JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

نقدم هنا، على إجراء فلوريسسينتلي فونكتيوناليزي ديسولفيديس في عزام Qβ مع ديبروموماليميدي. يصف لنا التعبير Qβ وتنقية وتركيب جزيئات فونكتيوناليزيد ديبروموماليميدي ورد فعل الاقتران بين ديبروموماليميدي و Qβ. يمكن استخدام الجسيمات مترافق نيون الصفراء الناتجة كتحقيق الأسفار داخل الخلايا.

Abstract

الارتفاع الأخير في جسيمات شبيهة بالفيروس (فلبس) في الطب الحيوي وأبحاث المواد يمكن أن يعزى إلى سهولة التركيب الحيوي وحجم منفصلة، وقابلية البرمجة الوراثية وتحلل الأحيائي. في حين أنهم عالية قابلة لردود الفعل بيوكونجوجيشن لإضافة يغاندس الاصطناعية على سطحها، النطاق في منهجيات بيوكونجوجيشن في هذه كابسيدس ولد مائي محدودة نسبيا. لتسهيل توجيه البحوث الحيوية الوظيفية، يجب النظر في ردود الفعل بيوكونجوجيشن غير التقليدية. رد فعل الموصوفة في هذا البروتوكول يستخدم ديبروموماليميديس استحداث وظائف جديدة في المذيب سندات ثنائي كبريتيد المكشوفة من عزام استناداً إلى Qβ عاثية. وعلاوة على ذلك، المنتج النهائي فلوري، الذي له فائدة إضافية لتوليد مسبار تتبعها في المختبر استخدام مجموعة عوامل تصفية متوفرة تجارياً.

Introduction

استخدام نانو الحجم كابسيدس الفيروسية قد برز كحقل مثيرة، التي تهدف إلى توسيع نطاق التطبيقات في البحوث الطبية الحيوية1،،من23. ريكومبينانتلي أعرب عن جسيمات شبيهة بالفيروس (فلبس) تستمد هيكلياً من الفيروسات، لكنها تفتقر إلى المواد الوراثية الفيروسية الأصلية يجعلها الجسيمات النانوية البروتينية غير المعدية. السمات السطحية هي مبرمج وراثيا وهو أعرب كل قفيصه مطابق تماما لتلك التي قبل وبعد ذلك، من الممكن أن تعرف موقع وعدد من سلاسل الجانب التفاعلي من الأحماض الأمينية بدقة متنافر. في كثير من الحالات، تمتلك كلا من الأسطح الخارجية والداخلية أنواع كثيرة من مخلفات المذيبات من الأحماض الأمينية المكشوفة، التي يمكن أن تكون فونكتيوناليزيد عمليا من خلال ردود الفعل بيوكونجوجيشن-ردود الفعل التي تشكل سندات تساهمية بين بيوموليكولي والاصطناعية جزيء4،5.

ردود فعل بيوكونجوجيشن مساعدة الجزيئات الحيوية ذات الاهتمام بوظائف أكثر تنوعاً بطريقة مباشرة نسبيا. يمكن توليفها من قبل الجزيئات ذات الاهتمام، مثل العقاقير العلاجية6،7 من العلامات الفلورية والبوليمرات8،9 وتتميز قبل هي التي تعلق على سطح فلبس. عزام شائع بوجه خاص في الطب الحيوي والأبحاث الحيوية قد كان عزام استناداً إلى Qβ عاثية، الذي، كما أعرب عن ريكومبينانتلي، هو icosahedral قفيصه فيروسية نانومتر 2810. مواقع رد الفعل الأكثر شيوعاً في Qβ ليسينيس بفارق كبير، على الرغم من أننا قد أبلغت مؤخرا الاقتران الناجح11 من مركبات ديبروموماليميدي إلى ديسولفيديس انخفاض هذا الخط مسام Qβ عن طريق فعل بيكر هادليتون. رد فعل العائدات مع حسن العائد، ونفس القدر من الأهمية، دون فقدان الثبات الحراري للجسيمات. في الوقت نفسه، يولد رد الفعل هذا الأسفار الناجم عن تصريف الأفعال، التي يمكن استخدامها لتعقب امتصاص هذه الجزيئات داخل الخلايا. في هذا العمل، ونظهر على تصريف من البولي إيثيلين غليكول (شماعة) على السطح Qβ من خلال رد فعل هادليتون-بيكر، الذي ينتج fluorophore صفراء زاهية. ثم يمكن تعقب هذه الجسيمات كما أخذوا الخلايا. البروتوكول هنا سوف تساعد الباحثين توليد الجديد سي نيون الجسيمات النانوية البروتينية استناداً إلى Qβ، على الرغم من أن المبادئ قابلة للتطبيق إلى واحدة من العديد من فلبس الأخرى التي تحتوي على المذيبات disulfides المكشوفة.

Protocol

1-إعداد

  1. أجار ليسوجيني مرق (رطل) وصب لوحات12.
  2. تحويل BL21(DE3) مع بلازميد pET28 التي تحتوي على تسلسل البروتين معطف wtQβ.
    1. ذوبان الجليد كولاي BL21(DE3) الخلايا المختصة في حمام الثلج. مكان 50 ميكروليتر من الخلايا في أنبوب ميكروسينتريفوجي.
    2. إضافة 2 ميكروليتر من بلازميد في أنبوب واحد ونفض الغبار بلطف الأنبوب. ثم احتضان على الجليد لمدة 30 دقيقة.
    3. صدمة الحرارة الخلايا ل 45 ثانية في حمام مائي في الضبط 42 درجة مئوية. ضع الأنبوبة في حمام الثلج فورا بعد صدمة الحرارة، واحتضان لمدة 5 دقائق.
    4. إضافة ميكروليتر 950 رطل من وسائط الإعلام التي لا تحتوي على أي من المضادات الحيوية.
    5. اهتزاز الثقافة 200 لفة في الدقيقة لمدة 60 دقيقة عند 37 درجة مئوية.
    6. لوحة 100 ميكروليتر من الثقافة في لوحات أجار رطل (مع كاناميسين) واحتضان لوحة بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية. حدد مستعمرات بيضاء عند الحاجة.
  3. جعل الإعلام سوبر الأمثل مرق (سوب).
    1. اﻷوتوكﻻف اثنين 2 ل حير قوارير ارلينمييير في دورة سوبيردري.
    2. في بيئة معقمة، تزن وإضافة ز 20.0 من تريبتوني، ز 5.0 من الخميرة استخراج، ز 2.469 اللامائى سلفات المغنيزيوم، 0.584 ز من كلوريد الصوديوم و 0.186 غرام من كلوريد البوتاسيوم لكل قارورة.
    3. إحضار وحدة التخزين إلى 1 لتر بالماء عالي النقاوة في كل قارورة والاوتوكلاف على دورة السائل.
    4. وبمجرد وسائل الإعلام سوب وصلت درجة حرارة الغرفة بعد التعقيم، إضافة 1 مل كاناميسين (100 مغ/مل) لكل لتر من وسائل الإعلام وتخزين في 4 درجات مئوية.
  4. جعل العازلة فوسفات البوتاسيوم 0.1 M (pH 7.00).
    1. جعل الحل مونوباسيك البوتاسيوم 1 م بتذويب ز 68.045 البوتاسيوم مونوباسيك في 500 مل الماء عالي النقاوة.
    2. جعل البوتاسيوم 1 م حل مائي بتذويب ز 87.09 البوتاسيوم مائي في 500 مل الماء عالي النقاوة.
    3. إضافة مل 38.5 الحل مونوباسيك البوتاسيوم ومل 61.5 البوتاسيوم مائي باستخدام زجاجة 1 لتر.
    4. ضبط الأس الهيدروجيني إلى 7.00 إذا لزم الأمر، وعلى كمية من 1 ل.
  5. إجراء 5 – 40% التدرجات السكروز في المخزن المؤقت لفوسفات البوتاسيوم 0.1 M (pH 7.00).
    1. في أنابيب الطرد المركزي 50 مل، إعداد الحلول مع 5 – 40% (زيادة في زيادات بمقدار 5 في المائة) السكروز المذاب في المخزن المؤقت لفوسفات البوتاسيوم 0.1 M (pH 7.00).
    2. إيداع 3.3 مل محلول 5% في الجزء السفلي من أنبوب البولي السفلي الجولة 38 مل باستخدام حقنه إبرة طويلة وكرر هذه العملية لخمسة أنابيب أخرى.
    3. إيداع 3.3 مل محلول السكروز 10% في الجزء السفلي من الأنبوب بعناية، وإزالة الإبرة بشأن عدم الإزعاج التدرج بعناية. كرر هذه الأنابيب الخمسة الأخرى.
       
  6. الاستمرار في إيداع طبقات 3.3 مل من حلول السكروز، زيادة من 15% إلى 40% في كل أنبوب، مع الحذر أن لا تخل بالتدرج.
  7. عند الانتهاء، تغطي قمم التدرجات مع إحباط وتخزينها في-80 درجة مئوية.

2-التعبير عن Qβ

  1. مسح منطقة مقاعد البدلاء مع التبييض 1:1/الإيثانول.
  2. جعل ثقافتين 3 مل من كاتب في بيئة معقمة بإضافة واحد مستعمرات كولاي BL21(DE3) إلى 3 مل الإعلام سوب في بيئة معقمة.
  3. تنمو على شاكر 250 لفة في الدقيقة في غرفة رطوبة النسبية (rH) 37 درجة مئوية و 0% بين عشية وضحاها.
  4. تطعيم الثقافة المبتدئين في سوب وسائط الإعلام:
    1. تقلع كل الثقافات كاتب 3 مل شاكر، وفي بيئة معقمة، صب كل ثقافة كاتب في واحد من اثنين ل 2 في حيرة قوارير Erlenmeyer مع 1 لتر وسائط سوب الطازجة في كل.
    2. وضع وسائل الإعلام الملقحين على شاكر 250 لفة في الدقيقة في غرفة rH 37 درجة مئوية و 0%.
  5. تنمو هذه البكتيريا في شاكر 250 لفة في الدقيقة في غرفة rH 37 درجة مئوية و 0% حتى OD600 يصل إلى 0.9-1.0.
  6. أضف 1 مل من م 1 الأيزوبروبيل β-د-1 ثيوجالاكتوبيرانوسيدي (إيبتج) باستخدام ماصة P1000 للحث على التعبير البروتين.
  7. ترك وسائل الإعلام على شاكر في 250 دورة في الدقيقة في غرفة 37 درجة مئوية و 0% رطوبة نسبية بين عشية وضحاها.
  8. إزالة الوسائط من شاكر في صباح اليوم التالي وأجهزة الطرد المركزي من استخدام زجاجات 1000 مل في 20,621 × ز ح 1 في 4 درجات مئوية لحصاد الخلايا.
  9. تجاهل المادة طافية وجمع بيليه الخلية.
    1. صب المادة طافية قارورة مع حوالي 5 مل التبييض لقتل البكتيريا. هذا النفايات.
    2. استخدام ملعقة كشط بيليه الخلية من الجزء السفلي من الزجاجة للطرد المركزي ووضع بيليه في أنبوب 50 مل أجهزة الطرد مركزي.

3-تنقية Qβ

  1. ريسوسبيند بيليه الخلية مع ~ 20-30 مل من المخزن المؤقت لفوسفات البوتاسيوم 0.1 M (pH 7.00).
  2. تأكد من استثارة لا قطع، والخلايا باستخدام معالج ميكروفلويديزير وفقا للبروتوكول الخاص بالشركة المصنعة (انظر الجدول للمواد). الخلايا مرتين على الأقل لزيادة عائد الجسيمات.
  3. الطرد المركزي في في أجهزة الطرد المركزي 250 مل الزجاجات 20,621 س ز للموارد البشرية 1 في 4 درجات مئوية.
  4. تجاهل بيليه، وقياس حجم المادة طافية في مل. ضرب هذه القيمة بواسطة 0.265 وإضافة هذا المبلغ من غرام كبريتات الأمونيوم إلى المادة طافية.
  5. ضجة في 4 درجات مئوية على الأقل 1 ح على لوحة ضجة 200 لفة في الدقيقة يعجل بالبروتين.
  6. الطرد المركزي في 250 مل الزجاجات 20,621 ز س ح 1 في 4 درجات مئوية.
  7. تجاهل المادة طافية وريسوسبيند بيليه مع حوالي 10 مل من المخزن المؤقت لفوسفات البوتاسيوم 0.1 M (pH 7.00).
  8. إضافة كميات متساوية من 1:1 كلوروفورم/n-butanol بعينه النفط الخام ومزيج من فورتيكسينج لبضع ثوان.
  9. الطرد المركزي في أنابيب مل 38 في 20,621 × ز لمدة 30 دقيقة في 4 درجات مئوية.
  10. استعادة الطبقة المائية العليا استخدام ماصة باستور. الحذر من عدم القيام بأي من الهلام مثل الطبقة التي شكلت بين الطبقة المائية والعضوية.
  11. ذوبان الجليد ستة التدرجات السكروز مسبقة الصنع 5 – 40% وتحميل حوالي 2 مل الاستخراج على كل منهما.
  12. أولتراسينتريفوجي في 99,582 س ز ح 16 عند 4 درجة مئوية مع تباطؤ مجاناً.
  13. تسليط ضوء التي ينبعث منها الضوء صمام ثنائي (LED) تحت كل أنبوبة وفرقة زرقاء وينبغي أن تصبح مرئية. استرداد هذه الجسيمات بحقنه إبرة طويلة.
  14. أولترابيليت الجسيمات في 370,541 س ز ح 2.5 في 4 درجات مئوية.
  15. تجاهل المادة طافية وريسوسبيند بيليه شفافة لتنقية الجزيئات مع المخزن المؤقت لفوسفات البوتاسيوم 0.1 M (pH 7.00).

4-التقييم الكمي، وتأكيدا للمنتج

  1. استخدام "مقايسة برادفورد" لتحديد كمية المنتج13.
  2. الحد من التشغيل وعدم تقليل الصوديوم دوديسيل كبريتات التفريد جل polyacrylamide (الحزب الديمقراطي الصربي صفحة) للتأكد من المنتج14.
    ملاحظة: الحد من الحزب الديمقراطي الصربي صفحة يستخدم للتأكد من الوزن الجزيئي للبروتين معطف؛ عدم خفض مخزونات النشر الاستراتيجي-الصفحة لتأكيد هيكل ترتيب أعلى.

5-التصريف DB المركبات في Qβ

  1. الحد من ديسولفيديس في Qβ.
    1. حل ز 0.0020 من tris(2-carboxyethyl) الفوسفين (تسيب) في 1 مل من الماء عالي النقاوة لجعل حل أسهم 100 x.
      ملاحظة: تعد تسيب الطازجة قبل التخفيض.
    2. إضافة 200 ميليلتر من Qβ (5 ملغ/mL) في أنبوب ميكروسينتريفوجي.
    3. اتبع بإضافة 20 ميليلتر من 100 x TCEP الأسهم الحل.
    4. احتضان في درجة حرارة الغرفة ح 1.
  2. إعادة سد ثنائي كبريتيد انخفاض استخدام ديبروموماليميدي البولي إيثيلين غليكول (DB-الربط).
    1. حل 0.0017 ز من البولي إيثيلين ديبروموماليميدي غليكول (DB-شماعة) في 100 ميليلتر من DMF.
    2. إضافة ميليلتر 680 من حل فوسفات الصوديوم 10 مم (درجة الحموضة 5.00).
    3. أضف تخفيض Qβ إلى حل DB-شماعة ومراقبة عملية خلط تحت مصباح الأشعة فوق البنفسجية 365 نانومتر. يمكن تصور الأسفار صفراء زاهية فورا مع مصباح الأشعة فوق البنفسجية يده 365 نيوتن متر عند خلط.
    4. واسمحوا رد فعل المضي قدما بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة (RT) على المشواة.
  3. تنقية الخليط رد الفعل بتصفية الطرد المركزي (كومو = كاتشين 10) ثلاث مرات باستخدام برنامج تلفزيوني x 1 في 3,283 س ز لمدة 20 دقيقة في 4 درجات مئوية.
  4. رصد الاقتران بغير تخفيض مخزونات النشر الاستراتيجي-الصفحة وأصلي [اغروس] هلام التفريد.
    ملاحظة: تشغيل فلبس كجزيئات سليمة في الأصلية [اغروس] هلام، وفصلهم بناء على تهمة والحجم والشكل.

النتائج

يمكن توليفها على المشتقات ديبروموماليميدي من خلال رد فعل التكثيف بين الخل ديبروموماليميدي والامينات الأولية15. وبدلاً من ذلك، كان استغلال معتدل طريقة اصطناعية16 استخدام N-ميثوكسيكاربونيل المنشط 3 و 4-ديبروموماليميدي هنا نتيجة للتفاعل مع ميثوكسي...

Discussion

مقارنة لتنقية البروتين أصغر حجماً، هي خطوة فريدة من نوعها في تنقية عاثية Qβ الطرد المركزي السكروز التدرج. بعد الخطوة استخراج كلوروفورم/n-butanol، هو زيادة تنقية Qβ استخدام التدرجات السكروز 5-40 في المائة. أثناء الطرد المركزي، يتم فصل الجزيئات استناداً إلى أحجام الخاصة بهم. السفر الجسيمات الأكبر...

Disclosures

الكتاب يعلن أن لديهم لا تضارب المصالح المالية.

Acknowledgements

J.J.G. يعترف بمؤسسة "العلوم الوطنية" (هيئة الهجرة واللاجئين-1654405) و "السرطان منع الأبحاث معهد تكساس" (كبريت) (RP170752s) لما تقدمه من الدعم.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
LB Broth (Miller) EMD Millipore1.10285.0500
Tryptone, PowederResearch Products InternationalT60060-1000.0
Yeast Extract, PowederResearch Products InternationalY20020-1000.0
Anhydrous magnesium sulfateP212121CI-06808-1KG
Sodium Chloride (Crystalline/Certified ACS)Fisher ScientificS271-10
Potassium ChlorideFisher ScientificBP366-500
Elga PURELAB Flex 3 Water Purification SystemFisher Scientific4474524
Potassium Phosphate MonobasicFisher ScientificBP362-1
Potassium Phosphate Dibasic AnhydrousFisher ScientificP288-500
SucroseFisher ScientificS25590B
EthanolFisher ScientificBP2818500
Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG)Sigma AldrichI6758-1G
Fiberlite F10-4x1000 LEX rotor Fisher Scientific096-041053
Ammonium SulfateP212121KW-0066-5KG
ChloroformAlfa Aesar32614-M6
1-ButanolFisher ScientificA399-4
SW 28 Ti Rotor, Swinging Bucket, AluminumBeckman Coulter342204: SW 28 Ti Rotor/ 342217: Bucket Set
Type 70 Ti Rotor, Fixed Angle, Titanium, 8 x 39 mL,Beckman Coulter337922
Coomassie (Bradford) Protein AssayFisher ScientificPI23200
TRIS HydrochlorideResearch Products InternationalT60050-1000.0
TetramethylethylenediamineAlfa AesarJ63734-AC
Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochlorideSigma AldrichC4706-2G
2 3-Dibromomaleimide 97%Sigma Aldrich553603-5G
Polythylene GlycolAlfa Aesar41561-22
Sodium PhosphateFisher ScientificAC424375000
Acrylamide/bis-AcrylamideP212121RP-A11310-500.0
Sodium dodecyl sulfateSigma AldrichL3771-100G
Ammonium PersulfateFisher ScientificBP179-100
FV3000 confocal laser scanning microscopeOlympus FV3000 
Labnet Revolver Adjustable Rotator Thomas Scientific 1190P25 
1000 mL Sorvall High Performance Bottle, PC, with Aluminum Cap Thermo Scientific010-1459
Nalgene Centrifuge Bottles with Caps, Polypropylene CopolymerThermo Scientific3141-0250
Nunc Round-bottom tubes; 38 mL; PCThermo Scientific3117-0380
2 L Narrow Mouth Erlenmeyer Flasks with Heavy Duty RimPyrex4980-2L
Amicon Ultra-4 Centrifugal Filter UnitsMillipore SigmaUFC801024
M-110P Microfluidizer Materials ProcessorMicrofluidicsM-110P
Nalgene High-Speed Polycarbonate Round Bottom Centrifuge TubesThermo Scientific3117-0380PK
Bottle, with Cap Assembly, PolycarbonateBeckman Coulter41121703
Cylinder, Graduated - Polypropylene 250 mLPolyLab80005
533LS-E Series Steam SterilizersGetinge533LS-E
TrueLine, Cell Culture Plate, Treated, PS, 96 Well, with LidLabSourceD36-313-CS
Falcon 15 mL Conical Centrifuge TubeFisher Scientific14-959-53A
Microcentifuge Tube: 1.5mLFisher Scientific05-408-129
VWR Os-500 Orbital ShakerVWR Scientifc Products14005-830
Tetra Handcast systemsBio-Rad1658000FC
Polypropylene, 250 mLBeckman Coulter41121703
Spectrofluorometer NanoDropThermo Fisher Scientific3300
Long Needle Hamilton 7693
Exel International 5 to 6 cc Syringes Luer LockFisher Scientific14-841-46
P1000 PipetmanGilsonF123602
P200 PipetmanGilsonF123601
P100 PipetmanGilsonF123615
P20 PipetmanGilsonF123600
P10 PipetmanGilsonF144802
Intel Weighing PM-100 Laboratory Classic High Precision Laboratory BalanceIntelligent Weighting TechnologyIWT_PM100
Falcon 50 mL Conical Centrifuge TubeFisher Scientific14-432-22
4–15% Mini-PROTEAN TGX Gel, 10 well, 50 µlBio-Rad456-1084

References

  1. Pokorski, J., Breitenkamp, K., Liepold, L., Qazi, S., Finn, M. G. Functional Virus-Based Polymer-Protein Nanoparticles by Atom Transfer Radical Polymerization. J. Am. Chem. Soc. 133 (24), 9242-9245 (2011).
  2. Capehart, S., Coylet, M., Glasgow, J., Francis, M. Controlled Integration of Gold Nanoparticles and Organic Fluorophores Using Synthetically Modified MS2 Viral Capsids. J. Am. Chem. Soc. 135 (8), 3011-3016 (2013).
  3. Li, S., et al. Template-Directed Synthesis of Porous and Protective Core-Shell Bionanoparticles. Angew. Chem. Int. Ed. 55 (36), 10691-10696 (2016).
  4. Chen, Z., Li, N., Li, S., Dharmarwardana, M., Schlimme, A., Gassensmith, J. J. Viral Chemistry: The Chemical Functionalization of Viral Architectures to Create New Technology. WIREs. Nanomed. Nanobiotechnol. 8 (4), 512-534 (2015).
  5. Chalker, J. M., Bernardes, G. J. L., Lin, Y. A., Davis, B. G. Chemical modification of proteins at cysteine: opportunities in chemistry and biology. Chem. - Asian J. 4 (5), 630-640 (2009).
  6. Le, D. H., Lee, K. L., Shukla, S., Commandeur, U., Steinmetz, N. F. Potato Virus X, a Filamentous Plant Viral Nanoparticle for Doxorubicin Delivery in Cancer Therapy. Nanoscale. 9 (6), 2348-2357 (2017).
  7. Chen, L., Wu, Y., Yuan, L., Wang, Q. Virus-templated FRET Platform for the Rational Design of Ratiometric Fluorescent Nanosensors. Chem. Comm. 51 (50), 10190-10193 (2015).
  8. Lee, P., et al. Polymer Structure and Conformation Alter the Antigenicity of Virus-like Particle-Polymer Conjugates. J. Am. Chem. Soc. 139 (9), 3312-3315 (2017).
  9. Zhang, X., et al. Polymer-Protein Core-Shell Nanoparticles for Enhanced Antigen Immunogenicity. ACS Macro Lett. 6 (4), 442-446 (2017).
  10. Brown, S. D., Fielder, J. D., Finn, M. G. Assembly of Hybrid Bacteriophage Qbeta virus-like particles. Biochemistry. 48 (47), 11155-11157 (2009).
  11. Chen, Z., et al. Fluorescent Functionalization across Quaternary Structure in a Virus- like Particle. Bioconjugate Chem. 28 (9), 2277-2283 (2017).
  12. . Pouring LB Agar Plates Available from: https://www.addgene.org/protocols/pouring-lb-agar-plates/ (2016)
  13. Smith, M., et al. Protein Modification, Bioconjugation, and Disulfide Bridging Using Bromomaleimides. J. Am. Chem. Soc. 132 (6), 1960-1965 (2010).
  14. Castaneda, L., et al. A Mild Synthesis of N-functionalised Bromomaleimides, Thiomaleimides and Bromopyridazinediones. Tetrahedron Lett. 54 (27), 3493-3495 (2013).
  15. Fiedler, J., et al. Engineered Mutations Change the Structure and Stability of a Virus- Like Particle. Biomacromolecules. 13 (8), 2339-2348 (2012).
  16. Manzenrieder, F., Luxenhofer, R., Retzlaff, M., Jordan, R., Finn, M. G. Stabilization of Virus-like Particles with Poly(2-oxazoline)s. Angew. Chem. Int. Ed. 50 (11), 2601-2605 (2011).
  17. Chen, Z., Li, N., Chen, L., Lee, J., Gassensmith, J. J. Dual Functionalized Bacteriophage Qβ as a Photocaged Drug Carrier. Small. 12 (33), 4563-4571 (2016).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

135 Q

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved