إجراء اختبار موضوعي واستنساخه من التعلم حاسة الشم والتمييز في الفئران

Summary

وهنا، نقوم بتدريب الفئران على مهمة تعلم النقابي لاختبار تمييز رائحة. كما يسمح هذا البروتوكول للدراسات المتعلقة بالتغييرات الهيكلية الناجمة عن التعلم في الدماغ.

Abstract

أولفاكشن هو الطريقة الحسية الغالبة في الفئران، ويؤثر على العديد من المشكلات الهامة، بما في ذلك جمع العلف، كشف المفترس والتزاوج، والأبوة والأمومة. الأهم من ذلك، يمكن أن يكون تدريب الفئران لإقران روائح الرواية بالاستجابات السلوكية محددة لتوفير نظرة ثاقبة وظيفة الدائرة حاسة الشم. هذا البروتوكول تفاصيل الإجراءات المتعلقة بتدريب الفئران على مهمة تعلم استثابي انتقال/عدم الانتقال. في هذا النهج، الفئران مدربون على مئات تجارب الآلي يوميا لمدة 2-4 أسابيع ويمكن اختبار ثم على رواية الانتقال/عدم الانتقال رائحة أزواج لتقييم التمييز حاسة الشم، أو استخدامها لإجراء دراسات عن كيفية التعلم رائحة يغير هيكل أو وظيفة لحاسة الشم الدائرة. بالإضافة إلى ذلك، يضم لمبة شمي الماوس (OB) التكامل الجارية ولد بالغ الخلايا العصبية. من المثير للاهتمام، يزيد حاسة الشم التعلم كل من البقاء على قيد الحياة واتصالات متشابك من هذه الخلايا العصبية ولد الكبار. ولذلك، يمكن الجمع بين هذا البروتوكول مع تقنيات أخرى البيوكيميائية والكهربية، والتصوير لدراسة عوامل التعلم وتعتمد على نشاط التوسط من أجل بقاء الخلايا العصبية واللدونه.

Introduction

الماوس المكشوف، حيث يدخل المعلومات رائحة أولاً الجهاز العصبي المركزي (CNS)، يقدم نموذجا ممتازا لدراسة التغيرات الهيكلية المعتمدة على الخبرة. الدوائر OB يتكامل باستمرار ولد بالغ من الخلايا العصبية بطريقة تعتمد على النشاط. تقسيم السلائف العصبية ولد بالغ قبالة من أجداد هذا الخط في منطقة سوبفينتريكولار المجاورة إلى البطينات الجانبية¹. عند ترحيل إلى المكشوف، هذه السلائف العصبية البقاء على قيد الحياة، والتفريق، ودمج الخلايا الحبيبية المثبطة أو الخضوع للمبرمج². التحديد لمصير الخلية تتأثر بالنشاط حاسة الشم، بما في ذلك التعلم حاسة الشم^3،4،،من⁵⁶. بعد الاندماج، تحدث التغييرات متشابك المستحثة بالتعلم في الخلايا الحبيبية خلال أسبوعين حرجة فترة^7،8. وهكذا، معبراً للتعلم حاسة الشم مفيدة لدراسة كيف تعتمد على خبرة اللدونة التأثيرات الهيكلية والوظيفية إعادة تنظيم الدائرة الدماغ ناضجة.

ويوفر هذا البروتوكول نهج واحد لتدريب حاسة الشم باستخدام نموذج تكييف هواء فعال. في هذه المهمة، يتم تدريب الفئران المحرومين من المياه ليتم اقترانه عقاب مهلة محاكمة رائحة واحدة (رائحة "الذهاب") مع مكافأة مياه ورائحة أخرى (رائحة "المحظورة"). الفئران في التقدم من خلال سلسلة متدرجة من مراحل التدريب على مدى 2-4 أسابيع. عند الانتهاء من التدريب، الفئران تستجيب لرائحة الذهاب أو عدم الذهاب مع السلوكيات المنفصلة، والمقابلة (تسعى إلى مكافأة مياه في محاكمات الذهاب ولا تسعى إلى مكافأة المياه في محاكمات المحظورة) (الشكل 1أ). بعد تدريب كاملة، يمكن كذلك الطعن الفئران مع أزواج رائحة مشابهة كيميائيا لاختبار التمييز أو تصبح انتقلت إلى دراسات التعلم كيف حاسة الشم التحقيق يغير هيكل أو وظيفة جراحات على الرغم من أن رائحة تمييز المهام قد وصفت سابقا، آخر تعتمد على قياسات موضوعية مثل عدد من الشمة بين اثنين أودورانتس^9،10. وعلاوة على ذلك، الحاجة إلى سجل البشرية من هذه المهام أيضا وقت كثيفة. ويوفر التعلم حاسة الشم الانتقال/عدم الانتقال المهمة المبينة في هذا البروتوكول قياس المباشر غير منحازة، ورائحة التمييز والتعلم حاسة الشم.

Protocol

واستخدمت جميع الفئران تحت بروتوكول أقرته بايلور كلية الطب المؤسسية الحيوان الرعاية واستخدام اللجنة وفقا لمعايير المعاهد الوطنية للصحة. كانت الفئران المستخدمة في هذا البروتوكول جميع الفئران الكبار (> 6 أسابيع عمر) في C57BL6/ي الخلفية وشملت الفئران الذكور والإناث على حد سواء. بعد التدريب/التدريج المهام، يتم إرجاع الفئران إلى القفص المنزل.

1-البناء والقواعد العامة لاستخدام تكييف هواء فعال التعلم مربع (الشكل 1ب، ج)

1. قم بتجميع دائرة ماوس مع الكلمة الدائرة. اترك مربع التدريب في انخفاض حركة مرور، منطقة الخافتة لتفادي الانحرافات.
2. التصفح لكل منفذ المياه مع وجود ثقب صغير في الأعلى للسماح إبرة عيار 18 الاستغناء عن المياه داخل الميناء.
3. ملء قنينة الزجاج مع الرائحة يذوب في الزيوت المعدنية (استبدال أسبوعيا)، وتشديد أمن عملية النداءات الموحدة.
4. قم بتوصيل إبرة قياس 18 أنابيب سيليكون. بيرس غطاء قنينة الزجاج بإبرة عيار 18، وتوصيل الطرف الآخر من أنابيب سيليكون مدخول المنافذ رائحة.
5. ضع كل أنابيب سيليكون في صمام رائحة.
6. قم بتوصيل خط فراغ المنافذ رائحة.
7. إرفاق اثنين 10 مل المحاقن بقضيب معدني عقد، وتوصيل أنابيب الحقن. الاتصال الجانب الآخر من الأنبوب إبرة 18 جرام. تناسب الإبرة في حفر حفرة المنفذ كزة الآنف على قاعة الماوس. قم بتوصيل الطرف الآخر من الأنبوب إلى صمام المياه.
8. ملء المحاقن 10 مل اثنين مع القوارض من مياه الشرب.
9. الاتصال مقياس تدفق هواء بكمية الهواء والحفاظ على تدفق الهواء في 3-5 لتر في الدقيقة.
10. الاتصال صمامات المياه 2، 2 رائحة الصمامات، 2 المياه المنافذ، منفذ رائحة والسلطة بنظام واجهة الناقل التسلسلي العام. توصيل جميع الصمامات لمنافذ 'الإخراج'، وكافة المنافذ الرائحة والمياه إلى 'إدخال' المنافذ. قم بتوصيل جميع المعدات إلى السلطة النواتج من مربع واجهة الناقل التسلسلي العام، وأخيراً، الاتصال مربع واجهة USB بالطاقة.
11. ضبط شفط فراغ لتجنب التلوث المنتقل من الروائح الكريهة بين المحاكمات.
12. استخدام أنابيب خاصة برائحة للاتصال قارورة الرائحة إلى الدائرة.

