في فيفو وفيفو السابقين المداخل لدراسة سرطان المبيض النقيلي الاستعمار من الهياكل التبانة بقعة في البريتوني الدهنية

Summary

We outline a protocol that implements both in vivo and ex vivo approaches to study ovarian cancer colonization of peritoneal adipose tissues, particularly the omentum. Furthermore, we present a protocol to quantitate and analyze immune cell-structures in the omentum known as milky spots, which promote metastases of peritoneal adipose.

Abstract

عالية الجودة سرطان المبيض المصلي (HGSC)، وسبب الانبثاث البريتوني واسعة النطاق، لا يزال لديهم التكهن سيئة للغاية؛ أقل من 30٪ من النساء على قيد الحياة بعد 5 سنوات من التشخيص. الثرب هو الموقع المفضل لتكوين ورم خبيث HGSC. وعلى الرغم من أهمية السريرية لهذا المكروية، ومساهمة من الثرب الأنسجة الدهنية لتطور سرطان المبيض لا تزال الكافي في. الدهنية ثربية غير عادي لأنه يحتوي على هياكل تعرف باسم البقع حليبي، والتي تتألف من B، T، والخلايا القاتلة الطبيعية، الضامة، والخلايا الاصلية المحيطة أعشاش كثيفة من الأوعية الدموية. البقع حليبي تلعب دورا رئيسيا في وظائف فيزيولوجية من الثرب، وهي مطلوبة من أجل التوازن البريتوني. لقد أثبتنا أن البقع حليبي أيضا تعزيز المبيض سرطان الاستعمار النقيلي من الدهنية البريتوني، خطوة رئيسية في تطوير الانبثاث البريتوني. نحن هنا وصف نهج ضعنا لتقييم وتحديد المواقع حليبي في نصيبitoneal الدهنية ودراسة مساهمة الوظيفية للخلية سرطانية في المبيض الاستعمار النقيلي من الأنسجة الثرب على حد سواء في الجسم الحي وخارج الحي. هذه الأساليب قابلة للتعميم على نماذج الماوس وخطوط الخلايا إضافي، مما يمكن دراسة المبيض تشكيل الانبثاث سرطان من توطين الأولي من الخلايا لهياكل بقعة حليبي لتطوير الانبثاث البريتوني واسعة النطاق.

Introduction

وخلافا لمعظم الأورام الصلبة، الانبثاث من الدرجة العالية سرطان المبيض المصلي (HGSC) تقتصر على التجويف البريتوني ^1. وبالتالي، يمكن أن العلاجات البريتوني فعالة يحتمل أن تكون مراقبة أو استئصال HGSC. حاليا، وهو النهج العلاجي هو معيار cytoreduction الجراحية جنبا إلى جنب مع العلاج الكيميائي ^1-3. للأسف، فإن الغالبية العظمى من المرضى تجربة وتستسلم لمضاعفات تكرار المرض. وتشير هذه الإحصاءات الكئيبة على الحاجة إلى تحسين فهم الاستعمار النقيلي، العملية التي الخلايا السرطانية توطين ل، والاستفادة، وتتكاثر داخل أنسجة المضيف لتشكيل النقائل ^2.

الثرب هو موقع أوائل فضل من HGSC ورم خبيث ^4-7. خلافا لغيرها الدهنية البريتوني، الأنسجة الدهنية الثرب تحتوي هياكل المناعي غير العادية المعروفة باسم البقع حليبي، والتي تحتوي على B، T، والخلايا القاتلة الطبيعية والضامة، والتي تلعب دورا رئيسيا في homeos البريتونيtasis ^8،9. بالإضافة إلى وظائفها الفسيولوجية، وجدنا أن البقع حليبي تلعب دورا نشطا في سرطان المبيض الاستعمار المنتشر ^4. في المقايسات الانبثاث التجريبية، SKOV3ip.1، CaOV3، وHeyA8 (الإنسان) وID8 (الفئران، C57BL / 6) خلايا سرطان المبيض بسرعة موطن البقع حليبي، مما يشير إلى أن الخلايا تتجه نحو عاملا الكيميائي تفرز. ومن المثير للاهتمام، وسرطان الخلايا لا يستعمر الدهنية البريتوني تفتقر البقع حليبي (أي الغدد التناسلية والدهون الرحم) ^4.

من أجل تحديد الآليات التي تنظم حليبي بقعة الاستعمار، قمنا الأمثل نماذج طعم أجنبي التي تمكن من استجواب الأحداث الخلوية والجزيئية على مدار الساعة من الاستعمار المنتشر ^4. وهناك ميزة معينة من النهج الموصوفة هنا هو التركيز على بنية الأنسجة وظيفة، والتي تمكن المستخدمين لاختبار الفرضيات في متكاملة في الجسم الحي وخارج الحي نماذج مetastatic ^(4،10) الاستعمار. بمقارنة توطين الخلايا السرطانية ونمو في مستودعات الدهون البريتوني التي تحتوي على أي أو تفتقر إلى البقع حليبي، تمكن الباحثون من اختبار المساهمة النسبية (ق) من الخلايا الشحمية والخلايا داخل البقع حليبي إلى السكن والنمو التدريجي للخلايا سرطان المبيض في الأنسجة ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية.

Protocol

وتم إيواء جميع الفئران وصيانتها والموت الرحيم وفقا ل(IACUC) المبادئ التوجيهية المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام اللجنة وتحت إشراف مركز جامعة الثروة الحيوانية شيكاغو.

1. الحيوانات إعداد الدراسات التجريبية

1. تسمح الحيوانات حتى يتأقلم في السكن الجديد والبيئة، للتعافي من آثار الفسيولوجية المحتملة النقل والمناولة.
   ملاحظة: هذه التقنية التالية تنطبق على جميع السلالات المتاحة تجاريا من الفئران. عدد الحيوانات لاستخدامها في تجربة تعتمد على تصميم الدراسة وينبغي أن يتم التشاور مع من إحصائي.

2. تحديد وعزل البريتوني الدهون مستودعات.

1. الموت ببطء الحيوانات عبر CO ₂ جرعة زائدة وطريقة المادية الثانوي لتأكيد الوفاة.
2. كما حصاد مستودعات الدهون البريتوني يشكل استئصال الأعضاء الداخلية (طريقة الثانوي)، يا أماهكه شق خط الوسط على مقربة من الحليمات الإربي من خلال الجدار البريتوني لفضح الأعضاء الداخلية (الشكل 1A).
3. لالثرب الدهون (OM)، فضح مجمع ثربية / البنكرياس من خلال توسيع الطحال من التجويف البريتوني مع ملقط (الشكل 1C). الإفراج الثرب من البنكرياس والطحال وتقليم عن كثب كافة الاتصالات الأنسجة. تأكد من أن أي نسيج البنكرياس المتبقية يتم استئصاله ^4.
4. لفات الغدد التناسلية (GF)، استخدم ملقط لرفع الدهون الغدد التناسلية المحيطة المبيضين والمكوس عن طريق قطع الاتصالات الأنسجة (الشكل 1A ر righ العلوي) ^4.
5. لالرحم الدهون (UF)، استخدام ملقط لرفع الدهون الرحم المحيطة قرون الرحم والمكوس عن طريق قطع الاتصالات الأنسجة (الشكل 1A أسفل اليمين) ^4.
6. لالمساريقي الدهون (MF)، وقطع تقاطع بين الأمعاء الدقيقة والبواب. استخدام ملقط لقبضة بحزم نهاية خالية منالأمعاء الدقيقة، وببطء "قشر" بعيدا عن الدهون المساريقي. الافراج عن الدهون المساريقي من جذورها المساريقي باستخدام مقص تشريح (الشكل 1A اليسرى السفلى) ^4.
7. لSplenoportal الدهون (SF)، ورفع النهاية البعيدة من الطحال باستخدام ملقط لفضح الفرقة الدهنية رقيقة من النسيج الذي يربط بين نقير الطحال في البنكرياس. استئصال الدهون splenoportal عن طريق الإفراج عن أول مرة من البنكرياس، وبعد ذلك بعناية تشريح أنه من الطحال (الشكل 1B) ^4.

3. التبانة بقعة تحديد عن طريق تلطيخ بالغيمزا

1. المكوس ثروب (راجع الخطوة 2.3) من C57BL / 6 الفئران وإصلاح في 5٪ من الفورمالين محايدة مخزنة في 4 درجة مئوية لمدة 16 ساعة (O / N).
2. لالبارافين تضمين الأنسجة ثابتة، واختيار القالب الذي يتناسب مع حجم الأنسجة. صب البارافين المنصهر من الخزان البارافين لملء القالب. فتح كاسيت واستخدام الحارة لمركز دراسات السياسات الأوروبية، ونقل الأنسجة في القالب.
   1. توجيه بعناية الأنسجة أثناء البارافين التضمين لإنتاج المقاطع الطولية. وضع الكاسيت النسيج المسمى على صب والصحافة ثابتا في مكانه. السماح القالب لتبرد لمدة 30 دقيقة على الأقل.
3. قطع الأجزاء المتسلسلة (4 ميكرون سميكة) من البارافين الثابتة الفورمالين جزءا لا يتجزأ من (FFPE) كتلة الأنسجة. ضع شريحة precleaned تحت أبواب مثل الشريط من نسيج يأتي قبالة كتلة البارافين.
4. متسلسل قسم الثرب كله؛ جمع وصمة عار كل قسم ثالث لبالغيمزا صمة عار (راجع 3.6). السماح للشريحة زجاجية مع أقسام للهواء الجاف، ويفضل O / N في RT. الشرائح المجففة جاهزة للتثبيت. وصمة عار على القسم الأول لالهيماتوكسيلين ويوزين للمقارنات على الشرائح بالغيمزا الملون.
5. Deparaffinize الشرائح من قبل اثنين من متتابعة حضانات 5 دقائق في الزايلينات. ترطيب الشرائح من قبل اثنين من حضانات متتابعة في ما يلي: الإيثانول بنسبة 100٪، و 95٪ من الإيثانول، وأخيرا الاستفادة واثالثا.
   1. اتخاذ الاحتياطات الكافية لتجنب الشرائح من التجفيف. تنفيذ جميع الخطوات في RT.
6. تماما تزج الشرائح في جرة Coplin تحتوي على 5٪ بالغيمزا الحل (ث / ت أعدت في مياه الحنفية)، واحتضان لمدة 4 دقائق على RT. شطف الشرائح في ماء الصنبور لمدة 60 ثانية، والهواء الجاف وجبل مع ساترة باستخدام وسائل الإعلام المتصاعدة.
7. صورة الشرائح ملطخة باستخدام الماسح الضوئي الشريحة بأكملها وعملية مع برنامج الشركة المصنعة. تحديد حجم البقعة حليبي في الأقسام الثرب بالغيمزا الملطخة باستخدام برنامج يماغيج ^4.

4. الانتشار وإعداد خلايا سرطان المبيض في الجسم الحي وخارج الحي الدراسات

1. قبل الدافئة 15 مل من نمو الخلايا المتوسطة إلى 37 درجة مئوية في حمام الحرارة. إعداد الأنسجة بحجم مناسب قارورة الثقافة (على سبيل المثال، 75 سم ^{مساحتها} 2 السطح) من خلال وضع العلامات مع اسم خط الخلية، رقم المرور، وتاريخ والشخص الذي أعد الأوراق المالية المجمدة، وتاريخوالشخص الذي يذوب / طلاء الخلايا.
   ملاحظة: في الدراسات الانبثاث هذه المعلومات التفصيلية هي الحاسمة، موعدا لتجميد أسفل وعدد مرور يمكن أن تؤثر على النمط الظاهري النقيلي.
2. باستخدام بيئة معقمة من غطاء محرك السيارة السلامة البيولوجية، ماصة 10 مل من المتوسط ​​في قارورة الثقافة T-75. إزالة قارورة من الخلايا من نظام النيتروجين السائل وتحقق التسمية لتأكيد نوع من الخلايا. ذوبان الجليد قارورة واحدة فقط من الخلايا في وقت واحد من قبل ارتفاع درجات الحرارة في 37 درجة مئوية حمام الحرارة.
3. باستخدام تقنية معقمة، ماصة 1X10 ⁶ إذابة الخلايا في قارورة الثقافة. ضع قارورة في الحاضنة للسماح للخلايا لنعلق. صخرة بلطف القارورة ذهابا وإيابا لتشكيل تعليق خلية موحد.
   1. ضع قارورة في الأنسجة حاضنة الثقافة والمحافظة على 37 درجة مئوية في 5٪ CO ₂ البيئة. يسمح للخلايا التمسك O / N.
4. وسائل الاعلام نضح، ويحل مع وسائط النمو قبل تحسنت جديدة. ضع قارورة في الحاضنة وجميعخلايا آه لتنمو. مراقبة نمو الخلايا يوميا عن طريق التفتيش البصري كل 2-3 أيام باستخدام مجهر مقلوب. استخدام تقنيات زراعة الخلايا القياسية لخلايا مرور عند بلوغه 70-80٪ التقاء.
   ملاحظة: لفحوصات التجريبية حصاد الخلايا عند 70٪ التقاء للتأكد من أن الخلايا تتكاثر بنشاط.
5. نضح مستنبت وشطف مع 10 مل من الفوسفات العقيمة مخزنة المالحة (PBS). نضح PBS وإضافة 0.25٪ التربسين / EDTA (2-3 مل ل75 سم مساحة ^2)، واحتضان 5 دقائق عند 37 درجة مئوية. تأكيد بصريا أن الخلايا قد فصل وإضافة حجم مساو من متوسط ​​النمو، وماصة بلطف خلايا صعودا وهبوطا للحصول على تعليق خلية واحدة.
   ملاحظة: من الأهمية بمكان أن متوسط ​​النمو يحتوي المصل لأنه يثبط نشاط التربسين. إعداد ما لا يقل عن 2- 4 أضعاف خلايا أكثر من العدد المطلوب لتجربة معينة للتعويض عن فقدان الخلايا خلال الخطوات اللاحقة
6. تحديد النسبة المئوية للخلايا قابلة للحياة فيتعليق عبر التريبان الأزرق الاستبعاد مقايسة باستخدام عدادة الكريات أو عداد خلية الآلي.
   ملاحظة: هنا، فقط استخدام الاستعدادات الخلية التي ≥ 96٪ من خلايا قابلة للتطبيق.
7. نقل تعليق خلية من القارورة إلى أنبوب مخروطي 50 مل. بيليه الخلايا بواسطة الطرد المركزي 5 دقائق في 1100 x ج في 4 ^{درجة مئوية.}
8. نضح طاف و resuspend الخلية بيليه في برنامج تلفزيوني إلى تركيز ^{الخلايا} 2x10 6 لكل مل.

5. حقن داخل الصفاق من الخلايا

ملاحظة: في تجاربنا، يتم التعامل مع الفئران في تدفق الهواء الصفحي أو الوزراء للسلامة الأحيائية داخل منشأة حاجز لدينا من أجل الحد من خطر التعرض للمرض، من أجل إثبات هذه التقنية بشكل واضح، وأجريت الإجراءات في شريط الفيديو المرافق في مختبر معتمد للعمل الحيوانية. هذا أسلوب معين لا يتطلب الحيوانات لتكون تحت التخدير. تحت البروتوكولات المعتمدة، تنفيذ هذا TECHNIQرق في الحيوانات الحية. استخدام سلالات من الفئران المناسبة لهذه الدراسة. على سبيل المثال: استخدام المناعة، الفئران عارية athymic لدراسة الإنسان خلايا سرطان المبيض (SKOV3ip.1، وHeyA8) الاستعمار. استخدام مناعيا C57BL / 6 الفئران لدراسة الماوس خلايا سرطان المبيض (ID8) الاستعمار.

1. تحميل 500 ميكرولتر من تعليق خلية واحدة في حقنة وضعت في العقيمة توج 25 G الإبرة. وهذا يقلل قص الخلية قبل الحقن.
2. اختيار الماوس من قبل القفا من الرقبة وعقد ذيل باستخدام النخيل والسبابة وإصلاح الساق الخلفية اليسرى بين الحلبة والاصبع الصغير (عند ضبط النفس والفأر مع اليد اليسرى).
   ملاحظة: لتفادي أعضاء البطن المؤلم، وكبح جماح الماوس بشكل جيد بحيث لا يمكن أن تتحرك خلال الحقن.
3. تخيل خط عبر البطن ما فوق الركبتين، وتحديد نقطة على الجانب الأيمن للحيوان وعلى مقربة من خط الوسط. نقطة الدخول هي الجمجمة لوسطي قليلامن الحلمة الماضية.
   ملاحظة: إدخال الإبرة على الجانب الأيمن الماوس، يتجنب الأعور ويقلل من خطر ثقب الأمعاء ^11.
4. ادخال الإبرة في المنطقة الجانبية السفلية من البطن الفئران على عمق حوالي 0.5 سم. سحب على المكبس للتأكد من أن الإبرة لم يتغلغل أحد الأوعية الدموية أو أجهزة البريتوني أخرى.
   1. إذا كان يستنشق أي سائل التخلص من حقنة (والعينة) ^11. A نضح الأخضر والبني أو الأصفر يشير اختراق الإبرة في الأمعاء أو المثانة، على التوالي.
5. حقن العينة باستخدام بطيئة، وضغط ثابت. سحب الإبرة والعودة الماوس لقفصه. لا خلاصة حقنة قبل التخلص منها في حاوية الأدوات الحادة.
6. الفئران التضحية عبر CO ₂ الخنق واستئصال الأعضاء الحيوية في نقطة زمنية محددة حقن آخر.

6. درب التبانة بقعة الاستعمار في الجسم الحي

1. Quantitaنشوئها توطين الخلايا السرطانية إلى بقع حليبي باستخدام التدفق الخلوي
   1. عزل مخازن الدهون البريتوني من الفئران (كما هو موضح في الخطوة 2،3-2،7) حقن الموسومة fluorescently الخلايا السرطانية والأنسجة مكان المباشرة في برنامج تلفزيوني الجليد الباردة.
      1. لهذا الأسلوب معينة، الوزن مباراة كل الأنسجة الدهنية لالثرب. الأنسجة نقل لفصل 5 مل أنابيب تحتوي على 1.5 مل من مصل خالية DMEM و 0.1٪ (ث / ت) ألبومين المصل البقري. الأنسجة تجمع تحصد من ثلاثة الفئران مستقلة لضمان عائد كاف من الخلايا للالتدفق الخلوي.
   2. أنسجة اللحم المفروم باستخدام مقص جراحي وإضافة 1.5 مل من مصل خالية DMEM تحتوي على 0.4٪ (ث / ت) كولاجيناز أولا احتضان تعليق الأنسجة عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة مع خلط التناوب.
      1. وكخطوة اختيارية، مما تنأى الأنسجة عن طريق المضغ. في هذه الحالة، نقل تعليق الأنسجة كولاجيناز إلى كيس microstomacher، عجن لمدة 10 دقيقة على الأقل، وتناوب التوجهمن أكياس بعد 5 دقائق.
   3. مرشح العينات من خلال مرشح شبكة من النايلون (60 ميكرون المسام) لإزالة الحطام أكبر. جمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي في 250 x ج لمدة 5 دقائق في 4 درجات مئوية، وتجاهل جزء طاف.
   4. resuspend الكرية الخلية في 100 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني جنبا إلى جنب مع 900 ميكرولتر من ACK العازلة تحلل واحتضانها في RT لمدة 1 دقيقة. خلايا الطرد المركزي في 250 x ج لمدة 5 دقائق وتجاهل طاف.
      1. resuspend الكرية الخلية في 250 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني الجليد الباردة. تصفية العينات خلال 60 ميكرومتر شبكة النايلون المسام لضمان تعليق خلية واحدة. شطف تصفية مع 250 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني الجليد الباردة.
   5. Quantitate عدد الخلايا الموسومة fluorescently في السكان باستخدام تدفق عداد الكريات مجهزة ليزر الأصفر والأخضر 561 نانومتر، ونانومتر 585/15 نانومتر ممر الموجة مرشح. تعيين بوابة للخلايا tdTomato إيجابي على أساس تحليل الخلايا الأبوية و / أو ضوابط السلبية المناسبة ^4.
2. الكميات الانبثاث والمجهري
   1. عند نقطة النهاية التجريبية المطلوبة (ق)، وعزل، وعلى الفور وضع الأنسجة في وسائل الإعلام التثبيت المناسب. إصلاح عينات أكبر، مثل الغدد التناسلية سليمة والرحم، ومستودعات الدهون المساريقي في 10٪ من الفورمالين محايدة مخزنة لمدة 48 ساعة في 4 درجات مئوية. إصلاح عينات أصغر (ثربي والدهون splenoportal، وكذلك حكمه أنسجة الرحم والدهون المساريقي) في 5٪ من الفورمالين محايدة مخزنة في 4 درجة مئوية لمدة 2-16 ساعة.
      1. بدلا من ذلك، والمفاجئة تجميد الأنسجة عن طريق وضعها في وسط تجميد مثل أكتوبر وانخفاض في كمية مناسبة من النيتروجين السائل.
   2. نقل ثابتة الأنسجة إلى 70٪ من الإيثانول وتخزينها في 4 درجات مئوية حتى التضمين في البارافين. تضمين والأنسجة العملية كما هو موضح في 3.2 و 3.3.
      1. استخدام القسم H & E الملون لتقييم الأنسجة لوجود أو عدم وجود النقائل المجهرية (أي مجموعات من 50 خلية). تأكيد ركان وجود النقائل المجهرية بطريقة الثانوية مثل وصمة عار IHC لcytokeratin 18/08 للكشف عن خلايا سرطان المبيض.

7. درب التبانة بقعة الاستعمار فيفو السابقين

1. تهيئة الظروف الثقافة الأساسية خارج الحي الجهاز ثربية
   1. وضع كل الثرب إلى واحد إدراج لوحة الثقافة ومكان داخل بئر واحدة من اثني عشر بشكل جيد لوحة زراعة الأنسجة التي تحتوي على 500 ميكرولتر من بورصة دبي للطاقة وسائل الإعلام / F12 تحتوي على 20٪ FCS. الحفاظ على الثقافات الجهاز عند 37 درجة مئوية في CO ₂ 5٪ بيئة ل24 إلى 48 ساعة و / أو نقاط زمنية إضافية. استخدام ثلاثة ثروب المستقلة (عينات من ثلاث نسخ) لكل حالة (على سبيل المثال، نوع الوسائط / نقطة زمنية).
   2. لتأكيد سلامة الأنسجة في النهاية التجريبية، إصلاح وعينات العملية كما هو موضح في الخطوة 3. عد الاصحاء الخلايا الشحمية الميتة على H & E أقسام يمكن تقييم سلامة الأنسجة. ما لا يقل عن 120 ~ خلايا منمطلوب العينات البيولوجية 5 إلى صياغة مئوية من الأنسجة الحية الحالية ^10.
   3. لقياس وظيفة الأنسجة، مكان ثروب (ن = 3) في آبار منفصلة من 24 لوحة جيدا تحتوي على 500 ميكرولتر من بورصة دبي للطاقة وسائل الإعلام / F12 مع 20٪ FCS. السماح ثروب لحالة وسائل الإعلام في 37 ° C في CO ₂ 5٪ بيئة لمدة 24 ساعة، ثم قم بإزالة 250 ميكرولتر للاستخدام في IL-6 ELISA مقايسة ^10.
2. فيفو السابقين ثقافة مشتركة من الثرب الفأر مع خلايا SKOV3ip.1-GFP
   1. تنمو وإعداد الخلايا الموسومة fluorescently كما هو موضح في قسم 4 و resuspend بتركيز 2 × 10 ⁶ خلايا لكل مل.
   2. تطبيق ~ 6 ميكرولتر من لاصق الأنسجة لغشاء إدراج الثقافة والسماح لها الهواء الجاف. غسل غشاء مرتين مع الماء المعقم لإزالة أية مواد لاصقة المفرط. الهواء الجاف الأغشية تحت غطاء الصفحي.
   3. استئصال بعناية ثروب وإرفاقه memb المغلفة لاصقةRANE باستخدام ملقط معقم. تسمح الأنسجة التمسك الغشاء لمدة 1 دقيقة قبل إضافة وسائل الإعلام. إضافة 500 ميكرولتر من تعليق الخلية على رأس كل الثرب في كل إدراج الثقافة. ملء المنطقة المحيطة غرفة transwell مع 2.5 مل من بورصة دبي للطاقة / F-12 ^10.
   4. احتضان ثروب مع تعليق خلية لمدة 6 ساعات في 37 ° C في CO ₂ 5٪ بيئة. إزالة بعناية ويغسل ثروب مع ~ 10 مل من برنامج تلفزيوني. تصور الفلورسنت بؤر الخلايا السرطانية باستخدام نظام ملائم التصوير الفلورسنت ^10.

النتائج

تحديد ونسيجية فحص البريتوني الدهون مستودعات

تشريح تشريحي الإجمالي يسمح بتحديد أربعة من المصادر الأولية خمسة من الدهون البريتوني (الشكل 1A). تتحرك في اتجاه عقارب الساعة من مركز أعلى هي: الثرب (OM، ورد) تقع على المع?...

Discussion

تطوير علاجات لاستهداف خلايا منتثرة يتطلب فهم الآلية الاستعمار المنتشر، فإن الخطوة الأولى الحاسمة في تطور مرض البريتوني. لمعالجة هذه القضايا ونحن التقرير النهج التي يمكن استخدامها لتبين كيف تكوين الأنسجة فريد الثرب والهندسة المعمارية تعزيز المبيض سرطان ا...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Dissection Tools	Fine Science Tools	NA
Geimsa	Fluka/Sigma Aldrich	48900
5% Formalin	Sigma	HT501320
DMEM	Corning	10-013-CV
Trypsin	Gibco	25200-056
PBS	Corning	21-040-CV	Without calcium and Magnesium
26 gauge needle	BD	329652
BSA	Sigma	A7906
Collagenase	Worthington	LS004196
Stomacher	Seward Labsystems	Stomacher 80 Biomaster
Microstomacher bag	Stomacher Lab Systems	BA6040/Micro
ACK Lysis Buffer	Gibco	A10492-01
Millicell culture plate insert	Millipore	PICM01250
Cell-Tak	Corning	354240