Valutazione dell'effetto di anti-depressione di Xiaoyaosan sui topi cronicamente stressato

Riepilogo

Qui, presentiamo un protocollo per stabilire il modello depressivi del mouse, osservare i cambiamenti di comportamento connessi con sforzo delicato imprevedibile cronico (CUMS) e valutare l'effetto di anti-depressione di Xiaoyaosan.

Abstract

Oltre all'uso standardizzato di farmaci antidepressivi e psicoterapia, l'utilizzo della medicina tradizionale cinese ha portato ad un miglioramento globale dei pazienti con disturbo depressivo maggiore (MDD). Pertanto, lo scopo di questo studio era di stabilire il modello depressivi del mouse, osservare i cambiamenti di comportamento connessi con sforzo delicato imprevedibile cronico (CUMS) e quindi valutare l'effetto di anti-depressione di Xiaoyaosan. Topi sono stati divisi a caso in quattro gruppi: un gruppo di controllo, un gruppo di modello, un gruppo di trattamento con Xiaoyaosan e un gruppo di trattamento con fluoxetina. Tutti i topi sono stati mantenuti singolarmente in gabbie e depressione è stato indotto nei topi di esporli a progettato diverse manipolazioni del CUMS per 21 giorni, come descritto nel protocollo. I topi nel gruppo di controllo e gruppo di modello hanno ricevuto 0,5 mL di acqua distillata, mentre i topi nei gruppi di trattamento hanno ricevuto entrambi Xiaoyaosan (0,25 g/kg/giorno) o fluoxetina (2,6 mg/kg/giorno). Le droghe usate nello studio erano dato intragastrically giornalmente durante le tre settimane intere. Per stimare i comportamenti simil-depressivi, una serie di parametri tra cui lo stato di cappotto, peso corporeo, aprire il punteggio del test di campo, e punteggio del test di saccarosio preferenza sono stato registrato. Analisi dei dati ha mostrato che i comportamenti del modello di topi sono stati cambiati significativamente rispetto ai comportamenti dei topi nel gruppo di controllo, che sono stati migliorati dal trattamento di Xiaoyaosan e la fluoxetina. I risultati attuali hanno dimostrato gli effetti di anti-depressione di Xiaoyaosan sui comportamenti dei topi indotti su CUMS e ha rivelato che composti dalla prescrizione di Xiaoyaosan possono essere utili nel trattamento della depressione, considerando i loro effetti benefici sulla comportamenti simil-depressivi.

Introduzione

MDD è una malattia mentale cronica, altamente ricorrente che presenta con persistente umore basso, depressione, bassa autostima, ritardo mentale, perdita di interesse, disturbi del sonno, profondamente pessimistiche o suicida tendenze; ha causato gravi danni alla salute umana e stabilizzazione sociale¹. È diventato una delle causa primaria del mondo della disabilità, e può essere una delle principali cause principali di malattia nel 2030 secondo l'organizzazione mondiale della sanità^2,3. Attualmente, psicoterapia e farmaci antidepressivi sono considerati di essere la prima scelta per il trattamento di MDD. Tuttavia, un numero enorme di pazienti diagnosticati con MDD non rispondono alla terapia o farmaco continuo, e sono elencati come avendo depressione trattamento-resistente⁴.

Xiaoyaosan è un classico cinese composto⁵ che è stato ampiamente usato per trattare malattie psicologiche per migliaia di anni a partire dalla dinastia Song in Cina⁶. Si compone di 8 erbe cinesi: Radix Bupleuri, Radix Paeoniae Alba, Radix Angelicae Sinensis, Poria, Rhizoma Atractylodis Macrocephalae, Radix Glycyrrhizae, Rhizoma Zingiberis Recens e Herba Menthae. Xiaoyaosan contiene più costituenti, ha più bersagli e utilizza molteplici vie⁷. Xiaoyaosan è stato comunemente indicato per essere una formula sicura ed efficace per il trattamento di vari disturbi correlati al mentale di malattie, e studi moderni hanno anche messo a fuoco sul meccanismo anti-depressione di questo composto^{8,9, 10}. La patogenesi della MDD non è ancora chiara, anche se esistono molteplici ipotesi, tra cui l'ipotesi della monoammina, l'ipotesi di recettori del neurotrasmettitore, l'ipotesi di cambiamento di funzione neuroendocrina, l'ipotesi di anomalia del sistema immunitario, ecc. Diversi studi hanno dimostrato che l'effetto antidepressivo di Xiaoyaosan ha un collegamento con le basi materiali delle ipotesi sopra^11,12e i relativi manifesti di azione terapeutica come miglioramento al tipo di depressiva comportamenti¹³.

