibial+injection+of+human+prostate+cancer+cells.">Establishment and characterization of osseous prostate cancer models: intra-tibial injection of human prostate cancer cells.</a> The Prostate. 52 (1), 20-33 (2002).</li><li>Andersen, C., Bagi, C. M., Adams, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-tibial+injection+of+human+prostate+cancer+cell+line+CWR22+elicits+osteoblastic+response+in+immunodeficient+rats.">Intra-tibial injection of human prostate cancer cell line CWR22 elicits osteoblastic response in immunodeficient rats.</a> Journal of Musculoskeletal &amp; Neuronal Interactions. 3 (2), 148-155 (2003).</li><li>Sudhan, D. R., Pampo, C., Rice, L., Siemann, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cathepsin+L+inactivation+leads+to+multimodal+inhibition+of+prostate+cancer+cell+dissemination+in+a+preclinical+bone+metastasis+model.">Cathepsin L inactivation leads to multimodal inhibition of prostate cancer cell dissemination in a preclinical bone metastasis model.</a> International Journal of Cancer. 138 (11), 2665-2677 (2016).</li><li>Jinnah, A. H., Zacks, B. C., Gwam, C. U., Kerr, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+and+established+models+of+bone+metastasis.">Emerging and established models of bone metastasis.</a> Cancers. 10 (6), 176 (2018).</li><li>Simmons, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Canine+prostate+cancer+cell+line+(Probasco)+produces+osteoblastic+metastases+in+vivo.">Canine prostate cancer cell line (Probasco) produces osteoblastic metastases in vivo.</a> The Prostate. 74 (13), 1251-1265 (2014).</li><li>Lamar, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SRC+tyrosine+kinase+activates+the+YAP/TAZ+axis+and+thereby+drives+tumor+growth+and+metastasis.">SRC tyrosine kinase activates the YAP/TAZ axis and thereby drives tumor growth and metastasis.</a> The Journal of Biological Chemistry. 294 (7), 2302-2317 (2019).</li><li>Chang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrine+inhibits+prostate+cancer+via+activation+of+the+unfolded+protein+response/endoplasmic+reticulum+stress+signaling+and+reversal+of+epithelial+to+mesenchymal+transition.">Matrine inhibits prostate cancer via activation of the unfolded protein response/endoplasmic reticulum stress signaling and reversal of epithelial to mesenchymal transition.</a> Molecular Medicine Reports. 18 (1), 945-957 (2018).</li><li>Arguello, F., Baggs, R. B., Frantz, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+experimental+metastasis+to+bone+and+bone+marrow.">A murine model of experimental metastasis to bone and bone marrow.</a> Cancer Research. 48 (23), 6876-6881 (1988).</li><li>Brylka, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spine+Metastases+in+immunocompromised+mice+after+intracardiac+injection+of+MDA-MB-231-SCP2+breast+cancer+cells.">Spine Metastases in immunocompromised mice after intracardiac injection of MDA-MB-231-SCP2 breast cancer cells.</a> Cancers. 14 (3), 556 (2022).</li><li>Rahman, M. M., Veigas, J. M., Williams, P. J., Fernandes, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DHA+is+a+more+potent+inhibitor+of+breast+cancer+metastasis+to+bone+and+related+osteolysis+than+EPA.">DHA is a more potent inhibitor of breast cancer metastasis to bone and related osteolysis than EPA.</a> Breast Cancer Research and Treatment. 141 (3), 341-352 (2013).</li><li>Park, S. I., Kim, S. J., McCauley, L. K., Gallick, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-clinical+mouse+models+of+human+prostate+cancer+and+their+utility+in+drug+discovery.">Pre-clinical mouse models of human prostate cancer and their utility in drug discovery.</a> Current Protocols in Pharmacology. , (2010).</li><li>Wright, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+breast+cancer+bone+metastasis.">Murine models of breast cancer bone metastasis.</a> BoneKEy Reports. 5, 804 (2016).</li><li>Fearon, K. C., Glass, D. J., Guttridge, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+cachexia:+mediators,+signaling,+and+metabolic+pathways.">Cancer cachexia: mediators, signaling, and metabolic pathways.</a> Cell Metabolism. 16 (2), 153-166 (2012).</li><li>Waning, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excess+TGF-&#946;+mediates+muscle+weakness+associated+with+bone+metastases+in+mice.">Excess TGF-&#946; mediates muscle weakness associated with bone metastases in mice.</a> Nature Medicine. 21 (11), 1262-1271 (2015).</li><li>Talbot, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+body-weight+reduction+as+a+humane+endpoint:+a+critical+appraisal.">Defining body-weight reduction as a humane endpoint: a critical appraisal.</a> Laboratory Animals. 54 (1), 99-110 (2020).</li><li>Paget, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+distribution+of+secondary+growths+in+cancer+of+the+breast.">The distribution of secondary growths in cancer of the breast.</a> Cancer Metastasis Reviews. 8 (2), 98-101 (1989).</li><li>Yin, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-beta+signaling+blockade+inhibits+PTHrP+secretion+by+breast+cancer+cells+and+bone+metastases+development.">TGF-beta signaling blockade inhibits PTHrP secretion by breast cancer cells and bone metastases development.</a> The Journal of Clinical Investigation. 103 (2), 197-206 (1999).</li><li>Schneider, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=turnover+mediates+preferential+localization+of+prostate+cancer+in+the+skeleton.">turnover mediates preferential localization of prostate cancer in the skeleton.</a> Endocrinology. 146 (4), 1727-1736 (2005).</li><li>Padalecki, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosome+18+suppresses+prostate+cancer+metastases.">Chromosome 18 suppresses prostate cancer metastases.</a> Urologic Oncology. 21 (5), 366-373 (2003).</li></ol>

Samtliga författare uppger att de inte har några konkurrerande ekonomiska intressen.

Intrakardiell injektion av humana prostatacancerceller för att generera benmetastaser är en idealisk musmodell för att utforska funktionerna och mekanismerna för prostatacancerbenmetastaser och utvärdera den terapeutiska effekten. Studier har visat att benskador sannolikt uppträder i proximal tibia och distala lårben17, vilket kan bero på deras höga vaskularisering och metaboliska aktivitet.
Eftersom benmetastaser är en ofta observerad metastaserande lesion ho...

Prostatacancer är den vanligaste cancerformen hos män i 112 länder och rankas tvåa för dödlighet i ländermed högre mänskligt utvecklingsindex 1,2. De flesta dödsfall hos prostatacancerpatienter orsakas av metastaser, och cirka 65% -75% av fallen kommer att utveckla benmetastaser 3,4. Därför är förebyggande och behandling av prostatacancerbenmetastaser brådskande för att förbättra det kliniska resultatet hos prostatacancerpatienter. Djurmodellen för benmetastaser är ett oumbärligt verktyg för att utforska flerstegsprocessen och molekylära mekanismer som är involverade i varje steg av prostatacancerbenmetastaser, och därmed identifiera terapeutiska mål och utveckla nya terapier5.
De vanligaste metoderna för att generera experimentella djurmodeller av prostatacancerbenmetastaser inkluderar ortotopisk, intradiafys (såsom intratibial) och intrakardiell injektion av prostatacancerceller. Benmetastasmodellen med ortotopisk injektion genereras genom att direkt injicera prostatacancerceller i prostata hos en mus 6,7. Denna experimentella djurmodell har mycket liknande kliniska egenskaper som prostatacancer benmetastaser. Metastaseringen sker emellertid huvudsakligen i axillär lymfkörtel och lunga snarare än i benet 8,9. Den intratibiala injektionsmodellen för prostatacancer injicerar direkt prostatacancerceller i skenbenet med en hög tumörbildningshastighet i benet (tibia)10,11; Benbarken och benmärgshålan skadas emellertid lätt. Dessutom kan tibialinjektionsmetoden inte stimulera den patologiska processen med prostatacancerbenmetastaser där cancercellerna koloniserar benet genom cirkulation. För att undersöka cirkulationen, vaskulär extravasering och avlägsen metastasering med högre benmetastaseringshastighet hos cancerceller har en intrakardiell injektionsteknik utvecklats genom att direkt injicera prostatacancerceller i vänster kammare på musen 8,12,13. Detta gör det till en värdefull djurmodell för benmetastasforskning8. Den intrakardiella injektionsmetoden visar en benmetastaseringshastighet på cirka 75%9,14, mycket högre än den ortotopiska injektionsmetoden. Därför är intrakardiell injektion en idealisk metod för att generera en djurmodell med prostatacancer benmetastaser.
Detta arbete syftar till att beskriva processen att etablera en musmodell av prostatacancerbenmetastaser, så att läsarna kan visualisera modelletableringen. Det aktuella arbetet ger detaljerade processer, försiktighetsåtgärder och illustrativa bilder för att generera en xenograftmodell för benmetastaser via intrakardiell injektion av humana prostatacancerceller i atymiska möss. Denna metod ger ett effektivt verktyg för att ytterligare utforska de molekylära mekanismerna och de in vivo terapeutiska effekterna av prostatacancer benmetastaser.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringes and needles</td>
			<td>Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd</td>
			<td>20200411</td>
			<td>The cells were injected into the ventricles of mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia machine</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>R500IP</td>
			<td>Equipment for anesthetizing mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic cell counter</td>
			<td>Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd</td>
			<td>IC1000</td>
			<td>&#160;For counting cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c athymic mice</td>
			<td>Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd.</td>
			<td>Male</td>
			<td>6-8 week old, male mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioluminescence imaging system</td>
			<td>Shanghai Baitai Technology Co., Ltd</td>
			<td>Vieworks</td>
			<td>For tracking the tumor growth and pulmonary metastasis if the injected cells are labeled by luciferase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tube (15 mL, 50 mL)</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>&#160;430790, Corning</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA solution</td>
			<td>Wuhan Xavier Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>G1105</td>
			<td>&#160;For decalcification of bone tissure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F-12 medium</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>21700075, GIBCO</td>
			<td>Cell culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>BL539A</td>
			<td>For fixing the specimen of each mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd</td>
			<td>VETEASY</td>
			<td>For anesthesia&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>11668027, Thermo fisher</td>
			<td>Plasmid transfection reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PC-3 cell line</td>
			<td>Cell Bank of Chinese Academy of Sciences</td>
			<td>TCHu 158</td>
			<td>Prostate cancer cell line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline</td>
			<td>Beyotime Biotechnology</td>
			<td>ST447</td>
			<td>Wash the human osteosarcoma cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin (0.25%)</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>25200056, Gibco</td>
			<td>For detaching the cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vector (pLV-luciferase)</td>
			<td>Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>VL3613</td>
			<td>Plasmid for transfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray imaging system</td>
			<td>Brook (Beijing) Technology Co., Ltd</td>
			<td>FX PRO</td>
			<td>For obtaining x-ray images to detect tumor growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#956;CT80</td>
			<td>Shenzhen Fraun Technology Service Co., Ltd</td>
			<td>Scanco Medical AG,Switzerland</td>
			<td>For detection of bone destruction. The mico-CT is equipped with 3DCalc, cone reconstruction,&#160; and &#956;CT Ray V3.4A model visualization software.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intra-cardiac injection of human prostate cancer cells to create a bone metastasis xenograft mouse model

Som den vanligaste manliga maligniteten rankas prostatacancer (PC) andra i dödligheten, främst på grund av en 65% -75% benmetastaseringshastighet. Därför är det viktigt att förstå processen och relaterade mekanismer för prostatacancer benmetastaser för att utveckla nya terapier. För detta är en djurmodell av benmetastaser ett viktigt verktyg. Här rapporterar vi detaljerade procedurer för att generera en benmetastasmusmodell via intrakardiell injektion av prostatacancerceller. Ett bioluminescensbildningssystem kan avgöra om prostatacancerceller har injicerats exakt i hjärtat och övervaka cancercellmetastaser eftersom det har stora fördelar vid övervakning av metastatisk lesionsutveckling. Denna modell replikerar den naturliga utvecklingen av disseminerade cancerceller för att bilda mikrometastaser i benet och imiterar den patologiska processen för prostatacancer benmetastaser. Det ger ett effektivt verktyg för vidare utforskning av de molekylära mekanismerna och de terapeutiska effekterna in vivo av denna sjukdom.

Bioluminiscensavbildning erbjuder enorma fördelar vid övervakning av metastaserad lesionsutveckling för en intrakardiell injektionsmodell. Strax efter cancercellsinjektionen (inom 24 timmar) användes bioluminescensavbildning för att visualisera cancercellerna som kom in i den allmänna cirkulationen (figur 3A). Uppenbar bioluminescenssignalering över hela kroppen kommer att ses när cancercellerna injiceras ordentligt i artärcirkulationen. Data från möss som endast visar bioluminisc...

Watch this Scientific Journal Video about Intra-Cardiac Injection of Human Prostate Cancer Cells to Create a Bone Metastasis Xenograft Mouse Model at JoVE.com

Intra-Cardiac Injection of Human Prostate Cancer Cells to Create a Bone Metastasis Xenograft Mouse Model

Här presenterar vi ett protokoll för intrakardiell injektion av humana prostatacancerceller för att generera en musmodell med benmetastaseringsskador.

Intrakardiell injektion av humana prostatacancerceller för att skapa en Xenograft-musmodell med benmetastaser

As the most common male malignancy, prostate cancer (PC) ranks second in mortality, primarily due to a 65%-75% bone metastasis rate. Therefore, it is ...

Denna metod kan bidra till att producera en idealisk modell som nära efterliknar den naturliga utvecklingen av benmetastaser av prostatacancerceller in vivo. Denna teknik har fördelen av en benmetastas och representerar den naturliga benmetastasprocessen för prostatacancerceller in vivo. Denna teknik gynnar utforskningen av de molekylära mekanismerna och undersökningen av in vivo terapeutiska effekter för prostatacancer benmetastaser.På injektionsdagen, ta 80 till 90% konfluenta luciferasmärkta PC3-celler odlade i en 10 centimeter cellodlingsskål och börja förbereda cellerna för injektion genom att tvätta dem två gånger med kall steril PBS. Trypsinisera de tvättade cellerna med 1,5 ml 0,25% trypsin i tre minuter, varefter trypsinet släcks genom att tillsätta sex milliliter F12-medium innehållande 10% serum och samla cellerna i ett 15 ml centrifugrör. Överför 20 mikroliter av den uppsamlade cellsuspensionen till en cellräkningsplatta och beräkna cellkoncentrationen med hjälp av en automatisk cellräknare.Centrifugera sedan cellerna vid rumstemperatur i fem minuter vid 800 G.Kassera supernatanten med en pipett och suspendera cellpelleten i F12-medium för att uppnå önskad slutlig celldensitet. Bär nu cellerna till operationsrummet och utför cellinjektionen inom två timmar. Håll cellerna på is tills injektion.För att påbörja operationen, placera den bedövade musen i ryggläge och immobilisera båda övre extremiteterna genom att vinkelrätt sträcka dem bort från mittlinjen. Använd kirurgisk tejp, immobilisera musen från buken ner utan att trycka hårt och förskjuta de inre organen. Desinficera bröstkorgens hud med en 70% etanolpinne.Palpera sedan ner mitten av den främre bröstväggen för att lokalisera musxiphoidprocessen i fördjupningen vid den lägsta änden av mitten av bröstbenet. Märk den mest underlägsna punkten i xiphoidprocessen. Sedan genom att palpera upp från mitten av den främre bröstväggen, lokalisera mushalshacket i den centrala fördjupningen vid manubriumets övre kant och markera den mest underlägsna punkten i halsskåran.Leta nu upp och markera mittpunkten mellan de två föregående märkena, något åt höger och strax över hjärtat i det tredje interkostala utrymmet. Detta är injektionspunkten. Blanda cellsuspensionen noggrant innan du laddar 200 mikroliter av suspensionen i en en en milliliter spruta monterad med en 26 gauge nål.Lämna lite luft i sprutan mellan kolven och suspensionen så att pulserande blod kan komma in under injektionen. För att utföra injektionen, sätt in nålen vertikalt genom injektionsstället. Om nålspetsen är korrekt införd i vänster kammare kommer ljusrött pulserande blod att synas i nålnavet.Försök att injicera igen om blodpulsering inte syns eller om blodet koagulerar. När nålen är ordentligt införd, injicera 100 mikroliter av cellsuspensionen mycket långsamt under 40 till 60 sekunder med en stabil hand. Efter avslutad injektion, dra tillbaka nålen medan du trycker på injektionsstället med en torr bomullspinne i 15 sekunder för att säkerställa hemostas.Sätt tillbaka musen till den rena buret och övervaka djuret tills det helt återhämtar sig från anestesi. Bioluminiscensavbildning utförd 24 timmar efter injektion av luciferasmärkta PC3-celler i musen visade signaler från hela djurets kropp som indikerar närvaron av cancerceller i den systemiska cirkulationen. Metastatiska lesioner uppträdde i musens bakben två veckor efter injektionen.De metastatiska lesionerna blev större med tiden och började dyka upp på andra platser. De prostatacancercellinducerade metastatiska lesionerna i benen upptäcktes vidare med hjälp av röntgenavbildning som visade benförstöring i djurets proximala skenben. Detsamma bekräftades också genom mikro-CT-skanning.De metastaserande lesionerna bekräftades ytterligare i paraffininbäddade vävnader genom hematin- och eosinfärgning. Korrekt injektionsställe är mycket viktigt för att säkerställa framgångsgraden för denna modell. Detta kan uppnås genom övning.

intra-cardiac-injection-human-prostate-cancer-cells-to-create-bone

Research

JoVE Journal

Cancer Research

3.7K Views.  Shanghai University of Traditional Chinese Medicine. This method can help to produce an ideal model that closely mimics the natural progress of bone metastasis of prostate cancer cells in vivo. This technique has the advantage of a bone metastasis and representing the natural bone metastasis process of prostate cancer cells in vivo. This technique benefits the exploration of the molecular mechanisms and investigation of in vivo therapeutic effects for prostate cancer bone metastasis.On the day of the injection, take 80 to 90%confluent lu...