Kronik vurguladı fareler üzerindeki Xiaoyaosan anti-depresyon etkisini değerlendirmek

Özet

Burada, fare depresif modeli kurmak, kronik öngörülemeyen hafif stres (CUMS) ile ilgili davranış değişiklikleri gözlemlemek ve Xiaoyaosan anti-depresyon etkisini değerlendirmek için bir protokol mevcut.

Özet

Antidepresan ilaçlar ve psikoterapi standartlaştırılmış kullanımı yanı sıra, geleneksel Çin tıbbı kullanımı major depresif bozukluk (MDD) hastalarda genel bir iyileşme çıkarmıştır. Bu nedenle, bu çalışmanın amacı fare depresif modeli kurmak, kronik öngörülemeyen hafif stres (CUMS) ile ilgili davranış değişiklikleri gözlemlemek ve Xiaoyaosan anti-depresyon etkisini değerlendirmek oldu. Fareler rasgele dört gruba ayrıldı: bir kontrol grubu, bir model grubu, Xiaoyaosan ile tedavi grubu ve tedavi grubunda Fluoksetin ile. Bütün fareler ayrı ayrı kafeslerde tutuldu ve depresyon fareler CUMS birkaç tasarlanmış manipülasyonlar için 21 gün boyunca açarak iletişim kuralında tanımlandığı gibi akımıdır. Kontrol grubu ve model grubu farelerde alınan 0.5 mL distile su, farelerde tedavi grupları ya Xiaoyaosan almış (0, 25 g/kg/gün) veya Fluoksetin (2.6 mg/kg/gün). Çalışmada kullanılan ilaçlar tüm üç hafta boyunca her gün intragastrically verildi. Depresif-gibi davranışları tahmin etmek için dahil olmak üzere ceket devlet, vücut ağırlığı, parametreleri bir dizi açık alan sınav sonucu ve sükroz tercih sınav sonucu kaydedildi. Veri Analizi fareler önemli ölçüde değiştirilmiş olan modeli davranışlarını kontrol grubunda Xiaoyaosan ve Fluoksetin tedavisi tarafından düzeldi fareler davranışlarını kıyasla gösterdi. Mevcut bulgular CUMS kaynaklı fareler davranışlarını Xiaoyaosan anti-depresyon etkileri gösterdi ve bileşikleri Xiaoyaosan reçete üzerinde yararlı etkileri göz önüne alındığında depresyon tedavisi için faydalı olabilir ortaya depresif-gibi davranışları.

Giriş

MDD kalıcı düşük ruh, depresyon, düşük benlik saygısı, mental retardasyon, ilgi, kaybı hediyelerle uyku bozuklukları, son derece kötümser veya intihar eğilimleri kronik, son derece tekrarlayan bir ruhsal hastalıktır; insan sağlığı ve sosyal istikrar¹büyük zarar neden oldu. Engellilik dünyanın başlıca nedeni biri olmuştur ve Dünya Sağlık Örgütü^2,3göre 2030 hastalık yükü önde gelen ana nedenlerinden biri olabilir. Şu anda, antidepresan ilaçlar ve psikoterapi MDD tedavisi için ilk seçim olarak kabul edilir. Yine de, MDD ile tanısı hastaların çok büyük bir sayı sürekli ilaç veya tedavi için yanıt vermeyen ve tedaviye dirençli depresyon⁴sahip olarak listelenir.

Xiaoyaosan yaygın olarak Song Hanedanı Çin⁶yıldır binlerce psikolojik hastalıkları tedavi etmek için kullanılan bir Klasik Çince bileşik⁵ ' tir. 8 Çince otlar oluşmaktadır: Radix Bupleuri, Radix Paeoniae Alba, Radix Angelicae Sinensis, Poria, Rhizoma Atractylodis Macrocephalae, Radix Glycyrrhizae, Rhizoma Zingiberis Recens ve Herba Menthae. Xiaoyaosan birden fazla bileşenleri içeren, birden çok hedefi olan ve birden çok yolları⁷kullanır. Xiaoyaosan yaygın olarak çeşitli hastalıklar ile ilgili zihinsel bozuklukları tedavisi için güvenli ve etkili bir formülü için gösterilmiştir ve modern çalışmalarda da bu bileşik^{8,9anti-depresyon mekanizması üzerinde odaklanmıştır, 10}. MDD patogenezinde henüz monoamin hipotez, nörotransmitter reseptör hipotez, nöroendokrin işlev değişikliği hipotez, bağışıklık sistemi anormallik hipotez de dahil olmak üzere çeşit çeşit hipotezler olsa bile belirsizdir, vb. Xiaoyaosan antidepresan etkisi depresif benzeri bir gelişme olarak yukarıdaki hipotezler^11,12ve onun terapötik eylem bildirimlerinin malzeme üsleri ile bağlantısı olan çeşitli çalışmalar göstermiştir davranışları¹³.

Ayrıca, depresyon yaygınlığı ile modern toplumun indirimleri iş gücü, erken emeklilikler ve pahalı tedaviler¹⁴gelen acı çekti. Pahalı tedavi anlamına gelir a sıra-in artan sağlık maliyetleri ve hassas beklentisiyle kesin istenmeyen sonuçlar gibi yan etkileri¹⁵katı tıbbi yardıma ihtiyacı var. Çince ot Xiaoyaosan erişilebilir bileşenler, benzersiz efektler ve hafif yan etkileri vardır. Uygulama modern tıbbi tedavi yükünün azaltılmasında bir rol oynayabilir. Bu nedenle, Xiaoyaosan uygulama için daha fazla teorik bir temel sağlamak için alternatif bir klinik tedavi depresyon, geçen yıl, hangi artar insidansı tedavisi için sunulan ve aynı zamanda insan sağlığı geliştirmek gerekir. Bu kağıt fare depresif modeli kurarak depresif-gibi davranışları önlemek için Xiaoyaosan kullanımını içeren bir protokolü açıklar. Açık alan testi ve sükroz tercih test Xiaoyaosan antidepresan etkileri doğrulamak için kullanılmıştır.

Protokol

Bu iletişim kuralı Çin tıbbı Pekin Üniversitesi hayvan Etik Komitesi tarafından kabul edildi ve bakım ve kullanım Laboratuvar hayvanları, Çin için bütün kuralları olduğunu. Deneysel bir işlem sırasında bir kaza sonucu ölüm durum yok oldu ve hiçbir hayvan bu çalışmada euthanized gerekiyordu.

1. uyuşturucu denemeye hazırlık

Not: Çince otlar satın aldım ve sonra Dr. B. Liu tarafından Çin tıbbı Pekin Üniversitesi kimliği. Xiaoyaosan içeren aşağıdaki sekiz geleneksel Çin ilaçları 6:6:6:6:3:6:2:2 oranında: Radix Angelicae Sinensis, Radix Paeoniae Alba, Poria, Radix Bupleuri, Radix Glycyrrhizae, Rhizoma Atractylodis Macrocephalae, Herba Menthae ve Rhizoma Zingiberis Recens.

1. Xiaoyaosan yukarıda açıklanan¹⁶olarak hazırlayın.
   Not: Bu bileşiklerin Çin Japonya dostluk Hastanesi Çin tıbbı hazırlık odasında aldığımız ve ayıklama verim %18,8 idi.
2. Xiaoyaosan kalitesi ile yüksek performanslı sıvı kromatografi-kütle spektrometresi analiz (LC-MS/MS)¹⁷doğrulayın.

2. deneysel bir işlem için fareler hazırlanması

Not: deneysel bir işlem için 60 sağlıklı erkek C57BL/6J fareler 12 hafta yaşlı, her fare arasında 18 ve 22 g ağırlığında ile seçildi.

1. Fareler ayrı ayrı bir odada tipik belirli patojen ücretsiz (SPF) laboratuvar hayvan kafeslerde tutmak (22 ± 1 ° C, 12 h/12 h karanlık/ışık siklet, bağıl nem oranı: % 30-40) için bir hafta önce CUMS yordamı.
2. Rasgele bir kontrol grubu, bir model grubu, bir Xiaoyaosan tedavi grubunda veya fluoksetin tedavi grubuna göre kendi vücut ağırlığı tüm fareler bölün. Her grubun 15 fareler vardır.
3. Deneme başlanmasından önce fareler sıralamasında her grubun bir işaretleme kalemi onların kuyruk numaralı.
4. Bütün fareler bir beş günlük sükroz tercih testi kullanılarak test (adım 5'e bakın) ve bir açık alan testi (6. adıma bakın).

3. indüksiyon farelerde depresyon

Not: depresyon ikna etmek için model grubu ve iki tedavi grubu farelerde CUMS 21 gün¹⁸için uygulandı. Plan pratik duruma göre değiştirilebilir, ancak aynı tetikleyici sürekli olarak kullanılamaz prensibi takip edilmelidir.

1. Fareler her gün için aşağıdaki yedi stresler 21 gün üst üste¹⁹için herhangi iki maruz. Modelleme planımızı şekilde tasarlanmıştır:
   1. Pazartesi günü, fareler gıda yoksunluğu (boş her kafes için 24 h, 8:00-8:00 önce besleme) ve su yoksunluk (Kaldır her kafes için 24 h, 8:00-8:00 önce içme şişe) için maruz.
   2. Salı günü, fareler kısıtlama stres (3 h, 8:00-11:00 önce için küçük bir plastik küvette dizginlemek fareler) ve boş kafesleri (Kaldır her kafes için 11 h, sabah 08:00 19:00 için doldurma) için maruz.
   3. Çarşamba günü, fareler (dökün su içine her kafes ve 24 h, 8:00-8:00 önce ıslak tutmak) ıslak ve kirli kafesleri için ortaya çıkarmak ve kalabalık kafesleri (24 h, sabah 08:00 ile 8:00 arası için bir kafes içinde beş fare koymak).
   4. Perşembe günü, fareler kısıtlama stres ve buz gibi yüzme^20,21 (her fare ile buzlu su 5 min için açık cam akvaryum yüzmeyi kuvvet) için maruz.
   5. Cuma günü, fareler ıslak ve kirli kafesleri ve gıda yoksunluğu için maruz.
   6. Cumartesi günü, fareler kısıtlama stres ve kalabalık kafesleri için maruz.
   7. Pazar günü, fareler boş kafes ve buz gibi yüzme için maruz.
2. Kat devlet ve vücut ağırlığı (21 gün) modelleme haftalık sonuna kadar kayıt. Yedi farklı vücut parçaları gelen puanları toplamı olarak kat devletin toplam puan hesaplamak: baş, boyun, sırt ceket, ventral ceket, forepaws, kuyruk ve arka paws. Bir puan bir su kuyusu-damat ceket ve sıfır puan bir dağınık kat²²gösterir.
3. Beş günlük sükroz tercih testi (adım 5'e bakın) ve bir açık alan testi (6. adıma bakın) Deney sonunda.

4. Xiaoyaosan İdaresi

Not: Xiaoyaosan doz (0, 25 g/kg/gün) yukarıda açıklanan⁹olarak tatmin edici onun etkinliği temelinde seçildi.

1. Deneme sırasında distile su Xiaoyaosan ve Fluoksetin süspansiyonlar hazırlamak ve hemen kullanmak emin olmak için kullanın.
2. İntragastric yönetimi modelleme önce her gün tarafından kontrol grubu ve model grubu farelerde için 0.5 mL distile su verin. Bu arada, Xiaoyaosan vermek (0, 25 g/kg/gün) veya Fluoksetin (2.6 mg/kg/gün) iki tedavi grupları fareler için.

5. sükroz tercih Test

Not: Hiçbir su veya gıda yoksunluğu önce test uygulandı. Protokol daha önce bildirilen²³gerçekleştirildi.

1. İlk iki gün üzerinde fareyi tek tek musluk suyuyla dolu iki şişe ile ev.
2. Sonraki iki gün, iki şişe % 1 sükroz çözüm ile dolu fareler ver.
3. Son gününde, fareler için 24 saat, bir musluk suyu ve %1 sükroz çözüm ile diğer iki şişe verin. Yan tercih farelerin davranış içme içinde ortadan kaldırmak için sonra 12 h iki şişe konumunu geçin.
4. Tüketilen sükroz çözüm ve musluk suyu hacmi (mL) kaydedin. Sükroz tercih aşağıdaki gibi hesaplar: sükroz tercih (%) = sükroz tüketimi/toplam sıvı tüketimi × %100.

6. açık alan testi

1. Bir dört kenarlı ahşap siyah fersiz kutusu ile loş ışıklı ve sessiz bir odada açık alan testi gerçekleştirin. floor mavi çizgilerle 25 eşit kareler halinde bölün.
2. %5 alkol erişim önce her fare yer aldığı açık alanlı kutuyu temizleyin. O zaman, fareyi hafifçe açık alanın ortasına yerleştirin.
3. Yüksek çözünürlüklü dijital fotoğraf makinesi yaklaşık 200 cm alanının üstünde askıya alma ve 5 min için her fare davranışını kaydedin.
4. Fareler davranış video video izleme sistem yazılımı tarafından değerlendirmek ve mesafe ve orta bölge içine girdi sayısı toplam verilerini kaydeder.
5. Toplam mesafe taşındı ve orta bölge içine girdi sayısı istatistiksel yazılım tarafından çözümleyebilirsiniz.

Sonuçlar

Not sonuçları daha önce Dr Xiu-Fang Ding, et al. tarafından yayınlanmış ¹⁸

Veri (SEM) ortalama ortalama ± standart hatasını ifade edildi. Bir tek yönlü ANOVA veya bir non-parametrik test normallik test ve varyans polimerlerin sınava dayalı genel veriler için kullanıldı. LSD testi gruplar arasında karşılaştırmalar için kullanıldı. Buna ek olarak, genel Doğrusal model (GLM...

Tartışmalar

Bu çalışmada kullanılan CUMS depresyon²⁴stres Diyatez modelini kurmak için kullanılan genel yöntem modelidir. Çoğu CUMS belirtileri bu modeli Yöntem güçlü akıllı geçerlilik²⁵vardır belirtilen antidepresan ilaçlar tarafından geri yüklenebilir. Bu yöntem tarafından hayvanlar kronik öngörülemeyen stresli uyaran almak ve azalan yer tercih Klima, anhedonia ve Engelli duygu gibi davranışları²⁶gibi majör depresyon belirtileri ç...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Chinese Herbs	Tongrentang (Bozhou, AnHui) Decoction Pieces Limited Company	-	The drugs were extracted by the Chinese medicine preparation room of the China-Japan Friendship Hospital, distilled water was used to prepare the suspension of Xiaoyaosan, and the dose was 0.25 g/kg/d.
Fluoxetine	PATHEON FRANCE	5545A	The distilled water was used to prepare the suspension of fluoxetine, and the dose 2.6 mg/kg/d.
C57BL/6j mice	Beijing Vital River of the Charles River Company	SCXK 2011-0004	60 healthy male C57BL/6J mice aged 12 weeks were purchased from Beijing Vital River of the Charles River Company.
Mouse cage	Styling Biotechnology	34853016	318×202×135 mm
Distilled Water	-	-	The water was used througout the experiment.
Sucrose	Sigma	-	The sucrose was used in the sucrose preference test to prepare 1% sucrose solution.
ACS-2EAS Electronic Balance	Beijing Hengzhongheng Electronic Technology Co., Ltd.	-	It was used to weigh the avoirdupois of mice at different stages.
Wooden Black Lusterless Box	-	-	(40 cm x 40 cm x 15 cm), divided into 25 equal squares by blue lines.
WV-CP470 Camera	Panasonic, Japan	-	A HD digital camera which was used for recording the whole process of the open field test.
Etho Vision 3.0 Software	Noldus, Wageningen, Holland	-	A video-tracking system which was used to evaluate the locomotor function and emotionality of mice.
SPSS Statistics 21.0 Software	IBM	-	SPSS 21.0 software was used to analyze the data, one-way ANOVA or non-parametric test was used for general data based on normality test and homogeneity test for variance, and LSD method was adopted for the comparisons between groups.
Graphpad Prism 6.0 Software	Graphpad Software,Inc.USA	-	Graphpad Prism 6.0 software was used to draw statistical graphs.