Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

ووصف طريقة لتوليف التيتانيوم والفاناديوم وكلاء المضادة للسرطان الحساسة الهواء، جنبا إلى جنب مع تقييم النشاط السامة للخلايا نحو خط الخلايا السرطانية البشرية التي MTT الفحص.

Abstract

التيتانيوم (IV) والفاناديوم (V) المجمعات وكلاء المضادة للسرطان قوية للغاية. ويتمثل التحدي في التوليف يشير إلى عدم استقرارها المائي، وبالتالي ينبغي أن تتم إعدادها في إطار جو خامل. لا يمكن أن يتحقق تقييم النشاط المضادة للسرطان من هذه المجمعات من قبل مقايسة الإنتقالي العسكري.

مقايسة الإنتقالي العسكري هو فحص الجدوى اللونية على أساس الحد الأنزيمية للجزيء الإنتقالي العسكري لformazan عندما يتعرض لخلايا قابلة للحياة. نتائج التخفيض هو تغيير لون جزيء الإنتقالي العسكري. قياسات الامتصاصية النسبي لعنصر تحكم تحديد نسبة الخلايا السرطانية المتبقية بعد العلاج قابلة للحياة مع تركيزات مختلفة من مركب اختبار، والتي تترجم إلى نشاط مضاد للسرطان مجمع وقيمها IC 50. مقايسة الإنتقالي العسكري هو شائع على نطاق واسع في دراسات السمية الخلوية نظرا لدقتها، سرعة، والبساطة النسبية.

نحن هنا قبلأرسلت بروتوكول مفصلة لتركيب الأدوية الهواء المعدنية الحساسة أساس القياسات وبقاء الخلية، بما في ذلك إعداد لوحات الخلايا، الحضانة من المركبات مع خلايا، وقياسات حيوية باستخدام مقايسة الإنتقالي العسكري، وتحديد IC 50 القيم.

Introduction

العلاج الكيميائي لا تزال واحدة من الدورات الرئيسية من العلاجات المستخدمة في عيادة لأمراض السرطان المختلفة، وتتم بالتالي كمية كبيرة من البحوث في جميع أنحاء العالم بهدف تطوير الأدوية المضادة للسرطان جديدة ومحسنة. تبدأ هذه الدراسات في معظمها على مستوى الكيميائية، مع تصميم وإعداد المركبات، تليها التقييم البيولوجي من الخصائص السامة للخلايا في المختبر. يمكن تقييم الجدوى الخلية المقايسات المختلفة التي تقدم معلومات عن النشاط الخلوي 1-2.

سيسبلاتين هو مثال من مجمع البلاتين الذي يستخدم على نطاق واسع كدواء العلاج الكيميائي، الذي يعتبر علاج فعال لسرطان الخصية أساسا والمبيض 3-4. ومع ذلك، في نطاق النشاط الضيقة وآثار جانبية خطيرة تؤدي إلى دراسات أخرى المجمعات المعادن التي تمر بمرحلة انتقالية قوية 5-8. من بين أمور أخرى، والتيتانيوم (IV) والفاناديوم (V) مجمعات أظهرت نتائج واعدة من ارتفاع النشاط وانخفاضسمية 9-16. وكانت منظمة الشفافية الدولية (IV) مجمعات أول من يدخل التجارب السريرية بعد سيسبلاتين بسبب هذه الخصائص، إلا أنها فشلت المحاكمات بسبب صعوبات صياغة وعدم الاستقرار المائي. وبالتالي هناك حاجة لتطوير وتحسين الحالية مشتقات هذه المجمعات المعدنية التي قد تجمع بين النشاط المضادة للسرطان عالية مع مقاومة للماء 15،17-21.

ويتمثل التحدي في إعداد تي (IV) والخامس (V) مجمعات يشير إلى عدم الاستقرار المائي من الكواشف السلائف، وبالتالي، ينبغي الحفاظ على جو خامل. ويجري إعداد تي (IV) والخامس (V) مركبات تحت رقم 2 أو وصول الأوضاع في علبة القفازات أو باستخدام تقنيات خط Schlenk.

ويستند أسلوب واحد مشترك لتقييم النشاط المضاد للسرطان على الإنتقالي العسكري (3 - (4،5-dimethylthiazolyl) بروميد -2،5-diphenyltetrazolium) مقايسة. هذا الفحص هو فحص الجدوى اللونية التي قدمت في عام 1983 من قبل Mosmann22. ودرس بشكل جيد للغاية، وتميزت، ويعتبر كفاءة عالية عند تقييم فعالية من المركبات السامة للخلايا جديدة نظرا لدقتها، سرعة، وقدرتها على أن تطبق على مجموعة متنوعة من خطوط الخلايا. ويستند هذا الاختبار بقاء على تغير لونها للجزيء MTT عندما يتعرض لخلايا قابلة للحياة. قياس الامتصاصية، والتي تتناسب مع عدد من خلايا قابلة للحياة، وبالمقارنة مع الضوابط دون علاج، يمكن تقييم قدرات تثبيط نمو الخلايا المجمع اختبارها.

ويجري الفحص اللونية الإنتقالي العسكري في لوحة شكل 96-23 بشكل جيد. قد تتطلب الخلايا حضن مسبق في الآبار قبل إضافة المخدرات التي تم اختبارها. قد تختلف أوقات حضن مسبق 0-24 ساعة وفقا لخصائص خط الخلية. وعادة ما تتعرض الخلايا إلى المخدرات ل24-96 ساعة اعتمادا على النشاط المخدرات. ثم يضاف محلول MTT إلى الخلايا المعالجة، حيث يصيحآه هو انخفاض الإنتقالي العسكري لformazan الأرجواني من قبل مجموعة متنوعة من الانزيمات الميتوكوندريا وعصاري خلوي التي هي خلايا قابلة للحياة العملية في (الشكل 1) 24. لا يتم تقليل جزيء الإنتقالي العسكري من قبل الخلايا الميتة أو خلايا الدم الحمراء (أيضي الخلايا غير نشط)، وخلايا الطحال (الخلايا يستريح) والخلايا الليمفاوية كونكانافالين حفز A (خلايا تنشيط) 22. بعد 3-4 ساعة من الحضانة مع MTT يترسب formazan. تشكيل formazan يبدأ بعد 0.5 ساعة من الحضانة ولكن من أجل تحقيق النتائج المثلى فمن الأفضل لفضح الخلايا لMTT لا يقل عن 3 ساعة 22. بالتالي، تتم إزالة المتوسطة المتنامية ويذوب formazan في المذيبات العضوية، ويفضل الأيزوبروبانول 25، على الرغم من DMSO يمكن أن تستخدم أيضا 26. القضاء على المتوسط ​​أمر بالغ الأهمية لتحقيق نتائج دقيقة منذ الفينول الحمراء، وهو أمر شائع على نطاق واسع في النمو متوسطة، وعجل البروتينات يمكن أن تتداخل مع قياس الامتصاصية 25. عندما شكليةالحل زان يصل متجانسة، يتم قياس الامتصاصية من الحل باستخدام مطياف قارئ صفيحة ميكروسكوبية. الامتصاصية في 550 نانومتر يتناسب طرديا مع عدد الخلايا في نطاق من الخلايا 200-50،000 لكل بئر، وبالتالي كميات صغيرة جدا من الخلايا يمكن أن يتم الكشف عن 22. الامتصاصية يشير إلى كمية خلايا قابلة للحياة التي بقيت بعد العلاج مع الدواء، ويتم مقارنة الامتصاصية من الخلايا السيطرة التي لم تتعرض لهذا الدواء. تحليل النتائج والبرامج المناسبة يوفر (تركيز تثبيط؛ 50٪) IC 50 القيم والأخطاء الإحصائية على أساس عدة تكرار القياس.

مقايسة الإنتقالي العسكري هو شائع على نطاق واسع في دراسات السمية الخلوية لفحص المركبات المضادة للسرطان جديدة، نظرا لدقتها والبساطة النسبية. ومع ذلك، عند استخدام الفحص الإنتقالي العسكري الذي يعتمد على رد الفعل الأنزيمية، يجب على المرء أن نعتبر أن مختلف مثبطات الإنزيم يمكن أن يؤثر على الحد من الإنتقالي العسكري لد يؤدي إلى نتائج خاطئة 27. بالإضافة إلى ذلك، لا مقايسة الإنتقالي العسكري لا يوفر أي معلومات عن آلية الجزيئية النشاط السامة للخلايا من المخدرات 2.

Protocol

  1. إعداد V (V) معقدة (الشكل 2)؛ 18 السلوك الخطوات 1،1-1،4 في مربع القفازات، وإذا كان صندوق القفازات ليست متاحة، انتقل إلى البديل الخطوتين 2 (2،1-2،6).
    1. تذوب 0.42 مليمول من بروابط H 2 لتر في THF الجافة وإضافته إلى حل التحريك من المبالغ المعادلة من VO (يا أنا العلاقات العامة) 3 في THF.
    2. يحرك خليط التفاعل في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة، وإزالة المواد المتطايرة في ظل فراغ.
    3. إضافة الهكسان الباردة وإزالته تحت فراغ. وينبغي الحصول على مسحوق الأرجواني الداكن في العائد الكمي.
    4. تزن 8 ملغ من مجمع تم الحصول عليها في قارورة إيبندورف. انتقل إلى الخطوة 3.
  2. إعداد مجمع V (V) باستخدام خط Schlenk.
    1. تذوب 0.42 مليمول من L يجند H 2 في THF الجافة في قارورة Schlenk الجافة مع قبعة الحاجز، ونعلق على خط Schlenk وتطبيق بالتناوب فراغ / غاز خامل (N 2 أو سورة) البيئات؛ فمن المستحسن لتطبيق ثلاث ليالياوك جولات والانتظار 2-5 دقائق على مراحل فراغ.
    2. إضافة THF الجافة عن طريق حقنة من خلال الغطاء الحاجز.
    3. إضافة كميات يعادل VO (يا أنا العلاقات العامة) 3 في محلول THF، الذي كان قد أعد بالمثل التي ربط السليم الجافة Schlenk القارورة إلى خط، وتطبيق بيئة خاملة وإضافة الكواشف من خلال حقنة من حل الفاناديوم إلى أن من يجند.
    4. يحرك خليط التفاعل في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة، وإزالة المواد المتطايرة في ظل فراغ، وإذا كان هناك قلق من المنتجات غير مستقرة، وأداء نوع Schlenk التقطير من المواد المتطايرة في ظل جو خامل، واستخدام تدفق غاز خامل إرفاق الأواني الزجاجية المطلوبة التي تم predried .
    5. إضافة الهكسان الباردة وإزالته تحت فراغ. وينبغي الحصول على مسحوق الأرجواني الداكن في العائد الكمي.
    6. تزن 8 ملغ من مجمع تم الحصول عليها في قارورة إيبندورف.
  3. إعداد تي (IV) معقدة (الشكل 2)؛ 28 السلوك الخطوات 3،1-3،3 في مربع القفازات، وإذا كان صندوق القفازات ليست متاحة، وضبط خطوات بديلة لمناقشة التماثلية الفاناديوم (الخطوة 2) التي تستخدم خط Schlenk بدلا من ذلك.
    1. تذوب 0.35 مليمول من L يجند H 2 في THF الجافة وإضافته إلى حل التحريك كميات يعادل تي (يا أنا العلاقات العامة) 4 في THF.
    2. يحرك خليط التفاعل في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 ساعة. إزالة المواد المتطايرة في ظل فراغ لإعطاء المنتج الأصفر في العائد الكمي.
    3. تزن 8 ملغ من مجمع تم الحصول عليها في إيبندورف القارورة.
  4. إعداد HT-29 خلايا لوحة 96 جيدا
    1. ثقافة HT-29 الخلايا في 75 سم 2 قارورة مع المتوسطة RPMI-1640 الذي يحتوي على 1٪ البنسلين / الستربتوميسين المضادات الحيوية، 1٪ L-الجلوتامين، و 10٪ مصل بقري جنيني (FBS)، عند 37 درجة مئوية مع نسبة 5٪ CO 2 .
    2. إزالة المتوسطة عندما تصل خلايا HT-29 confluency القصوى (90-100٪، كل 3-4 أيام دون ثقافة فرعية). تغسل مع 1 ملمن التربسين (0.25٪) / EDTA (0.05٪) حل وإزالته.
    3. إضافة 1 مل من التربسين (0.25٪) / EDTA (0.05٪) حل واحتضان لمدة 5 دقائق.
    4. فصل الخلايا HT-29 من القارورة وإضافة 10 مل من المتوسط ​​إلى تعطيل النشاط التربسين. نقل 5 مل من خليط الخلايا إلى أنبوب.
    5. استخدام ماصة لنقل بضع قطرات من خليط الخلايا في غرفة العداد. ويشمل غرفة العداد 5 × 5 الساحات.
    6. عد الخلايا في 5 الساحات ممثل باستخدام المجهر: المربعات 4 في زوايا واحد هو أن في وسطها.
    7. حساب المبلغ المقدر من خلايا موجودة. خلاصة القول الخلايا في الساحات ممثل 5 والقسمة على 20.
    8. تقسيم 0.6 من نتيجة الخطوة 4.7. عدد تلقى هو مقدار خليط الخلية المطلوبة لكل لوحة. يشير هذا الحساب إلى لوحة تحتوي على 0.6 × 10 6 خلايا (9،000 خلايا لكل بئر).
    9. استخدام ماصة لنقل كمية خليط الخلية المطلوبة لكل عفي وقت متأخر (كما تحسب في القسم 4.8) وإضافة 13.2 مل من المتوسط ​​(200 ميكرولتر لكل بئر × 66 بئرا).
    10. إضافة الخليط إلى لوحة 96 جيدا بنسبة 11 قناة ماصة (200 ميكرولتر لكل بئر، 6 خطوط و 66 بئرا في المجموع). واحد بشكل جيد من كل سطر يجب أن تبقى فارغة للسيطرة فارغة.
    11. احتضان لوحة في 37 درجة مئوية مع 5٪ CO 2 لمدة 24 ساعة للسماح للخلايا لنعلق على لوحة.
  5. الإدراج من المركبات
    1. إضافة 200 ميكرولتر (أو كمية مختلفة وفقا لمجموعة التركيز المطلوب) من THF الجافة إلى 8 ملغ من كل مجمع وزنه كما هو موضح في الخطوة 1.4 (أو 2.6) أو 3.3. تزن 8 ملغ من يجند H 2 L، أيضا.
    2. تمييع كل حل مركب مزيد بإضافة 60 ميكرولتر من THF في 9 قارورة إيبندورف مختلفة.
    3. نقل مع ماصة 60 ميكرولتر من الخليط في القسم 5.1 لأول قارورة إيبندورف، في resuspend ونقل 60 ميكرولتر إلى القارورة المقبل، وهكذا دواليك حتى 10 تركيزات مختلفة سbtained (بما في ذلك الخليط الأصل في القسم 5.1).
    4. تمييع 20 ميكرولتر من كل تركيز في THF مع 180 ميكرولتر من المتوسط.
    5. يعد حل التحكم مع THF فقط، و 20 ميكرولتر من THF مع 180 ميكرولتر من المتوسط ​​في كل قياس.
    6. إضافة 10 ميكرولتر من الحل الناتج (بما في ذلك مراقبة THF)، إلى كل بئر يحتوي بالفعل على 200 ميكرولتر من الحل المذكور أعلاه من الخلايا في المتوسط ​​إلى إعطاء تركيزات النهائية للمجمع تصل إلى 200 ملغ / لتر (نطاق تركيز يمكن ان تتغير وفقا للنشاط المجمع).
    7. قد لاحظت بعض الأمطار على أعلى تركيز تطبيقها اعتمادا على الذوبان في المجمع.
    8. أكرر كل قياس 3X مجمع (3 خطوط في لوحة من نفس المجمع)؛ كل سطر يحتوي على: الخلايا تعامل مع المجمع في 10 تركيزات مختلفة (1)، التي تحتوي على الخلايا المعالجة جيدا مع المذيبات فقط للسيطرة و1 بشكل جيد من دون خلايا فارغة ل السيطرة.
    9. احتضان لوحة تحميلها لمدة 3 أيام في 37 درجة مئوية في 5٪ CO 2 الغلاف الجوي.
  6. قياس السمية الخلوية باستخدام مقايسة الإنتقالي العسكري
    1. إعداد الحل MTT بإضافة 1 غرام من مسحوق MTT إلى 200 مل من محلول متوسطة RPMI-1640 دون الفينول الحمراء. ويمكن تقسيم محلول المخزون إلى 15 مل أنابيب وتخزينها في -20 درجة مئوية.
    2. إضافة 20 ميكرولتر من الحل الإنتقالي العسكري إلى كل بئر باستخدام ماصة 11 قناة (باستثناء لآبار المراقبة فارغة دون الخلايا من الخطوة 4.10)، واحتضان لوحة لمدة 3 ساعة إضافية.
    3. إزالة الحل المتوسطة من كل بئر.
    4. إضافة 200 ميكرولتر من الأيزوبروبانول إلى كل بئر إلى حل formazan. تحريك لوحة ل0.5 ساعة حتى يتم التوصل إلى التجانس.
    5. قياس الامتصاصية في 550 نانومتر ل200 ميكرولتر من الحل المذكور أعلاه من قبل معمل قارئ صفيحة ميكروسكوبية.
    6. أكرر كل قياس (التي تضم 3 التكرار، راجع الخطوة 5.8) في 3 أيام مختلفة.
    7. حساب طنانه نسبة بقاء الخلية عن طريق خصم قيمة الامتصاصية السيطرة فارغة من القيمة المقاسة، وتقسيم الناتج على الامتصاصية من قيمة السيطرة وضرب THF المذيبات بنسبة 100٪.
    8. حساب IC 50 GraphPad القيم باستخدام برامج بريزم (أو ما يعادلها).
    9. وذكرت IC 50 هو متوسط ​​جميع القيم التي تم جمعها على IC 50 على الأقل ثلاثة أيام مختلفة، وقيمة الخطأ هو الانحراف المعياري.

