بناء هيدروجيل الكولاجين لتسليم الشيتوزان الجذعية المجهرية الخلية محملة

Summary

وهناك عقبة رئيسية في العلاج بالخلايا الجذعية الحالية هو تحديد الطريقة الأكثر فعالية لإيصال هذه الخلايا إلى أنسجة المضيف. هنا، نحن تصف طريقة تسليم الشيتوزان مقرها تتسم بالكفاءة والبساطة في الأسلوب، في الوقت الذي تسمح الخلايا الجذعية الدهنية المشتقة للحفاظ على multipotency بهم.

Abstract

وقد تبين أن الخلايا الجذعية Multipotent أن تكون مفيدة للغاية في مجال الطب التجديدي ^1-3. ومع ذلك، من اجل استخدام هذه الخلايا بشكل فعال من أجل تجديد الأنسجة، لا بد من اتخاذ عدد من المتغيرات في الاعتبار. هذه المتغيرات ما يلي: إجمالي حجم والمساحة السطحية للموقع غرس، والخواص الميكانيكية للأنسجة والأنسجة المكروية، والذي يتضمن كمية من الأوعية الدموية ومكونات المصفوفة خارج الخلية. ولذلك، يجب أن المواد المستخدمة لتقديم هذه الخلايا يكون حيويا مع التركيب الكيميائي المحددة مع الحفاظ على القوة الميكانيكية الذي يحاكي الأنسجة المضيف. ويجب أيضا أن تكون هذه المواد قابلة للاختراق على الأوكسجين والمواد المغذية لتوفير المكروية مواتية للخلايا لنعلق وتتكاثر. ويمكن الشيتوزان، وهو السكاريد الموجبة مع توافق مع الحياة ممتازة، وكيميائيا بسهولة تعديل ولها قابلية عالية للربط مع لجنة الهدنة العسكرية في الجسم الحيromolecules ^4-5. الشيتوزان يحاكي جزء جلايكان من المصفوفة خارج الخلية، مما مكنها من العمل بوصفها ركيزة للهجرة الخلية، التصاق والانتشار. في هذه الدراسة نستخدم الشيتوزان في شكل المجهرية لتسليم الخلايا الجذعية الدهنية المشتقة من (ASC) في بناء الكولاجين ثلاثي الأبعاد سقالة ^6. كان مصمما مثاليا الخلية إلى microsphere نسبة فيما يتعلق فترة حضانة وكثافة الخلية لتحقيق الحد الأقصى لعدد الخلايا التي يمكن تحميلها. مرة واحدة على المصنف ASC والمجهرية الشيتوزان (CSM)، التي هي جزء لا يتجزأ في سقالة الكولاجين ويمكن الحفاظ على الثقافة في لفترات طويلة. وخلاصة القول، فإن هذه الدراسة توفر طريقة لتقديم بالتحديد خلايا جذعية في غضون 3 سقالة بيولوجية الأبعاد.

Protocol

1. عزل الخلايا الدهنية المستمدة من الجذعية (ASC)

ملاحظة: تم تنفيذ كافة الإجراءات في درجة حرارة الغرفة ما لم يذكر خلاف ذلك.

1. عزل الدهنية الفئران محيط بالكلية وبربخي وتغسل بمحلول معقم هانك والملح مخزنة (HBSS) التي تحتوي على 1٪ الجنين مصل بقري (FBS) كما هو موضح سابقا ^6.
2. فرم الأنسجة ونقل 1-2 غرام في 25 مل من HBSS FBS تحتوي على 1٪ في أنبوب 50 مل و الطرد المركزي في 500 غ لمدة 8 دقائق في درجة حرارة الغ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

وهناك عقبة رئيسية في العلاج بالخلايا الجذعية والقائم على تطوير أساليب فعالة لإيصال الخلايا إلى المناطق المحددة للإصلاح. نظرا لتقلب المريض إلى المريض، ونوع الأنسجة، وحجم الاصابة وعمق، ويجب أن تحدد منهجية للخلايا الجذعية تسليم على أساس كل حالة على حدة. على الرغم من ت?.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
اسم كاشف / معدات	شركة	فهرس العدد	تعليقات
هانكس BalancedSalt الحل (HBSS)	Gibco	14175	الاستهلاكية
الأبقار مصل الجنين	Hyclone	SH30071.03	الاستهلاكية
كولاجيناز النوع الثاني	سيغما الدريخ	C6685	الاستهلاكية
70 ميكرومتر النايلون سلكية فلتر	العلوم البيولوجية دينار بحريني	352350	الاستهلاكية
100 ميكرومتر النايلون سلكية فلتر	العلوم البيولوجية دينار بحريني	352360	الاستهلاكية
MesenPRO النظام نمو متوسطة	إينفيتروجن	12746-012	الاستهلاكية
L-الجلوتامين	Gibco	25030	الاستهلاكية
T75 قارورة زراعة الأنسجة	العلوم البيولوجية دينار بحريني	137787	الاستهلاكية
الشيتوزان	سيغما الدريخ	448869	الاستهلاكية
حمض الخليك	سيغما الدريخ	320099	الاستهلاكية
N-أوكتانول	العضوية Acros	150630025	الاستهلاكية
صوربيتان-أحادي أوليئات	سيغما الدريخ	S6760	الاستهلاكية
هيدروكسيد البوتاسيوم	سيغما الدريخ	P1767	الاستهلاكية
الأسيتون	فيشر العلمية	L-4859	الاستهلاكية
الإيثانول	سيغما الدريخ	270741	الاستهلاكية
Trinitro Benzenesulfonic حمض	سيغما الدريخ	P2297	الاستهلاكية
حامض الهيدروكلوريك	سيغما الدريخ	320331	الاستهلاكية
إثيل الأثير	سيغما الدريخ	472-484	الاستهلاكية
8 ميكرون إدراج اللوحة زراعة الأنسجة	العلوم البيولوجية دينار بحريني	353097	الاستهلاكية
أنابيب Microcentrifuge 1.5 مل	الصياد	05-408-129	الاستهلاكية
MTT الكاشف	إينفيتروجن	M6494	الاستهلاكية
ثنائي ميثيل سلفوكسيد	سيغما الدريخ	D8779	الاستهلاكية
Qtracker خلية كيت وصفها (Q تعقب 655)	الجزيئية تحقيقات	Q2502PMP	الاستهلاكية
اكتب 1 الكولاجين	Travigen	3447-020-01	الاستهلاكية
هيدروكسيد الصوديوم	سيغما الدريخ	S8045	الاستهلاكية
12-حسنا لوحات نسيج الثقافة	العلوم البيولوجية دينار بحريني	353043	الاستهلاكية
نبذ	إيبندورف	5417R	معدات
شاكر المداري	نيو برونزويك Scienctific	C24	معدات
مرطب حاضنة ثاني أكسيد الكربون مع الهواء-5 2٪	الحرارية العلمية	نموذج 370	معدات
فوق النمام	IKA	Visc6000	معدات
النمام المغناطيسي	كورنينج	PC-210	معدات
فراغ المجفف	-	-	معدات
حجم الجسيمات محلل	مالفيرن	STP2000 Spraytec	معدات
ماء الحمام	فيشر العلمية	Isotemp210	معدات
طيفي	بيكمان	بيكمان كولتر الطيف DU800UV/Visible	معدات
دوامة	Diagger	3030a	معدات
Microplate قارئ	الجزيئية الأجهزة	SpectraMax M2	معدات
ضوء / الإسفار مجهر	أوليمبوس	IX71	معدات
متحد البؤر المجهر	أوليمبوس	FV-500 ليزر متحد البؤر المجهر	معدات
المجهر الإلكتروني	كارل زايس هيئة التصنيع العسكريroImaging	435 ليو نائب الرئيس	معدات
انتقال الكترون المجهر	JEOL	JEOL 1230	معدات