Оценка антидепрессивное воздействие Xiaoyaosan на хронически подчеркнул мышей

Здесь мы представляем протокол к создать модель мыши депрессивное, наблюдать изменения поведения, связанные с хроническим стрессом непредсказуемым мягкая (КОНЧАЕТ) и оценить антидепрессивное действие Xiaoyaosan.

Аннотация

Помимо стандартных использование антидепрессантов и психотерапии использование традиционной китайской медицины привело к общему улучшению больных с большого депрессивного расстройства (MDD). Таким образом цель данного исследования – создать модель мыши депрессивное, наблюдать изменения поведения, связанные с хроническим стрессом непредсказуемым мягкая (КОНЧАЕТ) и затем оценить антидепрессивное действие Xiaoyaosan. Мышей случайно были разделены на четыре группы: группу управления, модель группу, группу лечения с Xiaoyaosan и группу лечения флуоксетином. Все мыши хранились отдельно в клетках, и депрессии были наведены в мышей, подвергая их несколько разработанных манипуляции КОНЧАЕТ на 21 дней, как описано в протоколе. Мышей в контрольной группе и группе моделей получил 0,5 мл дистиллированной воды, а мышей в группах лечения либо Xiaoyaosan (0,25 г/кг/день) или флуоксетин (2,6 мг/кг/день). Препараты, используемые в исследовании были даны intragastrically ежедневно в течение всего три недели. Для оценки депрессии как поведения, ряд параметров, включая состояние пальто, вес тела, открыть поле тест оценка, и сахароза предпочтение тест оценка были записаны. Анализ данных показал, что поведение модели мышей значительно изменились по сравнению с поведение мышей в контрольной группе, которые были улучшены в лечении Xiaoyaosan и флуоксетин. Текущие результаты продемонстрировали антидепрессивное воздействие Xiaoyaosan на поведение КОНЧАЕТ индуцированной мышей и показал, что соединений от Xiaoyaosan рецепт может быть worthwhile для лечения депрессии, учитывая их благотворное воздействие на депрессивно подобное поведение.

Введение

MDD является хроническим, высоко периодических психическое заболевание, что подарки с стойких низкой настроения, депрессия, низкая самооценка, умственной отсталости, потеря интереса, расстройства сна, глубоко пессимистично или суицидальные тенденции; Это вызвало большой вред для здоровья человека и социальной стабилизации¹. Он стал одним из основной причиной инвалидности в мире, и это может быть одним из основных ведущих причин заболеваний к 2030 году по данным Всемирной организации здравоохранения²^,³. В настоящее время чтобы быть первым выбором для лечения MDD считаются антидепрессантов и психотерапии. Тем не менее огромное количество пациентов с диагнозом MDD не реагировать на непрерывное лекарства или терапии, и они перечислены как имеющие устойчивостью лечения депрессии⁴.

Xiaoyaosan это классический китайский составные⁵ , которая широко используется для лечения психологических заболеваний для тысяч лет, начиная с династии Сун в Китае⁶. Она состоит из 8 китайских трав: Radix Bupleuri, Radix Paeoniae Альба, Radix Angelicae Sinensis, Poria, Корневище Atractylodis Macrocephalae, Radix Glycyrrhizae, корневище имбиря Recens и Herba Menthae. Xiaoyaosan содержит несколько компонентов, имеет несколько целей и использует несколько путей⁷. Xiaoyaosan обычно доказано, чтобы быть безопасным и эффективным формулы для лечения различных заболеваний по причине психических расстройств, и современные исследования были сосредоточены также на механизм Анти Депрессия это соединение⁸^,⁹^, ¹⁰. Патогенез MDD еще неясно, даже несмотря на то, что есть разнообразных гипотез, включая моноаминооксидазы гипотеза, гипотеза рецептор нейротрансмиттера, нейроэндокринная функция изменения гипотеза, аномалия гипотезу иммунной системы, и т.д. Несколько исследований показали, что антидепрессивный эффект Xiaoyaosan имеет связь с материальной базы выше гипотезы¹¹^,¹², и манифестах терапевтического действия как улучшение депрессивно как ¹³поведения.

Кроме того с преобладанием депрессии, современное общество страдает от сокращения рабочей силы, досрочного выхода на пенсию и дорогостоящее лечение¹⁴. Дорогостоящее лечение требует строгой медицинской помощи, что означает диапазон роста медицинских расходов и точные ожидание точного нежелательные результаты, а также побочные эффекты¹⁵. Китайские травы Xiaoyaosan имеет доступные компоненты, уникальные эффекты и незначительные побочные эффекты. Его применение может играть определенную роль в уменьшении бремени современной медицинской помощи. Таким образом более теоретической основой для применения Xiaoyaosan, альтернативной клинической терапии должны быть предложены для лечения депрессии, число которых увеличивается с каждым годом и в то же время следует улучшить здоровье человека. Этот документ описывает протокол с использованием Xiaoyaosan для предотвращения депрессивно как поведения, создав депрессивные модель мыши. Открытое поле тест и тест сахарозы предпочтения были использованы для проверки антидепрессивное действие Xiaoyaosan.

протокол

Этот протокол был одобрен Комитетом животных этики Пекинский университет китайской медицины и соответствовало все рекомендации по уходу и использованию лабораторных животных Китая. Была не случайной смерти ситуация во время экспериментальной процедуры, а не животных необходимо быть умерщвлены в этом исследовании.

1. подготовка препаратов для эксперимента

Примечание: Китайские травы были приобретены и затем удостоверена д-р B. Лю Пекинский университет китайской медицины. Xiaoyaosan содержит следующие восемь традиционные китайские препараты в соотношении 6:6:6:6:3:6:2:2: Radix Angelicae Sinensis, Radix Paeoniae Альба, Poria, Radix Bupleuri, Radix Glycyrrhizae, корневище Atractylodis Macrocephalae, Herba Menthae и корневище Имбиря Recens.

Подготовка Xiaoyaosan как описано¹⁶.
Примечание: Мы извлекли этих соединений в комнате подготовка китайской медицины в больнице дружбы Китай-Япония, и извлечение урожайность составила 18,8%.
Проверьте качество Xiaoyaosan высокой производительности жидкого хроматография масс-спектрометрия анализ (LC-MS/MS)¹⁷.

2. Подготовка мышей для экспериментальной процедуры

Примечание: Для экспериментальной процедуры, 60 здоровых самцов мышей C57BL/6J в возрасте 12 недель были отобраны, с каждой мыши, весом от 18 до 22 g.

Держать мышь индивидуально в клетках в типичном зале животных Лаборатория конкретных патогеном бесплатно (SPF) (22 ± 1 ° C, 12 h/12 h темно/свет цикла, относительная влажность: 30-40%) за одну неделю до процедуры не КОНЧАЕТ.
Случайным образом Разделите всех мышей на группу управления, модель группы, Xiaoyaosan группы лечения или флуоксетин лечения согласно их веса тела. Каждая группа имеет 15 мышей.
До начала эксперимента число мышей в каждой группе по их хвост с помощью пера маркировки.
Проверить все мыши с помощью теста предпочтение 5 дневный сахарозы (см. шаг 5) и открытом поле тест (см. шаг 6).

3. индукция депрессии у мышей

Примечание: Чтобы вызвать депрессию, мышей в группе модель и две группы лечения прошли КОНЧАЕТ для 21 дней¹⁸. План может быть изменен согласно практической ситуации, но должен соблюдаться принцип, что же стресса нельзя использовать постоянно.

Разоблачить мышей ежедневно в любых двух из следующих семи стресс для 21 дней подряд¹⁹. Наш план моделирования разработана следующим образом:
1. В понедельник разоблачить мышей лишение пищи (пустой канал каждой клетке за 24 ч, 8:00 утра до 8:00) и лишение воды (удаление питьевая бутылка каждой клетке за 24 ч, 8:00 утра до 8:00).
2. Во вторник разоблачить мышей сдержанность стресс (задержите мышей в небольшой пластиковый ванной для 3 h, 8:00 утра до 11:00) и пустые клетки (удаление поля в каждой клетке для 11 h, 8:00 до 19:00 часов).
3. В среду, разоблачить мышей для влажных и загрязненные клетки (налить воду в каждой клетке и держать влажной за 24 ч, 8:00 утра до 8:00) и переполненных клетках (поставить пять мышей в одной клетке за 24 ч, 8:00 утра до 8:00 утра).
4. В четверг разоблачить мышей сдержанность стресс и ледяной плавательный²⁰^,²¹ (силы каждой мыши, чтобы плавать в аквариуме прозрачного стекла с ледяной водой для 5 мин).
5. В пятницу разоблачить мышей для влажных и загрязненные клетки и лишение пищи.
6. В субботу разоблачить мышей сдержанность стресс и переполненных клетках.
7. В воскресенье разоблачить мышей в пустые клетки и ледяной бассейн.
Запись пальто состояния и массы тела за неделю до конца моделирования (21 день). Рассчитать общий балл пальто государства как сумма баллов от семи различных частей тела: головы, шеи, спинной пальто, пальто брюшины, передними лапами, хвост и задние лапы. Оценка одного указывает ухоженные пальто, а ноль баллов неопрятный пальто²².
Выполнить тест 5 дневный сахарозы предпочтения (см. шаг 5) и открытом поле тест (см. шаг 6) в конце эксперимента.

4. Администрация Xiaoyaosan

Примечание: В дозе Xiaoyaosan (0,25 г/кг/день) был выбран на основе ее удовлетворительной эффективности как описано⁹.

В ходе эксперимента используйте дистиллированную воду для подготовки Xiaoyaosan и флуоксетин суспензий и убедитесь в том использовать немедленно.
Дать 0,5 мл дистиллированной воды для мышей в контрольной группе и группе моделей внутрижелудочного администрацией каждый день до моделирования. Тем временем, дать Xiaoyaosan (0,25 г/кг/день) или флуоксетин (2,6 мг/кг/день) для мышей в двух группах.

5. сахароза предпочтение тест

Примечание: Нет воды или пищи лишение был применен до начала испытания. Как сообщалось ранее²³была исполнена протокол.

В первые два дня Дом мышей индивидуально с двумя бутылками с водопроводной водой.
На следующих двух дней дают мышей, две бутылки заполнены с 1% раствором сахарозы.
В последний день дают мышей двух бутылок за 24 часа, один с водопроводной водой и другой с 1% раствором сахарозы. Чтобы устранить предпочтение стороне мышей в питьевой поведение, включите положение две бутылки через 12 ч.
Фиксируют объем (мл) раствора потребления сахарозы и водопроводной воды. Рассчитать сахарозы предпочтение следующим: сахароза предпочтение (%) = сахарозы потребления/общее потребление жидкости × 100%.

6. открытые поля тест

Выполните тест открытого поля в тускло освещенной и тихий номер с 4 сторонняя деревянные черный матовый коробку. Разделите полу на 25 равных квадратов с синими линиями.
Очистите открытое поле с 5% спирта до доступ каждой мыши. Затем поместите курсор мыши в центре открытого поля аккуратно.
Приостановить на высокой четкости цифровой фотоаппарат примерно 200 см прямо над полем, запишите и поведение каждой мыши на 5 мин.
Оценить мышей поведенческих видео, видео слежения системного программного обеспечения и запись данных общее расстояние и количество записей в зоне центра.
Анализировать данные общее расстояние переехал и количество записей в зоне центра статистического программного обеспечения.

Результаты

Обратите внимание, что результаты были ранее опубликованы, д-р Дин Сю-фанг, et al. ¹⁸

Данные были высказаны как среднее ± Среднеквадратичная ошибка среднего значения (SEM). Односторонний дисперсионный анализ или непараметр?...

Обсуждение

КОНЧАЕТ модель, используемая в настоящем исследовании является распространенным методом установить модель диатез стресс депрессия²⁴. Большинство проявлений КОНЧАЕТ может быть восстановлен антидепрессантов, которые указали, что этот метод модель имеет сильный прогности?...

Раскрытие информации

Авторы не имеют ничего сообщать.

Благодарности

Это исследование было поддержано субсидии от национального естественных наук фонд Китая (№ 81630104, № 81473597) и фундаментальные исследования средств для университетов Центральной (№ 2018-JYBZZ-XS005). Протокол и результаты показали в этом документе происходит от статьи Участие из нормализованной глиальных фибриллово кислой выражение протеина в гиппокампах в Xiaoyaosan Antidepressant-Like эффекты на хронически подчеркнул мышей Dr. Сю Fang Дин, и др.

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Chinese Herbs	Tongrentang (Bozhou, AnHui) Decoction Pieces Limited Company	-	The drugs were extracted by the Chinese medicine preparation room of the China-Japan Friendship Hospital, distilled water was used to prepare the suspension of Xiaoyaosan, and the dose was 0.25 g/kg/d.
Fluoxetine	PATHEON FRANCE	5545A	The distilled water was used to prepare the suspension of fluoxetine, and the dose 2.6 mg/kg/d.
C57BL/6j mice	Beijing Vital River of the Charles River Company	SCXK 2011-0004	60 healthy male C57BL/6J mice aged 12 weeks were purchased from Beijing Vital River of the Charles River Company.
Mouse cage	Styling Biotechnology	34853016	318×202×135 mm
Distilled Water	-	-	The water was used througout the experiment.
Sucrose	Sigma	-	The sucrose was used in the sucrose preference test to prepare 1% sucrose solution.
ACS-2EAS Electronic Balance	Beijing Hengzhongheng Electronic Technology Co., Ltd.	-	It was used to weigh the avoirdupois of mice at different stages.
Wooden Black Lusterless Box	-	-	(40 cm x 40 cm x 15 cm), divided into 25 equal squares by blue lines.
WV-CP470 Camera	Panasonic, Japan	-	A HD digital camera which was used for recording the whole process of the open field test.
Etho Vision 3.0 Software	Noldus, Wageningen, Holland	-	A video-tracking system which was used to evaluate the locomotor function and emotionality of mice.
SPSS Statistics 21.0 Software	IBM	-	SPSS 21.0 software was used to analyze the data, one-way ANOVA or non-parametric test was used for general data based on normality test and homogeneity test for variance, and LSD method was adopted for the comparisons between groups.
Graphpad Prism 6.0 Software	Graphpad Software,Inc.USA	-	Graphpad Prism 6.0 software was used to draw statistical graphs.