Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.
Method Article
Построение коллагена Гидрогель для доставки стволовых клеток, загруженных Хитозан микросфер
В этой статье
Резюме
Главным препятствием в текущем лечения стволовыми клетками заключается в определении наиболее эффективных методов для достижения этих клеток в ткани хозяина. Здесь мы описываем на основе хитозана способ доставки, что является эффективным и простым в подходах, позволяя при этом жировых стволовых клеток для поддержания их multipotency.
Аннотация
Мультипотентных стволовых клеток было показано, что чрезвычайно полезно в области регенеративной медицины 1-3. Тем не менее, для того, чтобы использовать эти клетки эффективно для регенерации тканей, число переменных должны быть приняты во внимание. Эти переменные включают в себя: общий объем и площадь поверхности имплантации сайта, механические свойства ткани и ткани микросреда, которая включает в себя сумму васкуляризации и компоненты внеклеточного матрикса. Таким образом, материалов, которые используются, чтобы предоставить эти клетки должны быть биологически совместимыми с определенным химическим составом при сохранении механической прочности, который имитирует ткани хозяина. Эти материалы также должны быть проницаемы для кислорода и питательных веществ для обеспечения благоприятной микросреды для клеток приложить и размножаться. Хитозан, катионный полисахарид с отличной биосовместимости, может быть легко химически модифицированных и обладает высоким сродством связываться с Mac в естественных условияхromolecules 4-5. Хитозан имитирует гликозаминогликана часть внеклеточного матрикса, что позволяет ему функционировать в качестве субстрата для клеточной адгезии, миграции и пролиферации. В этом исследовании мы используем хитозана в виде микросфер для доставки жировых производных стволовых клеток (АОК) в коллагена основаны трехмерных леса 6. Идеальная клетка-микросфер соотношение определяется по времени инкубации и плотности клеток для достижения максимального числа клеток, которые могут быть загружены. Как только ASC высевают на микросферы хитозана (CSM), они встроены в коллаген леса и может сохраняться в культуре в течение длительного периода времени. Таким образом, данное исследование представляет собой метод точно доставить стволовые клетки в трехмерном биоматериала эшафот.
протокол
1. Изоляция жировой производные стволовые клетки (ASC)
Примечание: Все процедуры были выполнены при комнатной температуре, если не указано иное.
- Изолировать крысы паранефральная и придатка жировой и промыть буферной соли стерильной Хэнка решение (HBSS), содержащей 1% эмбриональной телячьей сыворотки (FBS), как описано выше 6.
- Фарш ткани и передавать 1-2 г на 25 мл HBSS, содержащим 1% FBS в 50 мл трубку и центрифуги в 500 г в течение 8 минут при комнатной температуре.
- Соберите свободно плавающего слоя жировой ткани и передачи до 125 мл колбу Эрленмейера и лечение с 25 мл коллагеназ....
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Обсуждение
Главным препятствием в стволовой клеточной терапии разрабатывает эффективные методы для доставки клеток к указанной области для ремонта. В связи с пациента к пациенту изменчивости, тип ткани, размер повреждений и глубины; методика доставки стволовых клеток должны определяться в кажд.......
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Раскрытие информации
Нет конкурирующих финансовых интересов существуют.
Отказ от ответственности
Мнения или утверждения, содержащиеся в настоящем личные взгляды авторов и не должно истолковываться как официальная или отражает мнение министерства обороны или американского правительства. Авторами являются сотрудники правительства США, и эта работа была подготовлена в рамках своих служебных обязанностей. Все Работа выполнена при поддержке армии США медицинских исследований и материального командования. Данное исследование было проведено в рамках протокола рассматриваются и утверждаются в армии США медицинских исследований и материального командной Экспертный совет организации, а также в соответствии с утвержденным протоколом.
Благодарности
ДОЗ поддерживается гранта от Фонда Женеве. Н. была поддержана Грантом Докторантура стипендий от инженерной инициативы тканей Питтсбурге.
....Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Материалы
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Название реагента / оборудование | Компания | Номер по каталогу | Комментарии |
| Хэнкс BalancedSalt Решение (HBSS) | Гибко | 14175 | Потребляемый |
| Эмбриональной телячьей сыворотки | Hyclone | SH30071.03 | Потребляемый |
| Коллагеназы II типа | Sigma-Aldrich | C6685 | Потребляемый |
| 70-мкм нейлоновая сетка фильтра | BD Biosciences | 352350 | Потребляемый |
| 100 мкм нейлоновая сетка фильтра | BD Biosciences | 352360 | Потребляемый |
| MesenPRO рост средней система | Invitrogen | 12746-012 | Потребляемый |
| L-глютамин | Гибко | 25030 | Потребляемый |
| T75 тканевой культуры колбу | BD Biosciences | 137787 | Потребляемый |
| Хитозан | Sigma-Aldrich | 448869 | Потребляемый |
| Уксусная кислота | Sigma-Aldrich | 320099 | Потребляемый |
| Октаноле | Acros Organics | 150630025 | Потребляемый |
| Сорбитан-моноолеат | Sigma-Aldrich | S6760 | Потребляемый |
| Гидроксид калия | Sigma-Aldrich | P1767 | Потребляемый |
| Ацетон | Fisher Scientific | L-4859 | Потребляемый |
| Этанол | Sigma-Aldrich | 270741 | Потребляемый |
| Тринитро бензолсульфокислота | Sigma-Aldrich | P2297 | Потребляемый |
| Соляная кислота | Sigma-Aldrich | 320331 | Потребляемый |
| Этиловый эфир | Sigma-Aldrich | 472-484 | Потребляемый |
| 8 мкм ткани Вставки культуры плиты | BD Biosciences | 353097 | Потребляемый |
| 1,5 мл Трубы Микроцентрифуга | Рыбак | 05-408-129 | Потребляемый |
| МТТ реагентов | Invitrogen | M6494 | Потребляемый |
| Диметилсульфоксида | Sigma-Aldrich | D8779 | Потребляемый |
| Qtracker мечения клеток Kit (Q трекер 655) | Молекулярные зонды | Q2502PMP | Потребляемый |
| Коллаген типа 1 | Travigen | 3447-020-01 | Потребляемый |
| Едкий натр | Sigma-Aldrich | S8045 | Потребляемый |
| 12-луночных тканевой культуры | BD Biosciences | 353043 | Потребляемый |
| Центрифугировать | Эппендорф | 5417R | Оборудование |
| Орбитальный Шейкер | Нью-Брансуик Scienctific | C24 | Оборудование |
| Увлажненном инкубаторе с воздушным 5% CO 2 | Thermo Scientific | Модель 370 | Оборудование |
| Накладные мешалки | IKA | Visc6000 | Оборудование |
| Магнитная мешалка | Гранулирование | PC-210 | Оборудование |
| Вакуум-эксикатор | - | - | Оборудование |
| Анализатор размеров частиц | Малверн | STP2000 Spraytec | Оборудование |
| Водяная баня | Fisher Scientific | Isotemp210 | Оборудование |
| Спектрофотометр | Beckman | Beckman Coulter DU800UV/Visible спектрофотометр | Оборудование |
| Вихревой | Diagger | 3030a | Оборудование |
| Считыватель микропланшетов | Molecular Devices | SpectraMax M2 | Оборудование |
| Свет / флуоресцентный микроскоп | Олимп | IX71 | Оборудование |
| Конфокальной микроскопии | Олимп | FV-500 лазерный сканирующий конфокальный микроскоп | Оборудование |
| Сканирующий электронный микроскоп | Carl Zeiss микрофонаroImaging | Лев 435 VP | Оборудование |
| Просвечивающего электронного микроскопа | JEOL | JEOL 1230 | Оборудование |
Ссылки
- Krampera, M. Mesenchymal stem cells for bone, cartilage, tendon and skeletal muscle repair. Bone. 39, 678-683 (2006).
- Patrick, C. W. Tissue engineering strategies for adipose tissue repair. Anat. Rec. 263, 361-366 (2001).
- Pountos, I., Giannoudis, P. V. ....
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Перепечатки и разрешения
Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи
Запросить разрешениеThis article has been published
Video Coming Soon
Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены