A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
نحن تصف طريقة لتحضير شرائح الحصين عضوي النمط التي يمكن تكييفها بسهولة إلى مناطق أخرى من الدماغ. وضعت شرائح الدماغ على الأغشية التي يسهل اختراقها وسائل الاعلام الثقافة يسمح له شكل واجهة. هذا الأسلوب يحافظ على بنية الإجمالي للقرن آمون لمدة تصل الى 2 أسابيع في الثقافة.
قرن آمون ، وهو مكون من الجهاز الحوفي ، ويلعب دورا هاما في الذاكرة طويلة المدى والملاحة الفضائية 1. يمكن أن الخلايا العصبية الحصين تعديل قوام صلاتهم بعد فترات وجيزة من تفعيل قوي. ويمكن لهذه الظاهرة ، والمعروفة باسم بعيدة المدى (الكمونية) تستمر لساعات أو أيام ، وأصبحت آلية أفضل مرشح للتعلم والذاكرة 2. بالإضافة إلى ذلك ، بذلت التشريح محددة جيدا ، والتواصل بين الحصين 3 أنه نظام نموذجي لدراسة نقل الكلاسيكية متشابك ومتشابك 4 اللدونة.
كما فهمنا للعلم وظائف الأعضاء من نقاط الاشتباك العصبي الحصين نما وأصبح اللاعبون الجزيئية التي تم تحديدها ، وأصبح من الضروري التعامل مع البروتينات متشابك حتمية. ثقافات الحصين عضوي النمط توفر إمكانية للتلاعب الجيني سهلة ودقيقة ولكن التدخل الدوائي الحفاظ على منظمة متشابك التي تعتبر ضرورية لفهم وظيفة المشبك في سياق طبيعي أكثر من الأساليب الروتينية ثقافة فصل الخلايا العصبية.
هنا نقدم طريقة لتحضير شرائح الحصين والثقافة التي يمكن تكييفها بسهولة إلى مناطق أخرى من الدماغ. هذا الأسلوب يتيح سهولة الوصول إلى شرائح للتلاعب الجيني باستخدام أساليب مختلفة مثل العدوى الفيروسية أو 5،6 biolistics 7. بالإضافة ، يمكن استردادها بسهولة لشرائح فحوصات البيوكيميائية 8 ، أو نقلها إلى المجاهر التصوير 9 أو 10 تجارب الكهربية.
1. قبل البدء في إعداد شرائح الحصين.
2. الحصين شرائح التحضير.
3. الحصين شرائح الثقافة
4. الحلول
ل 500 مل | ل 1000 مل | التركيز النهائي | |
CaCl 2 (1 م) | 0.5 مل | 1 مل | 1 ملم |
D - غلوكوز | 0،901 ز | 1،802 ز | 10 ملي |
بوكل | 0،149 ز | 0،298 ز | 4 ملم |
MgCl 2 (1 م) | 2.5 مل | 5 مل | 5 ملم |
NaHCO 3 | 1،092 ز | 2،184 ز | 26 مم |
السكروز | 40 غ | 80 غ | 234 ملي |
محلول الفينول الأحمر 0.5 ٪ في DPBS | 0.5 مل | 1 مل | 0.1 ٪ V / V |
ل 500 مل | ل 1000 مل | التركيز النهائي | |
MEM النسر المتوسطة | 4.2 غرام | 8.4 غرام | 8.4 غرام / لتر |
حصان المصل الحرارة المعطل | 100 مل | 200 مل | 20 ٪ |
L - الجلوتامين (200 ملم) | 2.5 مل | 5 مل | 1 ملم |
CaCl 2 (1 م) | 0.5 مل | 1 مل | 1 ملم |
MgSO 4 (1 م) | 1 مل | 2 مل | 2 ملم |
الانسولين (1 ملغ / مل) ، الذائب في حمض الهيدروكلوريك 0.01 N | 0.5 مل | 1 مل | 1 ملغم / لتر |
حمض الاسكوربيك ، والحل (25 ٪ W / V) | 0.024 مل | 0.048 مل | 0.00125 ٪ |
D - غلوكوز | 1.16g | 2.32g | 13 ملم |
NaHCO 3 | 0.22g | 0.44g | 5.2 ملي |
Hepes | 3.58g | 7.16g | 30 ملم |
5. ممثل النتائج :
وينبغي أن ننظر شرائح بيضاء تحت نطاق تشريح دون بقع سوداء واضحة المعالم وغير التالفة CA1 ، CA3 ، والمناطق التلفيف المسنن. ويعتبر التلوث الجرثومي وبسهولة نقل بقع سوداء في المتوسط أو تعكر المجلس الأعلى للقضاء. عند وضعها تحت المجهر ، يجب على سطح شريحة تبدو نظيفة بعد 4 أيام في الثقافة مع الهيئات واضحة وdiscernibly الخلية. إذا لم يكن هناك أجسام الخلايا واضحة وينظر الكثير من الحطام ويغطي السطح بعد 4 ايام ، ومن ثم لا شريحة صحية.
ويستند هذا الأسلوب على طريقة وصف لأول مرة من قبل Stoppini آخرون (11) وتقدم على نحو سريع لشرائح ثقافة الحصين. الجانب الأكثر أهمية من هذا البروتوكول هو الحفاظ على شرائح معقمة ، وبالتالي من الأهمية بمكان استخدام تقنيات مناسبة ومعقمة بشكل صحيح لتطهير وتعقيم جميع ال?...
وقد تم تمويل هذا العمل من قبل NINDS -- NIH R01NS060756
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Name | Company | Catalog Number | Comments | |
Cell culture inserts | Millipore | PICM03050 | ||
6 well plates | BD Falcon | 353046 | ||
Tissue Slicer | Stoelting | 51425/51415 | ||
Microscope | Olympus | SZX7-ILLD2-100 | ||
Hippocampus dissecting tool | F.S.T | 10099-15 | ||
Large utility scissors. Perfection | F.S.T | 37500-00/37000-00 Right/ Left handed | ||
Iris Spatula | F.S.T | 10093-13 | ||
Straight spatula | F.S.T | 10094-13 | ||
Rounded spoon micro spatula | VWR | 57949-039 | ||
Dissecting single cutting edge needle | Electron Microscopy Science | 72946 | ||
Dissecting tweezers | Dummont | #2 | ||
Small dissecting scissors | F.S.T | 14060-10 | ||
MEM Eagle medium | Cellgro | 50-019 PB | ||
Horse serum heat inactivated | Invitrogen | 26050-88 | ||
L-Glutamine (200 mM) | Invitrogen | 25030081 | ||
CaCl2 (1 M) | Sigma | C3881 | ||
MgSO4 (1 M) | Sigma | M2773 | ||
Insulin (1 mg/ml), dissolved in HCl 0.01 N | Sigma | I0516 | ||
Ascorbic Acid, solution (25%) | Sigma | A4544 | ||
D-Glucose | Sigma | G5767 | ||
NaHCO3 | Sigma | S6014 | ||
Hepes | Sigma | H7523 | ||
Sucrose | Sigma | S5016 | ||
Phenol Red Solution 0.5% in DPBS | Sigma | P0290 | ||
KCl | Sigma | P3911 | ||
MgCl2 (1 M) | Sigma | M9272 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved