طرق الحادة وتحت الحادة الفئران Hindlimb نقص التروية

Summary

Surgical induction of hindlimb ischemia in the mouse is useful to examine angiogenesis, however this is compromised in certain inbred mouse strains that display marked ischemia-induced tissue necrosis. Methods are described to induce subacute limb ischemia using ameroid constrictors to circumvent this problem through the induction of gradual arterial occlusion.

Abstract

مرض الشريان المحيطي (PAD) هو السبب الرئيسي لاعتلال القلب والأوعية الدموية والوفيات في البلدان المتقدمة، والنماذج الحيوانية التي تتكاثر بشكل موثوق الأمراض التي تصيب البشر وتكون ضرورية لتطوير علاجات جديدة لهذا المرض. وقد استخدم نموذج الفأر hindlimb نقص التروية على نطاق واسع لهذا الغرض، ولكن الممارسة القياسية على إحداث نقص تروية الأطراف الحادة التي ربط الشريان الفخذي يمكن أن يؤدي إلى نخر الأنسجة كبير، المساومة على قدرة الباحثين على دراسة استجابات الأوعية الدموية والأنسجة العضلية الهيكلية لنقص التروية . نهج بديل لعملية ربط الشريان الفخذي هو تحريض التدريجي انسداد الشريان الفخذي من خلال استخدام العضلات القابضة ameroid. عند وضعه حول الشريان الفخذي في المواقع نفسها أو مختلفة مثل مواقع ربط الشريان الفخذي، وهذه الأجهزة تسد الشريان خلال 1-3 أيام، مما أدى في أكثر تدرجا، نقص التروية تحت الحاد. هذه النتائج في أقل كبير الهيكل العظمي نخر الأنسجة العضلية، ثهيك قد تحاكي بشكل وثيق الردود ينظر في PAD البشري. بسبب تأثيرات الخلفية الوراثية الحصائل في كل من النماذج نقص التروية الحادة وتحت الحادة، النظر في سلالة الماوس قيد الدرس المهم في اختيار النموذج الأفضل. وتصف هذه الورقة الإجراء المناسب ووضع التشريحي للالأربطة أو العضلات القابضة ameroid على الشريان الفخذي الماوس للحث تحت الحاد أو نقص التروية hindlimb الحاد في الماوس.

Introduction

مرض الشريان المحيطي (PAD) هو السبب الرئيسي للوفيات والأمراض القلبية الوعائية في البلدان المتقدمة ^1. النتائج PAD من انسداد تصلب الشرايين الشرايين الطرفية الذي يؤدي إلى نقص تروية الأطراف مع الألم الجهدي أو الراحة الناتجة وأحيانا الغير قابلة للشفاء القرحة والغرغرينا التي تستلزم بتر الأطراف. وتوجه العلاجات التي تستهدف في المقام الأول PAD نحو اللف ² أو إعادة التوعي الجراحية ^3، كما في الأساس ليست علاجات طبية فعالة توجد ^4.

للأسف، عودة التوعي غالبا ما تكون ذات فائدة محدودة، والطعوم تجاوز معدلات فشل عالية (تصل إلى 50٪ خلال 5 سنوات) ⁵ التي هي أسوأ في بعض المجموعات السكانية (على سبيل المثال، المدخنين، والنساء، ترقيع الوريد الصافن غير) ^6،7. النهج اللف، مثل قسطرة والدعامات، وتتأثر أيضا بنسب عودة التضيق العالية (اكثر من 50٪ في غضون سنة 1)، ولا سيما البرامج طن فخذي مأبضي مرض ^8، على الرغم من أن استخدام المناطيد يبلغ حجمه المخدرات والدعامات تحسنت النتائج إلى حد ما ^11/09. من أجل تطوير علاجات جديدة لPAD من الضروري تطوير النماذج الحيوانية التي تتكاثر بشكل موثوق الأمراض التي تصيب البشر.

حتى الآن، والنموذج الأكثر شيوعا من PAD هو النموذج hindlimb نقص التروية (HLI)، والتي في معظم الأحيان تؤدى في الفئران ^12،13. في المظهر الأكثر شيوعا لها، ينطوي على نموذج الربط الجراحي للشريان الفخذي الداني والقاصي والتدخل-فروع جانبها يتبعه استئصال السفينة، مما أدى إلى انسداد تدفق الدم وتحريض نقص التروية أطرافهم الحاد. وقد استخدم HLI في المقام الأول لدراسة الردود عائية وarteriogenic في الطرفية الأنسجة أطرافه العضلية وآثار العلاجات المختلفة (على سبيل المثال، والمخدرات، والتسليم الجينات، الخلايا الجذعية) على هذه الردود. وفي الآونة الأخيرة، استخدمت مجموعتنا هذا النموذج لدراسة دور خلايا عضلات الهيكل العظمي طن ردا على أطرافهم نقص التروية وآثار الاختلافات الوراثية على النتائج ^14.

وقد يسر نموذج HLI فهمنا الحالي أن ردود الأوعية الدموية والعضلات لنقص التروية تعتمد على الوراثة (أي سلالة الفطرية) ^{15، 16} عاما، ووجود أو عدم وجود أمراض أخرى أو الظروف ذات الصلة إلى تصلب الشرايين، بما في ذلك داء السكري ¹⁷ و ارتفاع الكولسترول ^18. ومع ذلك، ثمة ضعف هام من طراز HLI التقليدي هو أنه نموذج للطرف نقص التروية الحاد ^12،13، في حين PAD البشري يسبب نقص التروية المزمن نتيجة التطور التدريجي للآفات تصلب الشرايين انسداد في الشرايين الطرفية.

في محاولة للتحايل على هذا الضعف، تانغ وزملاؤه ضعت في البداية نموذج الفئران من تدريجي انسداد الشرايين الفخذ باستخدام العضلات القابضة ameroid ^19، ونفس المجموعة الرابعة في وقت لاحقeveloped نموذج الفأر مماثل ^20. وقد وصفت العضلات القابضة Ameroid في البداية في 1950s في نموذج الكلاب نقص تروية عضلة القلب المزمن ^21،22. هذه الأجهزة لديها كم المعادن الخارجي يغلف طبقة داخلية من مادة استرطابي، عادة الكازين، وعند وضعه حول الشريان أنها تحفز انسداد الأوعية تدريجيا كما أنها تمتص الرطوبة من الأنسجة المحيطة بها. في تعديلها من طراز يانغ وآخرون. وضعت العضلات القابضة في كل من الداني والقاصي الشريان الفخذي في مواقع مشابهة لمواقع ربط الجراحية، وأنها ligated فروع الجانب من الشريان الفخذي، كما هو الحال في النموذج التقليدي. مقارنة مع HLI حاد، أدى ameroid نقص التروية الناجم عن انقباض في أقل تعبير عن الجينات الالتهابية والقص التي تعتمد على الضغط، انخفاض انتعاش تدفق الدم 4-5 أسابيع بعد الجراحة، وأقل نخر العضلات ^20. وبناء على هذه الملاحظات، رئي أن انسداد الشرايين تدريجيا قد تقدم نموذجا للPم أكثر أهمية إلى الأمراض التي تصيب البشر.

والجدير بالذكر، في التقرير الأصلي، تم فحص آثار ameroid نقص التروية الناجم عن المضيقة فقط في C57BL / 6 الفئران ^19، والتي هي مقاومة نسبيا لالناجم عن نقص التروية العضلات نخر ^15. ونحن مؤخرا تعديل نموذج نقص التروية التدريجي أبعد من ذلك واستكشاف آثاره في أكثر-نقص التروية عرضة BALB / ج الماوس سلالة ^23. في أول مظهر من مظاهر هذا النموذج، وضعنا العضلات القابضة في كل من الداني والقاصي شريان الفخذ لكنه ترك كل فروع جانبية سليمة. في الثاني، وتعديل أكثر اعتدالا، وضعنا المضيقة واحدة فقط على الشريان الفخذي الداني، ومرة ​​أخرى ترك كل الرياحات الجانب من الشريان سليمة. في كل التعديلات من هذا النموذج، وجدنا أن الفئران BALB / ج، ولكن ليس C57BL / 6 الفئران، عرض نخر عضلة كبيرة على الرغم من وجود تدفق الدم مماثلة وكثافة الأوعية الدموية. على غرار الدراسة السابقة لدينا ^14، وأظهرت هذه النتائج أن عضلات الطرفلا يتأثر إصابة فقط من تدفق الدم، ولكن هو في جزء منه يعتمد على الخلفية الوراثية. وعلاوة على ذلك، وجدنا أن تدفق الدم أطرافهم انخفض إلى الحضيض في غضون 3 أيام، وبالتالي فإن النموذج يبدو أكثر واحد من "تحت الحاد 'بدلا من تدريجي نقص تروية الأطراف.

وبناء على هذه الدراسات السابقة، يبدو واضحا أن أسلوب واحد لإحداث hindlimb نقص التروية قد لا تكون مناسبة في جميع الحالات. بسبب مجموعة متنوعة من الظروف (على سبيل المثال، والاختلافات الوراثية وجود أو عدم وجود شروط المشارك المهووسين) تأثير كل من الأوعية الدموية والعضلات الردود محددة الهيكل العظمي، قد المحققين تجد أنه من الضروري تعديل الإزمان و / أو شدة نقص التروية hindlimb إلى الأفضل تناسب أغراضهم. وعلاوة على ذلك، والأوصاف السابقة من طراز تفتقر عادة المعالم التشريحية المناسبة لتسهيل موثوق استنساخ بين محقق من هذه التقنية. في هذه الورقة، وأساليب لإحداث إما حاد أو تحت الحاد نقص التروية hindlimb في الماوستم وصفها، وتقدم المعالم التشريحية الدقيقة.

Protocol

وقد أجريت التجارب على الحيوانات فقط وفقا لبروتوكول افقت عليها لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي ديوك. استخدمت الفئران الذكور في هذه الدراسة، على الرغم من أن كلا الجنسين يمكن أن تستخدم على النحو المشار إليه لغرض العلمي للدراسة.

1. إزالة الشعر

1. قبل التخدير، وإنشاء منطقة إعداد ما قبل العمليات الجراحية التي تتكون من وسادة التدفئة مغطاة وضعت في 37 درجة مئوية ومنفذ الرؤوس متصلة التدفق المستمر للالأيزوفلورين.
2. ضع الماوس في غرفة التخدير تحريض. ضبط تدفق متر O _2-1 لتر / دقيقة والأيزوفلورين إلى 1-3٪.
   وبفعل التخدير عادة في 25 غ الماوس مع 2٪ الأيزوفلورين: ملاحظة.
3. تحقق استجابة التحفيز الماوس، هزاز بلطف الغرفة ومراقبة عدم وجود رد فعل المقوم.
4. مسح الغرفة مع O ₂ لمسح الأيزوفلورين قبل الافتتاح. التحرك بسرعة الماوس إلى التدفئة صإعلان وتوصيله إلى الأيزوفلورين عبر الرؤوس.
5. ضبط الأيزوفلورين إلى 1.5٪. تحقق من استجابة التحفيز عن طريق دواسة المنعكس (قرصة أخمص قدميه).
6. تطبيق مواد التشحيم العيون بحرية لكلتا العينين لتجنب جفاف أثناء الجراحة.
7. حلق الشعر من كل أطرافه الخلفية باستخدام الانتهازي الكهربائية الصغيرة. عقد الجلد مشدود في حين حلق لتجنب يمزق الجلد.
8. تطبيق قبل تحسنت كريم إزالة الشعر وترك الجلوس لمدة 1 دقيقة. يمسح برفق بعيدا باستخدام شاش مبلل.
9. لعملية جراحية في وقت لاحق، وإيقاف الأيزوفلورين وتحريك الماوس إلى ورقة فارغة مبطنة منشفة الانتعاش قفص لضمان الماوس لا نضح الفراش القفص. مراقبة الحيوانات حتى أنها قادرة على الحفاظ على الاستلقاء القصية. خلاف ذلك، حرك الماوس إلى طاولة الجراحة.
   ملاحظة: عملية إزالة الشعر يمكن أن تحدث تهيجا في الجلد وتؤثر على القياسات نضح. فمن المستحسن الانتظار 1-2 أيام بعد إزالة الشعر الحيوان قبل عerforming مسح التروية قبل الجراحة أو إجراء العمليات الجراحية.

إعداد 2. قبل الجراحة

1. استخدام الأدوات التالية أثناء هذا الإجراء. مقص صغير مستقيم الجراحية، 2 مقلوب غرامة ملقط الزاوية، ملقط غريف صغيرة، ملقط سائق إبرة، 3 مبعدات، مقص الربيع الصغيرة، ومسحات القطن يميل غرامة.
2. تعقيم جميع الأدوات باستخدام الأوتوكلاف قبل الشروع في عملية جراحية. استخدام معقم الساخنة حبة قبل وبين كل إجراء العمليات الجراحية، لمدة تصل إلى 5 الحيوانات. تعقيم الحزم أداة جراحية أخرى لعملية جراحية لمجموعات أكبر من 5.
3. إعداد الجراحي الميداني معقم يتكون من وسادة التدفئة تغطيتها ومنفذ الأيزوفلورين. أداء جميع الأعمال تحت 10 ستيريو تشريح المجهر.
4. تخدير وإعداد الماوس كما هو موضح في الخطوات 1،1-1،5.
5. تأكد من أن الفأر هو مخدرا بالكامل ووضع في موقف ضعيف على طاولة الجراحة. تأمين ساقيه باستخدام الشريط الجراحية.
6. في حالة استخدام وسادة التدفئة التحكم في درجة حرارته، ونعلق على التحقيق في درجة الحرارة وثبته على قاعدة من منصة الجراحية باستخدام الشريط الجراحية للتأكد من أنه لن يتم سحبها عن طريق الخطأ من خلال هذا الإجراء.
7. تنظيف الموقع شق باستخدام 3 بالتناوب بوفيدون اليود والكحول مناديل. تغطية حيوان مع ثنى الجراحية المعقمة وقطع حفرة لفضح موقع شق.

3. الحث بالطرف نقص التروية

1. استخدام مشرط لجعل شق الأولي على طول وسط الفخذ وسطي، ويمتد من الركبة نحو البطن، وإطالة شق إلى حوالي 1 سم مع مقص غرامة (الشكل 1A).

الشكل 1. الموقع الجراحي والأوعية الدموية تشريحية معالم لجراحة ماوس Hindlimb نقص التروية. (A) عرض الخارجي لوhindlimb من الماوس في موقف ضعيف. خط تحاك يشير إلى موقع شق لتنفيذ الإجراءات hindlimb نقص التروية بشكل صحيح. (ب) عرض للالداني الأوعية الدموية الماوس hindlimb. نهاية القريبة من الشريان الفخذي (FA) تنشأ من تحت الرباط الإربي (IL). يقع النهاية البعيدة من اتحاد كرة القدم في التشعب لها في شريان باطن الركبة (PA) والشريان الصافن (SA). الشرايين الضمانات الرئيسية الخروج من اتحاد كرة القدم هي الجانبي الشريان المنعطف الفخذي (LCFA)، والداني الذيلية الشريان الفخذي (PCFA)، وسطحية الشريان الشرسوفي الذيلية (SCEA). الوريد الفخذي (اناث) يعمل المجاور لاتحاد كرة القدم، وفروع وريدية يمكن رؤية موازية لفروع الشرايين الرئيسية. النجمة (*) للدلالة على الداني والقاصي مواقع لوضع العضلات القابضة ameroid أو الأربطة، وهذا يتوقف على ما إذا كان تحت الحاد أو نقص التروية الحاد سوف يكون ذلك حافزا. الرجاء المبادرة القطريةCK هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

2. باستخدام ملقط، فتح شق وفضح الغشاء الذي يغطي أنسجة الدهون الأربية (IFT).
3. باستخدام ملقط مغلقة، بيرس من خلال الغشاء في الفصل بين IFT والبطن. الافراج عن الضغط بلطف على ملقط لفصل IFT من عضلات البطن، وفضح حزمة وعائية عصبية تحتها. مراقبة القريبة وفروع الذيلية سطحية كما المعالم التشريحية الهامة (الشكل 1B).
4. إدراج ضام وسحب الأنسجة البطن قريب لفضح الداني ameroid المضيقة أو ربط الموقع، فقط الأقرب إلى جانبي الشريان الفخذي المنعطف (الشكل 1B). الشريان المنعطف الجانبي يكمن حوالي 5 ملم الأقرب إلى الداني والشرايين الذيلية سطحية.
   1. إدراج اثنين من أكثر مبعدات في الجزء الأعلى من شق، وسطي واحد واحد الجانبي، لسحب IFT بشكل أقصى بعيدا عنموقع الجراحية لتوسيع مجال العمليات الجراحية.
5. استخدام اثنين من ملقط غرامة لإزالة الغشاء الأبعد تغطي حزمة وعائية عصبية. إدراج بلطف نصف من طرف ملقط غرامة بين الوريد والشرايين، وانزلاق غيض ملقط تحت الغشاء الذي يربطهم معا. إغلاق ملقط والمسيل للدموع بلطف بعيدا الغشاء.
6. إدراج غيض من ملقط مغلقة بين الوريد والشريان وخلق فجوة بينهما عن طريق الإفراج عن الضغط على ملقط. كرر هذه التقنية لخلق فجوة بين الشريان والعصب.
7. لتحت الحاد أطرافهم نقص التروية، وضع المضيقة ameroid على الشريان الفخذي القريبة (الشكل 2).
   1. لتثبيت المضيقة ameroid الداني، حرك غيض من ملقط تحت الشريان الفخذي إلى عزلها عن حزمة وعائية عصبية. استخدام مجموعة ثانية من ملقط angled- إلى قبضة حافة المضيقة وتوجيهها تحت الشريان الفخذي.
   2. وضع الشريان الفخذي في الصورةالكثير في المضيقة. كرر لالمضيقة البعيدة، وتحديد المواقع القريبة على الفور إلى التشعب من الشريان الفخذي في شريان باطن الركبة والشريان الصافن (الشكل 2).

الشكل 2. تنسيب من Ameroid العضلات القابضة والحروف المركبة. (أ) مثال اثنين من العضلات القابضة ameroid وضعت على الشريان الفخذي للحث تحت الحاد hindlimb نقص التروية. يتم وضع المضيقة الأقرب فقط الداني إلى الشريان الفخذي المنعطف الجانبي (LCFA). يتم وضع المضيقة البعيدة فقط الأقرب إلى التشعب من مأبضي (PA) والشرايين الصافن (SA). يتم تثبيت العضلات القابضة مع تعيين فتحة مواجهة لضمان الشريان بشكل صحيح داخل المضيقة. (ب) مثال على الحروف المركبة من الشريان الفخذي للحث على نقص التروية hindlimb الحاد. Ligaturيتم وضع العناوين (الأسهم الصفراء) بحيث أنها تطويق موقف العضلات القابضة في لوحة (B)، ومقطوع الشريان الفخذي بين كل مجموعة من اثنين من الأربطة (النجمة). بار، 1 ملم. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

8. لنقص تروية الأطراف الحادة، ligate والقطع الشريان الفخذي الداني.
   1. إلى القطع الشريان الفخذي، موضوع 7 - O خياطة تحت الشريان فقط الداني إلى موقف المضيقة الداني (انظر الخطوة 3.7) وligate. ربط ربطة الثاني حوالي 1 مم القاصي إلى الأول.
   2. استخدام مقص الربيع إلى القطع الشريان بين الحروف المركبة اثنين. لtransection الشرايين البعيدة، كرر هذه الخطوات، ووضع اثنين من الأربطة وحوالي 1 ملم بعيدا، فقط الأقرب إلى التشعب من الشريان الفخذي في شريان باطن الركبة والشريان الصافن ولكن التأكد من أنها البعيدة إلى caud سطحيةآل الشريان الشرسوفي (انظر الشكل 1)
9. إغلاق شق باستخدام توقف 5 - يا الغرز vicryl.

4. الإرواء التصوير

1. تحريك الماوس إلى 37 درجة مئوية وسادة التدفئة وضع تحت تصوير دوبلر الليزر نضح (LDPI) والاتصال عبر الرؤوس إلى مصدر الأيزوفلورين. إذا لم يكن هناك رصد لدرجات الحرارة هو متاح، والسماح 5 دقائق للماوس لتدفئة تصل إلى 37 درجة مئوية.
2. بدوره على تصوير وإطلاق برنامج التقاط الصور.
3. انقر على أيقونة "جديدة واحدة صورة" لفتح نافذة "إعداد الماسح". مجموعة 'مسح الحجم "إلى" كبير "و" سرعة المسح الضوئي' إلى '4 مللي / بكسل. ضبط منطقة المسح الضوئي عن طريق تغيير قيم x و y تحت "مسح المنطقة (وحدة)" الجزء.
4. انقر فوق علامة التبويب "فيديو وبعد" لعرض الفيديو تغذية، وترتيب الماوس لتناسب منطقة المسح الضوئي يدل على مخطط الحمراء. انقر على "القطر السيارات" لمعايرةالمسافة من الليزر لهذا الموضوع. انقر على "التالي" لفتح نافذة "تفاصيل الموضوع.
5. أدخل المعلومات تخضع وأي تعليقات ذات الصلة. انقر فوق الزر "التالي" للانتقال إلى إطار المسح.
6. انقر على زر "البدء القياس" لفتح "تأكيد أو تجاوز المسح بعد" الحوار. انقر فوق "موافق" لتأكيد مسافة المسح الضوئي. مراقبة عملية المسح تبدأ وتشغيل عن 4-8 دقائق اعتمادا على حجم منطقة المسح الضوئي.
7. بعد مسح كامل، نلاحظ نافذة "حفظ باسم". اسم الملف وحفظه.
8. اغلاق الأيزوفلورين وتحريك الماوس إلى قفص الانتعاش فارغة، ورصد حتى يكون قادرا على الحفاظ على الاستلقاء القصية الحيوان. لا تضع الماوس يتعافى من التخدير في قفص مع الفئران الأخرى.
9. فتح برنامج تحليل الصور. انقر على أيقونة 'فتح' وتصفح لوفتح ملف الصورة لتحليلها. في إطار ملف، ومراقبة تدفق،الصورة، والصور الملونة من الفأرة.
10. بمناسبة المنطقة ذات الاهتمام (ROI) على الصورة التمويه، انقر على أيقونة "مشاهدة رويس". التالي انقر على زر "إضافة مضلع 'واسحب المؤشر حول الطرف غير الجراحية لرسم العائد على الاستثمار. انقر بزر الماوس الأيمن لإغلاق الشكل. اختر 'إضافة مضلع "مرة أخرى ورسم العائد على الاستثمار المطابقة حول أطرافهم الجراحي.
11. فوق رمز "الإحصائيات" لفتح "صورة نتائج رويس الإحصاء (PU)" نافذة. لاحظ الفرق في المئة في حالة تغير مستمر في العمود 'الجريان٪'.
    ملاحظة: العائد على الاستثمار الأول رسمها سيكون بمثابة المرجع.
    ملاحظة: قبل كل فحص نضح لاحقة اتباع الخطوات الموضحة في القسم 1 لتخدير الماوس وفي الخطوات 4،1-4،11 لصورة الحيوان.

النتائج

التحديد السليم من الأوعية الدموية الماوس hindlimb أمر بالغ الأهمية لضمان استنساخ تقنيات لإحداث كلا تحت الحاد ونقص التروية hindlimb الحاد، كما هو موضح هنا. بالإضافة إلى الاختلاف الكامن في الدراسات الحيوانية، يمكن لعوامل أخرى إدخال التغير في الليزر دوبلر ن?...

Discussion

ولعل الخطوة الأكثر تحديا في هذا الإجراء هو الفصل بين الشريان الفخذي من الوريد الفخذي. قطر أكبر وأرق الجدران من الوريد الفخذي مقارنة مع أولئك الشريان زيادة قابليته للثقب وتمزق خلال التلاعب الجراحية. احتمال تعطيل الوريد يمكن الحد من الحفاظ على رطوبة الجرح باستخدام مس?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Dumont #5/45 Forceps	Fine Science Tools	11251-35	Dumoxel
Dumont Style 5 Mini Forceps	Fine Science Tools	11200-14	Inox
Extra Fine Bonn Scissors	Fine Science Tools	14084-08
7 - 0 Silk Suture	Sharpoint	DA-2527N
5 - 0 Coated Vicryl Suture	Ethicon	J463G
Graefe Forceps	Fine Science Tools	11053-10
Vannas Spring Scissors	Fine Science Tools	15000-03
Artifical Tears Ointment	Rugby Laboratories	0536-6550-91
Surgical Tape	3M	1530-0
Fine Cotton Swabs	Contec	SC-4
Temperature Controller	Physitemp	TCAT-2DF
Ameroid Constrictors	Research Instruments SW	MMC-0.25 x 1.00-SS
Hot Bead Sterilizer
Deltaphase Isothermal Pad	Braintree Scientific	39DP
Needle Driver	Fine Science Tools
Phosphate Buffered Saline	Gibco	10010-023
Moor LDPI	Moor Instruments	moorLDI2
moorLDI Measurement software	Moor Instruments	v. 6.0
Hair Removal Cream	Nair