نمو اللاهوائية وصيانة خطوط خلايا الثدييات

Balbina J. Plotkin; Ira M. Sigar; Julie A. Swartzendruber; Amber Kaminski

doi:10.3791/58049

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

Summary

هنا، يمكننا وصف أسلوب جديد يتيح لزراعة اللاهوائية الطويلة الأجل من خطوط الخلايا المحددة. الوقت بقاء الحد الأقصى الذي تم اختباره 17 يوما. هذا الأسلوب مناسبة لاختبار العوامل السامة للخلايا واستكشاف الفسيولوجيا من تكرار أنوكسيكالي الخلايا.

Abstract

معظم الأسطح المخاطية جنبا إلى جنب مع نقاط المنتصف في الأورام والخلايا الجذعية المنافذ هي المناطق الجغرافية للهيئة التي وصول. تظهر الدراسات السابقة أن الاحتضان في نورموكسيك (5% CO₂في الهواء) أو التاكسج الظروف (مستويات الأوكسجين منخفض) تليها نتائج وصول حضانة (غياب الأكسجين الحرة) في صلاحية محدودة (2-3 أيام). وضعت منهجية مبتكرة تمكن زراعة خلية وصول (على الأقل 17 يوما؛ والحد الأقصى للوقت اختبار). الجانب الأكثر أهمية لهذه المنهجية ضمان أن لا الأكسجين الأخذ في النظام. وهذا يتم الحصول عليها جليحه لوسائل الإعلام، وأنابيب التفريغ والاطباق، وقوارير والماصات بأن خليط غاز اللاهوائية (ح₂، وأول أكسيد الكربون₂ن₂) متبوعاً بالسماح للمواد اللازمة لحجته بالبيئة (غير الأكسجين) وصول قبل الاستخدام. يجب توخي الحذر إضافية عند اكتساب photomicrographs لضمان عدم احتواء ميكروجرافس حصل على القطع الأثرية. في غياب الأوكسجين، مورفولوجيا الخلايا هو تغيير كبير. تتم الإشارة إلى اثنين من مورفوتيبيس متميزة لكافة الخلايا نابعة من دون وجود عوامل هوائية. يمكن تطبيق القدرة على النمو والحفاظ على خلايا الثدييات في غياب الأكسجين في تحليل فسيولوجيا الخلية والتفاعلات أنه وصف مسارات السكروز لتطوير عقاقير السرطان رواية.

Introduction

وتوجد خلايا من الأورام الصلبة والكوات الخلايا الجذعية، وأولئك بطانة الأسطح المخاطية في البيئات التي تعاني من مستويات انخفاض الأكسجين، بما في ذلك أكسجين¹^،²^،^،من³⁴. في الدول الفسيولوجية طبيعية، يختلف الأوكسجين إلى أبعد من ذلك لنقص أكسجين (الغياب الكامل للأوكسجين)⁵^،⁶. وذكر إدراك أن الأكسجين الغلاف الجوي يؤثر سلبا على خلايا الثدييات النسخ المتماثل، ويمكن أن يكون الأمثل أن نمو الخلايا في المختبر تحت شروط استنفاد الأكسجين في أوائل السبعينات. ريختر et al. ⁷ أظهرت أن 1 – 3 في المائة مستويات الأوكسجين (نقص) تعزيز كفاءة الطلاء بالمقارنة مع أكسجين الغلاف الجوي (20%). تم تمديد عمر الخلايا ضعفاني البشرية أيضا في ظروف الثقافة التاكسج⁸.

في فيفو، تحدث الشروط التاكسج عند مخازن الأكسجين المستنفد (مثلاً، أثناء ممارسة التمرينات الرياضية)، حيث يتم تبديل إنتاج ATP في العضلات الهيكلية من التنفس الهوائي للتخمير (التنفس اللاهوائي) مع المنتج النهائي لحمض الالكتيك⁹. مرضية، في الأورام السرطانية، الداخلية للورم هو كتلة التاكسج لوصول بسبب ضعف الأوعية الدموية¹⁰. أثر نضح محدودة على الورم الداخلية بصورة مستقلة يقرها الداخلية الورم استعمر اللاهوائيات تلزم¹. ميتشانيستيكالي، وورم الخلايا البقاء في نقص يعتقد أن تعتمد فقط على التعبير عن الجينات 1-ألفا عامل نقص إيندوسيبلي (HIF1-ألفا)، وهو استجابة عفوية الأولية لنقص⁴^،¹¹ ^, ¹²- HIF1-ألفا هو فعل بروتينات الصدمة الحرارية التي تربط HIF1تحت ظروف التاكسج-المروج ألفا و upregulate النسخ الجيني¹². ويعتقد هذه البروتينات صدمة الحرارة للمساعدة في تنظيم دورات تعريفية لتعمل مختلف ينظر في ورم المكروية التاكسج. تعمل هذه يحمل تعبير زيادة ناقلات الجلوكوز غشاء الخلية ومعدل تحلل (تأثير واربورغ)¹³. والنتيجة هي التحول من الفسفرة المتقدرية لاكتات التخمير.

بقاء وصول أيضا استخدام بدائل للسكر لدعم ال¹⁴^،ظاهرة بقاء¹⁵. هو أفضل مثال الثدييات درس فأر الخلد، التي يمكن البقاء على قيد الحياة لما يقرب من 20 دقيقة دون الأوكسجين من خلال مسار تخمير جليكوليتيك الفركتوز يحركها¹⁴. يحدث تكيف بديلة في بعض الأسماك (مثلاً، سمك الشبوط [Carassius sp.]، التي يمكن البقاء على قيد الحياة لفترة أطول إلى حد كبير الوقت فترات استخدام تحلل مع الإيثانول كمنتج ثانوي المحطة الطرفية)¹⁵. وفي كلتا الحالتين، محركات التخمير الأيض التمكينية البقاء على قيد الحياة في الغياب الأكسجين. الفرضية الحالية لوصول البقاء على قيد الحياة أن فترة طويلة ك HIF1--يتم تنشيط ألفا خلال نقص، التنفس المتقدرية، دون الحاجة للأوكسجين، يحدث تحت الظروف اللاهوائية¹⁶. وعلاوة على ذلك، هو افترض أن يحسن استخدام مسار معفن لبقاء التاكسج/وصول بقاء الورم نظراً لتجنب الأكسدة التي يمكن أن تكون ضارة ل بقاء الخلية¹⁷من الخلايا. ويدعم هذه الفرضية دراسة أجريت مؤخرا مما يدل على أن نقص في cardiomyocytes، يقلل من الأكسدة على خلايا الورم¹⁷.

حتى الآن، الطبيعة الأساسية لمسار معفن لبقاء الخلية الثديية وصول قد تم متأصلة في الأدب، يرجع، في جزء كبير منه، إلى عدم قدرة على خلايا الثدييات الثقافة في الغياب الكامل للأكسجين لأكثر من 3 أيام. ومع ذلك، يحدث بديل لتحلل لبقاء اللاهوائية في البكتيريا. في بعض البكتيريا، والنيتروجين أو كبريتات (من بين مركبات أخرى) يمكن اعتبارها متقبلون إلكترون المحطة الطرفية لنظام السيتوكروم أوكسيديز في الغياب الأكسجين¹⁸. ورغم حدوث تطور البكتيريا وحقيقية النواة جنبا إلى جنب منذ متباينة من سلف مشترك عالمي آخر، يقدر أن الميتوكوندريا كان توفير الطاقة للخلايا 1.542 مليون سنة قبل الأكسجين المحيطات¹⁹. منذ الباحثين أظهرت أن الميتوكوندريا المعزولة يمكن أن تنتج ATP في غياب الأكسجين، مع نتريت كما يقبلون الإلكترون المحطة الطرفية، أنها من المعقول افتراض أن الخلايا تستطيع أن تعمل لفترات زمنية أطول من 3 أيام في حالة عدم وجود الأوكسجين ²⁰ ^, ²¹ ^, ²² ^, ²³-المنهجية المشروحة في هذه الدراسة قد أداة لنمو خلايا الثدييات اللاهوائية للعديد من خطوط الخلايا.

Protocol

1. إعداد وسائل الإعلام للثقافة اللاهوائية لمختلف خطوط خلايا الثدييات

جعل المتوسطة PS 74656 كاملة ل ثقافة وصول خلية²⁵.
1. جعل الحل نتريت العقيمة الأسهم (م 5؛ 100 x) بتذويب ز 17.25 من نتريت في 50 مل ماء المقطر منزوع، ثم تصفية لتعقيم عليه.
2. إضافة 0.5 مل الحل نتريت الأسهم كل 50 مل الجلوكوز منخفضة دميم (1 غرام/لتر السكر) مع 110 مغ/لتر الجلوتامين لام، 584 مغ/لتر من بيروفات صوديوم، و 10% مصل بقرى الجنين (FBS؛ إبطال الحرارة).
  ملاحظة: استخدام تركيزات FBS أكبر من 10% ومواد سامة. من المذكرة، خط خلية سرطان اختبار واحد كان التفاوت منخفض لوسائل الإعلام مع النتريت (نجمة داود الحمراء-ميغابايت-231، خط خلية سرطان الثدي)، وهكذا، يزرع في غياب نتريت. وبالإضافة إلى ذلك، على الرغم من أن متوسط PS-74656 تدعم نمو كل من خطوط الخلايا التي تم اختبارها (n = 9)، وبعض من خطوط الخلايا (مثلاً، الخلايا فيرو) أظهرت تركيزات أعلى الخلية وبقاء أعلى في PS-74656 مع ارتفاع الجلوكوز (4.5 غرام/لتر) دميم ²⁵.
3. ضع 20 مل متوسطة في أنبوب الطرد مركزي مخروطية عقيمة 50 مل. لا تشديد عملية النداءات الموحدة؛ ينبغي أن تكون فضفاضة.
4. إزالة الغاز المتوسطة عن طريق وضع الأنبوب في جرة الجرس فراغ في زاوية 45 درجة تقريبا، تحقيق أقصى قدر من المساحة السطحية المتوسطة.
5. تطبيق فراغ باستخدام مضخة فراغ، أو ما يعادلها، في درجة حرارة الغرفة. الحفاظ على الفراغ حتى لم تعد تحترم فقاعات (ح 24 – 48).
6. إزالة الأنبوب من الجرة وفورا بإغلاق الغطاء، ختم أنبوب لتقليل إدخال الهواء في المتوسط.
7. ضع الأنبوبة في قاعة اللاهوائية التجارية.
8. قم بفك غطاء أنبوب ويسمح الغلاف الجوي في أنبوب لحجته بخليط الغاز اللاهوائية في قاعة لمالا يقل عن 24 ساعة.
  ملاحظة: ينبغي أن تظل المتوسطة حتى يتم استخدامه في الدائرة. لتسريع هذه العملية، تدفق الأنبوب مليئة x 3 على الأقل مع وصول الغاز المخلوط باستخدام ماصة نقل عقيمة وصول الغاز، الذي يتألف من ح₂و CO₂و N_2-
9. ديغا جميع الأنابيب (10 – 15 دقيقة) توضع في قاعة اللاهوائية كما هو موضح أعلاه قبل إغلاق الأنبوب ووضع في الدائرة. قبل الاستخدام، طرد مع خليط الغاز اللاهوائية باستخدام الماصات نقل 1.5 – 2 مل أو ماصة النصائح التي قد تم مسح مع وصول الغاز x 3 على الأقل.
10. بينما في قاعة اللاهوائية، إزالة 100 ميليلتر من المتوسط إلى أنبوب مايكرو--أجهزة الطرد المركزي ديجاسيد عقيمة واختباره للأكسجين المذاب باستخدام مسبار الأوكسجين داخل الدائرة.
  ملاحظة: يتم معايرة مسرى الأوكسجين كل الشركة المصنعة على البروتوكول قبل الاستخدام. قراءات وسائط مزيج الغاز اللاهوائية بشكل صحيح يطرد ومتوازن هي 0.
  تنبيه: إذا كانت القراءات فوق 0.3 جزء في المليون أكسجين، تواصل احتضان وسائط الإعلام في قاعة اللاهوائية منذ مطلوب مزيد من الوقت لحجته في المتوسط.

2-وصول زراعة مختلف خطوط خلايا الثدييات

يوم معين-1
1. تنمو خلايا (37 درجة مئوية، 5% CO₂) في قارورة T150 لالتقاء 90% لمراقبة وصول ونورموكسيك الثقافة لتوفير عدد كاف من الخلايا لثلاثة آبار 24 لوحات (التقاء 80%).
  ملاحظة: لهذه الدراسة، استخدمت خلايا هيلا 229 و فيرو. هذا البروتوكول أيضا اختبارها وأثبتت نجاحها للنمو والحفاظ على سبعة آخرين خلية خطوط²⁵.
2. إزالة المتوسطة من قارورة بالطموح وغسله مع 10 مل حبس.
3. استبدال المتوسطة مع 5 مل التربسين. تحرض قارورة حتى فصل الخلايا بصريا من البلاستيك. نضح معظم التربسين، ثم انقر على قارورة لإزاحة الخلايا ملتصقة. إضافة 10 – 15 مل من ارتفاع الجلوكوز دميم (4.5 غ/لتر جلوكوز، 110 مغ/لتر من الجلوتامين لام، 10% FBS، 50 ميكروغرام/مل من الجنتاميسين) لإلغاء تنشيط التربسين.
4. تريتوراتي الخلايا باستخدام ماصة 25 مل حتى تعطلت جميع كتل الخلية.
5. عد الخلايا وتحديد جدوى استخدام هيموسيتوميتير القياسية وطريقة الاستبعاد صبغة زرقاء تريبان أو ما يعادلها الآلي.
6. تعليق الخلايا الموجودة في الجلوكوز عالية دميم كما سبقت الإشارة إلى كثافة خلية 2.24 × 10⁵ خلايا/مل.
7. أضف 1 مل تعليق خلية لآبار طبق استنبات الأنسجة 24-جيدا (2.24 × 10⁵ خلايا/جيدا؛ والتقاء 80%). لوحة البذور 1 لثقافة وصول وآخر لثقافة نورموكسيك عنصر تحكم.
8. احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية في ظروف نورموكسيك (5% CO₂) 24 ساعة.
  ملاحظة: يمكن أن يكون مطلي بالخلايا في لوحات جيدا الحجم مختلف. ومع ذلك، بذر الخلايا لوصول النمو في قوارير ينطوي على خطر الأخذ بالأكسجين في النظام، ما لم يمارس الرعاية لطرد تماما غازات الغلاف الجوي.
اليوم المعين 0
1. بعد 24 ساعة الحضانة نورموكسيك، وضع لوحات لوصول النمو في قاعة اللاهوائية (اللاهوائية غرفة تجارية؛ الشكل 1).
2. فورا تغيير الوسيلة خالية من المضادات الحيوية دي المشككين PS-74656 المتوسطة التي قد تم تأقلم ح 24 إلى الدائرة اللاهوائية. ضع اللوحة في حاوية مع منشفة رطبة وفضفاضة وإغلاقه للحفاظ على الرطوبة.
  ملاحظة: تتم معالجة اللوحات للنمو نورموكسيك مطابق تماما باستثناء أن جميع العلاجات تتم تحت الظروف الجوية.
مكان مخصص يوم 1
1. يبدأ يوم 1 من حضانة اللاهوائية بعد 24 ساعة الحضانة في قاعة اللاهوائية التجاري الذي يحتوي على خليط الغاز اللاهوائية القياسية من 10 ٪ ح₂و 10% CO₂و 80% N₂.
2. احتضان الخلايا لفترات زمنية مختلفة.
3. رصد المتوسطة اللاهوائية لتغيير اللون مع مرور الوقت.
  ملاحظة: تحول لون من البرتقالي الأحمر إلى الأرجواني إشارات الوقت لتغيير في المتوسط. هذا يمكن أن تصل إلى 2 أسابيع لتحدث. تحول لون في الأجلين المتوسط ومن الأحمر-البرتقالي الأصفر يدل على وجود التلوث البكتيري.
4. عندما يتغير المتوسط من الأحمر إلى البنفسجي، إزالة الخلايا رانجيت بالطموح.
5. مكان يستنشق قضى وسائط الإعلام مع خلايا رانجيت اللاهوائية ويطرد غاز اكويليبراتيد [ميكروفوج] أنابيب، وإغلاق الأنابيب مع التأكد من أن الختم آمنة، وثم الطرد المركزي لهم (326 × ز؛ وفي درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق). فورا استبدال الوسائط يستنشق في البئر مع 1 مل من جديد يطرد PS-74656 المتوسطة.
6. المكان [ميكروفوج] أنابيب مع خلايا الأعلاف في قاعة اللاهوائية قبل فتحه. نضح المتوسطة المستهلك واستبداله بالطازج يطرد PS-74656 المتوسطة إلى إجمالي حجم 1 مل في [ميكروفوج] أنابيب.
7. عودة الخلايا من الأنبوب إلى بئر في لوحة زراعة الأنسجة 24-جيدا.

3-تقييم خلية المظهرية التفرقة بالفحص المجهري للخلايا المستزرعة لاهوائيا

بينما في قاعة اللاهوائية، ضع اللوحة في مربع resealable مسح مع خليط الغاز اللاهوائية وإغلاق المربع.
ملاحظة: يجب أن يحتوي على المربع منشفة ورقية رطبة لتوفير الرطوبة ومنع اللوحة من الجفاف. للفحص المجهري، عمل أكياس ساندويتش الأفضل نظراً لأنها رقيقة.
1. لمراقبة الخلايا تحت المجهر، ختم الحقيبة تماما وإزالته من الدائرة.
2. بعناية تمتد الكيس من البلاستيك على اللوحة وفحص الخلايا باستخدام مجهر الطوري مقلوب مع المرفق الكاميرا واتخاذ photomicrographs في تكبير مختلفة.
3. العودة اللوحة في حقيبة مختومة إلى الدائرة، وتستمر في الحضانة كما هو موضح في الخطوة 2.3.3.
4. لتحليل رانجيت الخلايا الموجودة في التعليق بشكل منفصل، اتبع الخطوات الموضحة في الخطوة 2.3.5.
  ملاحظة: هذه الخلايا يمكن استخدامها بعد ذلك لاختبار الهوائية أو يمكن إرجاعها إلى قاعة اللاهوائية للاختبار لهذه الفئة من السكان.

النتائج

وتكمن قوة هذا البروتوكول في دعمه لطول العمر والنمو في العديد من خطوط الخلايا، وفي الاعتراف بأن هناك التغيير العميق والاختلاف في مورفولوجيا الخلايا²⁵. أن أهم عنصر في هذه الدراسة هو نقل وصيانة الخلايا تحت أنايروبيوسيس صارمة. وهذا يتطلب دائرة اللاهوائية للمنظم...

Discussion

ويمثل هذا الأسلوب خلايا الثدييات في المرة الأولى التي تم مثقف لفترات طويلة من الزمن في حالة عدم وجود الأوكسجين. استناداً إلى الملاحظات الحالية، وصول النمو قدرة عبر مسار غير معفن يظهر أن يكون عالمياً بين خلايا الثدييات خطوط²⁸، حيث أدت إلى نمو اللاهوائية في اختلاف النمط ال?...

Disclosures

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgements

يشكر المؤلفون بمكتب بحوث جامعة الغرب الأوسط ورعاية برامج لدعمهم.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Whitney A35 anaerobic chamber	Don Whitley Scientific	Microbiology International	The ability to remove the front of the chamber makes it easy to put instruments inside without concern about getting them through the portals.
CO₂ incubator	Fisher Scientific	3531
Tissue Culture Hood	Labconco	DO55735
pipet aid	Drummond	4-000-100
sterile transfer pipets	Santa Cruz	sc-358867
50 cc sterile conical centrifuge tubes	DOT	451-PG
vaccum jar	Nalgene 111410862889	BTA-Mall 5311-0250
DMEM high glucose (4.5 g/L)	CellGro	10-017-CM
DMEM low glucose (1 g/L)	CellGro	10-014-CV
FBS	VWR	1500-500
HBSS	VWR	20-021-CV
trypsin	VWR	25-052-CI
gentamicin	Gibco	15750-060
sterile pipets	CellTreat	229210B, 229205B
Tissue culture flask (T75 or T150)	Santa Cruz	sc-200263, sc-200264
24 well tissue culture treated dishes	DOT	667124
glad ziplock sandwich bags	Ziploc	Costco
inverted phase microscope (10, 20 40x objectives with camera mont)	Nikon Eclipse	TS100
trypan blue	Invitrogen	T10282
hemocytometer	Invitrogen	C10283
Countess Automated Cell Counter	Life Technologies	AMQAF1000
Rainin microtiter pipets	Mettler Toledo	Rainin Classic Pipette PR-100
microtiter tips	Santa Cruz Biotechnology	sc-213233 & sc-201717
test tube rack (50cc tubes)	The Lab Depot	HS29050A
sodium nitrite	Sigma	https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigald/237213?lang=en&region=US
clear boxes with lids	Rosti Mepal	Rubber maid
paper towels	In House
cell scraper	CellTreat	229310
PBS	In house prepared
70% Ethanol	Fisher Scientific	64-17-5
microcentrifuge tubes sterile	Santa Cruz	sc-200273
biohazard bags with holder (desktop)	Heathrow Scientific	HS10320
Nitrile Gloves	VWR	89428
oxygen electrode	eDAQ	EPO354
pH meter	Jenway	3510
pH paper/ pHydrion	Sigma Aldich	Z111813

References

Cummins, J., Tangney, M. Bacteria and tumours: causative agents or opportunistic inhabitants?. Infectious Agents and Cancer. 8 (1), 11 (2013).
Liao, J., et al. Enhanced efficiency of generating induced pluripotent stem (iPS) cells from human somatic cells by a combination of six transcription factors. Cell Research. 18 (5), 600-603 (2008).
Park, I. H., Lerou, P. H., Zhao, R., Huo, H., Daley, G. Q. Generation of human-induced pluripotent stem cells. Nature Protocols. 3 (7), 1180-1186 (2008).
Semenza, G. L. HIF-1: mediator of physiological and pathophysiological responses to hypoxia. Journal of Applied Physiology. 88 (4), 1474-1480 (2000).
Biedermann, L., Rogler, G. The intestinal microbiota: its role in health and disease. European Journal of Pediatrics. 174 (2), 151-167 (2015).
Cui, X. Y., et al. Hypoxia influences stem cell-like properties in multidrug resistant K562 leukemic cells. Blood Cells, Molecules, and Diseases. 51 (3), 177-184 (2013).
Richter, A., Sanford, K. K., Evans, V. J. Influence of Oxygen and Culture Media on Plating Efficiency of Some Mammalian Tissue Cells. JNCI: Journal of the National Cancer Institute. 49 (6), 1705-1712 (1972).
Packer, L., Fuehr, K. Low oxygen concentration extends the lifespan of cultured human diploid cells. Nature. 267, 423 (1977).
Warburg, O. On the origin of cancer. Science. 123 (3191), 309-314 (1956).
Döme, B., Hendrix, M. J. C., Paku, S., Tóvári, J., Tímár, J. Alternative Vascularization Mechanisms in Cancer. The American Journal of Pathology. 170 (1), 1-15 (2007).
Jewell, U. R., et al. Induction of HIF-1α in response to hypoxia is instantaneous. The FASEB Journal. 15 (7), 1312-1314 (2001).
Lee, J. W., Bae, S. H., Jeong, J. W., Kim, S. H., Kim, K. W. Hypoxia-inducible factor (HIF-1)alpha: its protein stability and biological functions. Experimental & Molecular Medicine. 36 (1), 1-12 (2004).
Pagoulatos, D., Pharmakakis, N., Lakoumentas, J., Assimakopoulou, M. Etaypoxia-inducible factor-1alpha, von Hippel-Lindau protein, and heat shock protein expression in ophthalmic pterygium and normal conjunctiva. Molecular Vision. 20, 441-457 (2014).
Park, T. J., et al. Fructose-driven glycolysis supports anoxia resistance in the naked mole-rat. Science. 356 (6335), 307 (2017).
Johnston, I. A., Bernard, L. M. Utilization of the Ethanol Pathway in Carp Following Exposure to Anoxia. Journal of Experimental Biology. 104 (1), 73 (1983).
Takahashi, E., Sato, M. Anaerobic respiration sustains mitochondrial membrane potential in a prolyl hydroxylase pathway-activated cancer cell line in a hypoxic microenvironment. American Journal of Physiology-Cell Physiology. 306 (4), C334-C342 (2014).
Mandziuk, S., et al. Effect of hypoxia on toxicity induced by anticancer agents in cardiomyocyte culture. Medycyna Weterynaryjna. 70 (5), 287-291 (2014).
Arai, H., Kodama, T., Igarashi, Y. The role of the nirQOP genes in energy conservation during anaerobic growth of Pseudomonas aeruginosa. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 62 (10), 1995-1999 (1998).
Müller, M., et al. Biochemistry and Evolution of Anaerobic Energy Metabolism in Eukaryotes. Microbiology and Molecular Biology Reviews. 76 (2), 444-495 (2012).
Gupta, K. J., Igamberdiev, A. U. The anoxic plant mitochondrion as a nitrite: NO reductase. Mitochondrion. 11 (4), 537-543 (2011).
Gupta, K. J., Igamberdiev, A. U. Reactive Nitrogen Species in Mitochondria and Their Implications in Plant Energy Status and Hypoxic Stress Tolerance. Frontiers in Plant Science. 7 (369), (2016).
Kozlov, A. V., Staniek, K., Nohl, H. Nitrite reductase activity is a novel function of mammalian mitochondria. FEBS letters. 454 (1-2), 127-130 (1999).
Nohl, H., Staniek, K., Kozlov, A. V. The existence and significance of a mitochondrial nitrite reductase. Redox Report. 10 (6), 281-286 (2005).
Lawson, J. C., Blatch, G. L., Edkins, A. L. Cancer stem cells in breast cancer and metastasis. Breast Cancer Research and Treatment. 118 (2), 241-254 (2009).
Plotkin, B. J., et al. A method for the long-term cultivation of mammalian cells in the absence of oxygen: Characterization of cell replication, hypoxia-inducible factor expression and reactive oxygen species production. Tissue and Cell. 50 (Supplement C), 59-68 (2018).
Sarmento, B., et al. Cell-based in vitro models for predicting drug permeability. Expert Opinion on Drug Metabolism & Toxicology. 8 (5), 607-621 (2012).
Collins, S. J., Gallo, R. C., Gallagher, R. E. Continuous growth and differentiation of human myeloid leukaemic cells in suspension culture. Nature. 270 (5635), 347-349 (1977).
Plotkin, B. J., et al. A method for the long-term cultivation of mammalian cells in the absence of oxygen: Characterization of cell replication, hypoxia-inducible factor expression and reactive oxygen species production. Tissue and Cell. 50, 59-68 (2018).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

137

This article has been published

Video Coming Soon

Keep me updated: