הערכת אפקט אנטי-דיכאון של Xiaoyaosan על עכברים הדגיש באופן כרוני

Summary

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להקים דגם דיכאון העכבר, להתבונן השינויים הקשורים עם מתח כרוני בלתי צפוי מתון (CUMS), ולהעריך את אפקט אנטי-דיכאון של Xiaoyaosan.

Abstract

בנוסף לשימוש מתוקננת של תרופות נוגדות דיכאון, פסיכותרפיה, השימוש של הרפואה הסינית המסורתית יש להוביל שיפור כללי של חולים עם הפרעת דיכאון (MDD). לכן, מטרת מחקר זה היה כדי לבסס מודל דיכאון העכבר, לבחון את השינויים בהתנהגות המשויך מתח כרוני בלתי צפוי מתון (CUMS) ואז להעריך את השפעת נגד דיכאון Xiaoyaosan. עכברים חולקו באופן אקראי ארבע קבוצות: קבוצת ביקורת, קבוצת מודל, קבוצת הטיפול עם Xiaoyaosan, קבוצת טיפול עם פלואוקסטין. כל העכברים הוחזקו בנפרד בתוך כלובים, דיכאון הסחרור הושפע בעכברים לחשוף אותם מספר מניפולציות מעוצב של CUMS במשך 21 ימים, כמפורט בפרוטוקול. עכברים בתוך קבוצת הביקורת וקבוצת מודל התקבל 0.5 מ ל מים מזוקקים, בעוד עכברים בקבוצות הטיפול התקבל גם Xiaoyaosan (0.25 g/ק"ג/יום) או פלואוקסטין (2.6 מ"ג/ק"ג/יום). תרופות המשמשות במחקר נמסרו intragastrically מדי יום במהלך כל ימי בין המצרים. כדי להעריך התנהגויות כמו דיכאון, סדרה של פרמטרים כולל המדינה את המעיל, משקל גוף, פתח את הציון בבחינה שדה ולאחר סוכרוז העדפה תוצאת המשחק נרשמו. ניתוח הנתונים הראה כי התנהגויות של מודל עכברים שונו באופן משמעותי בהשוואה התנהגויות של עכברים בקבוצת הביקורת, אשר שופרו על ידי הטיפול של Xiaoyaosan ו פלואוקסטין. הממצאים הנוכחיים הפגינו את ההשפעות האנטי-דיכאון של Xiaoyaosan על ההתנהגויות של עכברים CUMS-induced וגילה כי תרכובות מן המרשם Xiaoyaosan עשוי להיות משתלם לטיפול בדיכאון, בהתחשב שלהם השפעות מועילות על התנהגויות כמו דיכאון.

Introduction

MDD היא מחלה נפשית כרונית, מאוד חוזרים ונשנים כי מתנות עם מצב רוח נמוך מתמיד, דיכאון, דימוי עצמי נמוך, פיגור שכלי, אובדן של עניין, הפרעות שינה, נטיות עמוקות פסימי או נטיות אובדניות; זה גרם נזק רב בריאות האדם וייצוב חברתית¹. זה הפך לאחד בעולם הגורם העיקרי של נכות, זה עשוי להיות אחד הגורמים המובילים העיקריים של המחלה נטל 2030 על פי ארגון הבריאות העולמי^2,3. כיום, תרופות נוגדות דיכאון ופסיכותרפיה נחשבים להיות הבחירה הראשונה לטיפול MDD. עם זאת, מספר עצום של חולים שאובחנו עם MDD אינם מגיבים רציפה תרופה או טיפול, הם רשומים כבעלי לטיפול בדיכאון עמיד⁴.

Xiaoyaosan הוא קלאסי הסינית מתחם⁵ זה כבר בשימוש נרחב לטיפול במחלות פסיכולוגי במשך אלפי שנים מאז שושלת סונג ב סין⁶. הוא מורכב של צמחי מרפא סיניים 8: בסיס Bupleuri, אלבה Paeoniae בסיס, בסיס Angelicae סיננסיס, פוריה, Rhizoma Atractylodis Macrocephalae, בסיס Glycyrrhizae, Rhizoma Zingiberis Recens , ו Menthae כפית. Xiaoyaosan מכיל את המרכיבים מרובים, יש מטרות מרובות, והוא מנצל מסלולים מספר⁷. Xiaoyaosan הוכח בדרך כלל להיות נוסחה בטוח ויעיל לטיפול בהפרעות הקשורות נפשי מחלות שונות, מחקרים מודרניים התמקדו גם מנגנון אנטי-דיכאון זה מתחם^{8,9, 10}. בפתוגנזה של MDD עדיין לא ברור, למרות שישנם בעלי תכונות רבגוניות השערות, לרבות ההנחה מונואמין ההשערה קולטן עצבי, ההשערה שינוי פונקציה נוירואנדוקריניים, ההנחה חריגות המערכת החיסונית, ועוד. מספר מחקרים הראו כי השפעת נוגדות דיכאון Xiaoyaosan יש קשר עם חומרים בסיסי של ה^11,לעיל השערות¹², את תעודות המשלוח פעולה טיפולית כמו שיפור, כמו דיכאון התנהגויות¹³.

