Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

بروتوكول لإعداد وتوصيف دوكسوروبيسين محبة للدهون المؤيدة للمخدرات تحميل 1،2-distearoyl- التعطيل -glycero-3-phosphoethanolamine- N - [الأمينية (البولي ايثيلين جلايكول) -2000] يوصف (DSPE-PEG) المذيلات.

Abstract

Micelles have been successfully used for the delivery of anticancer drugs. Amphiphilic polymers form core-shell structured micelles in an aqueous environment through self-assembly. The hydrophobic core of micelles functions as a drug reservoir and encapsulates hydrophobic drugs. The hydrophilic shell prevents the aggregation of micelles and also prolongs their systemic circulation in vivo. In this protocol, we describe a method to synthesize a doxorubicin lipophilic pro-drug, doxorubicin-palmitic acid (DOX-PA), which will enhance drug loading into micelles. A pH-sensitive hydrazone linker was used to conjugate doxorubicin with the lipid, which facilitates the release of free doxorubicin inside cancer cells. Synthesized DOX-PA was purified with a silica gel column using dichloromethane/methanol as the eluent. Purified DOX-PA was analyzed with thin layer chromatography (TLC) and 1H-Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy (1H-NMR). A film dispersion method was used to prepare DOX-PA loaded DSPE-PEG micelles. In addition, several methods for characterizing micelle formulations are described, including determination of DOX-PA concentration and encapsulation efficiency, measurement of particle size and distribution, and assessment of in vitro anticancer activities. This protocol provides useful information regarding the preparation and characterization of drug-loaded micelles and thus will facilitate the research and development of novel micelle-based cancer nanomedicines.

Introduction

ويستخدم العلاج الكيميائي عادة لعلاج أشكال مختلفة من أمراض السرطان. معظم، إن لم يكن كلها، أدوية العلاج الكيميائي لها آثار جانبية سامة والتي قد تختلف من الشروط البسيطة يمكن التحكم فيها، مثل الغثيان والإسهال، لظروف تهدد حياة أكثر. لأن معظم الأدوية المضادة للسرطان سامة، والتعرض غير انتقائي من هذه الأدوية إلى الأنسجة الطبيعية يسبب حتما سمية. لذلك، هناك حاجة ماسة لنهج العلاجي الذي يمكن أن يحقق انتقائي المخدرات إلى الخلايا السرطانية. وهناك تحد آخر مع إدارة الأدوية المضادة للسرطان ضعيف الذوبان في الماء الخاصة بهم. عادة، لا بد من وكلاء الانحلال لصياغة هذه الأدوية قليلة الانحلال. ومع ذلك، فإن معظم وكلاء الانحلال، مثل سلفوكسيد ثنائي ميثيل ([دمس])، Cremophor EL، وبوليسوربات 80 (توين 80) قد يسبب الكبد والتسمم الكلوي، انحلال الدم، تفاعلات فرط الحساسية الحادة واعتلال الأعصاب المحيطية. 1 لذلك، هناك حاجة إلى تركيبات آمنة وحيويا ل استخدام السريري للفقراءالأدوية المضادة للسرطان القابلة للذوبان لاي. Nanocarriers واعدة أنظمة توصيل الدواء للتصدي للتحديات المذكورة أعلاه. وتشمل هذه nanocarriers الجسيمات الشحمية، 2 النانوية، 3 المذيلات، 4-7 تقارن البوليمر المخدرات و 8 و المواد غير العضوية. 9 العديد من المنتجات النانوي (على سبيل المثال، Doxil، Abraxane، وGenexol) وقد تمت الموافقة من قبل الهيئات التنظيمية لعلاج مرضى السرطان. 10

المذيلات البوليمرية واعدة ناقلات تسليم المخدرات مقياس النانو، والتي تم استخدامها بنجاح لإيصال الأدوية المضادة للسرطان. وتعد 4-7،11،12 المذيلات البوليمرية النموذجية من البوليمرات محبة للجهتين من خلال عملية التجميع الذاتي. وتشمل الأساسية قذيفة المذيلات البوليمرية المركبة قذيفة ماء والأساسية مسعور. قذيفة ماء يمكن تحقيق الاستقرار sterically المذيلات وإطالة تداولها في مجرى الدم. جوهر مسعور يمكن أن تلخص على نحو فعال د مسعورالسجاد. ونظرا لصغر حجم المذيلات (عادة ما تكون أقل من 200 نانومتر) وخصائص التداول منذ فترة طويلة، ويعتقد أن المذيلات البوليمرية لتحقيق الورم تستهدف من خلال تعزيز نفاذية والاستبقاء (EPR) آثار (استهداف الورم السلبي).

استقرار تحميل الدواء هو أمر حاسم لورم تستهدف قدرة المذيلات. لتحقيق استهداف الورم الأمثل، يجب أن يكون المذيلات الحد الأدنى من تسرب المخدرات قبل الوصول إلى موقع الورم، ولكن بسرعة الافراج عن المخدرات بعد دخول الخلايا السرطانية. وبالإضافة إلى ذلك، الاستقرار صياغة هو أيضا شرط أساسي لتطوير المنتجات، وذلك لأن الاستقرار صياغة يحدد جدوى تطوير المنتجات، فضلا عن العمر الافتراضي للمنتجات المتقدمة. مؤخرا، تم إحراز الكثير من الجهد لتحسين التحميل من المخدرات داخل أجسام ناقلة التسليم. النهج المؤيدة للمخدرات محبة للدهون هي استراتيجية التي تم استكشافها لتحسين تحميل المخدرات في النانوية الدهون والمستحلبات. 13،14 في حرف عطفugation من الدهون مع العقاقير يمكن أن تحسن إلى حد كبير بالانجذاب وتعزيز التحميل والاحتفاظ في مكونات المحب للدهون nanocarriers.

هنا، نحن تصف بروتوكول لإعداد دوكسوروبيسين محبة للدهون المؤيدة للمخدرات المذيلات تحميل. أولا، يتم وصف الإجراء التوليف لدوكسوروبيسين محبة للدهون المؤيدة للمخدرات. ثم، يتم إدخال بروتوكول لتوليد المذيلات مع طريقة فيلم والتشتت. وقد استخدمت هذه الطريقة بنجاح في دراساتنا السابقة. وقد تم اختيار 5 DSPE-PEG كمادة حاملة لإعداد المذيلات لأنه كان قد تم استخدامها بنجاح لتسليم مذيلة المخدرات. 15،16 أخيرا، وصفنا عدة فحوصات في المختبر يستخدم لوصف مذيلة تركيبات ولتقييم النشاط المضادة للسرطان.

Protocol

1. توليف DOX والسلطة الفلسطينية

  1. تزن 390 ملغ من دوكسوروبيسين و 243 ملغ من هيدرازيد حمض البالمتيك، ونقل إلى قارورة أسفل مستديرة.
  2. إضافة 150 مل من الميثانول اللامائية لقارورة مع حقنة زجاجية. إضافة 39 ميكرولتر من حمض trifluoroacetic (TFA) مع ماصة. باستخدام محرك مغناطيسي، وتحريك خليط التفاعل لمدة 18 ساعة على RT في الظلام.
    ملاحظة: كميات من المواد رد فعل يمكن زيادتها أو لأسفل للحصول على كميات مختلفة من DOX والسلطة الفلسطينية. ينبغي الحفاظ على نسبة من المواد المتفاعلة في نفس النسب. ردود الفعل باستخدام كميات DOX في نطاق من 78 ملغ إلى 1170 ملغ يمكن أن يؤديها في مختبر الكيمياء منتظم.
  3. تنقية DOX والسلطة الفلسطينية باستخدام عمود هلام السيليكا 17
    1. إزالة المذيب في خليط التفاعل مع المبخر الدوار. إضافة 3 غرام من هلام السيليكا بعد يتم تقليل حجم الخليط إلى حوالي 20 مل. يستمر التبخر الدوارة لانتاج المساحيق الجافة والسماح رانه الامتزاز من المنتجات على هلام السيليكا. الحفاظ على العينة تحت فراغ لمدة 30 دقيقة إضافية بعد أن يتم تشكيل المساحيق الجافة.
    2. حزمة 50 غ من هلام السيليكا في عمود باستخدام ثنائي كلورو ميثان كمادة مذيبة. بعناية إضافة العينة تحتوي على هلام السيليكا المنتج كثف إلى العمود.
    3. أزل عمود مع خليط من ثنائي كلورو ميثان والميثانول، مع زيادة تدريجية في نسبة الميثانول، وبالتالي زيادة الاستقطاب المذيبات (الجدول 1).
    4. جمع كسور شاطف في أنابيب الاختبار (25 مل / أنبوب) ورصد التقدم المحرز من قبل اللوني طبقة رقيقة (TLC).
    5. الجمع بين جميع الكسور التي تحتوي نقية DOX والسلطة الفلسطينية وإزالة المذيب باستخدام المبخر الدوار حتى يتم تشكيل مسحوق جاف. وعلاوة على ذلك تجفيف المنتجات تحت فراغ O / N.
  4. تحليل DOX والسلطة الفلسطينية من قبل TLC.
    1. قطع جزء سم 4 سم × 8 لوحة TLC. بقعة عينة حلول 0.5 سم من الجزء السفلي من لوحة مع TLC الشعيرات الدموية اكتشاف باستخدام التقىhanol مثل المذيبات.
    2. وضع لوحة TLC في غرفة تطوير تحتوي على خليط من ثنائي كلورو ميثان والميثانول (01/03، ت / ت). يجب أن يكون عمق مذيب أقل فقط من 0.5 سم.
    3. إزالة لوحة من غرفة تطوير عندما تصل الجبهة المذيبات الجزء العلوي من لوحة. بمناسبة موقع الجبهة المذيبات مع قلم رصاص والسماح لوحة لتجف. وضع لوحة TLC في غرفة تلطيخ تحتوي المشبعة بخار اليود من أجل رؤية العينات.
  5. تحليل DOX والسلطة الفلسطينية مع الرنين المغناطيسي الطيفي 1 H-النووي (1 H-NMR). 18
    1. حل 15 ملغ من DOX والسلطة الفلسطينية في 1 مل من الميثيل سلفوكسيد-D6 ([دمس]) ونقل العينة إلى أنبوب الرنين المغناطيسي.
    2. إدراج أنبوب الرنين المغناطيسي في المغناطيس الصك NMR. قياس الطيف البروتون، واختيار DMSO كمادة مذيبة. إزالة أنبوب NMR من المغناطيس. تحليل نتيجة NMR 18.

2. إعداد DOX والسلطة الفلسطينية المذيلات بواسطة الأسلوب السينمائي والتشتت

  1. حل DSPE-PEG (40 ملغ) وDOX-PA (4 ملغ) مع 2 مل من الميثانول في قارورة زجاجية 10 مل.
  2. إزالة المذيبات العضوية تحت فراغ باستخدام المبخر الدوار حتى أشكال رقيقة في القارورة.
    ملاحظة: بدلا من ذلك، تتبخر المذيبات العضوية تحت غاز خامل (مثل الأرجون أو غاز النيتروجين) لتشكيل الفيلم والحفاظ على قنينة في مجفف فراغ لمواصلة إزالة المذيبات المتبقية.
  3. نقل 2 مل من الفوسفات مخزنة المالحة Dulbecco و(7.4 درجة الحموضة، DPBS) إلى قارورة زجاجية.
  4. ضع القارورة في حمام بالموجات فوق الصوتية لمدة 3 دقائق على RT لتوليد المذيلات.
    ملاحظة: تختلف السلطة بالموجات فوق الصوتية بين نماذج مختلفة من الحمامات فوق الصوتية. اختر وحدة التي يمكن أن تولد ما يكفي من القوة بالموجات فوق الصوتية لتفريق رقيقة فيلم البوليمر / المخدرات. انتاج الطاقة من حمام بالموجات فوق الصوتية المستخدمة في هذا البروتوكول هو 110 W.
  5. الحفاظ المذيلات في 4 درجة مئوية لمدة التخزين على المدى القصير و -20 درجة مئوية لمدة طويلةتخزين الاجل.
    ملاحظة: بدلا من ذلك، يمكن أيضا أن تكون المذيلات تجميد المجفف وتشكيلها مع الماء قبل الاستخدام. عادة، لا حاجة لcryoprotectant أو lyoprotectant لهذه الصيغة.

3. توصيف DOX والسلطة الفلسطينية المذيلات

  1. تحديد تركيز DOX والسلطة الفلسطينية في المذيلات والكفاءة التغليف المخدرات
    1. حل DOX والسلطة الفلسطينية توليفها في الخطوات السابقة في DMSO لإعداد حلول DOX والسلطة الفلسطينية من خمسة تركيزات مختلفة: 1 ميكروغرام / مل، 5 ميكروغرام / مل و 20 ميكروغرام / مل و 50 ميكروغرام / مل، و 100 ميكروغرام / مل. قياس امتصاص حلول DOX والسلطة الفلسطينية مع مطياف الأشعة فوق البنفسجية-VIS في 490 نانومتر. توليد منحنى القياسية على أساس تركيز الدواء DOX والسلطة الفلسطينية والمقابلة استيعابهم في 490 نانومتر.
    2. تمييع 25 ميكرولتر من مذيلة محملة المخدرات مع 500 ميكرولتر من DMSO. قياس امتصاص عند 490 نانومتر مع مطياف الأشعة فوق البنفسجية-VIS. حساب تركيز الدواء مع المنحنى القياسي ولدت في 3.1.1.
    3. حساب الكفاءة التغليف باستخدام المعادلة التالية:
      تغليف المخدرات الكفاءة (٪) = (كمية من المخدرات في المذيلات) / (كمية من المخدرات المضافة) × 100٪
  2. توصيف حجم الجسيمات مع تشتت الضوء الحيوي (DLS)
    1. تمييع المذيلات مع DPBS (درجة الحموضة 7.4) إلى تركيز DSPE-PEG النهائي من 1 ملغ / مل. تحليل عينة 2 مل مع محلل حجم الجسيمات للحصول على الحجم والتشتت المتعدد مؤشر Z متوسط ​​(PDI).
  3. تقييم في المختبر النشاط المضادة للسرطان
    ملاحظة: استخدام تقنية معقمة المناسبة والعمل داخل مجلس الوزراء السلامة البيولوجية.
    1. إزالة مستنبت الخلايا من قارورة ثقافة خلية (على سبيل المثال، T25) التي تحتوي على اليورانيوم المنضب-145 خلايا سرطان البروستاتا البشرية وشطف الخلايا مع 2 مل من DPBS (7.4 درجة الحموضة).
    2. نضح DPBS، إضافة 1 مل من محلول التربسين (0.25٪)، واحتضان لمدة 2 دقيقة عند 37 درجة مئوية لفصل الخلايا.
    3. إضافة 10 ملتر من مستنبت الخلية (RPMI 1640 + 10٪ مصل بقري جنيني + 1٪ للمضادات الحيوية مضاد فطري)، عندما يتم فصل معظم الخلايا من القارورة. نقل الخلايا إلى أنبوب الطرد المركزي 15 مل وأجهزة الطرد المركزي الخلايا في 1000 x ج لمدة 5 دقائق.
    4. إعادة تعليق بيليه خلية مع 5 مل من مستنبت الخلية وإزالة عينة لحساب أعداد الخلايا مع عدادة الكريات. تمييع الخلايا مع مستنبت الخلية إلى كثافة من 50000 خلية / مل. إضافة الخلية تعليق المخفف إلى 96 جيدا لوحة زراعة الخلايا (100 ميكرولتر / جيد). احتضان الخلايا في حاضنة الثقافة الخلية (37 درجة مئوية، و 5٪ CO 2) لمدة 18 ساعة للسماح مرفق الخلية.
    5. تمييع DOX ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) حل والحل DOX والسلطة الفلسطينية DMSO مع خلية ثقافة المتوسط ​​للحصول على تركيز الدواء النهائية من 0.1 ميكرومتر، 0.5 ميكرومتر، 2 ميكرومتر، 5 ميكرومتر، و 10 ميكرومتر، على التوالي. إبقاء تركيز DMSO النهائية في جميع العينات المذكورة أعلاه إلى 0.5٪. تمييع مذيلة DOX والسلطة الفلسطينية مع خلية ثقافة المتوسط ​​للحصول شارك المخدرات النهائيncentrations من 0.1 ميكرومتر، 0.5 ميكرومتر، 2 ميكرومتر، 5 ميكرومتر، و 10 ميكرومتر، على التوالي. استخدام فارغة زراعة الخلايا المتوسطة عنصر تحكم.
    6. إزالة 96-جيدا لوحة الثقافة خلية من الحاضنة واستبدال مستنبت الخلية مع 100 ميكرولتر من المتوسط ​​تحتوي على عناصر العلاج المختلفة التي أعدت في الخطوة 3.3.5 (ن = 4 لكل مجموعة). احتضان الخلايا في حاضنة الثقافة الخلية (37 درجة مئوية، و 5٪ CO 2) للحصول على 72 ساعة إضافية.
    7. نضح المتوسطة وإضافة 100 ميكرولتر من المتوسط ​​تحتوي على 0.5 ملغ / مل من 3- (4،5-ثنائي ميثيل-thiazol-2-YL) -2،5-ثنائي بروميد نتروبلو (الإنتقالي العسكري).
    8. احتضان الخلايا في حاضنة الثقافة خلية لمدة 2 ساعة إضافية. إزالة بعناية متوسطة وإضافة 100 ميكرولتر من DMSO لإذابة البلورات formazan.
    9. قياس الامتصاصية مع معمل صفيحة عند طول موجي 570 نانومتر، والطول الموجي إشارة من 670 نانومتر.
    10. حساب بقاء الخلية باستخدام المعادلة التالية:
      بقاء الخلية (٪) = (A اختبار / عنصر تحكم) × 100٪
      ملاحظة: مقارنة بقاء الخلية بين المجموعات المختلفة باستخدام تحليل التباين الأحادي (ANOVA) اختبار إحصائي. حساب IC 50 على أساس بقاء الخلية مقابل البيانات تركيز الدواء.

النتائج

ويبين الشكل 1 مخطط تركيب DOX والسلطة الفلسطينية. تم تصنيعه DOX والسلطة الفلسطينية عن طريق الاقتران من حمض البالمتيك مع دوكسوروبيسين من خلال السندات هيدرازون الحساسة درجة الحموضة. تم استخدام فائض طفيف من هيدرازيد حمض البالمتيك لتسهيل إتما?...

Discussion

في هذا العمل، نحن تصف وسريع طريقة فيلم تشتت غير معقدة لإعداد المذيلات. هذه الطريقة تستخدم خصائص التجميع الذاتي من البوليمر محبة للجهتين (على سبيل المثال، DSPE-PEG) لتشكيل نواة قذيفة المذيلات منظم في بيئة مائية. هذه طريقة إعداد مذيلة ديها العديد من المزايا. 1. كان ينطو...

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

This work was supported by the following grants: NIH-SC3 grant, NSF-PREM grant, Hampton University Faculty Research Grant. We would like to thank Mrs. Michele A. Cochran at Virginia Institute of Marine Science (VIMS) for the use of the particle size analyzer. We would also like to thank Mrs. Corinne R. Ramaley for reviewing the manuscript.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
DSPE-PEG2KCordenpharmLP-R4-039>95%
DoxorubicinLC LaboratoriesD-4000>99%
Palmitic Acid HydrazideTCI AMERICA  P000425G>98.0%
MethanolACROS Organics610981000Anhydrous
Methylene chloride FISHER D151-499.90%
Methyl sulfoxide-d6ACROS OrganicsAC320760075NMR solvent
Trifluoroacetic Acid ACROS OrganicsAC29381100099.50%
Silica GelFISHER L-7446230-400 mesh
BAKER FLEX TLC PLATES FISHER NC9990129
DPBSSigma-AldrichD8537
DU 145  Prostate Cancer CellsATCCHTB-81
MTTACROS Organics15899005098%
RPMI 1640 MediumMEDIATECH INC 10041CV
Antibiotic-Antimycotic LIFE TECHNOLOGIES 15240062100x stock solution
Fetal Bovine SerumLIFE TECHNOLOGIES 10437077
Nuclear Magnetic Resonance SpectroscopyVarian, Inc300 NMR 
Büchi R-3 RotavaporBuchi1103022V1 Rotary evaporator
Ultrasonic BathBRANSON ULTRASONICS CORPORATION CPX952318R
UV-VIS spectrometer Biomate 3Thermo Spectronic
Zetasizer Nano ZS90 Malvern InstrumentsParticle Size Analyer
Microplate Spectrophotometer Rio-RadBenchmark Plus 
Cell Culture IncubatorNapcoCO2 6000
Biological Safety CabinetNuaire
SigmaPlot Systat Software, Inc.Analytical Software
96-Well Cell Culture PlateBecton Dickinson353072
Trypsin  0.25%Corning Cellgro25-053-CI

References

  1. Hennenfent, K. L., Govindan, R. Novel formulations of taxanes: a review. Old wine in a new bottle?. ESMO. 17 (5), 735-749 (2006).
  2. Paliwal, S. R., Paliwal, R., Agrawal, G. P., Vyas, S. P. Liposomal nanomedicine for breast cancer therapy. Nanomedicine. 6 (6), 1085-1100 (2011).
  3. Mahapatro, A., Singh, D. K. Biodegradable nanoparticles are excellent vehicle for site directed in vivo delivery of drugs and vaccines. J Nanobiotechnology. 9 (55), (2011).
  4. Danquah, M., Li, F., Duke, C. B., Miller 3rd, ., D, D., Mahato, R. I. Micellar delivery of bicalutamide and embelin for treating prostate cancer. Pharm Res. 26 (9), 2081-2092 (2009).
  5. Li, F., Danquah, M., Mahato, R. I. Synthesis and characterization of amphiphilic lipopolymers for micellar drug delivery. Biomacromolecules. 11 (10), 2610-2620 (2010).
  6. Li, F., Danquah, M., Singh, S., Hao, W., Mahato, R. Paclitaxel- and lapatinib-loaded lipopolymer micelles overcome multidrug resistance in prostate cancer. Drug Deliv. and Transl. Res. 1 (6), 9 (2011).
  7. Li, F., Lu, Y., Li, W., Miller, D. D., Mahato, R. I. Synthesis, formulation and in vitro evaluation of a novel microtubule destabilizer, SMART-100. J Control Release. 143 (1), 151-158 (2010).
  8. Minko, T., Kopeckova, P., Pozharov, V., Kopecek, J. HPMA copolymer bound adriamycin overcomes MDR1 gene encoded resistance in a human ovarian carcinoma cell line. J Control Release. 54 (2), 223-233 (1998).
  9. Rosenholm, J. M., Mamaeva, V., Sahlgren, C., Linden, M. Nanoparticles in targeted cancer therapy: mesoporous silica nanoparticles entering preclinical development stage. Nanomedicine. 7 (1), 111-120 (2012).
  10. Kaur, I. P., et al. Issues and concerns in nanotech product development and its commercialization. J Control Release. 193, 51-62 (2014).
  11. Jones, M., Leroux, J. Polymeric micelles - a new generation of colloidal drug carriers. Eur J Pharm Biopharm. 48 (2), 101-111 (1999).
  12. Wang, H., Li, F., Du, C., Mahato, R. I., Huang, Y. Doxorubicin and lapatinib combination nanomedicine for treating resistant breast cancer. Mol Pharm. 11 (8), 2600-2611 (2014).
  13. Ma, P., Rahima Benhabbour, S., Feng, L., Mumper, R. J. 2'-Behenoyl-paclitaxel conjugate containing lipid nanoparticles for the treatment of metastatic breast cancer. Cancer Lett. 334 (2), 253-262 (2013).
  14. Lundberg, B. B., Risovic, V., Ramaswamy, M., Wasan, K. M. A lipophilic paclitaxel derivative incorporated in a lipid emulsion for parenteral administration. J Control Release. 86 (1), 93-100 (2003).
  15. Perche, F., Patel, N. R., Torchilin, V. P. Accumulation and toxicity of antibody-targeted doxorubicin-loaded PEG-PE micelles in ovarian cancer cell spheroid model. J Control Release. 164 (1), 95-102 (2012).
  16. Gill, K. K., Kaddoumi, A., Nazzal, S. Mixed micelles of PEG(2000)-DSPE and vitamin-E TPGS for concurrent delivery of paclitaxel and parthenolide: enhanced chemosenstization and antitumor efficacy against non-small cell lung cancer (NSCLC) cell lines. Eur J Pharm Sci. 46 (1-2), 67-71 (2012).
  17. Still, W. C., Kahn, M., Mitra, A. Rapid Chromatographic Technique for Preparative Separations with Moderate Resolution. J. Org. Chem. 43 (14), 2923-2925 (1978).
  18. Morton, L. A., Saludes, J. P., Yin, H. Constant pressure-controlled extrusion method for the preparation of Nano-sized lipid vesicles. J Vis Exp. (64), (2012).
  19. Ulbrich, K., Etrych, T., Chytil, P., Jelinkova, M., Rihova, B. HPMA copolymers with pH-controlled release of doxorubicin: in vitro cytotoxicity and in vivo antitumor activity. J Controlled Release. 87 (1-3), 33-47 (2003).
  20. Patil, R., et al. Cellular Delivery of Doxorubicin via pH-Controlled Hydrazone Linkage Using Multifunctional Nano Vehicle Based on Poly(beta-L-Malic Acid). Int J Mol Sci. 13 (9), 11681-11693 (2012).
  21. Hu, X., Liu, S., Huang, Y., Chen, X., Jing, X. Biodegradable block copolymer-doxorubicin conjugates via different linkages: preparation, characterization, and in vitro evaluation. Biomacromolecules. 11 (8), 2094-2102 (2010).
  22. Huynh, L., Neale, C., Pomes, R., Allen, C. Computational approaches to the rational design of nanoemulsions, polymeric micelles, and dendrimers for drug delivery. Nanomedicine. 8 (1), 20-36 (2012).
  23. Shi, C., et al. A drug-specific nanocarrier design for efficient anticancer therapy. Nat Commun. 6, 7449 (2015).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

114

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved