Farelerde Karın Adezyonların Oluşturulması

Özet

Abdominal adhesions that form after surgery are a major cause of pain, infertility, and hospitalization and reoperation for small bowel obstruction. Our surgical procedure for creating abdominal adhesions in mice is a reliable tool to study the mechanisms underlying the formation of adhesions.

Özet

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or intraabdominal infection. The precise mechanisms underlying adhesion formation are poorly understood. Many compounds and physical barriers have been tested for their ability to prevent adhesions after surgery with varying levels of success. The mouse and rat are important models for the study of abdominal adhesions. Several different techniques for the creation of adhesions in the mouse and rat exist in the literature. Here we describe a protocol utilizing abrasion of the cecum with sandpaper and sutures placed in the right abdominal sidewall. The mouse is anesthetized and the abdomen is prepped. A midline laparotomy is created and the cecum is identified. Sandpaper is used to gently abrade the surface of the cecum. Next, several figure-of-eight sutures are placed into the peritoneum of the right abdominal sidewall. The abdominal cavity is irrigated, a small amount of starch is applied, and the incision is closed. We have found that this technique produces the most consistent adhesions with the lowest mortality rate.

Giriş

Karın yapışıklıklar genellikle cerrahi veya karın içi enfeksiyonu takiben, inflamasyon yanıt olarak karın içinde formu skar dokusu bir form vardır. Yapışıklıklar kronik karın ağrısı ve kısırlık başlıca nedenidir ve ince bağırsak tıkanması ¹ en sık nedenidir. Yapışıklıklar varlığı, ikinci bir karın operasyonu daha zor performans ve komplikasyonların ² olasılığını artırır yapar.

Yıllar süren araştırmalara rağmen, yapışıklık oluşumunu altında yatan mekanizmaları yeterince anlaşılamamıştır. Peritoneal bir başlangıç ​​yaralanma ardından barsak ve karın duvarı birlikte, ³ yüzeylerini bağlayan bir pıhtı oluşturan fibrin bakımından zengin sıvının, bir eksudasyon neden olduğu bilinmektedir. Daha sonra, fibroblastlar ve diğer hücreler yapışkan uzaya göç ve bağ dokusunu ⁴ salgılar. yıllara aylarda yapışma kan damarlarını ve sinirleri geliştirerek olgunlaşır ^5.

Çeşitli ticari ürünler abdominal cerrahi (örneğin, Seprafilm) sonrasında doku kaynaşması oluşumunu azaltmak için tasarlanmış ürünler mevcuttur. Tüm bu ürünlerin mekanik bariyerler olarak hareket ve bağırsak döngüler ve karın duvarı ^6,7 arasındaki fiziksel teması engelleyerek yapışma oluşumunu durdurmak. Cerrahi adhezyon bariyeri yapışıklık ⁸ oluşumunu azaltır kontrollü çalışmadan kanıtlara rağmen, pek çok cerrah anekdotal mekanik bariyer ürünlerin etkinliği ile hayal kırıklığı olmuştur.

Şu anda yapışıklık oluşumunda rol kesin süreçler tam olarak anlaşılamamıştır olduğu gerçeğini yansıtır herhangi bir ilaç tabanlı anti-yapışma tedaviler vardır. Özellikle yapışma oluşumunda yer olayların gelişmiş bir anlayış gerektirir yapışıklıkların oluşumuna katılan hücresel veya moleküler ajanlar hedefleyen bir terapi geliştirilmesi. çeşitli grups yapışıklık oluşumu ^9-11 için önemli olabilir moleküler yollar belirledik. Hayvan modelleri yapışıklıklar oluşumunu incelemek için mükemmel bir ortam sağlar. Birçok çalışma, çok sayıda hayvan, özellikle de sıçan ve fare ^6,12-14 yapışkanlıktaki cerrahi oluşturulmasını tarif yayınlanmıştır. Fare ve transgenik fareler ve fare tabanlı antikorların geniş yer fibrozis okuyan bizim deneyim göz önüne alındığında, yapışıklıklar çalışma için model olarak fare seçti. Bu yazıda, biz tekrarlanabilir ve güvenilir fare karın yapışıklıklar oluşturmak için geliştirilen tekniği rapor.

Protokol

Aşağıdaki protokol Stanford Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış ve araştırma hayvanların kullanımı ile ilgili tüm kurumsal etik kurallara uygun olmuştur.

Karın Adezyonların 1. Yaratılış

1. bir hafta önce prosedüre antibiyotik chow diyet fare başlatın.
2. cerrahi aletler ve öncesi ılık tuzlu su sulama çözümü Otoklav.
3. % 2 solunan izofluran kullanarak fare anestezisi.
4. Hızlı bir uygulama tarafından izlenen bir saç kesme makinesi kullanılarak - tüy dökücü ajan (5 10 sn), karın yüzeyinin çoğunluğu saç kaldırmak. İyice yavaşça dikkatle ılık suya fare alt yarısını dunking, opsiyonel olarak ıslak gazlı bez ve silerek tüy dökücü ajan kaldırın. İyice hayvan kurulayın.
5. anestezik burun konisi içine hayvanın burun yerleştirin. Tüm Ameliyat sırasında dikkatlice r izlemekGerektiğinde hayvanın espiratory hızı ve anestezik akış hızı titre edilir.
6. hipotermiyi önlemek için, bu tür bir ısıtma yastığı veya ısıtıcı bir lamba gibi ısıtıcı bir cihazın kullanımı.
7. Önce karın prepping için, ameliyat sırasında kaymasını önlemek için fareyi karın üstünde ve altında yer bant şeritler ile fare sabitleyin. betadin ile karın dezenfekte edin, sonra% 70 etanol ile takip edin. traş edilmiş bölgeye kenarlarında saç dahil hazırlık mümkün olduğu kadar alanı içerir. fare üzerinde bir steril örtüyü yerleştirin. (Şekil 1)
8. Subkutan 0.1 mg / kg buprenorfin veya 30 g fare için 3 mikrogram enjekte.
9. cilt kesi olun.
   1. alt karın orta hatta başlayarak, forseps ile cilt kavramak ve keskin bir makas kullanarak deride sığ dikey kesim yapmak.
   2. makasla xiphoid superiorda kesim taşıyın. sadece cildi girmek için özen gösterin.
10. karın kaslarının n olarakiç organları kaplayan ow görünür, forseps ile kas orta hat kavramak ve çok dikkatli bir şekilde keskin bir makas kullanarak içine küçük bir kesim yapmak. yanlışlıkla bir abdominal organ içine kesmek için değil emin olun.
11. Küçük bir kesim ile periton alana giren ve kas tabakası abdominal organlar uzak çekin gördükten sonra ağzına makas ekleme ve dikkatle her iki yönde keserek superior ve altta kesim uzatmak. xiphoid gelen superior için inferiora mesane üzerinde kesi uzatın. (Şekil 2)
12. Şimdi bağırsak maruz kaldığı, çekum bulun ve hafifçe exteriorize. Dişli veya keskin forseps ile çekum tutmaktan kaçının. Bunun yerine, böyle bir Adson dişli forseps gibi atravmatik forseps kullanabilir.
13. zımpara kağıdı ile çekum aşındırmak.
    1. yüzey daha az parlak ve peteşiler appea oluncaya kadar 60 saniye - Yavaşça 30 100 zımpara kağıdı ile çekum iki tarafın tüm yüzeyini aşındırmakyüzeyde r. Cerrah sağ elini ise, sağa dönük ucu ile çekum yönlendirmek ve cerrahın sol işaret parmağı üzerinde çekum asmak için yardımcı olur. (Şekil 3)
    2. yanlışlıkla ince sekum duvarının bir perforasyona neden kolay olduğu gibi, yavaşça zımpara yapın. zımpara çekal yüzeyi boyunca hareket ettirildiğinde grittiness az miktarda hissedilebilir olmalıdır. zımpara çekum üzerinde alıcı art arda hissedilir, bu büyük olasılıkla çekal duvardaki bir gözyaşı neden olacaktır. zımpara tanecikleri çıkarmak ve bu aşırı yabancı cisim reaksiyonuna neden olabilir, karın kalmaz emin olmak için dikkatle izleyin.
    3. çekal duvardaki bir gözyaşı oluşursa, işlemi sonlandırmak ve hayvan euthanize.
    4. Bir çekal kan damarı zımpara tarafından kesilmesi ve kanama neden olur ise, gazlı bez ile en fazla iki dakika basıncı tutun. kanama, bu saatten sonra devam ederse Ancak, etrafında bir figür-of-sekiz 7-0 monofilament sütür koyunKanama nokta. Bu güvenilir hemen hemen her durumda kanamayı durduracak. Bu duvarın dahil kısmının nekroz sebep olma riski olarak, sütür içine çekal duvarın büyük miktarda dahil özen gösterin.
14. sağ karın yan duvar zarar.
    1. sağ karın yan duvarın kas periton yüzeyine aşındırmak için zımpara şeridi kullanın. zımparalama ile burada daha çekum daha agresif olun ve sağ karın yan duvarın tüm yüzeyi tartakladığı görünene kadar devam eder. Cilt kas tabakasında deliklerden görünür şekilde sert zımpara kaçının. (Şekil 4)
    2. Bir Castro-Viejo iğne sürücüsünü kullanma, sağ karın yan duvarın kas tabakası içine 4-0 figure-of-sekiz iki ila dört ipek dikiş yerleştirin. yaklaşık 5 mm uzunluğunda kuyrukları bırakın. yanlışlıkla sütür içine bağırsak duvarı yakalamak için özen gösterin. (Şekil 5)
15. W doldurulmuş bir 10 ml şırınga kullanılaraki, tuz ısındı bağırsakları birkaç kez sulanması. yanı sıra içini sulamak için karın boşluğuna tuzlu akışı yönlendirin. Fare altında yüzey batırılmış hale gelirse, fareyi üzerinde taşımak veya hipotermi önlemek için, yüzey değiştirin.
16. Aşırı sulama emmek için kesi üzerine yerleştirilen bir steril gazlı bez kullanın.
17. nişasta bir tutam alın ve sağ karın yan duvarın yüzeyine ve çekum her iki tarafında üzerine serpin. (Şekil 6)
18. aktif kanama olmadığından emin olun. varsa, durana kadar kanama noktasına doğrudan baskı uygulamak için bir gazlı bez sünger kullanın. Kanama kolaylıkla durmaz, yukarıda tarif edildiği gibi bir hemostatik dikiş yerleştirin.
19. forseps ve parmak künt ucunu kullanarak, yavaşça karın boşluğuna geri bağırsak itin. adezyon oluşumunu maksimize etmek için hemen yanında karın yanağında dikişlerle için çekum yerleştirin.
20. CKarın kesi kaybedersiniz.
    1. 6-0 emilebilir örgülü sütür kullanılarak, kesi üstündeki kas tabakası içine çalışan bir dikiş yerleştirin.
    2. kas tabakasını bir araya getirerek, aşağı insizyon altına doğru dikiş çalıştırın. yaklaşık 3 mm seyahat ve her yeni dikiş ile 3 mm sokması alır. sütürler yerleştirirken özen yanlışlıkla bağırsağın bir ısırık almak değil.
    3. kesi alt kısmında, önceki ısırık sütür bir döngü bırakmak ve dikiş kravat enstrüman için bunu kullanabilirsiniz. 5 mm kuyrukları bırakarak dikiş kesin.
    4. Cildi kapatmak için 6-0 naylon monofilament sütür ile yukarıdaki üç adımları tekrarlayın.
21. 20 ml / kg deri altı serum fizyolojik bolus (30 g fare için yaklaşık 0.5 ml) uygulayınız.
22. dorsal kürk sulama sırasında ıslak olsun eğilimi gibi kuru gazlı bez kullanarak, iyice tüm hayvan kurutun.
23. Gevşek kesi karşılamak için karın etrafında soyunma bir yapıştırıcı sarın. a sınırlamak vermemeye özenNimal bacakları ya da sargı ile nefes mekaniği.
24. anestezi kurtarır dikkatle hayvan izlemek. Ağrı kontrolü için işlem sonrası buprenorfin 2-3 gün boyunca her 12 saat uygulayın.

2. Hasat Yapışma Doku

1. İlk ameliyattan sonra yedi gün en az bekleyin. Yine, cerrahi aletler otoklav ve izofluran ile fare uyutmak.
2. % 70 etanol, ardından betadin ile karın sterilize edin. Tıraş ve histoloji zorlaştıran cildi içeren yapışma örnek saç kaplı olmayacak şekilde karın, sağ tarafında başka saç atmaktadır.
3. bağırsak genellikle orijinal kesi yapışmış olduğundan, bir sol paramedian kesi kullanın. karın alt ucunda başlayarak, orijinal kesi alt solunda yaklaşık 5 mm, küçük dişli forseps ile cilt kavramak ve keskin bir makas ile deri içine kesti. Bu üstün kesim uzatıngöğüs kafesi için ly. (Şekil 7)
4. makas kullanarak, kas tabakası içine ve periton boşluğu girdikten sonra kesilmiş, kesi üst ve alt kesim uzatmak. Orijinal kesi muhtemelen de karnın sağ yan duvarına yapışır ve çekum ve ince bağırsak neden yapışkan doku olacaktır. (Şekil 8)
5. Çekum seviyesinden, makas kullanılarak ve insizyon kenarında başlayan, bağırsak yapışık olduğu alanın çevresinde bir daire karın duvarı içine kesme başlar.
6. Yukarıda Alternatif ve çekum seviyesinin altında, yavaş yavaş barsak deri ve karın duvarı yapışık bir "ada", sonuçta tüm yol yapışma etrafını kesin ve daire tamamlayın. (Şekil 9)
7. Yine deri ve karın duvarı oluşan bir doku sandviç vererek, barsak oyulmuş ve barsak geri kalanından yapışık kısmını ayırmak, makas kullanarakbir tarafta, diğer tarafta bağırsak ve yapışkan dokuya arasındaki iki bağlantı. (Şekil 10)
8. İsteğe bağlı olarak, keskin karın duvarı kas cilt ayırmak için sivri makas kullanın. histoloji için ekli cildi düşünün, ama sindirim ve hücre izolasyonu için cilt kaldırılabilir. doku histolojisi için kullanılacaksa, aşırı yapışkan arayüzü bozmadan mümkün olduğunca sütür materyali kaldırmak için emin olun. sindirim ve hücre izolasyonu için o kadar uzun sindirmek süzülür doku olarak yerine sütür bırakmak kabul edilebilir.
9. yapışma dokusu eksize sonra, kurumsal hayvan kullanımı komitesi tarafından onaylanmış bir insani yöntemi kullanarak fare euthanize.

Sonuçlar

cerrahi, çekum ve muhtemelen artan kolon, karaciğer ve ince bağırsağın döngüler sonra yedi gün sağ taraflı karın duvarına yapışık olmalıdır. (Şekil 8) Kesilen doku gömüldü, kesit ve mükemmel histolojik slaytlar verecektir edilebilir. (Şekil 11, 12)

Prosedür doğru gerçekleştirildiğinde, farelerin% 100 yedi gün sonra dikkate değer adezyonlar olmalıdır. Öl?...

Tartışmalar

Bu prosedürde kritik adımlar şunlardır: iyice, perforasyon neden karın yanağında sütür yerleştirerek, ve nişasta doğru miktarda uygulamadan çekum aşındırma. Sadece çekum, ya da barsak küçük bir özel bölümüne zımpara kağıdı uygulayın. ince bağırsağın büyük miktarlarda zımpara yaygın kullanımı önemli ileus neden olmaktadır. yüzeyi pürüzlü hale yeterli kuvvetle çekum aşındırmak için özen, ancak duvar gözyaşları o kadar çok değil. Bu dengeyi bulmak biraz zaman alabilir...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Fisherbrand Absorbent Underpads, 20" x 24"	Fisher Scientific	14-206-62
Polylined Sterile Field, 18" x 24"	Busse Hospital Disposables	696	Cut a rectangular hole of the appropriate size
Isothesia isoflurane	Henry Schein	050033
Fisherbrand Sterile cotton gauze pad, 4" x 4"	Fisher Scientific	22-415-469
Puralube petrolatum ophthalmic ointment, 1/8 oz. tube	Dechra Veterinary Products	NDC 17033-211-38
Nair depilatory cream	Church & Dwight Co.	22339-05
Buprenex buprenorphine  0.3 mg/mL	Reckitt Benckiser Pharmaceuticals Inc.	NDC 12496-0757-5
1 cc insulin syringe, 27G	Becton  Dickinson	329412
Povidone Iodine Prep Solution	Medline	MDS093944H
Webcol alcohol prep swabs	Covidien	6818
General-Purpose Labarotory Labeling tape	VWR	89097-912
BioGel PI surgical gloves	Mölnlycke Health Care	ALA42675Z
Micro Forceps with teeth	Roboz	RS-5150
Fine scissors- sharp	Fine Science Tools	14060-09
Straight serrated forceps	Fine Science Tools	11050-10
Castro-Viejo needle driver	Fine Science Tools	12565-14
100 grit 1/4 sheet sandpaper	ACE Hardware	1010446	Cut into strips
4-0 silk suture, 30", SH needle	Ethicon	K831
7-0 PDS II absorbable monofilament suture, 30", BV-1 needle	Ethicon	Z135	Usually comes double-armed. Cut the suture at the midway point to generate two usable sutures.
Rice starch	MP Biomedicals	102955
0.9% Sodium Chloride Irrigation	Baxter	BHL2F7121	Warm to 37° C prior to use
10 mL syringe	Becton Dickinson	309604
6-0 Vicryl absorbable braided suture, 18", RB-1 taper needle	Ethicon	J212H
6-0 Ethilon nylon monofilament  suture, 18", P-3 needle,	Ethicon	1698G
Tegaderm Transparent Film Dressing Frame Style, 6 cm x 7 cm	3M	1624W	Cut in half lengthwise