יתר על כן, עם השכיחות של דיכאון, החברה המודרנית סובלת הפחתות כוח העבודה הפנסיה המוקדמת, טיפולים יקרים¹⁴. טיפולים יקרים זקוק לטיפול רפואי קפדני, מה שאומר מגוון של הוצאות רפואיות מוגברת ואת הציפייה מדויק של תוצאות בלתי רצויות מדויקת, כמו גם תופעות לוואי¹⁵. הרב סיני Xiaoyaosan יש רכיבים נגיש, אפקטים ייחודיים, תופעות לוואי קלה. היישום שלה יכול לשחק תפקיד להפחתת הנטל של טיפול רפואי מודרני. לכן, כדי לספק בסיס תיאורטי יותר של יישום Xiaoyaosan, טיפולים קליניים צריך להיות מוצעים לטיפול בדיכאון, השכיחות של אשר גדל שנה אחר שנה, צריך לשפר את בריאות האדם בו זמנית. מאמר זה מתאר פרוטוקול הכרוכות של Xiaoyaosan כדי למנוע התנהגויות כמו דיכאון על-ידי יצירת המודל דיכאון של העכבר. בדיקת שדה פתוח, ובדיקה העדפה של סוכרוז שימשו כדי לאמת את השפעות נוגדות דיכאון Xiaoyaosan.

Protocol

פרוטוקול זה אושרה על ידי ועדת האתיקה בעלי חיים של אוניברסיטת בייג'ינג של הרפואה הסינית, על פי הנחיות כל טיפול, שימוש של מעבדה החיות של סין. שם היה שום מצב מוות מתאונה במהלך ההליך ניסיוני, ללא בעלי צורך להרדימם במחקר זה.

1. מכינים את הסמים לניסוי.

הערה: צמחי מרפא סינים היו שנרכשו, מכן מאומתים על-ידי ד ר ליאו ב' של אוניברסיטת בייג'ינג ברפואה הסינית. Xiaoyaosan מכיל הבאים שמונה מסורתית סינית הסמים על יחס של 6:6:6:6:3:6:2:2: סיננסיס Angelicae בסיס, בסיס Paeoniae אלבה, פוריה, Bupleuri בסיס, בסיס Glycyrrhizae, Rhizoma Atractylodis Macrocephalae, כפית Menthae, Rhizoma Zingiberis Recens.

1. להכין Xiaoyaosan כפי שתואר לעיל¹⁶.
   הערה: שלפנו את תרכובות אלו בחדר הכנה רפואה סינית של החולים לידידות סין-יפן, התשואה החילוץ היה 18.8%.
2. ודא שאיכות Xiaoyaosan מאת מסות כרומטוגרפיה נוזלית ביצועים גבוהים ניתוח (LC-MS/MS)¹⁷.

2. הכנת עכברים בהליך ניסיוני

הערה: לקבלת ההליך ניסיוני, 60 בריא זכר C57BL/6J עכברים בגיל 12 שבועות נבחרו, עם כל לעכבר השוקל בין 18 ו- 22 g.

1. מחזיקים עכברים בנפרד בתוך כלובים בחדר טיפוסי ספציפי פתוגן חינם (SPF) מעבדה בבעלי חיים (22 ± 1 ° C, h 12 h/12 מחזור כהה/אור, לחות יחסית: 30-40%) למשך שבוע לפני ההליך CUMS.
2. לחלק באופן אקראי עכברים כל קבוצת ביקורת, קבוצת מודל, קבוצת טיפול Xiaoyaosan או קבוצת הטיפול פלואוקסטין לפי משקל הגוף שלהם. לכל קבוצה יש 15 עכברים.
3. לפני תחילתן של הניסוי, מספר העכברים בכל קבוצה על הזנב באמצעות עט סימון.
4. לבדוק כל עכברים באמצעות מבחן העדפה חמישה ימים סוכרוז (עיין שלב 5) ולאחר מבחן שדה פתוח (עיין שלב 6).

3. אינדוקציה של דיכאון אצל עכברים

הערה: כדי לגרום לדיכאון, העכברים בקבוצה מודל וקבוצות טיפול שני עברה CUMS על 21 ימים¹⁸. ניתן לשנות את התוכנית בהתאם למצב מעשית, אך צריכה להיות מלווה את העיקרון כי הלחץ אותו לא יכול לשמש באופן רציף.

1. לחשוף עכברים מדי יום כדי שכל שניים גורמי שבע הבאים עבור 21 ימים רצופים¹⁹. התוכנית דוגמנות שלנו מיועד כדלקמן:
   1. ביום שני, לחשוף עכברים מניעת מזון (ריק ההזנה של כל כלוב במשך 24 שעות, 8:00 בבוקר עד 8:00 בבוקר), מניעת מים (להסיר בקבוק שתיה של כל כלוב במשך 24 שעות, 8:00 בבוקר עד 8:00 בבוקר).
   2. ביום שלישי, לחשוף עכברים איפוק מתח (עכברים מגבילות באמבט פלסטיק קטן עבור h 3, 8:00 בבוקר עד 11:00), כלובים ריק (להסיר הריפוד בכלוב כל עבור 11 ה', 8:00 בבוקר עד 19:00 בערב).
   3. ביום רביעי, לחשוף עכברים לכלובים המלוכלכים ורטובה (שופך מים לתוך כל הכלוב ולשמור רטוב במשך 24 שעות, 8:00 בבוקר עד 8:00 בבוקר) וצפוף הכלובים (לשים חמש עכברים בכלוב אחד במשך 24 שעות, 8:00 בבוקר עד 8:00 בבוקר).
   4. ביום חמישי, חושפים את העכברים של איפוק מצוקה שחיה קרה כקרח^20,21 (כוח אחד העכבר כדי לשחות בתוך אקווריום זכוכית שקופה עם קרח מים במשך 5 דקות).
   5. ביום שישי, לחשוף עכברים הכלובים המלוכלכים ורטובה, מניעת מזון.
   6. ביום שבת, חושפים את העכברים של איפוק מצוקה בכלובים צפופים.
   7. ביום ראשון, לחשוף עכברים הכלובים ריק, שחיה קרה כקרח.
2. להקליט את המשקל של המדינה ואת הגוף המעיל שבועיות עד סוף דוגמנות (21 יום). לחשב את הציון הכולל של המדינה המעיל כסכום של ציונים מחלקי גוף שונים 7: הראש, הצוואר, הגבי המעיל, המעיל הגחון, forepaws, זנב, ואת כפות הרגליים האחוריות. ציון של אחד מציין מעיל מטופחים, ומציין ציון של אפס של המעיל מסורקות²².
3. לבצע בדיקה העדפה חמישה ימים סוכרוז (עיין שלב 5) ולאחר מבחן שדה פתוח (עיין שלב 6) בסוף הניסוי.

4. ניהול Xiaoyaosan

הערה: את המינון של Xiaoyaosan (0.25 g/ק"ג/יום) נבחר על בסיס יעילותה משביע רצון כפי שתואר לעיל⁹.

1. במהלך הניסוי, להשתמש במים מזוקקים להכין את המתלים Xiaoyaosan ו פלואוקסטין, הקפד להשתמש מיד.
2. לתת 0.5 מ ל מים מזוקקים העכברים קבוצת הביקורת, קבוצה של מודל על ידי המינהל intragastric כל יום לפני דוגמנות. בינתיים, תן Xiaoyaosan (0.25 g/kg/יום) או פלואוקסטין (2.6 מ"ג/ק"ג/יום) כדי העכברים בקבוצות טיפול שני.

5. סוכרוז העדפת מבחן

הערה: אין אוכל או מים מניעת הוחל לפני המבחן. הפרוטוקול בוצע כפי שדווחה בעבר²³.

1. שני הימים הראשונים, בית העכברים בנפרד שני בקבוקים מלאים במי ברז.
2. על היומיים הבאים, תן העכברים שני בקבוקים מלאים 1% סוכרוז פתרון.
3. ביום האחרון, לתת העכברים שני בקבוקים עבור 24 שעות ביממה, אחת עם מים מהברז, והשני עם 1% סוכרוז פתרון. כדי למנוע העדפה לצד של העכברים בשתייה התנהגות, לעבור את המיקום של שני בקבוקים לאחר 12 שעות.
4. שיא הנפח (mL) של סוכרוז נצרך פתרון והן מי ברז. לחשב את ההעדפה סוכרוז כדלקמן: העדפה סוכרוז (%) = סוכרוז הצריכה/סה כ צריכת נוזלים × 100%.

6. בדיקת שדה פתוח

1. לבצע ניסוי השדה פתוח בחדר מואר באור עמום ושקט עם ארבעה צדדים שחור הרקובות תיבה מעץ. לחלק floor של ריבועים שווים 25 על ידי קווים כחולים.
2. נקה תיבת בשדה פתוח עם 5% אלכוהול לפני הגישה של כל עכבר. אז, במקום העכבר במרכז המגרש בעדינות.
3. להשעות ס"מ מצלמה דיגיטלית כ-200 הגדרה גבוהה מעל השדה, לתעד את אופן הפעולה של כל העכבר במשך 5 דקות.
4. להעריך את הוידאו התנהגותית של עכברים על ידי תוכנת מערכת מעקב וידאו ולהקליט את הנתונים של הסכום הכולל הפעלה מרחוק ומספר הערכים לאזור המרכז.
5. לנתח את הנתונים של המרחק הכולל עברה, מספר הערכים לאזור מרכז בתוכנות סטטיסטיות.

תוצאות

שים לב לכך שהתוצאות פורסמו בעבר על ידי ד ר סיו-פנג דינג, et al. ¹⁸

הנתונים היו לבטא זאת אומרת ± שגיאת התקן של הממוצע (SEM). חד-כיווני אנובה או מבחן ללא פרמטרי שימש נתונים כלליים בהתבסס על הבדיקה נורמליות ואת המבחן עבור ההומוגניו?...

Discussion

המודל CUMS השתמשו במחקר זה היא שיטה נפוצה להקמת הדגם diathesis מתח של דיכאון²⁴. ניתן לשחזר רוב גילויי CUMS על-ידי תרופות נוגדות דיכאון, אשר ציין כי שיטה זו מודל יש תוקף ניבוי חזק של²⁵. בשיטה זו, חיות לקבל כרונית בלתי צפוי לגירויים מלחיצים ולפתח הליבה סימפטומים של דיכאון, לרבו?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Chinese Herbs	Tongrentang (Bozhou, AnHui) Decoction Pieces Limited Company	-	The drugs were extracted by the Chinese medicine preparation room of the China-Japan Friendship Hospital, distilled water was used to prepare the suspension of Xiaoyaosan, and the dose was 0.25 g/kg/d.
Fluoxetine	PATHEON FRANCE	5545A	The distilled water was used to prepare the suspension of fluoxetine, and the dose 2.6 mg/kg/d.
C57BL/6j mice	Beijing Vital River of the Charles River Company	SCXK 2011-0004	60 healthy male C57BL/6J mice aged 12 weeks were purchased from Beijing Vital River of the Charles River Company.
Mouse cage	Styling Biotechnology	34853016	318×202×135 mm
Distilled Water	-	-	The water was used througout the experiment.
Sucrose	Sigma	-	The sucrose was used in the sucrose preference test to prepare 1% sucrose solution.
ACS-2EAS Electronic Balance	Beijing Hengzhongheng Electronic Technology Co., Ltd.	-	It was used to weigh the avoirdupois of mice at different stages.
Wooden Black Lusterless Box	-	-	(40 cm x 40 cm x 15 cm), divided into 25 equal squares by blue lines.
WV-CP470 Camera	Panasonic, Japan	-	A HD digital camera which was used for recording the whole process of the open field test.
Etho Vision 3.0 Software	Noldus, Wageningen, Holland	-	A video-tracking system which was used to evaluate the locomotor function and emotionality of mice.
SPSS Statistics 21.0 Software	IBM	-	SPSS 21.0 software was used to analyze the data, one-way ANOVA or non-parametric test was used for general data based on normality test and homogeneity test for variance, and LSD method was adopted for the comparisons between groups.
Graphpad Prism 6.0 Software	Graphpad Software,Inc.USA	-	Graphpad Prism 6.0 software was used to draw statistical graphs.