Bewertung des Anti-Depressionen-Effekts des Xiaoyaosan auf chronisch gestresste Mäuse

Zusammenfassung

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um depressive Mausmodell zu etablieren, beobachten die Verhalten Veränderungen im Zusammenhang mit unvorhersehbaren milde Dauerstress (spritzt) und den Anti-Depressionen-Effekt von Xiaoyaosan zu bewerten.

Zusammenfassung

Neben dem standardisierten Einsatz von Antidepressiva und Psychotherapie hat die Nutzung der traditionellen chinesischen Medizin führen insgesamt zu einer Verbesserung von Patienten mit major Depression (MDD). Daher war der Zweck dieser Studie depressive Mausmodell zu etablieren, beobachten die Verhalten Veränderungen im Zusammenhang mit unvorhersehbaren milde Dauerstress (spritzt) und dann auswerten des Anti-Depressionen-Effekts des Xiaoyaosan. Mäuse wurden nach dem Zufallsprinzip in vier Gruppen eingeteilt: eine Kontrollgruppe, eine Modellgruppe Behandlungsgruppe mit Xiaoyaosan und Behandlungsgruppe mit Fluoxetin. Alle Mäuse wurden einzeln in Käfigen gehalten, und Depression wurde bei den Mäusen induziert durch Belichten sie mehrere gestaltete Manipulationen der CUMS für 21 Tage, wie im Protokoll beschrieben. Mäuse in der Kontrollgruppe und Model-Gruppe erhielt 0,5 mL destilliertem Wasser, während Mäuse in den Behandlungsgruppen entweder Xiaoyaosan erhielten (0,25 g/kg/Tag) oder Fluoxetin (2,6 mg/kg/Tag). In der Studie verwendeten Medikamente erhielten täglich während der gesamten drei Wochen intragastrically. Um die Depressive-ähnliche Verhaltensweisen einschätzen zu können, öffnen Sie eine Reihe von Parametern, einschließlich der Mantel stand, Körpergewicht, Feld-Test-Ergebnis und Saccharose Präferenz Testergebnis aufgenommen wurden. Analyse der Daten zeigte, dass Verhaltensweisen des Modells, die Mäuse wesentlich verändert wurden Verhalten der Mäuse in der Kontrollgruppe verglichen, die bei der Behandlung von Xiaoyaosan und Fluoxetin verbessert wurden. Die aktuellen Erkenntnisse Xiaoyaosan Anti-Depressionen Auswirkungen auf das Verhalten von Mäusen CUMS-induzierte demonstriert und gezeigt, dass Verbindungen aus dem Xiaoyaosan Rezept zur Behandlung von Depressionen, wenn man bedenkt ihre wohltuende Wirkung auf lohnen kann Depressive-ähnliche Verhaltensweisen.

Einleitung

MDD ist eine chronische, hoch wiederkehrende psychische Krankheit, Geschenke mit anhaltende Niedergeschlagenheit, Depressionen, geringes Selbstwertgefühl, geistige Retardierung, Verlust des Interesses,, zutiefst pessimistisch oder suizidale Tendenzen Schlafstörungen; Es hat großen Schaden für die Gesundheit und sozialen Stabilisierung¹verursacht. Es hat gewordenes der Welt Hauptursache für Behinderung und möglicherweise einer der wichtigsten Hauptursachen der Krankheitslast bis zum Jahr 2030 laut der Weltgesundheitsorganisation (WHO)^2,3. Derzeit sind Antidepressiva und Psychotherapie als die erste Wahl zur Behandlung von MDD sein. Dennoch eine enorme Anzahl von Patienten mit MDD reagieren nicht auf kontinuierliche Medikation oder Behandlung, und sie sind mit behandlungsresistenter Depression⁴aufgelistet.

Xiaoyaosan ist eine klassische chinesische Verbindung⁵ , die am meisten, zur Behandlung von psychischer Krankheiten seit Tausenden von Jahren seit der Song-Dynastie in China^{6 benutzt gewesen}. Es besteht aus 8 chinesische Kräuter: Radix Bupleuri Radix Paeoniae Alba, Radix Angelicae Sinensis, Poria, Rhizoma Atractylodis Macrocephalae, Radix Glycyrrhizae, Rhizoma Zingiberis Recens , und Herba Menthae. Xiaoyaosan enthält mehrere Komponenten, hat mehrere Ziele und nutzt mehrere Wege⁷. Xiaoyaosan ist häufig gezeigt, um eine sichere und wirksame Formel für die Behandlung von verschiedenen Krankheiten im Zusammenhang mit psychischen Erkrankungen sein, und moderne Studien konzentrierten sich auch auf die Anti-Depression-Mechanismus dieses zusammengesetzte^{8,9, 10}. Die Pathogenese der MDD ist noch unklar, obwohl es vielfältige Hypothesen gibt, einschließlich die Monoamin-Hypothese, die Neurotransmitter-Rezeptor-Hypothese, die neuroendokrine Funktion Änderung Hypothese, Immunsystem Anomalie Hypothese, Etc. Mehrere Studien haben gezeigt, dass die antidepressive Wirkung von Xiaoyaosan eine Verbindung mit der materiellen Grundlagen der oben genannten Hypothesen^11,12, und seine therapeutische Wirkung manifestiert sich als eine Verbesserung zu depressiv-like Verhaltensweisen¹³.

Darüber hinaus hat mit der Prävalenz von Depression, Rückgang der Arbeitskräfte, Frühpensionierungen und teure Behandlungen¹⁴modernen Gesellschaft litt. Teure Behandlung braucht strenge ärztliche Hilfe, die eine Reihe von erhöhten Behandlungskosten und genaue Vorwegnahme der präzise unerwünschte Ergebnisse sowie Nebenwirkungen¹⁵bedeutet. Das chinesische Kraut Xiaoyaosan hat zugänglichen Komponenten, einzigartige Effekte und leichte Nebenwirkungen. Seine Anwendung kann eine Rolle bei der Verringerung der Belastung der modernen medizinischen Behandlung. Daher, um eine mehr theoretische Grundlage für die Anwendung von Xiaoyaosan zu bieten, eine alternative klinische Therapie sollte zur Behandlung von Depressionen, die Inzidenz steigt von Jahr zu Jahr angeboten werden und sollte bei gleichzeitiger Verbesserung der menschlichen Gesundheit. Dieses Whitepaper beschreibt ein Protokoll unter Verwendung von Xiaoyaosan, depressiv-ähnliche Verhaltensweisen zu verhindern, indem Sie die depressive Modell der Maus zu etablieren. Die Freiland-Test und Saccharose Präferenz Test wurden verwendet, um die antidepressive Wirkung von Xiaoyaosan überprüfen.

Protokoll

Dieses Protokoll wurde von der tierischen Ethikkommission der Peking-Universität der chinesischen Medizin und wurde in Übereinstimmung mit allen Richtlinien für die Pflege und Nutzung des Labor Tiere von China. Es gab keine Unfalltod Situation während der Versuchsdurchführung und keine Tiere in dieser Studie eingeschläfert werden musste.

1. Vorbereitung Drogen für das Experiment

Hinweis: Die chinesische Kräuter wurden gekauft und dann von Dr. B. Liu von der Beijing University of Chinese Medicine authentifiziert. Xiaoyaosan enthält die folgenden acht traditionellen chinesischen Drogen in einem Verhältnis von 6:6:6:6:3:6:2:2: Radix Angelicae Sinensis Radix Paeoniae Alba, Poria, Radix Bupleuri, Radix Glycyrrhizae, Rhizoma Atractylodis Macrocephalae, Herba Menthae und Rhizoma Zingiberis Recens.

1. Bereiten Sie Xiaoyaosan als zuvor beschriebenen¹⁶.
   Hinweis: Wir extrahiert diese Verbindungen in der chinesischen Medizin Vorbereitungsraum des China-Japan Freundschaft Krankenhauses und die Extraktion-Rendite betrug 18,8 %.
2. Überprüfen Sie die Qualität des Xiaoyaosan durch leistungsstarke flüssige Chromatographie-Massenspektrometrie (LC-MS/MS) Analyse¹⁷.

2. Vorbereitung Mäuse für die Versuchsdurchführung

Hinweis: Für die Versuchsdurchführung wurden 60 gesunden männlichen C57BL/6J Mäuse im Alter von 12 Wochen, mit jeder Maus mit einem Gewicht zwischen 18 und 22 g ausgewählt.

1. Halten Sie Mäuse einzeln in Käfigen in eine typische spezifische Erreger frei (SPF) Labor Tierraum (22 ± 1 ° C, 12 h/12 h hell/dunkel-Zyklus, Relative Luftfeuchtigkeit: 30 – 40 %) für eine Woche vor dem Eingriff spritzt.
2. Nach dem Zufallsprinzip teilen Sie alle Mäuse in einer Kontrollgruppe, eine Modellgruppe, Xiaoyaosan Behandlungsgruppe oder Fluoxetin Behandlungsgruppe entsprechend ihres Körpergewichts. Jede Gruppe hat 15 Mäuse.
3. Vor Beginn des Experiments Nummer der Mäuse in den einzelnen Gruppen auf ihre Fersen mit einem Markierstift.
4. Alle Mäuse mit einem fünftägigen Saccharose-Präferenz-Test testen (siehe Schritt 5) und ein offenes Feld-Test (siehe Schritt 6).

(3) Induktion von Depression bei Mäusen

Hinweis: Um die Depression zu induzieren, erfuhr die Mäuse in der Model-Gruppe und zwei Behandlungsgruppen CUMS für 21 Tage¹⁸. Der Plan kann entsprechend der konkreten Situation geändert werden, aber das Prinzip der gleichen Stressor ständig verwendet werden sollten befolgt werden.

1. Mäuse, täglich um zwei beliebige der folgenden sieben Stressoren für 21 aufeinanderfolgenden Tagen¹⁹aussetzen. Unser Plan Modellierung ist folgendermaßen aufgebaut:
   1. Am Montag setzen Sie Mäuse zu Nahrungsmangel (leer den Feed jedes Käfigs für 24 h, 08:00 bis 08:00) und Wasserentzug (Entfernen der Trinkflasche jedes Käfigs für 24 h, 08:00 bis 08:00 aus).
   2. Am Dienstag setzen Sie Mäuse zu Zurückhaltung Stress (Restrain Mäuse in eine kleine Plastikwanne für 3 h, 08:00 bis 11:00) und leeren Käfige (entfernen Sie das Polster in jedem Käfig für 11 Uhr, 08:00 bis 19:00 Uhr aus).
   3. Am Mittwoch, Mäuse, nasse und verschmutzte Käfige (Gießen Sie Wasser in jedem Käfig und halten Sie feucht für 24 h, 08:00 bis 08:00) aussetzen und überfüllten Käfigen (legen fünf Mäuse in einem Käfig für 24 h, 08:00 bis 08:00 Uhr).
   4. Am Donnerstag setzen Sie Mäuse zu Zurückhaltung Stress und eiskalte schwimmen^20,21 (Kraft jeder Maus in ein klares Glas Aquarium mit eiskaltem Wasser für 5 min Schwimmen aus).
   5. Am Freitag setzen Sie Mäuse, nasse und verschmutzte Käfige und Nahrungsmangel aus.
   6. Am Samstag setzen Sie Mäuse zu Zurückhaltung Stress und überfüllten Käfigen aus.
   7. Am Sonntag setzen Sie Mäuse zu leeren Käfige und eiskalte Schwimmen aus.
2. Notieren Sie den Mantel Zustand und Körpergewicht wöchentlich bis zum Ende der Modellierung (Tag 21). Berechnen Sie die Gesamtpunktzahl des Bundestaates Mantel als der Summe der Punkte aus sieben verschiedenen Körperteile: Kopf, Hals, dorsale Fell, ventrale Fell, Vorderpfoten, Schweif und Hinterpfoten. Eine Punktzahl von eins kennzeichnet ein gepflegtes Fell und einen Wert von Null einen ungepflegten Mantel²².
3. Einen fünftägiges Saccharose Präferenz Test durchführen (siehe Schritt 5) und ein offenes Feld-Test (siehe Schritt 6) am Ende des Experiments.

4. Verwaltung des Xiaoyaosan

Hinweis: Die Dosis von Xiaoyaosan (0,25 g/kg/Tag) wurde auf der Grundlage seiner zufrieden stellende Wirksamkeit als zuvor beschriebenen⁹ausgewählt.

1. Während des Experiments verwenden Sie destilliertes Wasser bereiten die Xiaoyaosan und Fluoxetin Suspensionen, und stellen Sie sicher, sofort zu verwenden.
2. Geben Sie 0,5 mL destilliertem Wasser für die Mäuse in der Kontrollgruppe und Model-Gruppe von eines-Verwaltung jeden Tag vor der Modellierung. Unterdessen geben Xiaoyaosan (0,25 g/kg/Tag) oder Fluoxetin (2,6 mg/kg/Tag) für die Mäuse in den beiden Behandlungsgruppen.

(5) Saccharose Präferenz Test

Hinweis: Kein Wasser oder Nahrung Deprivation wurde vor dem Test angewendet. Das Protokoll wurde bereits berichtet²³aufgeführt.

1. Beherbergen Sie an den ersten beiden Tagen die Mäuse einzeln mit zwei Flaschen mit Leitungswasser gefüllt.
2. Geben Sie an den nächsten beiden Tagen die Mäuse zwei Flaschen mit 1 % Saccharoselösung gefüllt.
3. Am letzten Tag geben Sie die Mäuse zwei Flaschen für 24 h mit Leitungswasser und 1 % Saccharoselösung. Um eine Seite Präferenz der Mäuse im Trinkwasser Verhalten zu vermeiden, wechseln Sie die Position der zwei Flaschen nach 12 h.
4. Notieren Sie das Volumen (mL) der verbrauchten Saccharoselösung und Leitungswasser. Die Saccharose-Einstellung wie folgt zu berechnen: Saccharose Präferenz (%) = Saccharose Verbrauch/Total flüssigen Verbrauch × 100 %.

6. offene Feldtest

1. Führen Sie den Freiland-Test in einem schwach beleuchteten und ruhigen Raum mit einer vierseitigen Schwarz Matt Holzkiste. Teilen Sie dem Boden in 25 gleiche Quadrate durch blaue Linien.
2. Reinigen Sie Open-Feld mit 5 % Alkohol vor dem Zugriff von jeder Maus. Dann platzieren Sie den Mauszeiger in der Mitte des offenen Feldes sanft.
3. Anhalten einer hochauflösenden Digitalkamera ca. 200 cm direkt über das Feld und erfassen das Verhalten jeder Maus für 5 min.
4. Bewerten Sie die Mäuse Verhaltensstörungen Video von der Video-Tracking Systemsoftware zu und notieren Sie die Daten der gesamten Entfernung und Anzahl der Einträge in die Mitte-Zone laufen.
5. Analysieren Sie die Daten von der Gesamtstrecke verschoben und die Anzahl der Einträge in die Mitte-Zone von Statistik-Software.

Ergebnisse

Beachten Sie, dass die Ergebnisse von Dr. Xiu-Fang Ding, Et Al. zuvor veröffentlicht wurden ¹⁸

Daten wurden als der Mittelwert ± Standardfehler des Mittelwertes (SEM) ausgedrückt. Eine einfache ANOVA oder eines nicht-parametrische Tests wurde für allgemeine Daten basierend auf der Normalität-Test und der Test auf Homogenität der Varianz verwendet. Die LSD-Test wurde für die Vergleiche zwis...

Diskussion

In dieser Studie verwendete CUMS-Modell ist eine gängige Methode, Stress-Diathese-Modell Depression²⁴zu etablieren. Die meisten Manifestationen der CUMS können durch Antidepressiva, die zeigten, dass diese Modell-Methode eine starke prädiktive Gültigkeit^{25 hat}wiederhergestellt werden. Durch diese Methode Tiere erhalten chronische unberechenbar stressig Reize und Kernsymptome der major Depression, verminderte Ort Präferenz Klima-, Anhedonie, und beeinträchtigt Emotion-...

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
Chinese Herbs	Tongrentang (Bozhou, AnHui) Decoction Pieces Limited Company	-	The drugs were extracted by the Chinese medicine preparation room of the China-Japan Friendship Hospital, distilled water was used to prepare the suspension of Xiaoyaosan, and the dose was 0.25 g/kg/d.
Fluoxetine	PATHEON FRANCE	5545A	The distilled water was used to prepare the suspension of fluoxetine, and the dose 2.6 mg/kg/d.
C57BL/6j mice	Beijing Vital River of the Charles River Company	SCXK 2011-0004	60 healthy male C57BL/6J mice aged 12 weeks were purchased from Beijing Vital River of the Charles River Company.
Mouse cage	Styling Biotechnology	34853016	318×202×135 mm
Distilled Water	-	-	The water was used througout the experiment.
Sucrose	Sigma	-	The sucrose was used in the sucrose preference test to prepare 1% sucrose solution.
ACS-2EAS Electronic Balance	Beijing Hengzhongheng Electronic Technology Co., Ltd.	-	It was used to weigh the avoirdupois of mice at different stages.
Wooden Black Lusterless Box	-	-	(40 cm x 40 cm x 15 cm), divided into 25 equal squares by blue lines.
WV-CP470 Camera	Panasonic, Japan	-	A HD digital camera which was used for recording the whole process of the open field test.
Etho Vision 3.0 Software	Noldus, Wageningen, Holland	-	A video-tracking system which was used to evaluate the locomotor function and emotionality of mice.
SPSS Statistics 21.0 Software	IBM	-	SPSS 21.0 software was used to analyze the data, one-way ANOVA or non-parametric test was used for general data based on normality test and homogeneity test for variance, and LSD method was adopted for the comparisons between groups.
Graphpad Prism 6.0 Software	Graphpad Software,Inc.USA	-	Graphpad Prism 6.0 software was used to draw statistical graphs.