عزل وعن طريق أقسام الأبقار الشريان والوريد المساريقي باعتباره الأحيائي لاختبار لVasoactivity في الأمعاء الدقيقة

Summary

وكثيرا ما تتعرض الأمعاء الدقيقة للسموم التي يمكن أن تؤثر على تدفق الدم وتؤثر سلبا على امتصاص العناصر الغذائية. باستخدام الشريان المساريقي وmultimyograph ويعزل الوريد، المركبات أو السموم من الفائدة يمكن فرزهم لvasoactivity.

Abstract

يتعرض الجهاز الهضمي الثدييات باستمرار لمركبات (المرغوبة وغير المرغوبة) التي يمكن أن يكون لها تأثير على تدفق الدم من وإلى هذا النظام. التغيرات في تدفق الدم إلى الأمعاء الدقيقة يمكن أن يؤدي إلى آثار على وظائف الاستيعابية للجهاز. وقد وضعت مصلحة خاصة في السموم تتحرر من الأعلاف من خلال عمليات التخمر والهضم في المجترات كمجال حيث يمكن تحسين الكفاءة الإنتاجية. الفيديو المرتبطة بهذا المقال يصف الأحيائي في المختبر وضعت لمركبات الشاشة لvasoactivity معزولة في المقاطع العرضية من الشريان المساريقي البقري والوريد باستخدام multimyograph. مرة واحدة هي التي شنت الأوعية الدموية ومعايرتها في مخطاط العضل، والأحيائي نفسها يمكن استخدامها: كأداة فحص لتقييم الاستجابة مقلص أو vasoactivity من المركبات المصالح؛ تحديد وجود أنواع مستقبلات خلال استهداف دواء مستقبلات مع ناهض محددق. تحديد دور مستقبلات مع وجود واحد أو أكثر من الخصوم. أو تحديد التفاعلات المحتملة للمركبات في المصالح مع الخصوم. من خلال كل هذا، يتم جمع البيانات في الوقت الحقيقي، والأنسجة التي تم جمعها من حيوان واحد يمكن أن يتعرض لعدد كبير من العلاجات التجريبية المختلفة (ميزة في المختبر)، ويمثل الأوعية الدموية على جانبي السرير الشعرية لتوفير دقة صورة لما يمكن أن يحدث في وارد وصادر دعم إمدادات الدم إلى الأمعاء الدقيقة.

Introduction

التغيرات في تدفق الدم إلى الأنسجة سرير يمكن أن يكون لها تأثير كبير على وظيفة الجهاز. والوظيفة الرئيسية من الأمعاء الدقيقة لامتصاص العناصر الغذائية. مطلوب تدفق الدم الشرياني إلى السطح الاستيعابية للامعاء لامتصاص تدفق الدم وزيادة المغذيات للمساعدة في امتصاص العناصر الغذائية كما هضامة التحركات على طول السطح ^1. وحدث انخفاض في تدفق الدم يمكن أن يسبب انخفاض في امتصاص العناصر الغذائية بسبب انخفاض في الانحدار بطريق الظهارة ^2. بالإضافة إلى المواد الغذائية، ويمكن أيضا أن يتعرض الأمعاء الدقيقة إلى نواتج الأيض الثانوية، والمخدرات، أو السموم التي تمارس تأثير على تدفق الدم الموضعي في مساريق. في حالة الحيوانات المجترة، والمركبات يمكن ان تتحرر من الاعلاف (مثل المواد الغذائية مثل الأحماض الأمينية، أو السموم مثل قلويدات الشقران) من خلال عمليات التخمر من المعى الأمامي. إذا كانت هذه المركبات البقاء على قيد الحياة الأيض الميكروبي التخمير الكرش، فهي الآن متاحة للامتصاصأو التفاعل أثناء سفرهم من خلال القناة الهضمية للحيوان.

