마우스의 복부 유착의 창조

요약

Abdominal adhesions that form after surgery are a major cause of pain, infertility, and hospitalization and reoperation for small bowel obstruction. Our surgical procedure for creating abdominal adhesions in mice is a reliable tool to study the mechanisms underlying the formation of adhesions.

초록

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or intraabdominal infection. The precise mechanisms underlying adhesion formation are poorly understood. Many compounds and physical barriers have been tested for their ability to prevent adhesions after surgery with varying levels of success. The mouse and rat are important models for the study of abdominal adhesions. Several different techniques for the creation of adhesions in the mouse and rat exist in the literature. Here we describe a protocol utilizing abrasion of the cecum with sandpaper and sutures placed in the right abdominal sidewall. The mouse is anesthetized and the abdomen is prepped. A midline laparotomy is created and the cecum is identified. Sandpaper is used to gently abrade the surface of the cecum. Next, several figure-of-eight sutures are placed into the peritoneum of the right abdominal sidewall. The abdominal cavity is irrigated, a small amount of starch is applied, and the incision is closed. We have found that this technique produces the most consistent adhesions with the lowest mortality rate.

서문

복부 유착은 일반적으로 수술 또는 복강 내 감염에 이어 염증에 반응하여 복부 흉터 조직 형성의 형태이다. 유착 만성 복통 및 불임의 주요 원인이며, 소장 폐쇄 ^(1)의 가장 흔한 원인이다. 유착의 존재는 제 복부 조작이 더 어려운 수행 합병증의 ^가능성이 증가한다.

년간의 연구에도 불구하고, 유착의 형성을 기본 메커니즘은 제대로 이해 남아 있습니다. 복막 표면 초기 부상 다음 장과 같이 복벽 ^(3)의면을 결합하는 혈전 형성 피브린이 풍부한 유체의 삼출을 야기하는 것으로 알려져있다. 이후, 섬유 아세포 등의 세포 접착 공간으로 이전 및 결합 조직 ^(4)을 분비. 세 개월간 밀착성 혈관과 신경을 개발하여 성숙 ^5.

몇몇 상업적 제품은 복부 수술 (예 Seprafilm) 후 유착 형성을 줄일 수 있도록 설계되어있는 것. 이 모든 제품의 기계적 장벽의 역할과 대장의 ​​루프와 복부 벽 ^6,7 사이의 물리적 접촉을 방지하여 유착 형성을 중지합니다. 외과 접착 배리어 유착 ^(8)의 형성을 감소시키는 대조 연구로부터의 증거에도 불구하고, 많은 외과의는 일화 기계적 장벽 제품의 효과 실망되었다.

현재 유착 형성에 관여하는 정확한 과정이 제대로 이해하고 있다는 사실을 반영하는 어떤 약물 계 항 - 부착 요법은 존재하지 않는다. 특히 유착 형성에 관여하는 이벤트의 개선 된 이해를 필요 유착 형성에 관여하는 세포 또는 분자 제제를 대상으로하는 치료법 개발. 여러 그룹들 유착 형성 ^9-11에 대한 중요 할 수있다 분자 경로를 확인했다. 동물 모델은 유착 형성을 연구하기위한 최상의 환경을 제공한다. 많은 연구는 여러 동물, 특히 쥐와 마우스 ^6,12-14에 부착 수술 생성을 설명하는 발표되었다. 마우스 및 형질 전환 마우스 및 마우스 기반 항체의 폭 넓은 가용성 섬유증을 공부하고 우리의 경험을 감안할 때, 우리는 유착의 연구를위한 우리의 모델로 마우스를 선택했다. 여기서, 우리는 우리가 재현성 및 신뢰성 마우스의 복부 유착을 만들기 위해 개발 한 기술을보고합니다.

프로토콜

다음 프로토콜은 스탠포드 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 승인을 연구 동물의 사용과 관련된 모든 기관 윤리 지침을 준수하고 있습니다.

복부 유착 1. 창조

1. 일주 전 과정에 항생제 우 다이어트에 마우스를 시작합니다.
2. 수술 악기와 사전 따뜻한 식염수 관개 솔루션을 압력솥.
3. 2 % 흡입 이소 플루 란을 이용하여 마우스를 마취.
4. 짧은 애플리케이션 뒤에 이발기 사용 - 탈모 에이전트 (5 내지 10 초), 복부의 표면의 대부분으로부터 모발을 제거한다. 철저하게 조심스럽게 신중하게 따뜻한 물에 마우스의 아래쪽을 덩크에 의해 선택적으로 젖은 거즈로 닦아하여 제모 제를 제거합니다. 철저하게 동물을 건조.
5. 마취 코 콘에 동물의 주둥이를 놓습니다. 전체 수술하는 동안주의 깊게 연구를 모니터링필요에 따라 동물 espiratory 속도는 마취 유량을 적정한다.
6. 저체온증을 방지하기 위해, 이러한 가열 패드 또는 온난화 램프 등의 온난화 장치를 사용합니다.
7. 이전에 복부를 준비하고에, 수술 중 변화에서 마우스를 방지하기 위해 복부 위 아래에 배치 테이프의 스트립 마우스를 고정합니다. betadine와 복부를 소독 한 다음 70 % 에탄올에 따릅니다. 면도 영역의 에지에 모발을 포함하여 사전에 가능한 한 많은 공간을 포함한다. 마우스를 통해 멸균 드레이프를 놓습니다. (그림 1)
8. 피하 0.1 ㎎ / ㎏ 부 프레 노르 핀, 또는 30g 마우스 3 μg의 주입.
9. 피부 절개를합니다.
   1. 낮은 복부 정중선에서 시작, 집게로 피부를 잡고 날카로운 가위를 사용하여 피부의 얕은 수직 절단을합니다.
   2. 가위로 xyphoid에 우량 절단을 수행한다. 단지 피부를 입력하도록주의하십시오.
10. 복부 근육은 n입니다으로내장을 덮고 흐름 표시, 집게와 근육의 중간 선을 잡고 매우 신중하게 날카로운 가위를 사용에 작은 상처를합니다. 실수로 복부 장기로 절단하지 않도록합니다.
11. 작은 컷 복막 공간을 입력하고 근육 층이 복부 장기에서 멀리 당겨보고 후, 구멍에 가위를 삽입하고 조심스럽게 양 방향으로 절단하여 우량과 하방 절단을 확장합니다. xyphoid에서 우량으로 하방 방광 위의 절개를 확장합니다. (그림 2)
12. 이제 창자가 노출되어 있는지, 맹장을 찾아 조심스럽게 외면 화하다. 이빨이나 날카로운 집게로 맹장을 파악하지 마십시오. 대신 이러한 Adson 톱니 모양의 집게와 같은 외상성 집게를 사용합니다.
13. 사포와 맹장을 연마.
    1. 표면이 덜 반짝 점상 appea 될 때까지 60 초 - 부드럽게 30 100 사포로 맹장의 양쪽의 전체 표면을 연마표면에 연구. 외과 의사가 오른 손잡이 인 경우, 오른쪽에 직면 팁과 맹장의 방향과 외과 의사의 왼쪽 검지 손가락을 통해 맹장을 드레이프하는 데 도움이됩니다. (그림 3)
    2. 실수로 얇은 맹장 벽의 천공의 원인이 높기 때문에, 부드럽게 샌딩을 수행합니다. 샌드페이퍼가 맹장 표면을 따라 움직일 때 깔깔 소량 생각한다. 사포는 맹장에 잡기 반복적으로 느껴지는 경우,이 가능성이 맹장 벽에 파열의 원인이됩니다. 사포의 입자를 이동시키다이 과도한 이물 반응을 일으킬 수 있으므로, 복부에 남아 있지 않도록주의하세요.
    3. 맹장 벽에 파열이 발생하는 경우, 절차를 종료하고, 동물을 안락사.
    4. 맹장 혈관이 사포에 의해 전단되고 출혈이 발생하는 경우, 거즈와 최대 2 분 동안 압력을 유지. 출혈이 시간 이후 계속되면 그러나 주위에 그림-의 여덟 7-0 모노 필라멘트 봉합사를 배치출혈의 포인트. 이 안정적으로 거의 모든 경우에 출혈을 중지합니다. 이 벽의 관련 부분의 괴사를 일으키는 위험 같이, 봉합으로 맹장 벽을 다량 포함하지 않도록주의한다.
14. 오른쪽 복부 측벽을 손상.
    1. 오른쪽 복부 측벽의 근육의 복막 표면을 연마하기 위해 사포의 스트립을 사용합니다. 샌딩 여기보다 맹장에 더 적극적으로하고 오른쪽 복부 측벽의 전체 표면이 거칠게 나타날 때까지 계속합니다. 피부가 근육 층의 개구부를 통해 볼 수 있도록 열심히 연마하지 마십시오. (그림 4)
    2. 카스트로 - 비에 호 바늘 드라이버를 사용하여, 오른쪽 복부 측벽의 근육 층에 4-0 그림-의 여덟 둘 사이에 네 실크 바늘을 배치합니다. 약 5 mm 길이 꼬리를 남겨주세요. 실수로 봉합에 장 벽을 잡으려고 않도록주의하십시오. (그림 5)
15. 승 가득 10 ML의 주사기를 사용하여i 번째는 식염수를 따뜻하게 창자를 여러 번 관개. 뿐만 아니라 내부를 관개 복강 식염수의 흐름을 지시. 마우스 아래 표면이 적셔지면, 마우스를 통해 이동하거나 저체온증을 방지하기 위해, 표면을 교체한다.
16. 초과 관개를 흡수하기 위해 절개 위에 배치 멸균 거즈를 사용합니다.
17. 전분의 핀치를 타고 오른쪽 복부 측벽의 표면에와​​ 맹장의 양쪽에 그것을 뿌린다. (그림 6)
18. 활성 출혈이 없음을 확인합니다. 이 경우, 멈출 때까지 출혈 지점에 직접 압력을 적용 할 거즈 스폰지를 사용합니다. 출혈이 쉽게 멈추지 않을 경우 전술 한 바와 같이 지혈 봉합을 배치합니다.
19. 포셉과 손가락의 뭉툭한 끝을 사용하여 부드럽게 복강에 다시 창자를 밀어 넣습니다. 유착 형성을 극대화하기 위해 다음 오른쪽 복부 측벽의 봉합에 맹장을 배치합니다.
20. 기음복부 절개를 잃게됩니다.
    1. 6-0 꼰 흡수성 봉합사를 사용하여 절개 상단의 근육층에 실행 스티치를 배치했다.
    2. 근육 층을 함께 데리고 아래로 절개의 아래쪽으로 봉합을 실행합니다. 약 3mm로 여행하고 각각의 새로운 스티치로 3 밀리미터 물린 걸릴. 봉합을 배치하는 동안주의 실수로 소장의 물기를 취할 수 없습니다.
    3. 절개의 하단에서 이전의 입에서 봉합의 루프를두고 봉합을 묶어 악기로 사용합니다. 5mm 꼬리를 떠나 봉합을 잘라.
    4. 피부를 닫 6-0 나일론 모노 필라멘트 봉합사로 위의 세 가지 단계를 반복합니다.
21. 20 ㎖ / kg 피하 식염수 러스 (30 g을 마우스 약 0.5 ml)에 관리 할 수​​ 있습니다.
22. 지느러미 모피 관개 동안 젖지 경향 마른 거즈를 사용하여, 철저하게, 전체 동물을 건조.
23. 느슨하게 절개를 충당하기 위해 복부 주위에 드레싱 접착제를 포장. ㄱ을 제한하지 않도록주의 바랍니다nimal의 다리 또는 드레싱 호흡 역학.
24. 이 마취에서 회복으로 조심스럽게 동물을 모니터링 할 수 있습니다. 통증 조절을위한 시술 후 프레 노르 핀 2-3 일 동안 매일 12 시간을 관리 할 수​​ 있습니다.

2. 수확 접착 조직

1. 초기 수술 후 최소 7 일을 기다립니다. 또, 수술 도구를 압력솥과 이소 플루 란으로 마우스를 마취.
2. 70 % 에탄올 다음 betadine와 복부를 소독. 면도 조직학 더 어려워 피부를 포함하는 접착 시험편 모발에 적용되지 않도록 복부의 우측에서 부가 머리카락을 털을 뽑다.
3. 대장은 종종 원래의 절개에 부착되어 있기 때문에, 좌측 paramedian 절개를 사용합니다. 복부의 하단부터 원래 절개 하단 ​​왼쪽의 약 5 mm의 작은 톱니 집게로 피부를 잡고 예리한 가위 피부로 잘랐다. 이 우수한 절단 확장흉곽에 LY. (그림 7)
4. 가위를 이용하여 근육의 층으로하고, 복막 공간을 입력 한 후 절단, 절개의 상단과 하단에 컷 연장된다. 원래 절개로 가능 또한 복부의 우측 측벽에 부착하고 맹장과 소장을 일으키는 접착제 조직이 될 것입니다. (그림 8)
5. 맹장의 수준 이상, 가위를 사용하여 절개의 가장자리에 시작, 창자가 부착되는 영역 주위에 원 복부 벽에 절단 시작합니다.
6. 위의 교류와 맹장의 수준 이하로 점차 장에 피부와 복부 벽 부착의 "섬"을 산출, 모든 방법 접착 주위를 잘라 원을 완료합니다. (그림 9)
7. 다시 피부와 복부 벽으로 구성되어 조직의 샌드위치를​​ 산출, 창자로 절단 창자의 나머지 부분에서 접착 부분을 분리, 가위를 사용하여한쪽, 다른 쪽 창자 및 조직 접착제를 사이에이 둘을 연결. (그림 10)
8. 선택적으로, 크게 복벽 근육으로부터 피부를 분리 뾰족한 가위를 사용합니다. 조직학 붙어 피부를 떠나는 것을 고려하지만, 분해 및 세포 분리를 위해 피부를 제거 할 수있다. 조직은 조직 검사를 위해 사용되는 경우, 과도하게 접착 인터페이스를 방해하지 않고 가능한 한 많은 봉합 물질을 제거해야합니다. 소화와 세포 분리의 경우는 한 다이제스트 여과 조직으로 제자리에 봉합을 떠나 허용됩니다.
9. 접착 조직을 절제 한 후, 당신의 기관 동물 사용위원회의 승인을 인도적인 방법을 사용하여 마우스를 안락사.

결과

수술, 맹장 가능성이 상승 대장, 간, 작은 창자의 루프 후 7 일에서 오른쪽 양면 복부 벽에 부착해야한다. (그림 8) 절제된 조직은 임베디드 및 절단 및 우수한 조직 학적 슬라이드를 보장 할 수 있습니다. (그림 11, 12)

절차가 적절히 수행되면, 마우스의 100 % 이레에서 상당한 유착을 가져야한다. 사?...

토론

이 과정에서 중요한 단계는 다음과 같습니다 철저하게, 천공의 원인이되는 복부 측벽에 봉합을 배치하고, 전분의 오른쪽 금액을 적용하지 않고 맹장을 연마. 만 맹장, 또는 창자의 작은 특정 부분에 사포을 적용합니다. 소장 대량에 샌드 페이퍼의 광범위한 사용은 상당한 장폐색증을 유발하는 경향이있다. 표면이 거칠어집니다 충분한 힘과 맹장을 연마하는데주의를 기울여야하지만, 벽 눈물이 ?...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Fisherbrand Absorbent Underpads, 20" x 24"	Fisher Scientific	14-206-62
Polylined Sterile Field, 18" x 24"	Busse Hospital Disposables	696	Cut a rectangular hole of the appropriate size
Isothesia isoflurane	Henry Schein	050033
Fisherbrand Sterile cotton gauze pad, 4" x 4"	Fisher Scientific	22-415-469
Puralube petrolatum ophthalmic ointment, 1/8 oz. tube	Dechra Veterinary Products	NDC 17033-211-38
Nair depilatory cream	Church & Dwight Co.	22339-05
Buprenex buprenorphine  0.3 mg/mL	Reckitt Benckiser Pharmaceuticals Inc.	NDC 12496-0757-5
1 cc insulin syringe, 27G	Becton  Dickinson	329412
Povidone Iodine Prep Solution	Medline	MDS093944H
Webcol alcohol prep swabs	Covidien	6818
General-Purpose Labarotory Labeling tape	VWR	89097-912
BioGel PI surgical gloves	Mölnlycke Health Care	ALA42675Z
Micro Forceps with teeth	Roboz	RS-5150
Fine scissors- sharp	Fine Science Tools	14060-09
Straight serrated forceps	Fine Science Tools	11050-10
Castro-Viejo needle driver	Fine Science Tools	12565-14
100 grit 1/4 sheet sandpaper	ACE Hardware	1010446	Cut into strips
4-0 silk suture, 30", SH needle	Ethicon	K831
7-0 PDS II absorbable monofilament suture, 30", BV-1 needle	Ethicon	Z135	Usually comes double-armed. Cut the suture at the midway point to generate two usable sutures.
Rice starch	MP Biomedicals	102955
0.9% Sodium Chloride Irrigation	Baxter	BHL2F7121	Warm to 37° C prior to use
10 mL syringe	Becton Dickinson	309604
6-0 Vicryl absorbable braided suture, 18", RB-1 taper needle	Ethicon	J212H
6-0 Ethilon nylon monofilament  suture, 18", P-3 needle,	Ethicon	1698G
Tegaderm Transparent Film Dressing Frame Style, 6 cm x 7 cm	3M	1624W	Cut in half lengthwise