البناء وتوصيف من طية تفاعلات الاحيائية الرواية الصوتية

Summary

A novel vocal fold bioreactor capable of delivering physiologically relevant, vibratory stimulation to cultured cells is constructed and characterized. This dynamic culture device, when combined with a fibrous poly(ε-caprolactone) scaffold, creates a vocal fold-mimetic environment that modulates the behaviors of mesenchymal stem cells.

Abstract

In vitro engineering of mechanically active tissues requires the presentation of physiologically relevant mechanical conditions to cultured cells. To emulate the dynamic environment of vocal folds, a novel vocal fold bioreactor capable of producing vibratory stimulations at fundamental phonation frequencies is constructed and characterized. The device is composed of a function generator, a power amplifier, a speaker selector and parallel vibration chambers. Individual vibration chambers are created by sandwiching a custom-made silicone membrane between a pair of acrylic blocks. The silicone membrane not only serves as the bottom of the chamber but also provides a mechanism for securing the cell-laden scaffold. Vibration signals, generated by a speaker mounted underneath the bottom acrylic block, are transmitted to the membrane aerodynamically by the oscillating air. Eight identical vibration modules, fixed on two stationary metal bars, are housed in an anti-humidity chamber for long-term operation in a cell culture incubator. The vibration characteristics of the vocal fold bioreactor are analyzed non-destructively using a Laser Doppler Vibrometer (LDV). The utility of the dynamic culture device is demonstrated by culturing cellular constructs in the presence of 200-Hz sinusoidal vibrations with a mid-membrane displacement of 40 µm. Mesenchymal stem cells cultured in the bioreactor respond to the vibratory signals by altering the synthesis and degradation of vocal fold-relevant, extracellular matrix components. The novel bioreactor system presented herein offers an excellent in vitro platform for studying vibration-induced mechanotransduction and for the engineering of functional vocal fold tissues.

Introduction

حظيرة صخبا الإنسان، التي تتألف من طبقة الطلائية، الصفيحة المخصوصة (LP) والعضلات الصوتية، هو الأنسجة الرخوة المتخصصة الذي يحول تدفق الهواء من الرئتين إلى موجات الصوتية لإنتاج الصوت. ¹ الطيات الصوتية تتذبذب بشكل منتظم خلال معالجة حكمية العادية، اظهار سلالات تصل إلى 30٪ عند ترددات الأساسية تتراوح 100-300 هرتز. ² الكبار الصوتية أضعاف LP هو بنية التدرج تتألف من سطحية (SLP)، والمتوسطة (ILP) وعميقة (DLP) طبقة. مجموعات تصنيف مزيد من الظهارة وSLP كطبقة الغشاء المخاطي، ويجمع بين ILP وDLP في الرباط الصوتية. ³ يحتوي على طبقة SLP أساسا مصفوفة غير متبلور مع ألياف كولاجيني فرقت قليلة، في حين يتم تخصيبها في الرباط مع الكولاجين وألياف الإيلاستين ناضجة لتوفير قوة كافية. ⁴ هيكل وآليات الطيات الصوتية حديثي الولادة تختلف كثيرا عن نظرائهم ناضجة. على الرغم من أن آليةلا تزال غير مفهومة و تنظيم التنمية أضعاف صخبا والنضج الكامل، وأشارت الأدلة التجريبية إلى الأدوار المميزة للإجهاد الناجم عن النطق.

العديد من الظروف الطبية، بما في ذلك الإساءة صوت، والالتهابات، والمهيجات الكيميائية العمليات الجراحية، يمكن أن تلحق الضرر أضعاف صخبا. اضطرابات أضعاف الصوتية تؤثر على ما يقدر ب 3-9٪ من سكان الولايات المتحدة. طرق العلاج الحالية لاضطرابات أضعاف صخبا تقتصر ⁵ وبرز نهج هندسة الأنسجة القائمة على الخلايا الجذعية باعتبارها استراتيجية واعدة لاستعادة وظيفة أضعاف صخبا. الخلايا الجذعية الوسيطة (اللجان الدائمة) هي بديل مناسب للالليفية أضعاف صخبا صخبا الرئيسي لهندسة الأنسجة أضعاف. يتم بوساطة ^6-9 مصير الخلايا الجذعية مواصفات والتنمية الأنسجة لاحق من مكانة محددة يقيمون في، منها الحالة الميكانيكية هو عامل حيوي ¹⁰ القوات الميكانيكية والمنظمين أساسيا من الأنسجة التشكل والثانية التوازن، وخاصة بالنسبة الأنسجة التي تتعرض بشكل روتيني لتحميل ¹¹ من منظور هندسة الأنسجة، فقد ثبت أن التعرض لمن الناحية الفسيولوجية ذات الصلة بالتحفيز الميكانيكي يعزز تمايز الخلايا الجذعية والأنسجة محددة مصفوفة إعادة عرض. ^12-15

تم تصميم المفاعلات الحيوية زراعة الأنسجة لمحاكاة البيئة الفسيولوجية المطلوب لنمو الخلايا أو الأنسجة في المختبر. لصخبا هندسة الأنسجة أضعاف، فمن الأهمية بمكان وخاصة لإعادة البيئة الميكانيكية من الطيات الصوتية phonating. مثالية الصوتية أضعاف مفاعل حيوي يجب أن يدلي نحو فعال العظة اهتزازي إلى خلايا الثقافة، والسماح التحكم السهل على التردد، السعة ومدة الاهتزازات. Titze وزملاء العمل وضعت مفاعل حيوي الصوتية أضعاف (T1 مفاعل حيوي) ¹⁶ الذي يجمع بين تمتد ثابت مع ارتفاع وتيرة (20-200 هرتز) التذبذبات لتحفيز إنتاج البروتينات الخلوية المصفوفة. النقيبز هذه مفاعل حيوي، ودرس ويب وزملاؤه ¹⁷ من آثار 10 يوما، الاهتزازات 100 هرتز على الخلايا الليفية الجلدية مثقف في حمض الهيالورونيك (HA) على أساس هيدروجيل. يبني يتعرض للاهتزاز عرضت تعبير مرتفعة من سينسيز HA-2 (HAS2)، decorin، fibromodulin ومصفوفة الفلزي-1 (MMP1)، نسبة إلى ضوابط ثابتة. تم العثور على آثار تنشيطية ليكون الوقت قد حان التابعة. في الآونة الأخيرة، وتجميعها لدينا مجموعة ¹⁸ مفاعل حيوي أضعاف الصوتية (J1 مفاعل حيوي) باستخدام مكبر للصوت السلطة، ومولد وظيفة، وهو المتكلم بصوت عال المغلقة وغشاء السيليكون الراسية محيطي التي تنقل الهواء تتأرجح إلى الخلايا المرفقة. وتعرض الخلايا الليفية القلفة حديثي الولادة المزروعة في مفاعل حيوي J1 إلى 1 ساعة من الاهتزاز عند 60، 110 أو 300 هرتز، مع الضغط في الطائرة تصل إلى 0.05٪. اقترح نتائج QPCR أن التعبير عن بعض الجينات ECM تم تغيير معتدلة ردا على الترددات الاهتزازية متنوعةوسعة.

هذه التصاميم مفاعل حيوي، في حين فضول، لديها العديد من القيود. على سبيل المثال، يتطلب النظام T1 عدد كبير من الروابط والقضبان لاقتران الميكانيكية، والحد الأقصى للترددات يمكن بلوغه. علاوة على ذلك، قد يتعرض لخلايا غير مرغوبة الميكانيكية التحريض والسوائل الاضطراب التي تعقد تفسير البيانات. مفاعل حيوي J1، من ناحية أخرى، يسلك منخفضة نسبيا كفاءة تحويل الطاقة وليس سهل الاستعمال. بالإضافة إلى ذلك، في كثير من الأحيان الاهتزاز يفصل يبني خلايا لادن من غشاء السيليكون الأساسية. وJ2 أضعاف صخبا مفاعل حيوي ذكرت هنا، والمصممة على أساس المبدأ نفسه كإصدار J1، هو الأمثل من أجل التناسق والتكاثر. يتم إنشاء الاهتزازات محاكاة معالجة حكمية ديناميكية هوائية في غرف الاهتزاز تركيبها بشكل فردي حيث MSC-بالسكان بولي الليفية (ε-caprolactone) (PCL) السقالات هي فعاليهتأمين اعل. الليزر دوبلر Vibrometry (LDV) يسمح للمستخدم للتحقق من البيانات الشخصية اهتزازي للجمعية الغشاء / السقالة. في مظاهرة لدينا، ويتعرض اللجان الدائمة إلى 200 هرتز الاهتزازات الجيبية مع (من) نمط 1-HR-على-1-HR-قبالة ليصبح المجموع 12 ساعة يوميا لمدة 7 أيام. يتم التحقيق في الاستجابات الخلوية لمنبهات اهتزازي فرض منهجي. وعموما، فإن أضعاف صخبا J2 يوفر معظم ميزات سهلة الاستخدام، مما يسمح لإجراء دراسات ثقافة الخلية الحيوية في إنتاجية عالية والأزياء استنساخه.

Protocol

1. الجمعية تفاعلات الاحيائية (فيديو 1)

1. جعل العفن الألومنيوم (يموت دائرية + فاصل دبوس) مع الأبعاد الداخلية والخارجية محددة سلفا (الشكل 1).
2. باستخدام قالب من الخطوة 1.1، افتعال غشاء السيليكون (قطر: 42 مم، سماكة: 1.5 مم، الشكل 1) مع الأكمام الراسخة (قطر: 12 مم، سماكة 0.25 مم ~، التي شكلتها دبوس الفاصل في الشكل 1) في منتصف باستخدام المتاحة تجاريا السيليكون عدة المطاط الصناعي.
3. جعل زوج من كتل الاكريليك (الشكل 2 (4، 5)) مع فتحة دائرية (قطر: 24 مم) في الوسط، نقش أعلى (1.8 سم) وأسفل (0.9 سم) مع كتل مطابقة التلال والأخاديد ¹⁰
4. ساندويتش غشاء السيليكون بين الكتل الاكريليك المقترنة. تأمين التجمع مع أربعة مسامير الزاوية باستخدام مفك البراغي عزم الدوران الدقيقة تعيين إلى قوة ثابتة (35 CN · م). ونتيجة لذلك، ضيق في الماء، 24 ميتم إنشاء مترا و 18 مم غرفة الاهتزاز العميق (الشكل 2C).
5. جبل 3 ^{"مجموعة} موسعة مصغرة مكبر الصوت (الشكل 2D، 8 Ω/20 W) تحت غرفة الاهتزاز من خلال مجموعة أخرى من مسامير الزاوية على كتلة الاكريليك القاع. عند هذه النقطة، يتم تجميعها وحدة اهتزاز الفردية.
6. تكرار سبع وحدات إضافية الاهتزاز. يضعوا أربعة منهم إلى واحد من اثنين من قضبان الألومنيوم ثابتة (40 سم × 10 سم × 2.5 سم) من خلال وضع قواعد مكبر الصوت في فتحات دائرية متباعدة بشكل متساو (الإطارات: 7 سم، وسمك: 2 سم) يقتطع من القضبان. استقرار لكل متكلم عن طريق إدخال المسمار من خلال الجانب من شريط الألمنيوم في كل حفرة دائرية.
7. السيطرة بشكل فردي عن طريق مكبرات الصوت المتكلم محدد. ربط مكبرات الصوت الفردي إلى محدد عن طريق ربط أسلاك إلى المدخلات الإيجابية والسلبية على الجسم المتكلم ثم إلى النواتج المقابلة على محدد. يسمح محدد المتكلم الإشارة من روقال انه وظيفة مولد، بعد مروره عبر مكبر للصوت السلطة، للوصول إلى جميع المتحدثين ثمانية في آن واحد (الشكل 2E).
8. وضع اثنين من صفائف غرفة، محدد المتكلم والإلكترونيات المرتبطة في ضميمة مكافحة الرطوبة. إيواء التجمع بأكمله في المجال التجاري حاضنة الثقافة الخلية.
9. تغذية الكابلات الرئيسية (من خلال أنابيب PVC الصف الطبية) الذي يربط السلطة مكبر للصوت المتكلم ومحدد من خلال التجميع مرشح في الجزء الخلفي من الحاضنة.

2. تصنيع وتوصيف سقالة

1. حل الكريات PCL في الكلوروفورم بتركيز 15٪ بالوزن. تحميل الحل في حقنة 10 مل توج مع 21 G-كليلة العضوية الإبرة.
2. قفل الحقنة على مضخة المحاقن برمجة وضبط معدل التدفق في 1 مل / ساعة.
3. وضع الألمنيوم المغطاة احباط جامع على الجانب الآخر من الإبرة أفقيا، مع إبرة مسافة طرف إلى هواة جمع ~ 18 سم.
4. المشبك المعلى إيجابيةمقطع التمساح إلى منتصف الإبرة، والتمساح كليب الأرض إلى مجمع الألومنيوم، ثم تعيين الجهد على الجهد العالي امدادات الطاقة في 15 كيلو فولت. تنبيه: عالية الجهد، والحفاظ على مسافة واحدة من الإبرة.
5. بدوره بالتتابع على ضخ حقنة وإمدادات الطاقة؛ بسرعة نظيفة / إزالة حل البوليمر المتبقية المحيطة غيض من إبرة باستخدام منشفة ورقية جافة قبل طائرات الألياف مستقرة وتتشكل تايلور مخروط ^19.
6. تسمح للألياف تتراكم على جامع آل إلى سمك 250-300 ميكرون ~ (~ 7 ساعة في ظل الظروف الحالية الغزل). تخزين السقالات الناتجة في مجفف فراغ لمدة 1-2 أيام لإزالة أي المذيبات المتبقية.
7. صورة السقالات، تفل المغلفة بالذهب، وذلك باستخدام مجهر المسح الإلكتروني لتظهر مورفولوجيا الألياف متسقة. ¹⁰

3. الجمعية تفاعلات الاحيائية وتوصيف

1. لكمة قرص اسطواني (قطر: 8 ملم) مع أربعة أذرع (طول: 2مم) من PCL حصيرة (الشكل 2A)، ونسج من قبل أول استخدام 12 ملم خزعة قطر لكمة لخفض القطر الخارجي للقرص. ثم استخدم في الثانية، 8 ملم خزعة لكمة لتقديم أربعة 2 مم الشقوق طويلة متباعدة بشكل متساو في جميع أنحاء شفرة دائرية ليسجل أين هي الأسلحة إلى قطع. بعد أن سجل مع 8 مم لكمة، واستخدام شفرة مشرط لقطع حواف الأسلحة إلى الخارج. إدراج السقالة في أخدود من غشاء السيليكون عن طريق الأسلحة الموسعة (فيديو 1). تتسطح السقالة إدراجها عن طريق الضغط بلطف على سطح مسطح الرأس باستخدام الملقط.
2. نعلق قطعة صغيرة رقيقة آل احباط (8 مم × 2 مم، شكل متعامد الشكل 2B) لالسقالة PCL لمساعدة انعكاس الليزر.
3. تأمين السيليكون الغشاء / السقالة PCL تجميعها (كما هو موضح في الخطوة 1.4) في غرفة الاهتزاز. إضافة 1.5 مل من الماء في غرفة من أجل ترطيب السقالة PCL قبل الاهتزاز.
4. باستخدام مولد وظيفة، وإدخال علامة الاهتزازالمرض (على سبيل المثال، 200 هرتز موجات جيبية مع الجهد الذروة إلى الذروة، بي بي، من 0.1 V) إلى غرفة تقع الاكريليك. استخدام الفولتميتر لقياس بدقة الجهد في كل المدخلات المتكلم. ملاحظة: سوف قراءات بي بي من مولد وظيفة تختلف عن الجهد في نهاية المطاف تسليمها للمتكلم.
5. تجميع LDV نقطة واحدة وتأمين الليزر رئيس جهاز استشعار الألياف البصرية لترايبود رئيس عموم إمالة. زاوية رئيس مجس بحيث يشير عمودي على الطاولة. ربط رئيس جهاز استشعار LDV إلى وحدة جمع البيانات عن طريق كابل متحد المحور ثم وحدة للمحمول عن طريق USB.
6. تركيز شعاع الليزر عموديا على مختلف النقاط المحددة سلفا على غشاء السيليكون (الشكل 2B والشكل 3).
7. باستخدام برنامج الحصول على البيانات، وتسجيل تشريد منتصف الغشاء. انقر على زر "إعدادات اقتناء" من القائمة "خيارات"؛ ثم تغيير وضع قياس ل"الاتحاد الفرنسي للتنس221؛ المقبل، انقر فوق "القياس المستمر" في شريط الأدوات الرئيسي ثم انقر فوق الذروة التي تشكل على التردد المختار (الشكل 6D) لتسجيل النزوح.
8. رسم العادي النزوح منتصف الغشاء (ث ₀₎ بوصفها وظيفة من الوضع النسبي عبر الركيزة. بناء خارطة الألوان 3D من التشكيل الجانبي اهتزازي السطح باستخدام البرمجيات المنشأ تحليل البيانات 8.5.

4. الاهتزازي خلية ثقافة

1. اللجان الدائمة المشتقة من نخاع العظام ثقافة فرعية الإنسان في T150 قوارير زراعة الأنسجة في كثافة البذر الأولي من 4،000-5،000 خلية / سم ² في وسائل الإعلام MSC الصيانة.
2. بعد 7-8 أيام من خلية ثقافة (ل~ 85٪ confluency)، يعرض للتريبسين الخلايا مع كاشف تفارق الخلية مثل accutase، عد باستخدام عدادة الكريات، الطرد المركزي (440 x ج لمدة 5 دقائق)، وإعادة تعليق بيليه خلية في وسائل الإعلام الجديدة الصيانة MSC بتركيز 4.5 × 10 ⁶ خلية / مل.
3. تزج scaffo PCLدينار في الايثانول 70٪ O / N. بعد يبخر المذيب، وتعريض الجانبين من السقالة لضوء الأشعة فوق البنفسجية مبيد للجراثيم (254 نانومتر) ل5-8 دقيقة.
4. نقع السقالة PCL في حل فبرونيكتين 20 ميكروغرام / مل عند 37 درجة مئوية لمدة 1 ساعة. إدراج السقالة المغلفة فبرونيكتين في غشاء السيليكون. تجميع مفاعل حيوي على النحو المفصل في الخطوة 1.
5. توزيع 40 ميكرولتر من تعليق الخلية بالتساوي على السقالة PCL المضمون. تسمح للخلايا لنعلق ل1-1.5 ساعة قبل إضافة إلى 1.5 مل إضافية وسائل الإعلام الجديدة إلى غرفة الاهتزاز.
6. ثقافة السقالة-MSC لادن PCL بشكل ثابت لمدة 3 أيام، وتحديث وسائل الإعلام عند الانتهاء من ثقافة ساكنة.
7. فرض أنظمة الاهتزاز المحددة إلى بنيات الخلوية. ملاحظة: وكمثال على ذلك، تتعرض الخلايا إلى 1-HR-على-1-HR-إيقاف (OF) اهتزاز عند 200 هرتز مع فصيل عبد الواحد ₀ من ~ 40 ميكرون لمدة 12 ساعة في اليوم لمدة تصل إلى 7 أيام. يتم تعيين بنيات تعرض للالتحفيز اهتزازي كعينات VIB وتلك cultuأحمر ثابت في غرف الاهتزاز متطابقة خدمة ضوابط ثابتة مثل (ستات).

5. التقييم البيولوجي

1. جمع 200 ميكرولتر الخلية سائل الإعلام والثقافة من كل غرفة كل يوم (يوم 1 و 3 و 5 و 7) وتجميع مأخوذة من نفس العينة معا (800 ميكرولتر لكل منهما).
2. تحديد إنتاج الخلوية من مصفوفة الفلزي-1 (MMP1) وHA باستخدام عدة MMP1 ELISA التنمية وحمض الهيالورونيك تنافسية ELISA عدة، على التوالي، في أعقاب إجراء الصانعين. وفي الوقت نفسه، مقايسة إنتاج الإيلاستين للذوبان السلائف باتباع الإجراء ELISA ذكرت سابقا. ⁸
3. عند الانتهاء من دورة اهتزاز مشاركة في اليوم 7، وإزالة بسرعة يبني الخلوية من غرف الاهتزاز باستخدام الملقط حادة وشطف لهم مع الفوسفات مخزنة المالحة الباردة (PBS، 4 ° C) لفترة وجيزة.
4. ل/ تلطيخ ميتة حية، واحتضان يبني مع يوديد propidium (1:2،000 في برنامج تلفزيوني) وSyto-13 (1:1،000 في برنامج تلفزيوني) في وقت واحد لمدة 5 دقائق على RT. صورة بنيات ملطخة المجهر multiphoton متحد البؤر.
5. بشكل منفصل، الأداة الإضافية تجميد البنى الخلوية PBS تشطف على الثلج الجاف واستخراج الحمض النووي الريبي مجموع الخلوية التالية بروتوكول ذكرت سابقا لتحليل الجينات. ⁹
6. التحقق من كمية ونوعية الحمض النووي الريبي المستخرج باستخدام مطياف الأشعة فوق البنفسجية فيز. وتستخدم عينات الحمض النووي الريبي مع A260/A280 وA260/A230 نسب 1.8-2.2 لتحليل QPCR اللاحقة.
7. عكس نسخ الحمض النووي الريبي (500 نانوغرام / عينة) في [كدنا] باستخدام مجموعة النسخ العكسي متاحة تجاريا.
8. نفذ تفاعل PCR على الوقت الحقيقي نظام الكشف عن تسلسل باستخدام المتاحة تجاريا مزيج الرئيسي PCR باتباع الإجراء بالتفصيل سابقا. ⁸
9. تحليل النتائج باستخدام QPCR التجارية برمجيات تحليل البيانات QPCR. لضمان موثوقية من تحليل البيانات، ويعمل جينات مرجعية متعددة (YWHAZ، TBP، PPIA) ك intضوابط ernal، والتباين من الكفاءة التمهيدي محددة يتم أخذها بعين الاعتبار. ⁸

النتائج

السقالات PCL ملفقة من قبل electrospinning تحتوي على مسام ميكرون الخلالي الحجم والألياف عشوائيا متشابكا مع متوسط ​​قطرها 4.7 ميكرون (الشكل 4A). في التكبير العالي، الأخاديد النانو والمسام واضحة على ألياف الفردية (الشكل 4B). طلاء من السقالات مع فبرونيكتين يحسن hydr...

Discussion

الهندسة ناجحة للأنسجة أضعاف صخبا وظيفية في المختبر يتطلب الترفيه من مثل أضعاف المكروية الصوتية للتوسط في سلوك خلايا متعددة القدرات. ومن المتفق عليه عموما أن النسيج أو العضو الهياكل تعكس المهام التي يتعين عليهم القيام بها. الأنسجة ^لل22 أضعاف صخبا، تقترح ال?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
silicone elastomer kit	Dow Corning	Sylgard 184	cure the membrane at 100 C for 2 hr
PCL	Sigma Aldrich	440744-500G	Mn ~ 80 kDa, dissolve overnight
chloroform	Sigma Aldrich	C7559-5VL
human bone marrow-derived MSCs	Lonza	PT-2501	received with passage 2
MSC maintenance media	Lonza	PT-3001	10% FBS in basal media supplemented with L-glutamine, gentamicin and amphotericin
Accutase cell dissociation reagent	Life Technologies	A11105-01
ethanol	Sigma Aldrich	E7023-500ML
fibronectin	Sigma Aldrich	F2006-1MG
MMP1 DuoSet ELISA kit	R&D systems	DY901
HA ELISA kit	Echelon Biosciences	K-1200
PBS	Life Technologies	14190-136
propidium iodide	Life Technologies	P1304MP
Syto-13	Life Technologies	S7575
QuantiTect reverse transcription kit	Qiagen	205311
SYBR Green PCR master mix	Life Technologies	4309155
replacement speaker	DAYTON audio (via Parts Express)	DS90-8	paper cone, full range (80-13000 Hz), 85dB
Ergo Micro torque screwdriver	Mountz	# 020377	torque range: 20-120 cN.m
stereo speaker selector	RadioShack	40-244	maximum power handling 50 W
function generator	Agilent	33220A	frequency range 1 µHz- 20 MHz
power amplifier	PYLE audio	PylePro PT2400	frequency response: 10 Hz-50 kHz, two speaker channels
cell culture incubator	Thermo Fisher	Steri-Cult 3307
syringe pump	New Era Pump Systems	NE-300
High voltage power supply	Spellman	CZE 1000R	output voltage: 0-30 kV
scanning electron microscope	JEOL-USA	JSM-7400F
desk gold sputter coater	Denton Vacuum	DSK00V-0013
Doppler laser vibrometer	Polytec	PDV-100	non-contact velocity measurement (0-22 kHz)
PCR sequence detection system	Applied Biosystems	ABI7300
multiphoton confocal microscope	Zeiss	Zeiss 510Meta NLO
UV-VIS Spectrophotometer	NanoDrop Products via Thermo Scientific	ND-2000
VibSoft Data Acquisition Software	Polytec		acquisition bandwidth up to 40 MHz
Origin 8.5 data analysis software	OriginLab
qbasePlus qPCR data analysis software	Biogazelle	V2.3
aluminium alloy	McMaster-Carr	Alloy 6061
acrylic blocks	McMaster-Carr
polycarbonate anti-humidity chamber	McMaster-Carr		Impact-Resistant Polycarbonate
screws	McMaster-Carr
electronic cable/wire
medical grade PVC tubing	US Plastic Corp.	Tygon S-50-HL	clear, biocompatible
10 mL syringe	Becton Dickinson	309604
21 G blunt ended needle	Small Parts	NE-213PL-25	1-1/2" length
Alligator clip adapters	RadioShack	270-354	fully insulated
8 mm biopsy punch	Sklar Surgical Instruments	96-1152	sterile, disposable
12 mm biopsy punch	Acuderm (via Fisher Scientific)	NC9998681
tissue culture flasks	Corning		cell culture treated