Evaluar el efecto del antidepresivo de Xiaoyaosan en ratones crónicamente destacó

Resumen

Aquí, presentamos un protocolo para establecer el modelo depresivo de ratón, observar los cambios de comportamiento asociados con el estrés crónico de leve impredecible (CUMS) y evaluar el efecto de la depresión de Xiaoyaosan.

Resumen

Además del uso estandarizado de medicamentos antidepresivos y la psicoterapia, el uso de la medicina tradicional China ha llevado a una mejora general de los pacientes con desorden depresivo importante (MDD). Por lo tanto, el propósito de este estudio fue establecer el modelo depresivo de ratón, observar los cambios de comportamiento asociados con el estrés crónico de leve impredecible (CUMS) y entonces evaluar el efecto de la depresión de Xiaoyaosan. Ratones fueron divididos aleatoriamente en cuatro grupos: un grupo control, grupo modelo, un grupo de tratamiento con Xiaoyaosan y un grupo de tratamiento con fluoxetina. Todos los ratones se mantuvieron individualmente en jaulas, y depresión fue inducida en los ratones exponiéndolas a varias manipulaciones diseñadas de CUMS por 21 días, como se describe en el protocolo. Ratones en el grupo modelo y grupo de control recibieron 0,5 mL de agua destilada, mientras que los ratones en los grupos de tratamiento recibieron ya sea Xiaoyaosan (0,25 g/kg/día) o fluoxetina (2,6 mg/kg/día). Los fármacos utilizados en el estudio recibieron intragástrica durante las tres semanas enteras. Estimar los comportamientos depresivos, una serie de parámetros como el estado de la capa, peso corporal, abren cuenta de prueba de campo, y se registraron puntaje de prueba de preferencia de sacarosa. Análisis de los datos demostraron que comportamientos del modelo ratones cambiaron significativamente compararon con el comportamiento de los ratones del grupo control, que fueron mejoradas por el tratamiento de Xiaoyaosan y fluoxetina. Los resultados actuales demostraron los efectos de la depresión de Xiaoyaosan en los comportamientos de los ratones inducido por CUMS y revelaron que compuestos a partir de la prescripción de Xiaoyaosan pueden ser valioso para tratar la depresión, teniendo en cuenta sus efectos beneficiosos en comportamientos depresivos.

Introducción

MDD es una enfermedad mental crónica, altamente recurrente que presenta con persistente estado de ánimo bajo, depresión, baja autoestima, retraso mental, pérdida de interés, dormir trastornos, tendencias profundamente pesimistas o suicidas; ha causado gran daño a la salud humana y de la estabilización social¹. Se ha convertido en una de la principal causa mundial de discapacidad, y puede ser una de las principales causas principales de morbilidad en el 2030 según la Organización Mundial de la salud^2,3. Actualmente, la psicoterapia y medicamentos antidepresivos se consideran la primera opción para el tratamiento de MDD. Sin embargo, un enorme número de pacientes diagnosticados con MDD no responde a la terapia o medicación continua, y aparecen como teniendo depresión resistente al tratamiento⁴.

Xiaoyaosan es un clásico chino compuesto⁵ que ha sido ampliamente utilizado para tratar enfermedades psicológicas durante miles de años desde la dinastía Song en China⁶. Está compuesto por 8 hierbas chinas: Radix Bupleuri, Radix Paeoniae Alba, Radix Angelicae Sinensis, Poria, Rhizoma Atractylodis Macrocephalae, Radix Glycyrrhizae, Rhizoma Zingiberis Recens y Herba Menthae. Xiaoyaosan contiene a varios componentes, tiene múltiples objetivos y utiliza varias vías⁷. Xiaoyaosan comúnmente ha demostrado ser una fórmula segura y efectiva para el tratamiento de diversos trastornos mentales relacionados con enfermedades, y estudios modernos se han centrado también en el mecanismo de la depresión de este compuesto^{8,9, 10}. La patogenia de la MDD es todavía confusa, aunque existen múltiples hipótesis, incluyendo la hipótesis de la monoamina, la hipótesis de receptores de neurotransmisores, la hipótesis de cambio de función neuroendocrina, la hipótesis de anormalidad del sistema inmune, etcetera. Varios estudios han demostrado que el efecto antidepresivo de Xiaoyaosan tiene una conexión con las bases materiales de la anterior hipótesis^11,12y se manifiesta de su acción terapéutica como una mejora al depresivo conductas¹³.

Por otra parte, con la prevalencia de la depresión, la sociedad moderna ha sufrido reducciones en la fuerza de trabajo, jubilaciones anticipadas y costosos tratamientos¹⁴. Tratamiento costoso necesita atención médica estricta, que significa una gama de aumento de los costos médico y previsión precisa de precisos resultados indeseables, así como efectos secundarios¹⁵. La hierba China Xiaoyaosan tiene componentes accesibles, efectos únicos y leves efectos secundarios. Su aplicación puede jugar un papel en la reducción de la carga del tratamiento médico moderno. Por lo tanto, para proporcionar una base más teórica a la aplicación de Xiaoyaosan, una terapia alternativa clínica debe ofrecerse para el tratamiento de la depresión, la incidencia de que aumenta año tras año y debe mejorar la salud humana al mismo tiempo. Este papel describe un protocolo que implica el uso de Xiaoyaosan para prevenir los comportamientos depresivos, estableciendo el modelo depresivo del ratón. La prueba de campo abierto y prueba de preferencia de sacarosa fueron utilizados para verificar los efectos antidepresivos de la Xiaoyaosan.

Protocolo

Este protocolo fue aprobado por el Comité de ética Animal de la Universidad de Beijing de Medicina China y estaba de acuerdo con todas las pautas para el cuidado y uso de animales de laboratorio de China. No hubo ninguna situación de muerte accidental durante el procedimiento experimental, y no animales debían ser sacrificados en este estudio.

1. preparación de medicamentos para el experimento

Nota: Las hierbas chinas fueron compradas y luego authenticadas por Dr. B. Liu de la Universidad de Beijing de Medicina China. Xiaoyaosan contiene los siguientes medicamentos chinos tradicionales ocho en una proporción de 6:6:6:6:3:6:2:2: Radix Angelicae Sinensis, Radix Paeoniae Alba, Poria, Radix Bupleuri, Radix Glycyrrhizae, Rhizoma Atractylodis Macrocephalae, Herba Menthae y Rhizoma Zingiberis Recens.

1. Preparar Xiaoyaosan como se describió anteriormente¹⁶.
   Nota: Se extrajeron estos compuestos en la sala de preparación de Medicina China del Hospital de amistad China-Japón, y el rendimiento de la extracción fue de 18.8%.
2. Verificar la calidad de Xiaoyaosan de alto rendimiento cromatografía líquida-espectrometría de análisis (LC-MS/MS)¹⁷.

2. preparación de ratones para el procedimiento Experimental

Nota: Para el procedimiento experimental, 60 saludables ratones machos de la C57BL/6J de 12 semanas de edad se seleccionaron, con cada ratón pesa entre 18 y 22 g.

1. Mantener los ratones individualmente en jaulas en un típico cuarto animales de laboratorio Free de patógeno específico (SPF) (22 ± 1 ° C, ciclo de 12 h/12 h luz/oscuridad, humedad relativa: 30 – 40%) una semana antes del procedimiento CUMS.
2. Dividir todos los ratones, al azar, un grupo de control, un grupo de modelo, un grupo de tratamiento de Xiaoyaosan o un grupo de tratamiento de fluoxetina según su peso corporal. Cada grupo tiene 15 ratones.
3. Antes de la iniciación de la experiencia, número de los ratones de cada grupo en su cola con una pluma de marca.
4. Todos los ratones con una prueba de preferencia de sacarosa de cinco días de prueba (consulte el paso 5) y una prueba de campo abierto (consulte el paso 6).

3. inducción de la depresión en ratones

Nota: Para inducir a la depresión, los ratones del grupo modelo y dos grupos de tratamiento experimentaron CUMS para 21 días¹⁸. El plan se puede cambiar según la situación práctica, pero se debe respetar el principio de que el mismo factor estresante no puede utilizarse continuamente.

1. Exponga los ratones diariamente a dos de los siguientes siete estresores días consecutivos 21¹⁹. Nuestro plan de modelado está diseñada como sigue:
   1. El lunes, exponer ratones con carencia de alimentos (vacía la alimentación de cada jaula durante 24 h, 8:00 a 8:00) y privación de agua (quitar la botella de consumición de cada jaula durante 24 h, 8:00 a 8:00).
   2. El martes, exponer ratones con tensión de seguridad (refrene ratones en una bañera de plástico pequeña para 3 h, 8:00 a 11:00) y jaulas vacías (quitar el acolchado en cada jaula para h 11, 8:00 a 19:00 p.m.).
   3. El miércoles, exponer ratones en jaulas húmedas y sucias (Vierta el agua en cada jaula y mantenga mojado durante 24 h, 8:00 a 8:00) y jaulas (poner cinco ratones en una jaula durante 24 h, 8:00 a 8:00 a.m.).
   4. El jueves, exponer ratones con estrés de moderación y piscina helada^20,21 (fuerza cada ratón para nadar en un acuario de cristal con agua con hielo durante 5 minutos).
   5. El viernes, exponer ratones en jaulas húmedas y sucias y la carencia de alimentos.
   6. El sábado, exponer ratones con estrés de moderación y llenos jaulas.
   7. El domingo, exponer ratones jaulas vacías y piscina helada.
2. Grabar el escudo estatal y el peso corporal semanalmente hasta el final del modelado (día 21). Calcular la puntuación total del estado de capa como la suma de puntuaciones de siete partes diferentes del cuerpo: cabeza, cuello, dorsal capa, capa ventral, patas delanteras, la cola y las patas traseras. Una puntuación de uno indica una capa bien cuidada, y una puntuación de cero indica una capa desarreglado²².
3. Realizar una prueba de preferencia de cinco días de sacarosa (véase paso 5) y una prueba de campo abierto (consulte el paso 6) al final del experimento.

4. administración de Xiaoyaosan

Nota: La dosis de Xiaoyaosan (0,25 g/kg/día) fue seleccionado sobre la base de su eficacia satisfactoria como se describió previamente⁹.

1. Durante el experimento, utilizar agua destilada para preparar las suspensiones Xiaoyaosan y fluoxetina y asegúrese de utilizar de inmediato.
2. Dar 0.5 mL de agua destilada a los ratones en el grupo control y grupo modelo administración intragástrica cada día antes de modelado. Mientras tanto, dan Xiaoyaosan (0,25 g/kg/día) o fluoxetina (2,6 mg/kg/día) a los ratones en los dos grupos de tratamiento.

5. Test de preferencia de sacarosa

Nota: No hay privación de agua o alimentos se aplicó antes de la prueba. El protocolo fue realizado como previamente divulgados²³.

1. En los dos primeros días, la casa los ratones individualmente con dos botellas llenados con agua del grifo.
2. En los próximos dos días, dan los ratones dos botellas llenan con solución de sacarosa al 1%.
3. El último día, dan los ratones dos botellas para 24 h, uno con agua del grifo y el otro con solución de sacarosa al 1%. Para eliminar una preferencia del lado de los ratones en comportamiento de beber, cambiar la posición de las dos botellas después de 12 h.
4. Registrar el volumen (mL) de agua y la solución de sacarosa consumida. Calcular la preferencia de sacarosa como se indica a continuación: preferencia de sacarosa (%) = sacarosa total consumo de consumo de líquido x 100%.

6. campo prueba

1. Realizar la prueba de campo abierto en una sala tenuemente iluminada y tranquila con una cuatro negro mate caja de madera. El suelo se dividen en 25 cuadrados iguales por líneas azules.
2. Limpie la caja de campo abierto con 5% de alcohol antes del acceso de cada ratón. Luego, coloque el ratón en el centro del campo abierto suavemente.
3. Suspender una alta definición digital cámara aproximadamente 200 cm sobre el campo y registrar el comportamiento de cada ratón durante 5 minutos.
4. Evaluar el vídeo del comportamiento de ratones por el software de sistema de seguimiento de video y grabar los datos del total funcionamiento distancia y número de entradas en la zona centro.
5. Analizar los datos de la distancia total se movió y número de entradas en la zona central de software estadístico.

Resultados

Tenga en cuenta que los resultados hayan sido publicados previamente por el Dr. Ding Xiu Fang, et al. ¹⁸

Los datos se expresaron como media ± error estándar de la media (SEM). Un ANOVA de una vía o una prueba no paramétrica fue utilizada para datos generales basados en la normalidad y la prueba de homogeneidad de varianza. La prueba LSD se utilizó para las comparaciones entre grupos. Además...

Discusión

El modelo CUMS utilizado en este estudio es un método común para establecer el modelo de diátesis de estrés de depresión²⁴. Más manifestaciones de la CUMS pueden restaurarse por antidepresivos, lo que indicaron que este método de modelo tiene una fuerte validez predictiva²⁵. Por este método, animales reciben estímulos estresantes impredecibles crónica y síntomas principales de la depresión mayor, como menor lugar preferencia acondicionado, anhedonia y comportami...

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
Chinese Herbs	Tongrentang (Bozhou, AnHui) Decoction Pieces Limited Company	-	The drugs were extracted by the Chinese medicine preparation room of the China-Japan Friendship Hospital, distilled water was used to prepare the suspension of Xiaoyaosan, and the dose was 0.25 g/kg/d.
Fluoxetine	PATHEON FRANCE	5545A	The distilled water was used to prepare the suspension of fluoxetine, and the dose 2.6 mg/kg/d.
C57BL/6j mice	Beijing Vital River of the Charles River Company	SCXK 2011-0004	60 healthy male C57BL/6J mice aged 12 weeks were purchased from Beijing Vital River of the Charles River Company.
Mouse cage	Styling Biotechnology	34853016	318×202×135 mm
Distilled Water	-	-	The water was used througout the experiment.
Sucrose	Sigma	-	The sucrose was used in the sucrose preference test to prepare 1% sucrose solution.
ACS-2EAS Electronic Balance	Beijing Hengzhongheng Electronic Technology Co., Ltd.	-	It was used to weigh the avoirdupois of mice at different stages.
Wooden Black Lusterless Box	-	-	(40 cm x 40 cm x 15 cm), divided into 25 equal squares by blue lines.
WV-CP470 Camera	Panasonic, Japan	-	A HD digital camera which was used for recording the whole process of the open field test.
Etho Vision 3.0 Software	Noldus, Wageningen, Holland	-	A video-tracking system which was used to evaluate the locomotor function and emotionality of mice.
SPSS Statistics 21.0 Software	IBM	-	SPSS 21.0 software was used to analyze the data, one-way ANOVA or non-parametric test was used for general data based on normality test and homogeneity test for variance, and LSD method was adopted for the comparisons between groups.
Graphpad Prism 6.0 Software	Graphpad Software,Inc.USA	-	Graphpad Prism 6.0 software was used to draw statistical graphs.