Inoltre, con la prevalenza della depressione, la società moderna ha sofferto di riduzioni della forza lavoro, i pensionamenti anticipati e trattamenti costosi¹⁴. Trattamento costoso ha bisogno di attenzione medica rigorosa, che significa una gamma di costi medici aumentati e precisa previsione di precisi risultati indesiderati, come pure effetti collaterali¹⁵. L'erba cinese Xiaoyaosan ha componenti accessibili, effetti unici e lievi effetti collaterali. Sua applicazione può giocare un ruolo nel ridurre l'onere del trattamento medico moderno. Di conseguenza, per fornire una base più teorica per l'applicazione di Xiaoyaosan, una terapia alternativa clinica dovrebbe essere offerto per il trattamento della depressione, l'incidenza di che aumenta di anno in anno e dovrebbe migliorare la salute umana allo stesso tempo. Questo articolo descrive un protocollo che coinvolge l'uso di Xiaoyaosan al fine di prevenire i comportamenti simil-depressivi che stabilisce il modello depressivo del mouse. Il campo aperto test e test di preferenza di saccarosio sono stati utilizzati per verificare gli effetti antidepressivi di Xiaoyaosan.

Protocollo

Questo protocollo è stato approvato dal comitato di etica animale dell'Università di Pechino di medicina cinese ed è stato in conformità con tutte le linee guida per la cura e l'uso di laboratorio animali della Cina. Non c'era nessuna situazione di morte accidentale durante la procedura sperimentale, e nessun animale dovevano essere eutanasia in questo studio.

1. preparazione di farmaci per l'esperimento

Nota: Erbe cinesi sono state acquistate e poi autenticate dal Dr. B. Liu dell'Università di medicina cinese Beijing. Xiaoyaosan contiene i seguenti otto farmaci tradizionali cinesi in un rapporto di 6:6:6:6:3:6:2:2: Radix Angelicae Sinensis, Radix Paeoniae Alba, Poria, Radix Bupleuri, Radix Glycyrrhizae, Rhizoma Atractylodis Macrocephalae, Herba Menthae e Rhizoma Zingiberis Recens.

1. Preparare Xiaoyaosan come descritto in precedenza¹⁶.
   Nota: Abbiamo estratto questi composti nella sala di preparazione di medicina cinese di China-Japan Friendship Hospital, e la resa di estrazione era 18,8%.
2. Verificare la qualità di Xiaoyaosan di spettrometria della cromatografia-massa liquida ad alte prestazioni analisi (LC-MS/MS)¹⁷.

2. preparazione dei topi per la procedura sperimentale

Nota: Per la procedura sperimentale, sono stati selezionati 60 topi C57BL/6J maschio sani 12 settimane di età, con ogni mouse peso compreso tra 18 e 22 g.

1. Tenere i topi singolarmente in gabbie in una tipica camera animale di laboratorio specifico patogeno Free (SPF) (22 ± 1 ° C, ciclo di buio/luce 12 h/12 h, umidità relativa: 30-40%) per una settimana prima della procedura CUMS.
2. Dividere in modo casuale tutti i topi in un gruppo di controllo, un gruppo di modello, un gruppo di trattamento di Xiaoyaosan o un gruppo di trattamento del fluoxetine secondo il loro peso corporeo. Ogni gruppo dispone di 15 topi.
3. Prima dell'inizio dell'esperimento, numerare i topi in ogni gruppo sulla loro coda utilizzando una penna di marcatura.
4. Tutti i topi utilizzando un test di preferenza di saccarosio di cinque giorni di prova (Vedi punto 5) e una prova di campo aperto (vedere il passaggio 6).

3. induzione di depressione in topi

Nota: Per indurre la depressione, i topi del gruppo di modello e due gruppi di trattamento hanno subito CUMS per 21 giorni¹⁸. Il piano può essere modificato secondo la situazione pratica, ma il principio che il fattore di stress stesso non può essere usato continuamente deve essere seguito.

1. Esporre i topi al giorno per due dei seguenti sette fattori di sforzo per 21 giorni consecutivi¹⁹. Il nostro piano di modellazione è progettato come segue:
   1. Il lunedì, esporre topi per deprivazione alimentare (vuoto il feed di ogni gabbia per 24 h, 8:00 a 8:00) e la privazione dell'acqua (rimuovere la bottiglia bevente di ogni gabbia per 24 h, 8:00 a 8:00).
   2. Martedì, esporre topi per lo sforzo del fermo (trattenga topi in una piccola vasca di plastica per 3 h, 8:00 a 11:00) e gabbie vuote (rimuovere l'imbottitura in ogni gabbia per h 11, 8:00 alle 19:00 p.m.).
   3. Il mercoledì, esporre topi per gabbie bagnati e sporchi (versare l'acqua in ogni gabbia e mantenere umido per 24 h, 8:00 a 8:00) e affollata gabbie (mettere cinque topi in una gabbia per 24 h, 8:00 alle 08:00 del mattino).
   4. Il giovedì, esporre topi per lo sforzo del fermo e piscina ghiacciata^20,21 (forza ogni mouse per nuotare in un acquario di vetro trasparente con acqua ghiacciata per 5 min).
   5. Il venerdì, esporre topi di gabbie bagnate e sporche e la privazione di cibo.
   6. Il sabato, esporre topi per lo sforzo del fermo e gabbie affollate.
   7. Domenica, esporre topi di gabbie vuote e piscina ghiacciata.
2. Registrare il cappotto dello stato e del peso corporeo ogni settimana fino alla fine della modellazione (giorno 21). Calcolare il punteggio totale dello stato cappotto come la somma dei punteggi da sette diverse parti del corpo: testa, collo, dorsale cappotto, cappotto ventrale, zampe anteriori, coda e zampe posteriori. Un punteggio di uno indica un cappotto ben curato, e un punteggio pari a zero indica un cappotto arruffato²².
3. Eseguire un test di preferenza di saccarosio di cinque giorni (Vedi punto 5) e una prova di campo aperto (vedere il passaggio 6) alla fine dell'esperimento.

4. amministrazione di Xiaoyaosan

Nota: La dose di Xiaoyaosan (0,25 g/kg/giorno) è stato selezionato sulla base della sua efficacia soddisfacente come descritto in precedenza⁹.

1. Durante l'esperimento, utilizzare acqua distillata per preparare le sospensioni Xiaoyaosan e fluoxetina e assicurarsi di utilizzare immediatamente.
2. Dare 0,5 mL di acqua distillata per i topi nel gruppo di controllo e gruppo di modello di amministrazione intragastrica ogni giorno prima di modellazione. Nel frattempo, dare Xiaoyaosan (0,25 g/kg/giorno) o fluoxetina (2,6 mg/kg/giorno) per i topi in due gruppi di trattamento.

5. saccarosio preferenza Test

Nota: Nessuna privazione di acqua o cibo è stata applicata prima del test. Il protocollo è stato effettuato come precedentemente segnalato²³.

1. I primi due giorni, casa individualmente i topi con due bottiglie riempite con acqua del rubinetto.
2. Nei prossimi due giorni, dare i topi due bottiglie riempite con 1% di soluzione di saccarosio.
3. L'ultimo giorno, dare i topi due bottiglie per 24 h, una con acqua di rubinetto e l'altra con 1% di soluzione di saccarosio. Per eliminare una preferenza di lato dei topi nel comportamento del bere, cambiare la posizione delle due bottiglie dopo 12 h.
4. Registrare il volume (mL) di soluzione di saccarosio consumato sia acqua di rubinetto. Calcolare la preferenza di saccarosio come segue: preferenza di saccarosio (%) = consumo di saccarosio/totale consumo liquido × 100%.

6. campo prova

1. Eseguire la prova in loco aperta in una stanza scarsamente illuminata e tranquilla con una quattro lati nera lusterless scatola di legno. Dividere il pavimento in 25 quadrati uguali da linee blu.
2. Pulire la casella campo aperto con 5% di alcol prima l'accesso di ogni mouse. Quindi, posizionare il mouse al centro del campo aperto delicatamente.
3. Sospendere un ad alta definizione fotocamera digitale circa 200 cm proprio sopra il campo e registrare il comportamento di ogni mouse per 5 min.
4. Valutare il video comportamentale di topi mediante il software di sistema di video-monitoraggio e registrare i dati del totale in esecuzione di distanza e il numero di voci nella zona centro.
5. Analizzare i dati della distanza totale spostato e il numero di voci nella zona centro di software statistico.

Risultati

Si noti che i risultati sono stati pubblicati in precedenza da Dr. Xiu-Fang Ding, et al. ¹⁸

I dati sono stati espressi come media ± errore standard della media (SEM). Un one-way ANOVA o un test non parametrico è stato utilizzato per dati generali sulla base del test di normalità e il test di omogeneità della varianza. Il test di LSD è stato utilizzato per i confronti tra gruppi. Inoltre, il ...

Discussione

Il modello CUMS utilizzato in questo studio è un metodo comune per stabilire il modello di diatesi stress di depressione²⁴. La maggior parte delle manifestazioni di CUMS possono essere ripristinate da farmaci antidepressivi, che hanno indicato che questo metodo di modello ha una forte validità predittiva²⁵. Da questo metodo, gli animali ricevono stimoli stressanti imprevedibili cronici e sviluppano sintomi di depressione, compresa la diminuzione posto preferenza condizion...

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
Chinese Herbs	Tongrentang (Bozhou, AnHui) Decoction Pieces Limited Company	-	The drugs were extracted by the Chinese medicine preparation room of the China-Japan Friendship Hospital, distilled water was used to prepare the suspension of Xiaoyaosan, and the dose was 0.25 g/kg/d.
Fluoxetine	PATHEON FRANCE	5545A	The distilled water was used to prepare the suspension of fluoxetine, and the dose 2.6 mg/kg/d.
C57BL/6j mice	Beijing Vital River of the Charles River Company	SCXK 2011-0004	60 healthy male C57BL/6J mice aged 12 weeks were purchased from Beijing Vital River of the Charles River Company.
Mouse cage	Styling Biotechnology	34853016	318×202×135 mm
Distilled Water	-	-	The water was used througout the experiment.
Sucrose	Sigma	-	The sucrose was used in the sucrose preference test to prepare 1% sucrose solution.
ACS-2EAS Electronic Balance	Beijing Hengzhongheng Electronic Technology Co., Ltd.	-	It was used to weigh the avoirdupois of mice at different stages.
Wooden Black Lusterless Box	-	-	(40 cm x 40 cm x 15 cm), divided into 25 equal squares by blue lines.
WV-CP470 Camera	Panasonic, Japan	-	A HD digital camera which was used for recording the whole process of the open field test.
Etho Vision 3.0 Software	Noldus, Wageningen, Holland	-	A video-tracking system which was used to evaluate the locomotor function and emotionality of mice.
SPSS Statistics 21.0 Software	IBM	-	SPSS 21.0 software was used to analyze the data, one-way ANOVA or non-parametric test was used for general data based on normality test and homogeneity test for variance, and LSD method was adopted for the comparisons between groups.
Graphpad Prism 6.0 Software	Graphpad Software,Inc.USA	-	Graphpad Prism 6.0 software was used to draw statistical graphs.