2. الماوس إعداد: 1 – 3 أيام

1. تقسيم الفئران إلى 3 مجموعات: التحكم (لا يلزم تدريب حاسة الشم)، المدربين الزائفة (الفئران الذين يتلقون المكافأة أو العقوبة بشكل عشوائي)، وتدريب المجموعات. تعرض الفئران الزائفة المدربين لتقديم التدريب مربع ورائحة، ولكن لا توفر تدريب حاسة الشم لأن نتائج مكافأة مقابل العقوبة يرتبط عشوائياً مع رائحة تسليمها.
   ملاحظة: سوف تذهب مجموعة المدربين الزائفة من خلال نموذج التدريب ضمن مراحل "بسيودوترينينج". الفئران مدربين سيتم إكمال جميع مراحل التدريب. بسيودوترينينج اختياري إذا كان الغرض من هذه التجربة للاعتداء للاختلافات السلوكية في تمييز رائحة أو التعلم. البروتوكول المقدمة هنا يضيف هذا الفريق إذا كان يريد المجرب للتحقيق للاختلافات العصبية قبل وبعد التدريب. ثم أن التحكم مجموعة بسيودوترينيد للتعرض لرائحة السلبي والتدريب ذات الصلة غير حاسة الشم.
2. تبدأ المياه التقييد في الفئران إلى 40 مل/كغم/يوم. تجنب فقدان وزن الجسم أكبر من 20% وزن الحيوانات خط الأساس من أجل تجنب الشدة (الشكل 2أ).
3. وزن الفئران يوميا للتأكد من أنها أعلى من 80% وزن خط الأساس. إذا كان ماوس يندرج تحت هذه العتبة، إزالة الماوس من الدراسة وتوفير حرية الوصول إلى المياه.
4. إبقاء جميع العوامل البيئية ثابتة طوال البروتوكول بما في ذلك درجة الحرارة والضوضاء والروائح الكريهة الضآلة (بما في ذلك هيئة الشخصية والعطور/كولونيا/مزيل الروائح).
   ملاحظة: كما هو الحال مع كل اختبار سلوك الحيوانات، التغيرات البيئية الصغيرة يمكن أن تؤثر إلى حد كبير النتائج.

3-تعليمات لجميع المراحل

1. رمز البرنامج التدريب لكل مرحلة من المراحل أدناه. تشغيل البرنامج في البرامج السلوكية.
   ملاحظة: الترميز لجميع المراحل هي الواردة في ملفات الترميز تكميلية. يتم تجميع البيانات لمسارات 20 كما هي معروضة أداء كتلة وماوس واحد عبر كتل. وعلاوة على ذلك، يمكن أن تتكرر كل مرحلة على ماوس لعدد من الأيام حتى يتم الوفاء بمعايير الإنجاز.
2. لا تحتفظ بالفئران في المربع السلوك لأكثر من 60 دقيقة في اليوم.
3. النفايات الماوس نظيفة من القفص قبل أن يتم نقل كل الماوس إلى القفص. رذاذ ومسح الدائرة مع الإيثانول 70% لتقليل الهاء رائحة الماوس.

4-تدريب المرحلة 1: ربط مكافأة المياه مع مركز آنف كزة، 1 – 3 أيام

1. في هذه المرحلة، إقران الفئران بمكافأة مياه عند استكشاف مياه الميناء.
2. 1 مرحلة التدريب تعليمات البرمجة
   1. برنامج هذه المرحلة لاستخدام منفذ توصيل المياه فقط. واسمحوا الماوس تلقي مكافأة مياه لكل كزة الآنف.
      ملاحظة: سيتم إخراج البرنامج فترة زمنية للمحاكمة، والعدد الإجمالي للمياه المكافآت الماوس الواردة.
3. تعيين 1 المرحلة بسيودوترينينج برمجة نفس التدريب المرحلة 1.
4. إعداد الماوس وتكوين مربع
   1. تكوين مربع السلوك مع منفذ مياه في المركز وكافة المنافذ الجانبية غير قابل للوصول. ضع ماوس في الدائرة. إغلاق قاعة الماوس وبدء برنامج المرحلة 1.
5. النظر في هذه المرحلة كاملة عند الماوس يحقق محاكمات 100 في غضون 60 دقيقة إزالة الماوس من الدائرة بعد 60 دقيقة أو المحاكمات 100 تم الانتهاء (الشكل 2ب).
   ملاحظة: بسبب الاختلافات الفردية، بعض الفئران بطبيعة الحال ستمتنع عن استكشاف المربع.
6. إذا كانت هناك حاجة إلى التشجيع، يدوياً توصيل المياه إلى ميناء المياه. كرر هذه المرحلة لمدة 3 أيام.
   ملاحظة: الفئران التي هي بالفعل بتدريب يمكن أن تتكرر كذلك للحفاظ على التكافؤ وإبقائهم على تقييد السوائل. من الممكن أيضا لتعزيز مجموعة بأكملها إلى المرحلة الثانية عندما يصل متوسط المجموعة 100 المحاكمات/60 دقيقة. وهذا سيسمح لجميع الفئران مواصلة التدريب في نفس اليوم.

5-تدريب المرحلة 2: مكافأة مياه ميناء الجانب إقران المنفذ مركز الآنف كزة، 1-5 أيام

1. في هذه المرحلة، اسمحوا الفئران كزة أنوفهم في الميناء مركز وثم فورا تلقي مكافأة مياه على المنافذ الجانبية.
2. إعداد الماوس وتكوين مربع
   1. تكوين هذا وكل مرحلة من المراحل اللاحقة مع 2 منافذ المياه على الجانبين وميناء رائحة في الوسط. ضع ماوس في الدائرة. إغلاق قاعة الماوس والبدء ببرنامج المرحلة 2.
3. 2 مرحلة التدريب تعليمات البرمجة
   1. تزويد الماوس مكافأة مياه فورا على كلا الجانبين بعد كزة آنف في الوسط رائحة تسليم ميناء. تعيين معلمات الإخراج لهذه المرحلة كفترة زمنية للمحاكمة، وعدد المحاكمات التي بدأت، والعدد من المكافآت المياه تلقي في غضون 5 ليالي كزة الآنف.
4. تعيين 2 المرحلة بسيودوترينينج برمجة نفس التدريب المرحلة 2.
5. النظر في هذه المرحلة بالكامل عندما يتم تنفيذ الحد ني محاكمات 40 في 60 دقيقة، مع 25 في المائة على الأقل من المكافآت المياه تلقي في غضون 5 ليالي كزة الآنف منفذ مركز. إزالة الماوس بمجرد اكتمال هذه المرحلة (الشكل 2-ج).
   ملاحظة: برنامج التدريب على حساب النسبة المئوية للمكافآت المياه تلقي في الوقت مناسب من أجل تحديد الانتهاء من هذه المرحلة. على الرغم من أن الفئران تختلف في مدى سرعة الانتهاء من هذه المرحلة، ومعظم أجهزة الماوس سيتم التوصل إلى معايير الإنجاز في غضون 5 أيام. ومع ذلك، إذا لم يكتمل ماوس هذه المرحلة في غضون 5 أيام، لا مسبقاً الماوس إلى المرحلة التالية. سيتم إزالة هذا الفأر من الفوج.

6-تدريب المرحلة 3: ربط مكافأة مياه مع رائحة محددة وضمن إطار زمني محدد، من 1 – 3 أيام

1. في هذه المرحلة، اسمحوا الفئران تتلقى رائحة الذهاب (S+) عند كزة آنف في مركز الميناء. في وقت لاحق، تسفر عن مكافأة مياه عند كزة آنف إلى موانئ المياه الجانب ضمن 5 s.
2. 3 مرحلة التدريب تعليمات البرمجة
   1. تسليم رائحة S+ في الوسط رائحة الميناء.
   2. تسليم المكافأة المياه إذا كان الماوس الوخزات المنافذ الجانبية داخل 5 ق إيصالها رائحة.
      ملاحظة: يبدأ البرنامج باشتراط إلا كزة آنف 100 مللي ثانية في مركز الميناء تسفر عن مكافأة مياه. وبمجرد الماوس الوخزات مركز الميناء للمبلغ الصحيح للوقت في 80 في المائة محاكمات، فترة زمنية من كزة الآنف المطلوبة لمكافأة مياه سيزداد بمقدار 50 مللي ثانية تصل إلى 400 مرض التصلب العصبي المتعدد.
   3. تعيين معلمات الإخراج مطابقة للمرحلة 2.
3. مجموعة تعليمات البرمجة المرحلة 3 بسيودوترينينج نفس كتدريب المرحلة 3. ومع ذلك، لا تتصل برائحة S+ رائحة التسليم المراقب المالي لضمان أن رائحة S+ لم يقترن بمكافأة مياه.
4. إعداد الماوس وتكوين مربع
   1. تعيين نفس التكوين في المرحلة 2.
   2. قم بتوصيل رائحة S+ رائحة التسليم المراقب المالي. ضع ماوس في الدائرة. إغلاق قاعة الماوس وبدء برنامج المرحلة 3. إزالة الماوس بمجرد اكتمال هذه المرحلة.
5. النظر في هذه المرحلة بالكامل عندما يكون هناك أكثر من 60 من مكافآت خلال 60 دقيقة (الشكل 2د).

7-المرحلة 4A: اقتران رائحة المحظورة (S-) ومهلة العقوبة، أيام 1-2

1. في هذه المرحلة، أعرض الفئران رائحة محظورة (S-). توفير عقوبة مهلة للفئران التي تذهب بشكل غير صحيح إلى موانئ المياه بعد شم رائحة المحظورة.
2. تدريب المرحلة 4A تعليمات البرمجة
   1. تسليم فقط الرائحة S+ في هذه المرحلة في البداية، مطابقة للمرحلة 3. بعد استكمال المحاكمات 40 الفئران، تبدأ تسليم عشوائية من الروائح الكريهة تشمل كلا من S+ والروائح الكريهة S. برنامج عقوبة مهلة 2-s إذا كان الماوس محاولات للحصول على مكافأة مياه بعد تعرض رائحة المحظورة.
      ملاحظة: للمساعدة في التمييز بين الذهاب مقابل المحظورة، أضواء الجانب الأشعة تحت الحمراء يمكن التلاعب بها حيث أنها هي في أثناء الذهاب أودورانتس وإيقاف أثناء odorants المحظورة. الأضواء تتصرف كرمز ثانوية لمساعدة الفئران في التدريب الأولى. حالما يتم تدريب الفئران مع الأضواء، ينبغي تدريب الخضوع دون أضواء للتأكد من أنهم تعلموا المهمة مع الروائح.
   2. تعيين معلمات الإخراج كالمدة الزمنية للمحاكمة، وعدد المحاكمات التي بدأت، عدد من المحاكمات المنجزة، % الصحيح، والعدد الإجمالي لتلقي مكافآت.
3. S-روائح ترد عشوائياً من البداية وتعيين تعليمات البرمجة 4A المرحلة بسيودوترينينج نفسه "مرحلة التدريب" 4S إلا S+. تعطي المياه العقوبات مكافأة أو مهلة بشكل عشوائي، بغض النظر عن أداء المهمة.
4. إعداد الماوس وتكوين مربع
   1. تعيين تكوين مربع نفسه كالمرحلة السابقة 3.
   2. قم بتوصيل S+ وق-رائحة رائحة التسليم المراقب المالي. ضع ماوس في الدائرة. إغلاق قاعة الماوس وبدء البرنامج 4A المرحلة. بعد محاكمات 40 كاملة الفئران، تبديل البرنامج لتسليم عشوائياً الروائح الكريهة. إزالة الماوس بمجرد اكتمال هذه المرحلة.
5. النظر في هذه المرحلة كاملة عندما تكون هناك محاكمات 40 مع > 60% الاستجابات الصحيحة.

8-المرحلة 4 باء: اقتران رائحة المحظورة (S-) ومهلة العقوبة، 5 – 11 يوما

1. تدريب المرحلة 4B تعليمات البرمجة
   1. تجعل هذه المرحلة مطابقة للمرحلة 4A، لكن العقوبة مهلة لمحاولة مكافأة مياه بعد رائحة S هو 4 s.
2. تعيين المكافأة المياه بسيودوترينينج 4B مرحلة البرمجة تعليمات متطابقة إلى المرحلة 4 ألف، ومع ذلك، ويتم تسليم مهلة العقوبة عشوائياً كل محاكمة.
3. إعداد الماوس وتكوين مربع
   1. تعيين تكوين مربع نفسه ك 4A المرحلة السابقة.
   2. قم بتوصيل S+ وق-رائحة رائحة التسليم المراقب المالي. ضع ماوس في الدائرة. إغلاق قاعة الماوس وبدء البرنامج 4B المرحلة. النظر في هذه المرحلة كاملة عندما تكون هناك > محاكمات 100 في غضون 60 دقيقة مع دقة > 85% (الشكل 2ه)
4. رصد نسبة الحد الأقصى والحد الأدنى الصحيح لكل جلسة عمل تتبع الماوس كل التقدم المحرز في هذه المرحلة. حوالي 85-90% فئران التوصل إلى معايير الإنجاز لهذه المرحلة. استبعاد الفئران التي لا تحقق إنجاز هذه المرحلة لمرحلة اختبار الانتقال/عدم الانتقال.
5. (اختياري) في نهاية هذه المرحلة، تطبيق تدريب عكس، حيث يتم تبديل odorants الانتقال/عدم الانتقال على منصة قنينة رائحة. ضمان أن الفئران هي عدم اقترانها حافزا آخر، مثل صوت الصمامات المرتبطة بالمنافذ الجانبية.

9-الانتقال/عدم الانتقال الاعتداء المهمة: 1 يوم، 20 دقيقة لكل الماوس لليوم الواحد

1. تعتبر هذه المرحلة النهائية لتحديد دقة تحديد الجمعيات رائحة وتعلم أن تميز رائحة أزواج.
   ملاحظة: تستخدم odorants رواية S + S-لاختبار الحيوانات كم يستغرق للتعرف على الجمعيات الجديدة. أزواج الرائحة هيكلياً مشابهة تستخدم لزيادة صعوبة المهمة. وتشمل الأمثلة 1-Butanol مقابل 1-بينتانول، اسيتات إيسواميل مقابل بوتيرات إيسواميل، و + Carvone مقابل-كارفوني.
2. تعليمات البرمجة
   1. السماح لبرنامج التدريب الكشف عن طول كزة الآنف. برنامج كزة آنف 300 مرض التصلب العصبي المتعدد في الميناء رائحة مركز لتنفيذ المهمة.
   2. تعيين معلمات الإخراج مطابقة للمرحلة 4 باء، ما عدا لا تستخدم أي ضوء يسترشد العظة.
3. إعداد الماوس وتكوين مربع
   1. تعيين تكوين مربع نفسه ك 4B المرحلة السابقة.
   2. قم بتوصيل S+ وق-رائحة رائحة التسليم المراقب المالي. ضع ماوس في الدائرة. إغلاق قاعة الماوس وبدء البرنامج مرحلة الانتقال/عدم الانتقال. تعرض الفئران التي تعلمنا مهمة التعلم حاسة الشم لرواية أزواج من روائح مشابهة كيميائيا.
      ملاحظة: الوصول إلى الفئران Wildtype مع تمييز رائحة كافية > دقة 85% مع أودورانتس الرواية بعد ما يقرب من 10-20 كتل أو المحاكمات 200-400 (الشكل 3أ).

النتائج

متى تعلمنا الفئران مهمة التعلم حاسة الشم، أنهم الآن إقران أزواج رائحة الرواية بالثواب والعقاب. عادة ما تبدأ هذه الفئران المدربة مع حوالي 50% دقة في مهمة الانتقال/عدم الانتقال. يمكن رسم النسبة المئوية الصحيحة من كتلة المحاكمة كمنحنى التعلم لأزواج رائحة رواية (ا?...

Discussion

ويوفر النظام حاسة الشم القوارض نموذجا فريداً لدراسة اللدونة تعتمد الحسية. نقدم هنا نموذج تعلم حاسة الشم لتدريب الفئران ليتم اقترانه أزواج الرائحة أما الثواب أو العقاب. من خلال هذه المهمة التعلم، يمكن دراسة التغييرات الدائرة المصب في التجارب اللاحقة (الكهربية، في فيفو تصوير الخلايا ?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Glass vial	Qorpak	GLC-01016
Silicon Tubing	Thermo Scientific	86000030
18 gauge needles	BD	305196
1-Butanol	Sigma Aldrich	437603
Propionic Acid	Sigma Aldrich	402907
Mouse Chamber	Med Associates	ENV-307W
Chamber Floor	Med Associates	ENV-307W-GFW
Water Port	Med Associates	ENV-313W	Need two
Odor stimulus	Med Associates	ENV-275	Contain 2 valves to gate odor delivery
Odor Port	Med Associates	ENV-375W-NPP
USB Interface	Med Associates	DIG-703A-USB
Desktop Computer with Windows 2000, XP, Vista, or 7
Flow meter	VWR	97004-952
Behavioral software	Med Associates	SOF-735	This software, which runs each training stage, has now been replaced with Med-PC V
Data Transfer software	Med Associates	SOF-731	This software formats the data to Excel
Training Software	Med Associates	DIG-703A-USB	This software is used to program each training stage
Water Valve	Neptune Research	225P012-11	This valve is used to gate the water delivery. Need Two
Odor Valve	Neptune Research	360P012-42	This valve is used to gate the odor delivery. Need Two