JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يتم تطبيق متحد البؤر المسح المجهري لتصوير الأحداث الميتوكوندريا واحد في القلب perfused أو عضلات الهيكل العظمي في الحيوانات الحية. رصد في الوقت الحقيقي للعمليات الميتوكوندريا واحد مثل ومضات الفائق وغشاء التقلبات المحتملة يمكن تقييم وظيفة الميتوكوندريا في سياق ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية وخلال الاضطرابات المرضية.

Abstract

الحبيبات الخيطية هي عضية داخل الخلايا الحرجة المسؤولة عن إنتاج الطاقة والإشارات بين الخلايا في أنظمة حقيقية النواة. ضعف الميتوكوندريا غالبا ما ترافق وتساهم في الأمراض التي تصيب البشر. وتستند غالبية المناهج التي تم تطويرها لتقييم وظيفة الميتوكوندريا واختلال وظيفي في المختبر أو على فيفو السابقين القياسات. والنتائج من هذه التجارب القدرة في تحديد وظيفة الميتوكوندريا في الجسم الحي محدودة. هنا، نحن تصف الرواية التي تستخدم نهج متحد البؤر المسح المجهري للتصوير الأنسجة سليمة في aminals الحية، والذي يسمح للتقييم وظيفة الميتوكوندريا واحد بطريقة الوقت الحقيقي في الجسم الحي. أولا، نحن توليد الفئران المعدلة وراثيا معربا عن الميتوكوندريا المستهدفة مؤشر الفائق، مبدل دائري بروتين فلوري الصفراء (MT-cpYFP). يتم إصلاح MT-cpYFP تخدير الماوس على محول المرحلة حسب الطلب ويتم أخذ الصور الوقت الفاصل بين وROM عضلات الهيكل العظمي المكشوفة من hindlimb. وضحى الماوس في وقت لاحق ويتم تعيين ما يصل لقلب Langendorff نضح مع حلول فسيولوجية في 37 درجة مئوية. يتم وضع القلب perfused في غرفة خاصة على المسرح المجهر متحد البؤر ويتم تطبيق ضغط لطيف لشل حركة القلب وقمع ضربات القلب التي يسببها قطعة أثرية الحركة. تم الكشف عن ومضات الفائق من قبل في الوقت الحقيقي التصوير 2D متحد البؤر على تردد إطار واحد في الثانية الواحدة. الحل نضح يمكن تعديلها لاحتواء ركائز مختلفة التنفس أو مؤشرات الفلورسنت الأخرى. ويمكن أيضا نضح تعديلها لإنتاج نماذج مرض مثل نقص التروية وضخه. هذا الأسلوب هو نهج فريد لتحديد وظيفة واحدة في الحبيبات الخيطية أنسجة سليمة والحية.

Introduction

الميتوكوندريا تلعب دورا محوريا في الطاقة الحيوية الخلوية، مما يشير الى الجذور الحرة، الأكسدة التوازن، وتنظيم أيون، وتقرير مصير الخلية 1،2. ضعف الميتوكوندريا غالبا ما ترافق وراء التسبب في الأمراض 3-6. وخصوصا في النظم العضلات مثل القلب والعضلات والهيكل العظمي، ويوفر التنفس الميتوكوندريا غالبية ATP لدعم التنظيم في الوقت المناسب من الكالسيوم داخل الخلايا وقوية 7،8 تطوير القوة. هذه العضلات امتلاك عدد كبير من الميتوكوندريا التي غالبا ما تشغل ما يصل الى 20-40٪ من حجم الخلية الكلي و"الثابتة" بين لل myofilaments 2.

على الرغم من العديد من الدراسات، فهمنا للتنظيم وظيفة الميتوكوندريا، وتحديدا في الجسم الحي، وتحت الظروف ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية، محدودة. أحد الأسباب هو أن غالبية الطرق وضعت لتقييم وظيفة الميتوكوندريا في الاعتماد على vitro أو خارج الحي النهج، مثل مراقبة استهلاك الأوكسجين الميتوكوندريا المعزولة تستكمل مع ركائز مصطنعة، وغير المباشرة لتحديد وظيفة الميتوكوندريا من خلال التشكل (مثل الإلكترون المجهري)، نشاط انزيم (مثل النشاط أكونيتاز)، أو مستويات ATP داخل الخلايا 9-11 .

مؤخرا، مؤشرات الفلورسنت جزيء صغير مع تخصيب الميتوكوندريا النسبية طبقت لتقديم لمحة عن إشارات الميتوكوندريا، بما في ذلك إمكانات غشاء، والكالسيوم وأنواع الاكسجين التفاعلية (ROS)، في الخلايا سليمة 11-13. علاوة على ذلك، العديد من الأخضر بروتين فلوري (GFP) الأكسدة ومقرها وضعت مؤشرات لتحقيق ROS تقييم أكثر تحديدا من الأكسدة داخل الخلايا مجزأة أو ROS يشير 14-16. بين هذا، قمنا بتطوير مؤشر المشفرة وراثيا الفائق، ومبدل بروتين فلوري الصفراء دائرية، وtargeteد عليه في الميتوكوندريا (MT-cpYFP) 17. MT-cpYFP يمكن متحمس في 405 أو 488 نانومتر مع كل قمم الانبعاثات في 515 نانومتر. انبعاث في 488 نانومتر الإثارة تستجيب خصيصا لالفائق كما يتضح من السابق في التجارب المختبرية والمعايرة فيفو 17،18. يتم استخدام الانبعاثات في 405 نانومتر الإثارة كما الرقابة الداخلية (يرجى الرجوع إلى الشكل 1 من المرجع 17 للحصول على معلومات مفصلة عن الانبعاثات والإثارة أطياف MT-cpYFP في ظل ظروف مختلفة). مع مرور الزمن التصوير متحد البؤر، وهذا مؤشر يكشف انفجار الأحداث الإنتاج الفائق، واسمه ومضات الفائق، في الميتوكوندريا واحدة من الخلايا سليمة. يقدم الفائق فلاش بوصفها وظيفة مركب من التنفس الميتوكوندريا، المرفقة عابرة الميتوكوندريا الاستقطاب الغشاء وROS إنتاج 17-20. في الآونة الأخيرة، ونحن قد ولدت الأنسجة عموم MT-cpYFP الفئران المعدلة وراثيا باستخدام ناقلات تقوم تقنية-CAGGS-MT-cpYFP 17،19 C57/BL6 على خلفية والتحقق من اكسبريس قويةسيون من هذا المؤشر في قلب والعضلات والهيكل العظمي والأنسجة الأخرى (الشكل 2). فإن الفئران المعدلة وراثيا تكون متاحة للمحققين الأكاديمية المهتمة بناء على طلب وموافقة MTA من جامعة واشنطن.

في هذه الدراسة، ونحن تصف الوضع الطبيعي من ومضات التصوير الفائق في قلب Langendorff perfused وكذلك في الجسم الحي التصوير من الأحداث فلاش في عضلات الهيكل العظمي من تخدير MT-cpYFP الفئران المعدلة وراثيا في 17،19. هذه التكنولوجيا تتيح رصد في الوقت الحقيقي للأحداث إنتاج ريوس الميتوكوندريا واحد في حالة ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية في الجسم الحي أو 21،22. بل هو أيضا من المجدي استخدام نظام لرصد الأخرى المعلمات الميتوكوندريا واحد مثل غشاء المحتملة والكالسيوم مع مؤشرات الفلورسنت المناسبة. التقييم كذلك، في وقت واحد أو بالتوازي وظيفة الميتوكوندريا مع الأحداث داخل الخلايا (مثل العابرين الكالسيوم) أو وظيفة القلب (على سبيل المثال. جزء طرد) لا يمكن أن يتحقق. الاضطرابات المرضية، مثل نقص التروية وضخه، يمكن تطبيقها على قلب perfused لتقييم تأثير الإجهاد على وظيفة الميتوكوندريا واحدة في عضلة القلب سليمة.

Protocol

1. تجربة إعداد

  1. إعداد محلول ملحي متساوي التوتر متوازنة (50 مل) تحتوي على: 140 ملي مول كلوريد الصوديوم، 5 ملي بوكل، 2.5 مم CaCl 2، 2 مم MgCl 2 و 10 ملي HEPES (درجة الحموضة 7.2) لفي الجسم الحي التصوير العضلات والهيكل العظمي.
  2. تحضير 1 لتر من كريبس-هنسلايت العازلة (جسر الملك حسين) التي تحتوي على: 118 ملي مول كلوريد الصوديوم، 5.3 ملي بوكل، 1.2 ملي MgSO 4، 0.5 ملي EDTA و 25 مم 3 NaHCO.
  3. فقاعة في جسر الملك حسين مع الغاز التي تحتوي على 95٪ O 2/5٪ CO 2 لمدة 10-15 دقيقة قبل إضافة 2 مم CaCl 2. إضافة ركائز التمثيل الغذائي (مثل الجلوكوز 10 ملم و 0.5 ملم البيروفات).
  4. إعداد الأدوات الجراحية بواسطة تعقيم المشبك، مقص، وملقط في الايثانول 70٪ ثم الشطف في تعقيم ده 2 O.
  5. بدوره على نظام نضح القلب، وضبط درجة الحرارة على حمام مائي ودائري، ضبط سرعة مضخة تحوي على 6 مل / دقيقة.
  6. فقاعة في جسر الملك حسين مع 95٪ O 2/ 5٪ CO 2 الغاز، ورصد معدل التدفق ودرجة الحرارة (37 درجة مئوية، ودرجة الحرارة قبل التحقيق الألياف البصرية) من النفايات السائلة. يحتاج النظام حوالي 20 دقيقة لدرجة حرارة الغاز وموازنة.

2. التصوير متحد البؤر من عضلات الهيكل العظمي في فيفو

  1. تخدير الفأر مع بنتوباربيتال (80 مغ / كغ، والملكية الفكرية). سوف الحيوان تصل التخدير الجراحي (أي رد حتى أخمص القدمين قرصة) في غضون 10-15 دقيقة والبقاء في هذا الوضع ل1-1.5 ساعة، كافية لفي الجسم الحي التصوير من عضلات الهيكل العظمي.
  2. إزالة الشعر على واحد من hindlimbs وتعقيم الجلد مع الايثانول 70٪.
  3. إجراء شق في الجلد على طول الجانب الخارجي من أطرافهم لفضح عضلات الساق.
  4. التقاط غمد بلطف مع ملقط حادة وإجراء شق من خلال ذلك مع مقص. مزيد من تشريح لإزالة غمد وفضح ألياف العضلات تحتها.
  5. لفي الجسم الحي تحميل TMRM في الهيكل العظميالعضلات، وتشمل TMRM (500 نانومتر) في متساوي التوتر حل متوازن الملح أن تزج العضلات لمدة 30 دقيقة ثم يغسل بها الحل خالية من المؤشر.
  6. وضع الماوس على جانبها على المجهر متحد البؤر (LSM زايس 510) مرحلة وكبح جماح الطرف الخلفي في موقف أن الهيكل العظمي والعضلات تتعرض تواجه ضد ساترة التي تشكل الجزء السفلي من الغرفة. ساترة هو في بين الأنسجة العضلية والهدف مقلوب (النفط 40X).
  7. اضغط على الساق أسفل بلطف لاجراء اتصالات ضيق بين الأنسجة وساترة. تزج العضلات التي تتعرض لها متساوي التوتر حل متوازن الملح.
  8. سجل ثنائية الأبعاد (2D، س ص) وصور متحد البؤر بمعدل عينة من ثانية واحدة لكل إطار. يتم ترقيم شدة كل بكسل على عمق 8 بت. عادة، تفحص المسلسل يحتوي على 100 لقطة.
  9. جمع الصور المتسلسلة التي كتبها الأولى مثيرة في 405 نانومتر وجمع في> 505 نانومتر ثم في 488 نانومتر في حين جمع> 505 نانومتر لثنائي الطول الموجي excitatioن تصوير MT-cpYFP. استخدام الإثارة متتابعة في 405 و 488 و 543 نانومتر، وجمع الانبعاثات في 505-545، 505-545، و> 560 نانومتر، على التوالي، على الثلاثي الطول الموجي الإثارة التصوير MT-cpYFP وTMRM.

3. التصوير متحد البؤر من القلب Perfused ماوس

  1. مباشرة بعد التصوير في الجسم الحي من عضلات الهيكل العظمي، وحقن الفأر مع 200 وحدة من الهيبارين (الملكية الفكرية). بعد عشر دقائق، الموت ببطء الماوس عن طريق بضع الصدر وبسرعة إزالة القلب مع الرئتين والغدة الصعترية المرتبطة به.
  2. بسرعة إزالة الرئة في المخزن الجليد الباردة. تحديد فصوص من الغدة الصعترية وقشر بلطف مرة أخرى لفضح الأبهر الصاعد.
  3. إزالة الغدة الصعترية وعزل الشريان الأورطي عن طريق إزالة أي نوع من الأنسجة المحيطة بها بعناية.
  4. اجراء خفض في نهاية العلوي من الأبهر الصاعد قبل أول فرع من قوس الأبهر.
  5. عقد جدار الشريان الأورطي برفق مع اثنين من الملقط الصغير خياطة لفضح التجويف ووضع بعناية الشريان الأورطي إلى كاليفورنياnnula (PE50 أنبوب). يقام الشريان الأورطي في مكان مع المشبك سفينة صغيرة في حين ترتبط خيوط بسرعة حول الشريان الأورطي.
  6. إزالة المشبك، بعناية تحقق قنية مع ملقط للتأكد من غيض من قنية فوق جذر الأبهر. تضاف العلاقات إضافية حسب الضرورة لعقد القلب في المكان.
  7. بدوره على مضخة تحوي ويروي القلب في 1 مل / دقيقة. فإن القلب استئناف الضرب على الارواء.
  8. ضبط الموقف من نظام الارواء ووضع القلب على المسرح المجهر. المرحلة ديه المحول الذي يسمح التدفئة للغرفة التي تحتوي على القلب.
  9. إضافة 1 مل من محلول الارواء جسر الملك حسين في غرفة لغمر جزئي القلب. مراقبة درجة حرارة الغرفة عند 37 درجة مئوية. إزالة النفايات السائلة من الغرفة باستخدام مضخة تمعجية.
  10. زيادة سرعة مضخة تحوي تدريجيا لتوفير تدفق كاف (حوالي 2 مل / دقيقة) إلى القلب.
  11. بعد 10 دقيقة من الاستقرار، يروي هيئة التعليم العاليغ مع 10 ميكرومتر blebbistatin و100-500 نانومتر TMRM. وسوف تبطئ ضربات القلب بعد 10 دقيقة.
  12. تطبيق ضغط لطيف على القلب للتأكد من ملامسة ضيق من القلب مع ساترة في الجزء السفلي من الغرفة، ومواصلة قمع ضربات القلب.
  13. اتبع نفس الإجراء لتصوير عضلة القلب سليمة مبائر كما هو موضح في الخطوة 2.8 أعلاه. ضبط البؤري بعناية لتكشف أوضح صورة ممكنة.

4. معالجة الصور وتحليل البيانات

  1. استخدام الأدوات التي توفرها "تحليل الفسيولوجية" وحدة من البرنامج لتحليل واحد متحد البؤر الميتوكوندريا ومضات وغشاء التغييرات المحتملة. وغالبا ما تتضمن هذه الوحدة في صورة الحصول على البرمجيات لنظام متحد البؤر ويسمح تحديد مناطق معينة في الصورة وكذلك الناتج من كثافة مضان مع تسميات الوقت.
  2. فتح قاعدة البيانات ثم ملف الصورة 2D المسلسل ليتم تحليلها.
  3. انقر على "المنطقةالاهتمام (ROI) يعني "للتبديل إلى" متوسط ​​رويس "واسطة. انقر على" المنطقة ذات الاهتمام (ROI) يعني "للتبديل إلى" يعني من رويس "واسطة.
  4. إيقاف عرض من القنوات الأخرى باستثناء قناة cpYFP 488 نانومتر لاختيار ومضات.
  5. تكبير الصورة ويدويا نقل شريط الشريحة للعب الصور 2D المسلسل.
  6. تحديد واحد ومضات الفائق الميتوكوندريا من خلال تحديد موقع الموقع حيث الزيادات إشارة الفلورسنت عابر. استخدام أداة ROI مناسبة للاحتفال ومضات. وسوف تتبع تظهر تعتمد على الوقت تغير مضان من كل ROI تظهر بجانب الصورة.
  7. بعد اختيار كل ومضات، بدوره على عرض من القنوات الأخرى. تحديد العائد على الاستثمار على الصورة خارج الخلية لخلفية إشارة الطرح. إخراج متوسط ​​مضان من كل ROI جنبا إلى جنب مع التسميات الوقت.
  8. تسجيل عدد من ومضات في كل من ملف صورة المسح المسلسل مع الوقت ومسح منطقةالخلية. استخدام Excel لحساب تردد فلاش كما عدد من ومضات في 100 ثانية / 1،000 ميكرون 2 مساحة الخلية.
  9. استخدام برنامج نموا العرف مكتوب في اللغة التفاعلية البيانات (IDL، ResearchSystems) لحساب المعلمات كل فلاش (السعة والوقت إلى الذروة ووقت تسوس). برامج IDL هو متاح تجاريا وبرنامج تطوير مخصصة لتحليل المعلمة فلاش يمكن الحصول عليها من المؤلف عند الطلب.

النتائج

وفقا لهذا البروتوكول، في الجسم الحي التصوير من الأحداث الميتوكوندريا واحد يمكن القيام به في عضلات الهيكل العظمي من الفئران تخدير تليها التصوير في الموقع perfused القلب (الشكل 1) في. سوف الإعداد الأمثل للظروف التصوير ضمان صور واضحة للأنسجة العضلات...

Discussion

تصوير الأحداث الميتوكوندريا واحد في الحيوانات الحية أو الأجهزة perfused لديه ميزة كبيرة على الأساليب التقليدية لتقييم وظيفة الميتوكوندريا 17،19،21،22،24،25. تقنية الموضحة هنا يمكن أن يحقق في الوقت الحقيقي في تحديد الموضع وظيفة الميتوكوندريا في حالة فسيولوج?...

Disclosures

يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.

Acknowledgements

فإن الكتاب أود أن أشكر الدكاترة. خه بينغ تشنغ، Huiliang تشانغ وستيفن Kolwicz على تعليقاتهم المفيدة والدعم التقني في تطوير هذا الأسلوب. وأيد هذه الدراسة من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح والمنح الإنمائية العلماء من جمعية القلب الأمريكية لWW.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
REAGENTS
BlebbistatinToronto Research ChemicalsB592500
CaCl2Acros OrganicsAC34961-5000
EDTAFisher ScientificBP120-500
D-GlucoseSigma-AldrichG8270-1
HEPESSigma-AldrichH7006-500
KClSigma-AldrichP9541-1
MgCl2•6H2OFisher ScientificBP214-500
MgSO4•7H2OSigma-AldrichM1880-1
NaClFisher ScientificBP358-212
NaH2PO4Sigma-AldrichS8282-500
NaHCO3Sigma-AldrichS6014-1
PyruvateSigma-AldrichP2256-25
TMRMInvitrogenT-668
EQUIPMENT
Confocal Line Scanning Microscope (LSM 510 Meta, Zeiss), software version 4.2 SP1 including "Physiological Analysis" module.

References

  1. Brookes, P. S., Yoon, Y., Robotham, J. L., Anders, M. W., Calcium Sheu, S. S. Calcium, ATP, and ROS: a mitochondrial love-hate triangle. Am. J. Physiol. Cell Physiol. 287, 817-833 (2004).
  2. Scheffler, I. E. . Mitochondria. , (2008).
  3. Rosca, M. G., Hoppel, C. L. Mitochondria in heart failure. Cardiovasc. Res. 88, 40-50 (2010).
  4. Griffiths, E. J. Mitochondria and heart disease. Adv. Exp. Med. Biol. 942, 249-267 (2012).
  5. Winklhofer, K. F., Haass, C. Mitochondrial dysfunction in Parkinson's disease. Biochim. Biophys. Acta. 1802, 29-44 (2010).
  6. Pieczenik, S. R., Neustadt, J. Mitochondrial dysfunction and molecular pathways of disease. Exp. Mol. Pathol. 83, 84-92 (2007).
  7. Szentesi, P., Zaremba, R., van Mechelen, W., Stienen, G. J. M. ATP utilization for calcium uptake and force production in different types of human skeletal muscle fibres. J. Physiol. 531, 393-403 (2001).
  8. Lemieux, H., Hoppel, C. L. Mitochondria in the human heart. J. Bioenerg. Biomembr. 41, 99-106 (2009).
  9. Chance, B., Williams, G. R. Respiratory enzymes in oxidative phosphorylation. III. The steady state. J. Biol. Chem. 217, 409-427 (1955).
  10. Lambert, A. J., Brand, M. D. Reactive oxygen species production by mitochondria. Methods Mol Biol. 554, 165-181 (2009).
  11. Brand, M. D., Nicholls, D. G. Assessing mitochondrial dysfunction in cells. Biochem. J. 435, 297-312 (2011).
  12. Robinson, K. M., et al. Selective fluorescent imaging of superoxide in vivo using ethidium-based probes. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 15038-15043 (2006).
  13. Dickinson, B. C., Srikun, D., Chang, C. J. Mitochondrial-targeted fluorescent probes for reactive oxygen species. Curr. Opin. Chem. Biol. 14, 50-56 (2010).
  14. Dooley, C. T., et al. Imaging dynamic redox changes in mammalian cells with green fluorescent protein indicators. J. Biol. Chem. 279, 22284-22293 (2004).
  15. Hanson, G. T., et al. Investigating mitochondrial redox potential with redox-sensitive green fluorescent protein indicators. J. Biol. Chem. 279, 13044-13053 (2004).
  16. Belousov, V. V., et al. Genetically encoded fluorescent indicator for intracellular hydrogen peroxide. Nat. Methods. 3, 281-286 (2006).
  17. Wang, W., et al. Superoxide Flashes in Single Mitochondria. Cell. 134, 279-290 (2008).
  18. Wei-Lapierre, L., et al. Respective Contribution of Mitochondrial Superoxide and pH to Mitochondria-targeted Circularly Permuted Yellow Fluorescent Protein (mt-cpYFP) Flash Activity. J. Biol. Chem. 288, 10567-10577 (2013).
  19. Fang, H., et al. Imaging superoxide flash and metabolism-coupled mitochondrial permeability transition in living animals. Cell Res. 21, 1295-1304 (2011).
  20. Wei, L., et al. Mitochondrial superoxide flashes: metabolic biomarkers of skeletal muscle activity and disease. FASEB J. 25, 3068-3078 (2011).
  21. Sheu, S. S., Wang, W., Cheng, H., Dirksen, R. T. Superoxide flashes: illuminating new insights into cardiac ischemia/reperfusion injury. Future Cardiol. 4, 551-554 (2008).
  22. Wei, L., Dirksen, R. T. Perspectives on: SGP symposium on mitochondrial physiology and medicine: mitochondrial superoxide flashes: from discovery to new controversies. J. Gen. Physiol. 139, 425-434 (2012).
  23. Johnson, I., Spence, M. T. Z. Ch. 12.2. The Molecular Probes Handbook, A Guide to Fluorescent Probes and Labeling Technologies. , 510-511 (2013).
  24. Wang, X., et al. Superoxide flashes: elemental events of mitochondrial ROS signaling in the heart. J. Mol. Cell Cardiol. 52, 940-948 (2012).
  25. Li, K., et al. Superoxide flashes reveal novel properties of mitochondrial reactive oxygen species excitability in cardiomyocytes. Biophys. J. 102, 1011-1021 (2012).
  26. Bell, R. M., Mocanu, M. M., Yellon, D. M. Retrograde heart perfusion: The Langendorff technique of isolated heart perfusion. J. Mol. Cell. Cardiol. 50, 940-950 (2011).
  27. Pasdois, P., et al. Effect of diazoxide on flavoprotein oxidation and reactive oxygen species generation during ischemia-reperfusion: a study on Langendorff-perfused rat hearts using optic fibers. Am. J. Physiol. 294, H2088-H2097 (2008).
  28. Granville, D. J., et al. Reduction of ischemia and reperfusion-induced myocardial damage by cytochrome P450 inhibitors. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 1321-1326 (2004).
  29. Davidson, S. M., Yellon, D. M., Murphy, M. P., Duchen, M. R. Slow calcium waves and redox changes precede mitochondrial permeability transition pore opening in the intact heart during hypoxia and reoxygenation. Cardiovasc. Res. 93, 445-453 (2012).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

81 MT cpYFP Langendorff perfused

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved