إنشاء البطن التصاقات في الفئران

Summary

Abdominal adhesions that form after surgery are a major cause of pain, infertility, and hospitalization and reoperation for small bowel obstruction. Our surgical procedure for creating abdominal adhesions in mice is a reliable tool to study the mechanisms underlying the formation of adhesions.

Abstract

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or intraabdominal infection. The precise mechanisms underlying adhesion formation are poorly understood. Many compounds and physical barriers have been tested for their ability to prevent adhesions after surgery with varying levels of success. The mouse and rat are important models for the study of abdominal adhesions. Several different techniques for the creation of adhesions in the mouse and rat exist in the literature. Here we describe a protocol utilizing abrasion of the cecum with sandpaper and sutures placed in the right abdominal sidewall. The mouse is anesthetized and the abdomen is prepped. A midline laparotomy is created and the cecum is identified. Sandpaper is used to gently abrade the surface of the cecum. Next, several figure-of-eight sutures are placed into the peritoneum of the right abdominal sidewall. The abdominal cavity is irrigated, a small amount of starch is applied, and the incision is closed. We have found that this technique produces the most consistent adhesions with the lowest mortality rate.

Introduction

التصاقات في البطن هي شكل من أشكال ندبا التي تشكل في البطن ردا على الالتهابات، عادة بعد الجراحة أو العدوى داخل البطن. الالتصاقات هي سبب رئيسي من آلام في البطن المزمن والعقم، وهي السبب الأكثر شيوعا لانسداد الأمعاء الدقيقة ^1. وجود التصاقات يجعل تنفيذ عملية في البطن الثانية أكثر صعوبة ويزيد من احتمال حدوث مضاعفات ^2.

وعلى الرغم من سنوات من البحث، والآليات الكامنة وراء تشكيل الالتصاقات لا تزال غير مفهومة. ومن المعروف أن إصابة الأولية لسطح البريتوني يؤدي إلى نضح السوائل الليفين الغني، الذي ثم تشكل الجلطة التي تربط أسطح الأمعاء وجدار البطن معا ^3. وفي وقت لاحق، الخلايا الليفية والخلايا الأخرى تهاجر في الفضاء لاصقة وتفرز النسيج الضام ^4. وعلى مدى أشهر إلى سنوات التصاق ينضج من خلال تطوير الأوعية الدموية والأعصاب 5.

وتوجد العديد من المنتجات التجارية التي تم تصميمها للحد من تشكيل الالتصاقات بعد عملية جراحية في البطن (على سبيل المثال، Seprafilm). جميع هذه المنتجات تعمل كحواجز الميكانيكية ووقف تشكيل التصاق عن طريق منع الاتصال الجسدي بين حلقات من الأمعاء وجدار البطن ^6،7. رغم وجود أدلة من المحاكمة للرقابة التي حاجزا التصاق الجراحية يقلل من تشكيل الالتصاقات ^8، العديد من الجراحين الروايات المتناقلة قد أصيب بخيبة أمل مع فعالية المنتجات حاجز الميكانيكية.

حاليا لا توجد علاجات مضادة للالتصاق القائم على المخدرات، وهو ما يعكس حقيقة أن العمليات الدقيقة التي تدخل في تشكيل التصاق وغير مفهومة. تطوير العلاج الذي يستهدف على وجه التحديد وكلاء الخلوية أو الجزيئية تشارك في تشكيل الالتصاقات سوف تحتاج إلى فهم أفضل للأحداث التي تشارك في تشكيل الالتصاق. عدة مجموعةحددت الصورة المسارات الجزيئية التي قد تكون مهمة لتكوين الالتصاق ^9-11. توفر النماذج الحيوانية بيئة رائعة لدراسة تشكيل الالتصاقات. وقد نشرت العديد من الدراسات التي تصف خلق الجراحي من التصاق في العديد من الحيوانات، ولا سيما في الجرذان والفئران ^6،12-14. نظرا تجربتنا مع دراسة تليف في الماوس وتوافر واسعة من الفئران المعدلة وراثيا والأجسام المضادة القائمة على الماوس، اخترنا الماوس كما نموذجنا لدراسة التصاقات. هنا، نحن تقرير تقنية أننا قد وضعت لإنشاء بتكاثر وموثوق التصاقات في البطن في الماوس.

Protocol

تمت الموافقة على بروتوكول التالية من قبل لجنة جامعة ستانفورد المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) ويتوافق مع جميع المبادئ التوجيهية الأخلاقية المؤسسية فيما يتعلق باستخدام حيوانات التجارب.

1. إنشاء البطن الالتصاقات

1. بدء تشغيل الماوس على نظام غذائي طعام المضادات الحيوية قبل أسبوع واحد لهذا الإجراء.
2. تعقيم الأدوات الجراحية وقبل دافئ الحل الري بالمياه المالحة.
3. تخدير الماوس باستخدام 2٪ الأيزوفلورين استنشاقه.
4. باستخدام المقص الشعر تليها تطبيق سريع (5-10 ثانية) وكيل مزيل الشعر، إزالة الشعر من الغالبية العظمى من سطح البطن. تماما إزالة عامل مزيل الشعر عن طريق المسح برفق مع الشاش الرطب، واختياريا، عن طريق التغميس بعناية النصف السفلي من الفأرة في الماء الدافئ. تجف تماما والحيوان.
5. ضع خطم الحيوان في مخروط الأنف مخدر. أثناء الجراحة بأكملها، ترصد بدقة صمعدل espiratory الحيوان وعاير معدل التدفق مخدر حسب الحاجة.
6. استخدام جهاز الاحتباس الحراري، مثل وسادة التدفئة أو مصباح الاحتباس الحراري، لمنع انخفاض حرارة الجسم.
7. قبل الإستعداد البطن، وتأمين الفأر مع شرائح من الشريط وضعت فوق وتحت البطن لمنع الماوس من التحول أثناء الجراحة. تطهير البطن مع betadine، ثم اتبع مع 70٪ من الإيثانول. تشمل أكبر قدر من مساحة ممكنة في الإعدادية، بما في ذلك الشعر على حواف منطقة حلق. وضع الستارة العقيمة على الماوس. (الشكل 1)
8. تحت الجلد حقن 0.1 ملغم / كغم البوبرينورفين، أو 3 ميكروغرام لمدة 30 ز الماوس.
9. جعل شق الجلد.
   1. بدءا من خط الوسط أسفل البطن، فهم الجلد بالملقط واجراء خفض الضحلة العمودي في الجلد باستخدام مقص حاد.
   2. حمل قطع متفوق إلى سيفي الشكل مع مقص. احرص على إدخال فقط الجلد.
10. كما أن عضلات البطن هي نآه مرئية تغطي الأحشاء، فهم خط الوسط من العضلات مع ملقط وبعناية فائقة وجعل قطع صغير في ذلك باستخدام مقص حاد. تأكد من عدم قطع طريق الخطأ في جهاز البطن.
11. بعد دخول الفضاء البريتوني مع قطع صغيرة ورؤية الطبقة العضلية سحب بعيدا عن أعضاء البطن، وتمديد خفض متفوق ودون المستوى عن طريق إدراج مقص في افتتاح وقطع بعناية في كلا الاتجاهين. تمديد شق من سيفي الشكل متفوق إلى فوق المثانة دون المستوى. (الشكل 2)
12. الآن التي تتعرض الأمعاء، حدد موقع الأعور والداخل للظاهر برفق. تجنب استيعاب الأعور مع ملقط مسنن أو حادة. بدلا من ذلك استخدام ملقط ارضحي مثل أدسون ملقط مسنن.
13. كشط الأعور مع الصنفرة.
    1. كشط بلطف على كامل سطح جانبي الأعور مع 100 الصنفرة حصى ل30 - 60 ثانية حتى يصبح السطح أقل لامعة ونمشات appear على السطح. إذا كان الجراح هو اليد اليمنى، فإنه يساعد على توجيه الأعور مع طرف تواجه للحق وثنى الأعور على السبابة اليسرى الجراح. (الشكل 3)
    2. أداء الرملي بلطف، لأنه من السهل أن تسبب بطريق الخطأ ثقب في جدار الأعور رقيقة. يجب أن يرى وهناك كمية صغيرة من رمل كما يتم نقل الصنفرة على طول سطح الأعور. إذا شعرت الصنفرة مرارا وتكرارا على التقاط الأعور، وهذا من المرجح أن يؤدي إلى تمزق في جدار الأعور. مشاهدة بعناية للتأكد من أن جزيئات من ورق زجاج لا طرد ويبقى في البطن، لأن هذا قد يسبب الإفراط في رد فعل جسم غريب.
    3. في حالة حدوث تمزق في جدار الأعور، إنهاء إجراءات والموت ببطء الحيوان.
    4. إذا تم المنفصمة والأوعية الدموية الأعور بواسطة الصنفرة ويسبب النزيف، واجراء الضغط لمدة تصل إلى دقيقتين مع الشاش. ومع ذلك، إذا استمر النزيف بعد هذا الوقت، ضع الرقم ثمانية و7-0 حيدة الخيط حولدرجة النزيف. هذا سيوقف موثوق النزيف في جميع الحالات تقريبا. الحرص على عدم إدراج كمية كبيرة من جدار الأعور إلى خياطة، لأن ذلك المخاطر تسبب نخر من جانب المعنيين من الجدار.
14. تجرح جدار البطن الصحيح.
    1. استخدام شريط من ورق زجاج لكشط سطح البريتوني لعضلات جدار البطن الصحيح. أن تكون أكثر عدوانية مع الرملي هنا من التركيز على الأعور وتستمر حتى كامل سطح جدار البطن الصحيح يبدو بخشونة. تجنب الرملي من الصعب جدا أن الجلد هو واضح من خلال الفتحات الموجودة في الطبقة العضلية. (الشكل 4)
    2. استخدام برنامج تشغيل إبرة كاسترو فيجو، تضع بين اثنين وأربعة الرقم ثمانية و4-0 غرز الحرير في الطبقة العضلية لجدار البطن الصحيح. ترك ذيول حوالي 5 ملم طويلة. الحرص على عدم قبض بطريق الخطأ جدار الأمعاء في خياطة الجروح. (الشكل 5)
15. باستخدام حقنة 10 مل شغل ثاستعد إيث المالحة، لري الأمعاء عدة مرات. توجيه تيار من المياه المالحة في تجويف البطن للري الداخل أيضا. إذا كان السطح تحت الماوس يصبح غارقة، حرك الماوس فوق أو استبدال السطح، من أجل تجنب انخفاض حرارة الجسم.
16. استخدام شاش معقم وضعت على الجرح لامتصاص الري الزائد.
17. خذ قليل من النشا ويرشه على سطح جدار البطن اليمنى على كلا الجانبين من الأعور. (الشكل 6)
18. تأكد من عدم وجود نزيف نشط. إذا كان هناك استخدام اسفنجة الشاش لممارسة الضغط مباشرة على درجة النزيف حتى يتوقف. إذا لم يتوقف النزيف بسهولة، ضع خياطة مرقئ كما هو موضح أعلاه.
19. باستخدام نهاية حادة من الملقط وإصبع، ودفع بلطف الأمعاء مرة أخرى إلى تجويف البطن. ضع الأعور بجانب الغرز في جدار البطن الصحيح من أجل تحقيق أقصى قدر من تشكيل الالتصاق.
20. Cتفقد شق البطن.
    1. باستخدام 6-0 امتصاص خياطة مضفر، وضع غرزة الوقوع في الطبقة العضلية في الجزء العلوي من شق.
    2. تشغيل خياطة أسفل باتجاه الجزء السفلي من شق، والجمع بين طبقة العضلات. السفر حوالي 3 ملم ويستغرق 3 لدغات ملم مع كل غرزة جديدة. الحرص على عدم اتخاذ قصد لدغة من الأمعاء في حين وضع الغرز.
    3. في الجزء السفلي من شق، وترك حلقة من الخيط من لدغة السابقة، واستخدام هذا لأداة ربط الخيط. قطع الخيط وترك 5 ملم ذيول.
    4. كرر الخطوات الثلاث المذكورة أعلاه مع 6-0 النايلون حيدة خياطة لإغلاق الجلد.
21. إدارة 20 مل / كغ تحت الجلد المالحة بلعة (حوالي 0.5 مل لمدة 30 ز الماوس).
22. باستخدام شاش جافة، يجف تماما الحيوان كله، والفراء ظهري يميل إلى الحصول على الرطب أثناء الري.
23. فضفاضة التفاف لاصقة خلع الملابس حول البطن لتغطية الجرح. الحرص على عدم تقييد لالساقين نيمال أو الميكانيكا التنفس مع الملابس.
24. ترصد بدقة الحيوان لأنه يتعافى من التخدير. إدارة البوبرينورفين كل 12 ساعة لمدة 2-3 أيام بعد العملية للسيطرة على الألم.

2. حصاد التصاق الأنسجة

1. الانتظار مدة لا تقل عن سبعة أيام بعد الجراحة الأولية. مرة أخرى، الأوتوكلاف الأدوات الجراحية وتخدير الماوس مع isoflurane.
2. تعقيم البطن مع betadine تليها الايثانول 70٪. حلاقة ويزيل الشعر الشعر إضافية من الجانب الأيمن من البطن بحيث لن تكون مشمولة في عينة التصاق يحتوي الجلد في الشعر، مما يجعل الأنسجة أكثر صعوبة.
3. استخدام شق ناصف اليسار، منذ الأمعاء غالبا ما تمسك شق الأصلي. بدءا من النهاية السفلية من البطن، حوالي 5 ملم إلى اليسار من أسفل شق الأصلي، فهم الجلد بالملقط مسننة الصغيرة وقطع في الجلد مع مقص حاد. تمديد هذا خفض متفوقةلاي إلى القفص الصدري. (الشكل 7)
4. باستخدام مقص، وقطع في الطبقة العضلية وبعد دخول الفضاء البريتوني، تمديد خفض إلى أعلى وأسفل من شق. سيكون هناك أنسجة لاصقة تسبب الأعور والأمعاء الدقيقة على التمسك جدار الأيمن من البطن، وربما أيضا إلى شق الأصلي. (الشكل 8)
5. باستخدام مقص والبدء على حافة الجرح، فوق مستوى الأعور، البدء في قطع في جدار البطن في دائرة حول المنطقة حيث الأمعاء هو ملتصقة.
6. بالتناوب فوق وتحت مستوى الأعور، وقطع تدريجيا على طول الطريق نحو الالتصاق وإكمال الدائرة، العائد في "الجزيرة" من الجلد والبطن ملتصقة الجدار إلى الأمعاء. (الشكل 9)
7. مرة أخرى باستخدام مقص، وقطع في الأمعاء وفصل جزء ملتصقة عن بقية الأمعاء، مما أسفر عن شطيرة من الأنسجة التي تتكون من الجلد وجدار البطنعلى جانب واحد، الأمعاء على الجانب الآخر، والأنسجة لاصقة يربط بين اثنين من بينهما. (الشكل 10)
8. اختياريا، واستخدام مقص وأشار إلى فصل حاد في الجلد من العضلات جدار البطن. لالأنسجة النظر في ترك الجلد المرفقة، ولكن للهضم وزنزانة انفرادية الجلد يمكن إزالتها. إذا كان سيتم استخدام الأنسجة لالأنسجة، تأكد من إزالة أكبر قدر ممكن من المواد خياطة ممكن من دون إزعاج بشكل مفرط واجهة لاصقة. للهضم والعزلة خلية من المقبول ترك الغرز في مكان طالما أن الأنسجة التي تمت تصفيتها هضم.
9. بعد استئصال الأنسجة التصاق، الموت ببطء الماوس باستخدام طريقة إنسانية افقت لجنة استخدام الحيوان المؤسسية الخاص بك.

النتائج

في سبعة أيام بعد الجراحة، والأعور وربما القولون الصاعد، والكبد، وحلقات من الأمعاء الدقيقة ينبغي أن تكون ملتصقة إلى اليمين من جانب وجدار البطن. (الشكل 8) الأنسجة رفعه يمكن أن تكون جزءا لا يتجزأ ومقطوع وسوف تسفر عن الشرائح النسيجية ممتازة....

Discussion

الخطوات الحاسمة في هذا الإجراء هي: الكشط بدقة الأعور دون التسبب في ثقب، وضع خيوط في جدار البطن، وتطبيق كمية مناسبة من النشا. تنطبق إلا الصنفرة لالأعور، أو لجزء معين صغير من الأمعاء. استخدام واسع من الصنفرة على كميات كبيرة من الأمعاء الدقيقة يميل إلى أن يسبب الشلل اللف...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Fisherbrand Absorbent Underpads, 20" x 24"	Fisher Scientific	14-206-62
Polylined Sterile Field, 18" x 24"	Busse Hospital Disposables	696	Cut a rectangular hole of the appropriate size
Isothesia isoflurane	Henry Schein	050033
Fisherbrand Sterile cotton gauze pad, 4" x 4"	Fisher Scientific	22-415-469
Puralube petrolatum ophthalmic ointment, 1/8 oz. tube	Dechra Veterinary Products	NDC 17033-211-38
Nair depilatory cream	Church & Dwight Co.	22339-05
Buprenex buprenorphine  0.3 mg/mL	Reckitt Benckiser Pharmaceuticals Inc.	NDC 12496-0757-5
1 cc insulin syringe, 27G	Becton  Dickinson	329412
Povidone Iodine Prep Solution	Medline	MDS093944H
Webcol alcohol prep swabs	Covidien	6818
General-Purpose Labarotory Labeling tape	VWR	89097-912
BioGel PI surgical gloves	Mölnlycke Health Care	ALA42675Z
Micro Forceps with teeth	Roboz	RS-5150
Fine scissors- sharp	Fine Science Tools	14060-09
Straight serrated forceps	Fine Science Tools	11050-10
Castro-Viejo needle driver	Fine Science Tools	12565-14
100 grit 1/4 sheet sandpaper	ACE Hardware	1010446	Cut into strips
4-0 silk suture, 30", SH needle	Ethicon	K831
7-0 PDS II absorbable monofilament suture, 30", BV-1 needle	Ethicon	Z135	Usually comes double-armed. Cut the suture at the midway point to generate two usable sutures.
Rice starch	MP Biomedicals	102955
0.9% Sodium Chloride Irrigation	Baxter	BHL2F7121	Warm to 37° C prior to use
10 mL syringe	Becton Dickinson	309604
6-0 Vicryl absorbable braided suture, 18", RB-1 taper needle	Ethicon	J212H
6-0 Ethilon nylon monofilament  suture, 18", P-3 needle,	Ethicon	1698G
Tegaderm Transparent Film Dressing Frame Style, 6 cm x 7 cm	3M	1624W	Cut in half lengthwise