النتائج

أعدت المجمعات على أساس الإجراءات المعمول 18،28 ويمكن تقييم النقاء من خلال تحليل NMR وعنصري.

ويتم تحليل البيانات الواردة من مقايسة الإنتقالي العسكري لتقييم السمسة من المجمع 18،21. أولا، يتم تنفيذ الطرح من السيطرة قيمة الام...

Discussion

الطريقة الموضحة في هذه المخطوطة يجمع بين التركيب الكيميائي البيولوجي مع مقايسة بقاء الخلية. كما هو الحال مع أي الأساليب البيولوجية المتعلقة خلايا قابلة للحياة، فمن الأهمية بمكان أن تعمل في غطاء محرك السيارة الصفحي، والحفاظ على ظروف معقمة، بما في ذلك استخدام المذيب?...

Disclosures

يعلن الكتاب ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

Acknowledgements

وقد تلقت تمويلا من مجلس البحوث الأوروبي في إطار البرنامج الإطاري السابع للجماعة الأوروبية (FP7/2007-2013) / ERC اتفاق منحة لا [239603]

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Reagent/Material
Fetal bovine serum (FBS)Biological Industries04-007-1A
Hexane ARGadot830122313Dried using a solvent drying system
HT-29 cell lineATCCHTB-38
Isopropanol ARGadot830111370
L-glutamineBiological Industries03-020-1B
MTTSigma-AldrichM5655-1G
Penicillin/streptomycin antibioticsBiological Industries03-031-1B
RPMI-1640 with phenol red with L-glutamineSigma-AldrichR8758
RPMI without phenol redBiological Industries01-103-1A
Tetrahydrofuran (THF) ARGadot830156391dried using a solvent drying system
Ti(OiPr)4Sigma-Aldrich205273-500MLmoisture sensitive
Trypsin/EDTABiological Industries03-052-1B
VO(OiPr)3Sigma-Aldrich404926-10Gmoisture sensitive
Equipment
12-channel pipette 30-300 μlThermo Scientific
12-channel pipette 5-50 μlFinnpipette
75 cm2 flaskNUNC156472
96-well plate with lid (flat bottom)NUNC167008
CO2 IncubatorBinderAPT.line C150
Counter chamberMarienfeld-Superior650030
Eppendorf vialKARTELL
Glove boxM. Braun
Laminar flow hoodADS LAMINAIREOPTIMALE 12
Microplate reader spectrophotometerBio-TekEl-800
MicroscopeNikonEclipse TS100
Pipette 20-200 μlFinnpipette
Pipette 5-50 μlFinnpipette

References

  1. Niles, A. L., Moravec, R. A., Riss, T. L. Update on in vitro cytotoxicity assays for drug development. Expert Opinion on Drug Discovery. 3, 655-669 (2008).
  2. Hatok, J., et al. In vitro assays for the evaluation of drug resistance in tumor cells. Clinical and Experimental Medicine. 9, 1-7 (2009).
  3. Wang, D., Lippard, S. J. Cellular processing of platinum anticancer drugs. Nature Reviews Drug Discovery. 4, 307-320 (2005).
  4. Muggia, F. Platinum compounds 30 years after the introduction of cisplatin: Implications for the treatment of ovarian cancer. Gynecologic Oncology. 112, 275-281 (2009).
  5. Bruijnincx, P. C., Sadler, P. J. New trends for metal complexes with anticancer activity. Current Opinion in Chemical Biology. 12, 197-206 (2008).
  6. Ott, I., Gust, R. Non platinum metal complexes as anti-cancer drugs. Archiv der Pharmazie (Weinheim. 340, 117-126 (2007).
  7. Desoize, B. Metals and metal compounds in cancer treatment. Anticancer Research. 24, 1529-1544 (2004).
  8. Jakupec, M. A., Galanski, M., Arion, V. B., Hartinger, C. G., Keppler, B. K. Antitumour metal compounds: more than theme and variations. Dalton Transactions. , 183-194 (2008).
  9. Meléndez, E. Titanium complexes in cancer treatment. Critical Reviews in Oncology/Hematology. 42, 309-315 (2002).
  10. Evangelou, A. M. Vanadium in cancer treatment. Critical Reviews in Oncology/Hematology. 42, 249-265 (2002).
  11. Djordjevic, C. Antitumor activity of vanadium compounds. Metal ions in biological systems. 31, 595-616 (1995).
  12. Caruso, F., Rossi, M., Pettinari, C. Anticancer titanium agents. Expert Opinion on Therapeutic Patents. 11, 969-979 (2001).
  13. Caruso, F., Rossi, M. Antitumor titanium compounds. Mini-Review in Medicinal Chemistry. 4, 49-60 (2004).
  14. Kostova, I. Titanium and vanadium complexes as anticancer agents. Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry. 9, 827-842 (2009).
  15. Tshuva, E. Y., Ashenhurst, J. A. Cytotoxic Titanium(IV) Complexes: Renaissance. European Journal of Inorganic Chemistry. , 2203-2218 (2009).
  16. Buettner, K. M., Valentine, A. M. Bioinorganic Chemistry of Titanium. Chemical Reviews. 112, 1863-1881 (2012).
  17. Meker, S., Margulis-Goshen, K., Weiss, E., Magdassi, S., Tshuva, E. Y. High antitumor activity of highly resistant salan-titanium(IV) complexes in nanoparticles: an identified active species. Angewandte Chemie International Edition in English. 51, 10515-10517 (2012).
  18. Reytman, L., Braitbard, O., Tshuva, E. Y. Highly cytotoxic vanadium(V) complexes of salan ligands; insights on the role of hydrolysis. Dalton Transactions. 41, 5241-5247 (2012).
  19. Tzubery, A., Tshuva, E. Y. Cytotoxicity and Hydrolysis of trans-Ti(IV) Complexes of Salen Ligands: Structure-Activity Relationship Studies. Inorganic Chemistry. 51, 1796-1804 (2012).
  20. Tshuva, E. Y., Peri, D. Modern cytotoxic titanium(IV) complexes; Insights on the enigmatic involvement of hydrolysis. Coordination Chemistry Reviews. 253, 2098-2115 (2009).
  21. Shavit, M., Peri, D., Manna, C. M., Alexander, J. S., Tshuva, E. Y. Active cytotoxic reagents based on non-metallocene non-diketonato well-defined C-2-symmetrical titanium complexes of tetradentate bis(phenolato) ligands. Journal of the American Chemical Society. 129, 12098-12099 (2007).
  22. Mosmann, T. Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival - Application to Proliferation and Cyto-Toxicity Assays. Journal of Immunological Methods. 65 (83), 55-63 (1983).
  23. Ahmadian, S., Barar, J., Saei, A. A., Fakhree, M. A. A., Omidi, Y. Cellular Toxicity of Nanogenomedicine in MCF-7 Cell Line: MTT assay. Journal of Visualized Experiments. (26), e1191 (2009).
  24. Gonzalez, R. J., Tarloff, J. B. Evaluation of hepatic subcellular fractions for Alamar blue and MTT reductase activity. Toxicology in Vitro. 15, 257-259 (2001).
  25. Denizot, F., Lang, R. Rapid Colorimetric Assay for Cell-Growth and Survival - Modifications to the Tetrazolium Dye Procedure Giving Improved Sensitivity and Reliability. Journal of Immunological Methods. 89, 271-277 (1986).
  26. Alley, M. C., et al. Feasibility of drug screening with panels of human tumor cell lines using a microculture tetrazolium assay. Cancer Research. 48, 589-601 (1988).
  27. Weyermann, J., Lochmann, D., Zimmer, A. A practical note on the use of cytotoxicity assays. International Journal of Pharmaceutics. 288, 369-376 (2005).
  28. Chmura, A. J., et al. Group 4 complexes with aminebisphenolate ligands and their application for the ring opening polymerization of cyclic esters. Macromolecules. 39, 7250-7257 (2006).
  29. Sebaugh, J. L. Guidelines for accurate EC50/IC50 estimation. Pharmaceutical Statistics. 10, 128-134 (2011).
  30. Yung, W. K. A. In vitro Chemosensitivity Testing and its Clinical-Application in Human Gliomas. Neurosurgical Review. 12, 197-203 (1989).
  31. McCarthy, N. J., Evan, G. I. . Current Topics in Developmental Biology. 36, 259-278 (1997).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

81 HT 29 MTT IV V

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved