消炎散对慢性应激小鼠的抗抑郁作用评价

摘要

本文提出了建立小鼠抑郁模型的方案, 观察了与慢性不可预测轻度应激 (cums) 相关的行为变化, 并评价了消炎散的抗抑郁作用。

摘要

除了标准化使用抗抑郁药物和心理治疗外, 中药的使用还使严重抑郁症 (mdd) 患者得到了全面改善。因此, 本研究的目的是建立小鼠抑郁模型, 观察慢性不可预测轻度应激 (cums) 的行为变化, 进而评价消炎散的抗抑郁作用。将小鼠随机分为四组: 对照组、模型组、消炎散治疗组和氟西汀治疗组。所有的老鼠都被单独关在笼子里, 按照协议的描述, 通过让老鼠接触 cums 的几次设计操作 2 1天, 导致了抑郁。对照组和模型组的小鼠接受0.5 毫升的蒸馏水, 而治疗组的小鼠接受消炎药 (0.25 g/kg/day) 或氟西汀 (2.6 mg g day)。在整个三周内, 研究中使用的药物每天都会被非法给予。为了估计抑郁样行为, 记录了涂层状态、体重、开放场测试分数、蔗糖偏好测试分数等一系列参数。数据分析表明, 与对照组小鼠行为相比, 模型小鼠的行为发生了显著变化, 通过小糖和氟西汀的治疗得到了改善。目前的研究结果表明 , 消炎散对诱导的小鼠行为有抗抑郁作用 , 并表明小黄散处方中的化合物对治疗抑郁可能是值得的 , 因为它们对小药散对小鼠的影响是有益的。令人沮丧的行为。

引言

mdd 是一种慢性、高度复发的精神疾病, 具有持续情绪低落、抑郁、自卑、智力迟钝、失去兴趣、睡眠障碍、极度悲观或自杀倾向;它对人类健康和社会稳定造成了极大的危害^.根据世界卫生组织^{2、3 的}数据, 到 2030年, 残疾已成为世界上主要的残疾原因之一, 可能是疾病负担的主要原因之一。目前, 抗抑郁药物和心理治疗被认为是治疗 mdd 的首选。然而, 大量被诊断为 mdd 的患者对持续的药物或治疗没有反应, 他们被列为有耐治疗抑郁症 4.

消炎山是中国经典化合物 5,自中国宋代以来, 已被广泛用于治疗心理疾病.它由8种中草药组成:金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、甘草、甘草、黄连、 黄连、黄连、黄连、黄连、黄连、黄连、黄连、黄连、黄连、黄连、黄连、黄连、 黄连、黄连、黄连、黄连、黄连、黄连、黄连、黄连、黄连、黄连、黄连、黄连、黄连、黄连、黄连、黄连、黄连、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花, 和赫巴·门泰。小山含有多种成分, 有多个靶点, 并利用多种途径⁷。消炎散已被普遍证明是一种安全有效的治疗各种疾病的治疗与精神障碍有关的配方, 现代研究也集中在^{这种化合物的}抗抑郁机制 8^{,9, 10个}。mdd 的发病机制尚不清楚, 尽管有多种假设, 包括单胺假说、神经递质受体假说、神经内分泌功能变化假说、免疫系统异常假说,等。几项研究表明, 消炎散的抗抑郁作用与上述 11^{、12 的}物质基础有关, 其治疗作用表现为对抑郁样的改善行为¹³。

此外, 随着抑郁症的盛行, 现代社会受到劳动力减少、提前退休和昂贵治疗的影响.昂贵的治疗需要严格的医疗护理, 这意味着一系列增加的医疗费用和精确预测准确的不良结果以及副作用 15.中草药消药具有易获得的成分、独特的效果和轻微的副作用。它的应用可以为减轻现代医疗负担发挥作用。因此, 为消炎散的应用提供更多的理论依据, 应提供一种替代临床治疗抑郁症的方法, 其发病率逐年增加, 同时应改善人体健康。本文介绍了一种利用消炎山防止抑郁行为的方案, 建立了小鼠的抑郁模型。采用野外试验和蔗糖偏好试验验证了消药散的抗抑郁作用。

研究方案

该议定书得到了北京中医药大学动物伦理委员会的批准, 并符合中国实验动物护理和使用的所有准则。在实验过程中没有意外死亡情况, 也不需要在本研究中对动物进行安乐死。

1. 为实验准备药物

注: 中草药是由北京中医药大学刘博士购买并进行鉴定的。小药散含有以下八种中药, 比例为 6:6: 6: 3: 6:2: 2: 2: 当归、白杨、百合、甘草、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、金银花、甘草、甘草、甘草、大黄、大黄、大黄、大黄Zingiberis reens,。

1. 准备小耀山, 如前所述的¹⁶。
   注: 我们在中日友谊医院的中药制剂室提取了这些化合物, 提取率为18.8%。
2. 用高效液相色谱-质谱分析 (lc-msms)^检验消炎散的质量。

2. 为实验程序准备小鼠

注: 在实验过程中, 选择了 60只12周的健康雄性 c57bl/6j 小鼠, 每只小鼠体重在18至22克之间。

1. 将小鼠单独关在笼子中, 在典型的特定无病原体 (spf) 实验动物室 (22±1°c, 12小时暗/光循环, 相对湿度: 30-40%), 在 cums 程序之前一周。
2. 根据小鼠的体重, 将所有小鼠随机分为对照组、模型组、消炎散治疗组或氟西汀治疗组。每组有15只老鼠。
3. 在实验开始之前, 用标记笔对每组老鼠的尾巴进行编号。
4. 使用五天蔗糖偏好测试 (参见步骤 5) 和开放场测试 (参见步骤 6) 测试所有小鼠。

3. 小鼠抑郁症的诱发

注: 为了诱发抑郁症, 模型组和两个治疗组的小鼠接受 cums 21天^18天.该方案可以根据实际情况进行修改, 但应遵循同一压力源不能连续使用的原则。

1. 连续 21天¹⁹每天将老鼠暴露在以下7个压力源中的任何两个。我们的建模计划设计如下:
   1. 星期一, 使老鼠面临食物匮乏 (将每个笼子的饲料清空 24小时, 上午8:00 至上午 8:00) 和水的匮乏 (取出每个笼子的饮用水瓶 24小时, 上午8:00 至 8:00)。
   2. 周二, 让老鼠承受约束压力 (在小塑料盆中抑制老鼠 3小时, 上午8:00 至上午 11:00) 和空笼子 (取出每个笼子中的填充物 11小时, 上午8:00 至晚上 19:00)。
   3. 周三, 将老鼠暴露在潮湿和肮脏的笼子里 (倒水到每个笼子里, 凌晨8:00 至早上8点保持湿润) 和拥挤的笼子 (把5只老鼠放在一个笼子里, 24小时, 早上8点到早上 8点)。
   4. 周四, 让老鼠接触到约束压力和冰凉^{游泳 2 0岁、2 1日}(强迫每只老鼠在一个有冰水的透明玻璃水族馆里游泳 5分钟)。
   5. 上周五, 让老鼠接触到潮湿、肮脏的笼子和食物匮乏。
   6. 周六, 让老鼠接触到克制的压力和拥挤的笼子。
   7. 周日, 让老鼠接触空笼子和冰冷的游泳。
2. 每周记录外套状态和体重, 直到建模结束 (第21天)。计算涂层状态的总分作为分数之和, 来自七个不同的身体部位: 头部、颈部、背侧外套、腹侧外套、前爪、尾巴和后爪。分数为1表示衣冠楚楚, 零分表示外套不整洁.
3. 在实验结束时进行五天的蔗糖偏好测试 (请参阅步骤 5) 和开放的现场测试 (请参阅步骤 6)。

4. 小耀山的行政管理

注: 小糖的剂量是根据其令人满意的疗效选择的, 如前面^所述的9。

1. 在实验过程中, 用蒸馏水制备消炎散和氟西汀悬浮液, 并确保立即使用。
2. 在建模前每天通过胃内给药给对照组和模型组的小鼠提供0.5 毫升的蒸馏水。同时, 将消炎散 (0.25 g/kg/day) 或氟西汀 (2.6 mggg day) 给予两组小鼠。

5. 蔗糖偏好测试

注: 试验前不剥夺水或食物。该协议是按照先前报告的²³项进行的。

1. 在头两天, 用两瓶装满自来水的瓶子分别为老鼠提供住所。
2. 在接下来的两天里, 给老鼠两瓶装满 1% 蔗糖溶液的瓶子。
3. 最后一天, 给老鼠两瓶, 2 4小时, 一瓶用自来水, 另一瓶用 1% 的蔗糖溶液。为了消除老鼠在饮酒行为方面的侧面偏好, 在 1 2小时后切换两瓶的位置。
4. 记录所消耗的蔗糖溶液和自来水的体积 (ml)。计算蔗糖偏好如下: 蔗糖偏好 (%) = 蔗糖消费/液体总消耗量 x100%。

6. 开放场测试

1. 在灯光昏暗、安静的房间里, 用四边木制的黑色无毛盒子进行开放的现场测试。用蓝线把地板分成25个相等的正方形。
2. 在每只老鼠进入之前, 用5% 的酒精清洁开场箱。然后, 轻轻地将鼠标放在开放字段的中心。
3. 将高清数码相机悬挂在现场上方约200厘米处, 并记录每只鼠标的行为5分钟。
4. 利用视频跟踪系统软件对小鼠行为视频进行评估, 并将总运行距离和进入中心区域的条目数的数据记录出来。
5. 用统计软件分析进入中心区域的总距离和条目数量的数据。

结果

请注意, 研究结果此前已由丁秀芳博士等人公布.¹⁸

数据表示为均值 (sem) 的均值±标准误差。基于正态性测试和方差均匀性测试, 对一般数据采用了单向方差分析或非参数测试。lsd 测试用于组之间的比较。此外, 还利用一般线性模型 (glm) 的重复测量过程对重复测量数据 (外套得分和体重) 进行了单向方差?...

讨论

本研究中使用的 cums 模型是建立抑郁症 24^应力素质模型的常用方法。抗抑郁药物可以恢复大多数 cums 的表现, 表明该模型方法具有较强的预测有效性 25.通过这种方法, 动物接受慢性不可预知的压力刺激, 并发展为严重抑郁症的核心症状, 包括减少位置偏好条件, 厌食症, 和受损的情绪样行为²⁶。在本方案中, 根据实验结果, 连续使用消炎散或氟西汀...

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Chinese Herbs	Tongrentang (Bozhou, AnHui) Decoction Pieces Limited Company	-	The drugs were extracted by the Chinese medicine preparation room of the China-Japan Friendship Hospital, distilled water was used to prepare the suspension of Xiaoyaosan, and the dose was 0.25 g/kg/d.
Fluoxetine	PATHEON FRANCE	5545A	The distilled water was used to prepare the suspension of fluoxetine, and the dose 2.6 mg/kg/d.
C57BL/6j mice	Beijing Vital River of the Charles River Company	SCXK 2011-0004	60 healthy male C57BL/6J mice aged 12 weeks were purchased from Beijing Vital River of the Charles River Company.
Mouse cage	Styling Biotechnology	34853016	318×202×135 mm
Distilled Water	-	-	The water was used througout the experiment.
Sucrose	Sigma	-	The sucrose was used in the sucrose preference test to prepare 1% sucrose solution.
ACS-2EAS Electronic Balance	Beijing Hengzhongheng Electronic Technology Co., Ltd.	-	It was used to weigh the avoirdupois of mice at different stages.
Wooden Black Lusterless Box	-	-	(40 cm x 40 cm x 15 cm), divided into 25 equal squares by blue lines.
WV-CP470 Camera	Panasonic, Japan	-	A HD digital camera which was used for recording the whole process of the open field test.
Etho Vision 3.0 Software	Noldus, Wageningen, Holland	-	A video-tracking system which was used to evaluate the locomotor function and emotionality of mice.
SPSS Statistics 21.0 Software	IBM	-	SPSS 21.0 software was used to analyze the data, one-way ANOVA or non-parametric test was used for general data based on normality test and homogeneity test for variance, and LSD method was adopted for the comparisons between groups.
Graphpad Prism 6.0 Software	Graphpad Software,Inc.USA	-	Graphpad Prism 6.0 software was used to draw statistical graphs.