هناك عدد من الأساليب المختلفة المتاحة لقياس تدفق الدم في الجسم الحي (على سبيل المثال، دوبلر بالموجات فوق الصوتية، ساكن مقاييس التدفق الدم، رديولبلد المجهرية، وتقنيات مؤشر-تمييع) التي تسمح تقييم السيناريوهات المختلفة أو العلاجات التجريبية. ومع ذلك، للحصول على معلومات حول الخصائص الميكانيكية أو الدوائية من العضلات الملساء الوعائية، وظلت أساليب محدودة للسفن الكبيرة حتى Mulvany وهالبيرن ³ نشرت مقالا يصف التقنية باستخدام سلك شنت الاستعدادات حلقة الأوعية الدموية في مخطاط العضل. منذ تطوير هذه التقنية ما زالت التعديلات التي ينبغي إدخالها على النظم المرتبطة مخطاط العضل التي تسمح مجموعة متنوعة من التطبيقات المختلفة لتقييم الهياكل الأنبوبية. كما تم تكييف هذا النظام لاستخدام قضبان ثابتة لتركيب السفن الكبيرة ⁴ حيث نضحلم يتم المطلوب التقنيات.

بسبب الاختلاف في السفن من أصول التشريحية المختلفة والفروق في نفس السفن من أنواع مختلفة من الحيوانات، والبيانات من السفينة ونوع الحيوان لا يمكن بسهولة استقراء عبر السفن المختلفة أو نفس السفينة في أنواع حيوانية مختلفة ^5. وبالتالي، يجب تطوير اختبارات بيولوجية منفصلة والتحقق من صحة أي وقت يتم تغيير هذه الجوانب. في الآونة الأخيرة تم تطوير عدة اختبارات بيولوجية مع هذه التقنيات لاستخدامها في الماشية الوحشي الوريد الصافن والشريان والوريد الأيمن الكرش ^6،7.

وقد وضعت هذه الأحيائي للتحقيق على وجه التحديد الآثار التي قلويدات الشقران لها على دعم الأوعية الدموية في الأمعاء الدقيقة. أفيد بأن 50-60٪ من القلويدات تغذية تظهر في محتويات ابوماسال، ولكن يتم استرداد 5٪ فقط في البراز ^8. وذكر ستريكلاند وآخرون. ⁹ في مراجعة قلويدات الشقران، التي سوج البيانات المتاحةطبقا لتقديرات أن الأمعاء الدقيقة قد تكون أهم موقع لامتصاص ergopeptine. إيكرت وآخرون ¹⁰ الجوانب الصيدلانية البيولوجية استعرض قلويدات من الشقران وذكرت أنه بمجرد عبورهم الحاجز الظهاري، ويتم نقل قلويدات الشقران إما عن طريق الجهاز اللمفاوي إلى الوريد تحت الترقوة أو عن طريق الوريد المساريقي والى الدم البابي. رودس وآخرون ¹¹ سجلت انخفاضا في تدفق الدم إلى الاثني عشر والقولون في يرسم تستهلك عالية المصابة نابوت داخلي (عالية الشقران قلويد) النظام الغذائي. باستخدام الصحيح الكرش الشريان والوريد الأحيائي، فوت وآخرون ¹² أثبتت أن قلويدات الشقران هي فعال في الأوعية في الأوعية الدموية الكرش. فوت وآخرون ¹³ أظهرت في وقت لاحق في الجسم الحي أن التعرض الكرش إلى نتائج قلويدات الشقران في الكرش انخفاض تدفق الدم الظهارية. هذا الانخفاض في تدفق الدم إلى السطح الاستيعابية للالكرش تسبب بالتزامن انخفاض في المغذيات (الأحماض الدهنية المتطايرة) تدفق. نظرا لتشوantity من قلويدات الشقران يمر إلى الأمعاء الدقيقة من المعى الأمامي. كان الافتراض بأن تأثير مماثل على الأوعية الدموية في الأمعاء الصغيرة وامتصاص العناصر الغذائية يمكن أن يحدث. هذا استلزم تطوير البقري القريبة الشريان المساريقي اللفائفي والوريد الأحيائي.

Protocol

ولم الإجراءات المستخدمة في هذه الدراسة لا تتطلب موافقة من جامعة كنتاكي رعاية الحيوان واستخدام اللجنة لأنه تم استخدام أي الحيوانات الحية. قبل جمع أي عينة المستخدمة هنا، وقد فاجأ جميع الحيوانات مع الترباس الأسير وexsanguinated. وقد أجريت هذه في منشأة مسلخ تفقد اتحاديا في جامعة كنتاكي. لاحظ ممثل رسمي لسلامة الأغذية والتفتيش الخدمة USDA جميع الأنشطة التي تناولت الحيوانات الحية والتعامل مع الذبيحة.

1. إعداد الأجهزة

1. لتقليل مقدار الوقت بين مجموعات من عينات الأنسجة إلى بداية تجربة، نصب المعدات وإعداد مخازن قبل جمع الأنسجة التجريبية (أو إذا هم أفراد إضافيين المتاحة، يمكن أن تحدث هذه المهام في وقت واحد).
   ملاحظة: هذا ليس فقط يوفر أكبر قدر من الوقت الذي لا تزال قابلة للحياة الأنسجة لإجراء التجارب، ولكن بعضيمكن أن تجارب تشغيل لفترات طويلة من الزمن (أو أن هناك رغبة في إكمال تجارب متعددة في يوم واحد)، لذلك فإنه عادة ما يكون من المرغوب فيه أن تبدأ في أقرب وقت ممكن.
2. السلطة حتى الكمبيوتر المرتبطة بها، المعدات الاستحواذ البيانات، حمام الماء (لعازلة (ق)) ومخطاط العضل وحدة (ق). وضع معايرة المعدات على الوحدة مخطاط العضل (ق) وتشغيل الحرارة مخطاط العضل (مسبقا إلى 37.5 درجة مئوية) والسماح الوحدات والمعدات المعايرة لتدفئة مسبقا لدرجات الحرارة.
   1. فتح ملف إعدادات برنامج مخطط إنشاؤها مسبقا على الكمبيوتر والبدء في تشغيل (ولكن ليس الحصول على البيانات).
3. الاحماء المعدات لمدة 10 دقيقة.
   1. بدء الحصول على البيانات.
   2. جميع القنوات الصفر.
   3. تحقق، وإجراء معايرة (إذا لزم الأمر) على كل قناة (4 قنوات في multimyograph) لتوحيد الإشارات الكهربائية الموردة من محول قوة كل منها يرتبط مع تلك القناة إلى قوة 2-G المقدمة من وزن المعتمدة.
   4. بعد الانتهاء من المعايرة وتحويل الوحدات، وتخزين جميع البيانات اللاحقة كما غراما. تغيير وفقا لذلك بناء على رغبات كل مختبر مستقل. المعدات والبرمجيات تسمح باستخدام وحدات أخرى، مثل milliNewtons وفولت.
4. تأكد من أن خطوط الغاز واضحة من العقبات وبدوره على امدادات الغاز (95٪ O _2/5٪ CO ₂₎ لمخطاط العضل (ق) وحدة. بالغاز المتواصل لجميع مخازن (في غرف مخطاط العضل) خلال الإجراء بأكمله.
5. ملء جميع غرف مخطاط العضل مع الايثانول 70٪ وينقع لمدة 10 دقيقة، وإزالة الإيثانول، وأكرر للمرة الثانية 10 دقيقة نقع.
   1. بعد إزالة الإيثانول، شطف ثلاث مرات مع الماء منزوع الأيونات، تليها ثلاث يشطف مع استعداد عازلة (انظر القسم 2 لإعداد عازلة)، وترك بالإضافة الثالثة من العازلة في غرف.
      ملاحظة: عند هذه النقطة المعدات يمكن أن يبقى خاملا في هذه الحالة حتى يتم إعداد العازلة والأنسجة والموظفين على استعداد للمضي قدما في التجربهر.

2. إعداد المخازن المؤقتة

1. إعداد 1 L-كريبس هنسلايت حل العازلة لاستخدامها في النقل وتجهيز عينات الأنسجة لتحقيق تركيزات النهائية من 11.1 ملي مد الجلوكوز. 1.2 ملي MgSO _4. 1.2 ملي KH ₂ PO _4. 4.7 ملي بوكل. 118.1 مم كلوريد الصوديوم. 3.4 مم CaCl _2. 24.9 مم ₃ NaHCO.
   1. خلط 9.6 غرام من أملاح كريبس إلى حوالي 900 مل من الماء منزوع الأيونات على طبق من ضجة.
   2. خلط في 0.373 جم كلوريد الكالسيوم يذوى تليها 2.1 غرام بيكربونات الصوديوم لكل لتر من العازلة المطلوب.
   3. حل العازلة الغاز لمدة 20 دقيقة مع 95٪ O _2/5٪ CO _2.
   4. بعد بالغاز، وضبط درجة الحموضة إلى 7.05 (الترشيح من العازلة يزيد درجة الحموضة، وينبغي أن يكون الهدف النهائي درجة الحموضة 7.4) وضبط مستوى الصوت إلى 1 L.
   5. فلتر تعقيم عازلة في تعقيمها وسائل الإعلام 1 L زجاجة وتخزين عازلة نظيفة في 4 درجات مئوية لتصبح جاهزة للاستخدام.
2. إعداد منفصل كريبس-Hحل العازلة enseleit للاستخدام في التجارب مخطاط العضل كما هو موضح في الخطوة 2.1 لنقل كريبس-هنسلايت العازلة مع مركبات إضافية تتعلق التجارب انقباض.
   ملاحظة: عادة 2 L لن يكون كافيا لإجراء التجارب الموضحة في هذه المقالة، ولكن قد يحتاج هذا الحجم إلى زيادة أو تخفيض على أساس طول التجربة، وعدد من الغرف مخطاط العضل، واستبدال عازلة عدد (نسبة إلى الإضافات العلاج).
   1. قبل الخطوة بالغاز (الخطوة 2.1.3)، إضافة 9.1 ملغ (لكل لتر من العازلة التي يجري إعدادها) من حمض الهيدروكلوريك ديسيبرامين لالعازلة.
   2. إعداد محلول 1.0 ميكرومتر من بروبرانولول، حمض الهيدروكلوريك وإضافة 1 مل (لكل L من العازلة التي يجري إعدادها) من هذا الحل إلى حل العازلة كريبس-هنسلايت. جعل هذا المخزن المؤقت في يوم من الاستخدام والحفاظ على مخطاط العضل تعمل درجات الحرارة (درجة الحرارة التي تعطي 37.5 درجة مئوية درجة الحرارة في مخطاط العضل).
      وأضاف ديسيبرامين لكبح آليات امتصاص أمين الاحيائية: ملاحظةوالسماح المقاصة من الإضافات التجريبية من المخزن المؤقت الاستحمام الأوعية الدموية تحدث بسرعة أكبر. إضافة بروبرانولول يمنع ملزم من المركبات العلاج لβ-مستقبلات الأدرينالية غير محددة.

3. جمع وإعداد الأوعية الدموية

1. في أقرب وقت ممكن، وإزالة الجهاز الهضمي من الذبيحة. مرة واحدة الحيوان لم يعد يسلك أي رد فعل غير الطوعي، وإزالة الرأس وإخفاء ومن ثم رفع الجثة عموديا. وينبغي الانتهاء من إزالة الأحشاء الهضمية (المريء إلى فتحة الشرج) من الذبيحة قبل موظفي المسالخ المعتمدة (<20 دقيقة من وقت مذهلة).
   ملاحظة: كيف قريبا، وتقتصر عادة من قبل موقع / منشأة حيث يتم جمعها من الأمعاء وإجراءات التشغيل القياسية أو إجراءات تكليف اتحادي تليها موظفي المرفق.
   1. في معظم المرافق، وإجراء معالجات الجهاز الهضميفي مكان منفصل عن تجهيز الذبيحة التي كانت متجهة لدخول الإمدادات الغذائية. استخدام موقع مناسب قريب حيث يمكن أن تؤخذ في الجهاز الهضمي وتنتشر لفحصها.
2. بمجرد نشر الجهاز الهضمي بها، التعرف على الأمعاء الدقيقة، حظيرة اللفائفية ربط الأمعاء الدقيقة إلى الأعور، وشفة اللفائفية توسيع الأقرب إلى حظيرة اللفائفية (الشكل 1A).
   1. باستخدام مشرط أو سكين، وجعل طفيفة جدا شق في الغشاء المساريقي في وسط شفة اللفائفية. باستخدام اثنين من السبابة، تشريح بصراحة بعيدا عن الأنسجة الدهنية والضامة تعرض الأوعية الدموية المساريقي (الشكل 1B).
3. من هذا شفة أو انتفاخ في مساريق الأمعاء، تشريح خارج فروع متعددة (~ 2 سم في الطول) من الشريان والوريد المساريقي حزم تتعرض التي تدعم هذا الجزء من الدقاق (الشكل 1C).
   1. إذا شالغناء ملقط لفهم الأنسجة، والحرص على عدم فهم أو سحب مباشرة على الأوعية الدموية في كل حين إزالتها عن أي نوع من التمدد يمكن أن تلحق الضرر وتؤثر سلبا على أداء النسيج ^14. من الأفضل القيام إزالة الأوعية الدموية، عن طريق خفض عبر كل نهاية القسم المراد إزالتها ومن ثم خفض إلى جانب أو موازية لقسم معزولة الآن. لسهولة، إزالة بعض الأنسجة المحيطة بها جنبا إلى جنب مع السفن لتوفير بعض الأنسجة لفهم مع زوج من ملقط.
   2. مع زوج من ملقط، غمر عينة الأنسجة في أنبوب يحتوي على الجليد الباردة العازلة كريبس-هنسلايت وتخزينها على الجليد حتى يمكن أن تحدث في تجهيز المختبر.
4. وضع عينة الأنسجة على سطح القطع أو في طبق بتري وغمر جزئي في الجليد الباردة كريبس-هنسلايت.
   1. باستخدام # 5 ملقط المجوهرات، نويس قزحية مقص، ومصباح المكبرة أو تشريح النطاق (2.5 إلى 5.0X التكبير يكفي)، تشريح بعناية بعيدا المحيطة connecti الدهون ولقد الأنسجة وفصل الشريان والوريد. تحديد افتتاح سفينة في واحدة من نهاية القسم بعناية وفهم اللفافة المحيطة السفينة مع ملقط.
   2. جعل قطع مع مقص موازية للسفينة عن طريق تحريك غيض من مقص تحت اللفافة التي أثيرت. بعد شق الأولي، والدهون والأنسجة الضامة يمكن فصل مزيد من السفينة عن طريق خفض جانبي مع مقص. تأكد من أن السفن نظيفة قدر الإمكان مع تقليل مقدار الوقت الأوعية تنفق على مقاعد البدلاء.
   3. العودة الأوعية الدموية إلى أنابيب جديدة عازلة كريبس-هنسلايت وتخزينها في 4 ° C (عينات يمكن أن تبقى مخزنة لمدة تصل إلى 24 ساعة بعد جمع البيانات والتي لا تزال تنتج انقباض صالحة).
   4. باستخدام شفرة حلاقة، سفينة شريحة لاستخدامها في مخطاط العضل إلى العدد المرغوب فيه من القسمين 2 ملم (فمن المفيد استخدام تقطيع الأنسجة للحصول متسقة المقاطع العرضية).
   5. دراسة كل قسم تحت تشريح منظمة شانغهاى للتعاونPE (12.5X التكبير) لضمان أن كل قسم ليس لديه شذوذ والفروع والصمامات، أو تلف سطحي القيام به عن غير قصد أثناء تشريح والتنظيف. استبدال الباب السفينة إذا كان هناك أي خلل، فرع، صمام، أو أضرار سطحية.
5. مخزن مقبولة أقسام شرائح سفينة (المغمورة في المخزن كريبس-هنسلايت) على الجليد أو على 4 درجات مئوية لتصبح جاهزة للتركيب في غرف مخطاط العضل (عادة <30 دقيقة).
6. جبل بلطف السفينة على مخطاط العضل عن طريق إدراج الدعم من خلال التجويف وزيادة التوتر (باستخدام micropositioner على مخطاط العضل) والحرص على أن لا تمتد الأوعية فوق 2 إلى 3 غرام القراءة.
7. مرة واحدة يتم تغطية جميع الدوائر، فراغ العازلة من جميع الغرف وإعادة ملء مع 5.0 مل من العازلة وبدء الموقت 15 دقيقة لبدء فترة موازنة والتجربة.

4. تجربة

1. تتوازن جميع أقسام السفينة عن 1.5 ساعة لتحقيق الدقة مستقرةتينغ التوتر من 1.0 غرام.
   1. استبدال المخزن المؤقت حضانة كريبس-هنسلايت كل 15 دقيقة.
   2. خلال موازنة، وضبط باستمرار التوتر على أقسام الأوعية الدموية لتصل إلى 2 ز ومن ثم السماح للاسترخاء وصولا الى حوالي 0.80 غرام. ليس محاولة للسماح للاسترخاء الأوعية كثيرا (أنها قد تنزلق قبالة يتصاعد). محاولة لتحقيق التوتر الأساسي ثابتا، حيث تحمل السفينة 1 غرام التوتر دون الحاجة إلى تعديل.
2. خلال موازنة، إعداد مائي 1.32 M حل بوكل لاستخدامها كمرجع.
3. بعد الانتهاء من موازنة مرضية، إضافة 500 ميكرولتر من M بوكل 1.32 حل أن يؤدي إلى 0.12 M الحل في حل 5.5 مل الاستحمام السفينة.
   1. بعد اضافة 1.32 M بوكل، لا ضبط التوتر يدويا كما يتم استخدام الاستجابة القصوى من هذا بالإضافة إلى تقييم الجدوى الأنسجة، ويمكن استخدامها لتطبيع بيانات العلاج (على سبيل المثال الردود على تركيز لgonist).
   2. استبدال عازلة في فترات من 15 دقيقة حتى عاد التوتر إلى قيمة خط الأساس من 1.0 غرام.
4. حالما يتم التوصل إلى خط الأساس، وتغيير العازلة وتبدأ في وقت واحد الموقت 1 دقيقة. القيام بذلك في وقت واحد لجميع الدوائر لتجنب مذهلة من أوقات البدء.
   1. دوامة القياسية التي يمكن ان تضاف وإعداد تعليق لغرفة 1 خلال العد التنازلي 1 دقيقة.
   2. إضافة المعايير في 25 مكل لكل غرفة كما يمليه التجربة (وهذا يحافظ على العلاج أقل من 0.5٪ من إجمالي حجم).
   3. عندما تمت إضافة معيار الماضي، بدء الموقت 9 دقائق.
   4. في نهاية الحضانة 9 دقائق القياسية، وإزالة المنطقة العازلة التي تحتوي على العلاج من غرف وإضافة 5.0 مل من العازلة الطازجة، وبدء الموقت 2.5 دقيقة.
   5. كرر الخطوة 4.4.4.
   6. في نهاية الثاني 2.5 دقيقة شطف، فراغ وإضافة غرف عازلة جديدة، وبدء الموقت 1 دقيقة العد التنازلي لبدء الشركة السعوديةد بالإضافة القياسية.
5. تستمر هذه الدورة لجميع الإضافات لهذا اليوم القياسية.
6. خلال إضافة معيار النهائية واللاحقة 9 دقائق حضانة إعداد 1.32 M بوكل مجمع إشارة إلى وضع حد للإشارة المدى إضافة جرعة من 500 ميكرولتر.
7. بعد فاصل 1 دقيقة بعد إضافة المعالجة النهائية، إضافة بوكل وبدء توقيت 9 دقائق.
   ملاحظة: إضافة بوكل هي لتأكيد جدوى الأنسجة في ختام التجربة ومفيدة إذا إدارة العلاج الذي يؤدي إلى استجابة تذكر.
8. في ختام المباراة النهائية 9 دقيقة مركب إشارة الحضانة، فراغ أو إزالة العازلة من كل دائرة من الدوائر. لا تضيف عازلة الطازجة. اختتام التجربة.
9. حفظ ملف الرسم البياني، وإزالة الأجزاء الأوعية الدموية والتخلص منها بشكل سليم، واتباع بروتوكول تنظيف (المقدمة من قبل الشركة المصنعة، ويمكن أن تكون محددة LAB) لمعدات مخطاط العضل.

النتائج

تم جمع الأوعية الدموية تستخدم لتوليد النتائج المتضمنة في الفترة من 6 يرسم هولشتاين (425 ± 8 كلغ) ضمن فترة 3 أسابيع. ويرد مثال على استجابة الوريد المساريقي نموذجي مقلص لبوكل والإضافات العلاج زيادة في التركيز في الشكل 2. سيكون حجم الاستجابة تختلف بعض مع حجم السفين?...

Discussion

كان التحدي الأولي في تطوير هذا الأحيائي وإنشاء موقع لجمع تكرار الأوعية الدموية المساريقي. عينة الموقع الاتساق أمر بالغ الأهمية، حيث أن بعض مهام التغيير الأمعاء الدقيقة خلال التقدم من الصائم من خلال الدقاق وبالتالي مساريق تختلف في نمط مماثل. كانت فروع الشريان المسار...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Name of the Material/Equipment	Company	Catalog Number	Comment/Description (optional)
Multi Myograph	Danish Myo Technologies	610M	A myograph is critical to this bioassay, but there are other platforms available for use that will suffice.
Powerlab 8/sp	ADIntruments	ML785
LabChart 7	ADInstruments	Version 7
Force Calibration Kit	Danish Myo Technologies	100055	Specific to DMT myographs
Bottle-top Filter	Nalgene	595-4520	0.22 um pore size; 45 mm neck size
#5 Jewler’s Forceps	Miltex	555008FT	Any brand of forceps can be used
Noyes Iris Scissors	Miltex	18-1510	Any brand of scissors can be used
Dissecting Scope	Zeiss	Stemi 2000-C	Any brand of dissecting light microscope will suffice
Adjustable Tissue Matrice	Braintree Scientific	TM C12	This is not critical to the assay, but greatly reduces section to section variation in length and speeds up the slicing process greatly
Krebs-Hensleit Buffer	Sigma-Aldrich	K3753-10x1L	It is not necessary to buy Krebs, this can be made in house
Calcium chloride dehydrate	Sigma-Aldrich	C7902-500G
Sodium bicarbonate	Sigma-Aldrich	S5761-500G
Desipramine-HCl	Sigma-Aldrich	D3900-5G
Propranolol-HCl	Sigma-Aldrich	P0884-1G
KCl	Sigma-Aldrich	P9333-500G
95% O2/5% CO2	Scott Gross	UN3156