تقييم تأثير المضادة الاكتئاب إكسياوياوسان على الفئران أكد مزمن

Summary

نقدم هنا، وضع بروتوكول لإنشاء نموذج الاكتئاب الماوس ومراقبة التغييرات السلوك المرتبطة بالإجهاد المزمن المعتدل لا يمكن التنبؤ بها (CUMS)، وتقييم تأثير المضادة الاكتئاب إكسياوياوسان.

Abstract

بالإضافة إلى استخدام موحدة للأدوية المضادة للاكتئاب والعلاج النفسي، استخدام الطب الصيني التقليدي قد يؤدي إلى حدوث تحسن عام للمرضى الذين يعانون من اضطراب الاكتئاب الرئيسي (MDD). ولذلك، كان الغرض من هذه الدراسة وضع نموذج الاكتئاب الماوس ومراقبة التغييرات السلوك المرتبطة بالإجهاد المزمن المعتدل لا يمكن التنبؤ بها (CUMS) ثم تقييم تأثير المضادة الاكتئاب إكسياوياوسان. وتم تقسيم الفئران عشوائياً إلى أربع مجموعات: مجموعة مراقبة ومجموعة طراز، مجموعة علاج مع إكسياوياوسان، ومجموعة علاج مع فلوكستين. وأبقى على حدة جميع الفئران في أقفاص، والاكتئاب قد يتسبب في الفئران بتعريضها لعدة ألاعيب CUMS مصممة لمدة 21 يوما، كما هو مبين في البروتوكول. الفئران في مجموعة التحكم ومجموعة نموذج تلقت 0.5 مل ماء المقطر، بينما تلقت الفئران في مجموعات العلاج أما إكسياوياوسان (0.25 غ/كغ/يوم) أو فلوكستين (2.6 مغ/كغ/يوم). وأعطيت الأدوية المستخدمة في الدراسة إينتراجاستريكالي يوميا خلال الثلاثة أسابيع كاملة. لتقدير السلوكيات مثل الاكتئاب، مجموعة من المعلمات بما في ذلك الدولة معطف، وزن الجسم، فتح نقاط الاختبار الميداني، وقد سجلت نقاط اختبار التفضيل السكروز. وأظهر تحليل البيانات أن السلوكيات نموذج الفئران التي تم تغييرها إلى حد كبير بالمقارنة مع سلوكيات الفئران في مجموعة التحكم، التي تم تحسينها بمعاملة إكسياوياوسان وفلوكسيتين. النتائج الحالية أثبتت آثار مضادة الاكتئاب إكسياوياوسان على سلوكيات الفئران التي يسببها CUMS، وكشفت عن أن مركبات من الوصفة إكسياوياوسان قد تكون جديرة بالاهتمام لعلاج الاكتئاب، والنظر في آثارها المفيدة على السلوكيات مثل الاكتئاب.

Introduction

MDD مرض عقلية المزمنة والمتكررة جداً أن يعرض مع استمرار تدني الحالة المزاجية، والاكتئاب، وتدني احترام الذات، التخلف العقلي، فقدان الاهتمام، النوم اضطرابات، الاتجاهات تأثيراً عميقا في التشاؤم أو الانتحار؛ أنها تسببت في ضرر كبير على صحة الإنسان وتحقيق الاستقرار الاجتماعي¹. فقد أصبح واحداً من العالم السبب الرئيسي للعجز، وقد يكون أحد أهم الأسباب الرئيسية لعبء المرض بحلول عام 2030، وفقا "منظمة الصحة العالمية"^2،3. حاليا، تعتبر الأدوية المضادة للاكتئاب والعلاج النفسي لتكون الخيار الأول لعلاج MDD. ومع ذلك، عددا هائلا من المرضى الذين شخصت MDD لا تستجيب للعلاج أو الدواء مستمرة، ويتم سردها كوجود⁴من الاكتئاب المقاوم للعلاج.

إكسياوياوسان هو كلاسيكية صينية مجمع⁵ التي تم استخدامها على نطاق واسع لعلاج الأمراض النفسية لآلاف السنين منذ عهد أسرة سونغ في الصين⁶. وهو يتألف من الأعشاب الصينية 8: بوبليوري الرقم الأساسي، "الرقم الأساسي" بونيا ألبا، "الرقم الأساسي" Angelicae سينينسيس، بوريا، ماكروسيفالاي أتراكتيلوديس ريزوما، جليسيرهيزاي Radix، ريزوما زينجبيرس Recens ، و العود هيربا. إكسياوياوسان يحتوي على مكونات متعددة وله أهداف متعددة، وتستخدم مسارات متعددة⁷. إكسياوياوسان قد ثبت عموما أن تكون صيغة آمنة وفعالة لعلاج مختلف الأمراض ذات الصلة بالعقلية اضطرابات، وقد ركزت الدراسات الحديثة أيضا على الآلية المضادة الاكتئاب من هذا المجمع^{8،9، 10}. إمراضية MDD حتى الآن غير واضحة، على الرغم من أن هناك فرضيات متنوعة، بما في ذلك فرضية مونوأمين، فرضية مستقبلات الناقل العصبي، فرضية تغيير وظيفة الغدد الصم العصبية، وفرضية الشذوذ المناعي، إلخ. لقد بينت دراسات عديدة أن تأثير مضاد إكسياوياوسان لديه اتصال مع الأسس المادية الفرضيات أعلاه^11،12، وفي بيانات العمل العلاجي كتحسين للاكتئاب مثل ¹³من السلوكيات.

وعلاوة على ذلك، مع انتشار الاكتئاب، عانى المجتمع الحديث من تخفيضات في قوة العمل، والتقاعد المبكر، والعلاجات مكلفة¹⁴. تكلفة العلاج يحتاج إلى عناية طبية صارمة، مما يعني طائفة من زيادة التكاليف الطبية وتوقعا دقيقا دقة نتائج غير مرغوب فيها، فضلا عن الآثار الجانبية¹⁵. وقد عشب صيني إكسياوياوسان المكونات موجوداً وآثار فريدة من نوعها، وآثار جانبية طفيفة. التطبيق يمكن أن تلعب دوراً في تخفيف العبء على المعالجة الطبية الحديثة. ولذلك، لتوفير أساس نظري أكثر لتطبيق إكسياوياوسان، علاج السريري بديل ينبغي أن تقدم لعلاج الاكتئاب، وحالات الإصابة التي يزيد عاماً بعد عام، وينبغي تحسين صحة الإنسان في نفس الوقت. وتصف هذه الورقة بروتوكول التي تنطوي على استخدام إكسياوياوسان لمنع السلوكيات مثل الاكتئاب بإنشاء نموذج اكتئاب من الماوس. واستخدمت في حقل مفتوح واختبار السكروز الأفضلية للتحقق من آثار إكسياوياوسان المضادة للاكتئاب.

Protocol

هذا البروتوكول أقرته لجنة أخلاقيات الحيوان من جامعة بكين "الطب الصيني" ووفقا لجميع المبادئ التوجيهية لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية للصين. كان هناك أي حالة الوفاة العرضية أثناء إجراء التجارب، والحيوانات لا تحتاج إلى أن euthanized في هذه الدراسة.

1. إعداد المخدرات للتجربة

ملاحظة: تم شراؤها الأعشاب الصينية وثم مصادقة من قبل الدكتور ليو باء بجامعة بكين "الطب الصيني". إكسياوياوسان يحتوي على الأدوية الصينية التقليدية الثمانية التالية في نسبة 6:6:6:6:3:6:2:2: "الرقم الأساسي" Angelicae سينينسيس، وألبا بونيا "الرقم الأساسي"، بوريا، بوبليوري الرقم الأساسي، جليسيرهيزاي الرقم الأساسي، ماكروسيفالاي أتراكتيلوديس ريزوما، العود هيربا وريزوما زينجبيرس ريسينس،.

1. إعداد إكسياوياوسان كما هو موضح سابقا¹⁶.
   ملاحظة: يمكننا استخراج هذه المركبات في غرفة إعداد الطب الصيني في مستشفى الصداقة الصينية اليابانية، وعائد استخراج 18.8 في المائة.
2. التحقق من جودة إكسياوياوسان كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء-الكتلي التحليل (LC-MS/MS)¹⁷.

2-إعداد الفئران للإجراء التجريبي

ملاحظة: الإجراء التجريبي، 60 الفئران C57BL/6J صحية الذكور الذين تتراوح أعمارهم بين 12 أسبوعا واختيرت، مع الماوس كل وزنها بين 18 و 22 g.

1. تبقى الفئران منفردة في أقفاص في غرفة حيوانات مختبرية ممرض محددة مجاناً (SPF) نموذجية (22 ± 1 درجة مئوية، ودورة ح 12/12 ح الظلام/الضوء، الرطوبة النسبية: 30-40%) لمدة أسبوع واحد قبل الإجراء CUMS.
2. تقسيم جميع الفئران عشوائياً إلى مجموعة مراقبة، ومجموعة نموذجية، مجموعة علاج إكسياوياوسان، أو مجموعة علاج فلوكستين وفقا لوزن الجسم. تحتوي كل مجموعة 15 الفئران.
3. قبل البدء بالتجربة، عدد الفئران في كل مجموعة على ذيل استخدام قلم تمييز.
4. اختبار جميع الفئران باستخدام اختبار تفضيل سكروز خمسة أيام (راجع الخطوة 5) وإجراء اختبار حقل مفتوح (راجع الخطوة 6).

3-تنظيم دورات تعريفية للاكتئاب في الفئران

ملاحظة: للحث على الاكتئاب، خضع الفئران في المجموعة النموذجية، ومجموعتين من العلاج CUMS لمدة 21 يوما¹⁸. يمكن تغيير الخطة حسب الحالة العملية، ولكن ينبغي أن يتبع مبدأ أن الضغوطات نفسه لا يمكن استخدامها بشكل مستمر.

1. تعرض الفئران يوميا لأي اثنين من الضغوطات السبعة التالية ل¹⁹من 21 يوما على التوالي. وتهدف الخطة النمذجة لدينا كما يلي:
   1. يوم الاثنين، تعرض الفئران للحرمان من الطعام (فارغ التغذية لكل قفص ح 24، 08:00 ص إلى 08:00 ص) والحرمان من الماء (إزالة زجاجة مياه الشرب لكل قفص ح 24، 08:00 ص إلى 08:00 ص).
   2. يوم الثلاثاء، كشف الفئران إلى ضبط النفس الإجهاد (كبح جماح الفئران في حوض بلاستيكية صغيرة ل 3 ح، 08:00 ص إلى 11:00 ص) واقفاص فارغة (إزالة الحشو في كل قفص ح 11، 08:00 ص إلى الساعة 19:00).
   3. يوم الأربعاء، تعرض الفئران في أقفاص الرطب والمتسخة (صب الماء في كل قفص وإبقاء الرطب ح 24، 08:00 ص إلى 08:00 ص) ومزدحمة أقفاص (وضع خمسة فئران في قفص واحد ح 24، 08:00 ص إلى 08:00 صباحا).
   4. يوم الخميس، تعرض الفئران لضبط النفس الإجهاد والسباحة المثلج^20،21 (قوة كل من الماوس للسباحة في حوض السمك زجاج الشفاف مع الماء المثلج لمدة 5 دقائق).
   5. يوم الجمعة الماضي، تعرض الفئران في أقفاص الرطب والمتسخة، والحرمان من الطعام.
   6. يوم السبت، تعرض الفئران لضبط النفس الإجهاد واقفاص مزدحمة.
   7. يوم الأحد، تعرض الفئران في أقفاص فارغة والسباحة المثلج.
2. سجل شعار الدولة ووزن الجسم أسبوعيا حتى نهاية النمذجة (يوم 21). حساب النتيجة الإجمالية للدولة معطف كمجموع لعشرات من سبعة أجزاء الجسم المختلفة: الرأس والرقبة ومعطف الظهرية، معطف البطني، فوريباوس، والذيل وآثار أقدام هند. درجة واحدة تشير إلى معطف مهندم، ويشير إلى درجة الصفر معطف غير مهذب²².
3. إجراء اختبار تفضيل سكروز خمسة أيام (راجع الخطوة 5) وإجراء اختبار حقل مفتوح (راجع الخطوة 6) في نهاية التجربة.

4-إدارة شؤون إكسياوياوسان

ملاحظة: جرعة إكسياوياوسان (0.25 غ/كغ/يوم) واختيرت على أساس كفاءته مرضية كما هو موضح سابقا⁹.

1. أثناء التجربة، استخدام الماء المقطر لإعداد تعليق إكسياوياوسان وفلوكستين، والتأكد من استخدامها على الفور.
2. إعطاء 0.5 مل ماء المقطر للفئران في مجموعة التحكم ومجموعة نموذج الإدارة إجراء كل يوم قبل النمذجة. وفي الوقت نفسه، إعطاء إكسياوياوسان (0.25 غ/كغ/يوم) أو فلوكستين (2.6 مغ/كغ/يوم) للفئران في مجموعات معاملة اثنين.

5-السكروز تفضيل الاختبار

ملاحظة: تم تطبيق لا الحرمان المياه أو الطعام قبل الاختبار. وأجرى البروتوكول كما ذكر سابقا²³.

1. في اليومين الأول والثاني، بيت الفئران على حدة مع اثنين من زجاجات مليئة بماء الصنبور.
2. في اليومين المقبلين، إعطاء الفئران اثنان زجاجات مليئة بمحلول السكروز 1%.
3. في اليوم الأخير، إعطاء الفئران زجاجتين ح 24 وواحد بماء الصنبور والآخر مع محلول السكروز 1%. للقضاء على تفضيل جانب من الفئران في الشرب السلوك، تبديل موضع زجاجتين بعد 12 ساعة.
4. سجل الحجم (mL) من محلول السكروز المستهلكة ومياه الحنفية. حساب تفضيل السكروز كما يلي: تفضيل السكروز (%) = الاستهلاك السكروز إلى مجموع استهلاك السائل × 100%.

6-فتح مجال الاختبار

1. إجراء اختبار حقل مفتوح في غرفة مضاءة خافتة وهادئة مع رباعي أسود والارجنين صندوق خشبي. القسمة العطس إلى مربعات متساوية 25 خطوط زرقاء.
2. تنظيف المربع الحقول المفتوحة مع الكحول 5% قبل الوصول كل الماوس. ثم، ضع الماوس في وسط ميدان مفتوح بلطف.
3. تعليق من عالية الوضوح كاميرا رقمية حوالي 200 سم الحق فوق الحقل، وتسجيل سلوك كل الماوس لمدة 5 دقائق.
4. تقييم الفيديو السلوكية الفئران عن طريق برامج فيديو-تتبع النظام وتسجيل بيانات مجموع تشغيل المسافة وعدد حالات الدخول إلى منطقة المركز.
5. تحليل البيانات نقل المسافة الإجمالية وعدد حالات الدخول إلى منطقة مركز بالبرمجيات الإحصائية.

النتائج

علما بأن النتائج التي صدرت سابقا بالدكتور شيوى-فانغ دينغ، et al. ¹⁸

وأعرب عن البيانات ك ± يعني الخطأ المعياري للوسط (SEM). واستخدمت ANOVA أحادي اتجاه أو اختبار غير حدودي للبيانات العامة استناداً إلى اختبار الحياة الطبيعية واختب?...

Discussion

CUMS النموذج المستخدم في هذه الدراسة طريقة شائعة لإنشاء نموذج استهداف الإجهاد للاكتئاب²⁴. ويمكن استعادة معظم مظاهر CUMS بالعقاقير المضادة للاكتئاب، الذي أشار إلى أن هذا الأسلوب النموذجي له صحة تنبؤية قوية²⁵. بهذه الطريقة، الحيوانات تلقي المزمنة المحفزات مرهقة لا يمك...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Chinese Herbs	Tongrentang (Bozhou, AnHui) Decoction Pieces Limited Company	-	The drugs were extracted by the Chinese medicine preparation room of the China-Japan Friendship Hospital, distilled water was used to prepare the suspension of Xiaoyaosan, and the dose was 0.25 g/kg/d.
Fluoxetine	PATHEON FRANCE	5545A	The distilled water was used to prepare the suspension of fluoxetine, and the dose 2.6 mg/kg/d.
C57BL/6j mice	Beijing Vital River of the Charles River Company	SCXK 2011-0004	60 healthy male C57BL/6J mice aged 12 weeks were purchased from Beijing Vital River of the Charles River Company.
Mouse cage	Styling Biotechnology	34853016	318×202×135 mm
Distilled Water	-	-	The water was used througout the experiment.
Sucrose	Sigma	-	The sucrose was used in the sucrose preference test to prepare 1% sucrose solution.
ACS-2EAS Electronic Balance	Beijing Hengzhongheng Electronic Technology Co., Ltd.	-	It was used to weigh the avoirdupois of mice at different stages.
Wooden Black Lusterless Box	-	-	(40 cm x 40 cm x 15 cm), divided into 25 equal squares by blue lines.
WV-CP470 Camera	Panasonic, Japan	-	A HD digital camera which was used for recording the whole process of the open field test.
Etho Vision 3.0 Software	Noldus, Wageningen, Holland	-	A video-tracking system which was used to evaluate the locomotor function and emotionality of mice.
SPSS Statistics 21.0 Software	IBM	-	SPSS 21.0 software was used to analyze the data, one-way ANOVA or non-parametric test was used for general data based on normality test and homogeneity test for variance, and LSD method was adopted for the comparisons between groups.
Graphpad Prism 6.0 Software	Graphpad Software,Inc.USA	-	Graphpad Prism 6.0 software was used to draw statistical graphs.