زرع تقويم الرئة اليسرى في نموذج خنزير الأحداث ل ESLP

Summary

يصف هذا البروتوكول نموذج خنزير الأحداث لزراعة الرئة اليسرى التقويمية المصممة للاستخدام مع أبحاث ESLP. يتم التركيز على تقنيات التخدير والجراحة ، بالإضافة إلى الخطوات الحاسمة واستكشاف الأخطاء وإصلاحها.

Abstract

زراعة الرئة هي العلاج القياسي الذهبي لمرض الرئة في المرحلة النهائية ، حيث يتم إجراء أكثر من 4600 عملية زرع رئة في جميع أنحاء العالم سنويا. ومع ذلك ، فإن زراعة الرئة محدودة بسبب نقص الأعضاء المانحة المتاحة. على هذا النحو ، هناك ارتفاع معدل الوفيات في قائمة الانتظار. أدى التروية الرئوية خارج الموقع (ESLP) إلى زيادة معدلات استخدام رئة المتبرع في بعض المراكز بنسبة 15٪ -20٪. تم تطبيق ESLP كطريقة لتقييم وتجديد رئتي المتبرع الهامشي وأظهر نتائج مقبولة على المدى القصير والطويل بعد زرع رئتي المتبرع بمعايير ممتدة (ECD). مطلوب نماذج زرع الحيوانات الكبيرة (في الجسم الحي) للتحقق من صحة نتائج البحوث الجارية في المختبر . تشكل الاختلافات التشريحية والفسيولوجية بين البشر والخنازير تحديات تقنية ومخدرة كبيرة. سيسمح نموذج الزرع القابل للتكرار بسهولة بالتحقق في الجسم الحي من استراتيجيات ESLP الحالية والتقييم قبل السريري لمختلف التدخلات المصممة لتحسين وظائف الرئة لدى المتبرع. يصف هذا البروتوكول نموذجا خنزيريا لزرع الرئة اليسرى التقويمية. وهذا يشمل تقنيات التخدير والجراحة ، وقائمة مراجعة جراحية مخصصة ، واستكشاف الأخطاء وإصلاحها ، والتعديلات ، وفوائد وقيود النهج.

Introduction

زرع الرئة هو العلاج البارز على المدى الطويل لمرض الرئة في المرحلة النهائية. يتم إجراء أكثر من 4600 عملية زرع رئة في جميع أنحاء العالم سنويا¹. ومع ذلك ، فإن زراعة الرئة لديها حاليا قيود كبيرة. أولا ، لا تزال الحاجة إلى الأعضاء تحجب المتبرعين المتاحين. على الرغم من زيادة معدلات زراعة الرئة كل عام منذ عام 2012 بسبب الآثار المشتركة لإدراج المزيد من المرشحين للزرع ، وزيادة عدد المتبرعين ، وتحسين استخدام الأعضاء المستعادة ، لم تنخفض وفيات قائمة انتظار الزرع بشكل ملحوظ². تمثل مخاوف جودة الأعضاء قيدا رئيسيا آخر ، حيث تنخفض معدلات استخدام الأعضاء المبلغ عنها إلى 20٪ -30٪ ^3،4،5. وأخيرا، فإن الاتجاهات في نتائج ما بعد الجراحة لزراعة الرئة أقل من مرضية، حيث لا تزال نتائج الكسب غير المشروع والمرضى على المدى الطويل متخلفة عن نتائج عمليات زرع الأعضاء الصلبة الأخرى².

التكنولوجيا الناشئة ، تروية الرئة خارج الموقع (ESLP) ، لديها القدرة على التخفيف من هذه القيود. تم تطبيق ESLP بشكل متزايد كطريقة لتقييم وتجديد رئتي المتبرعين الهامشيين وأظهر نتائج مقبولة على المدى القصير والطويل بعد زرع رئتي المتبرع بالمعايير الموسعة (ECD)⁶،^7،8،^9،10. ونتيجة لذلك، زادت ESLP معدلات الاستخدام في بعض المراكز بنسبة 15٪ -20٪ ⁶،^7،8،⁹،^10،11.

يتطلب البحث المناسب في ESLP التحقق من صحة النتائج في المختبر في الجسم الحي ؛ ومع ذلك ، هناك أدبيات محدودة حول نماذج زراعة الرئة الخنازير ل ESLP¹²،¹³،^14،15. علاوة على ذلك ، توفر الأدبيات المتاحة تفاصيل غير كافية فيما يتعلق بإدارة التخدير لخنازير يوركشاير لزراعة الرئة ، والتي يمكن أن تكون غير مستقرة للغاية من الناحية الديناميكية^{الدموية 12}،¹³،^14،15. إن إنشاء نموذج قابل للتكرار بسهولة من شأنه أن يسمح بالتحقق في الجسم الحي من استراتيجيات ESLP الحالية والتقييم قبل السريري للتدخلات المختلفة للحد من إصابة نقص تروية الرئة. الهدف من هذه الدراسة هو وصف نموذج خنزير لزراعة الرئة اليسرى التقويمية للاستخدام مع ESLP. يتضمن البروتوكول أوصافا لتقنيات التخدير والجراحة ، وقائمة مراجعة جراحية مخصصة ، وتفاصيل تتعلق بتجربة استكشاف الأخطاء وإصلاحها وتعديلات البروتوكول. كما تمت مناقشة قيود وفوائد نموذج زراعة الخنازير في الرئة اليسرى في هذا العمل. لا تحدد هذه المخطوطة عملية استرجاع رئتي الخنازير في خنازير يوركشاير التي يتراوح وزنها بين 35 و 50 كجم ، ولا تغطي إنشاء وإنهاء ESLP. يتناول هذا البروتوكول حصريا عملية زرع المتلقي.

Protocol

تم تنفيذ جميع الإجراءات وفقا للمبادئ التوجيهية للمجلس الكندي لرعاية الحيوان ودليل رعاية واستخدام المختبر. تمت الموافقة على البروتوكولات من قبل لجنة رعاية الحيوان المؤسسية بجامعة ألبرتا. تم تطبيق هذا البروتوكول على إناث خنازير يوركشاير بين 35-50 كجم. الخنازير هي عينات خالية من مسببات الأمراض ، من الدرجة الغذائية. يتم شراؤها من مركز أبحاث وتكنولوجيا الخنازير في إدمونتون ، AB ، كندا (https://srtc.ualberta.ca). وقد تلقى جميع الأفراد المشاركين في إجراءات ESLP تدريبا مناسبا على السلامة الأحيائية.

1. الاستعدادات قبل الجراحة والتخدير

ملاحظة: يتم صيام الخنازير طوال الليل قبل الجراحة لمدة أقصاها 12 ساعة.

1. تطبيق الحقن العضلي للكيتامين (20 ملغ/كغ) والأتروبين (0.05 ملغ/كغ) كتخدير للخنزير المتلقي في غرفة العمليات.
2. ضع مستلق الخنزير على طاولة عمليات ساخنة للحفاظ على الحرارة الطبيعية والمضي قدما في تحريض القناع.
3. معايرة معدل تدفق الأكسجين وفقا لوزن الحيوان ونظام التخدير.
   ملاحظة: يجب أن يكون تدفق الأكسجين 20-40 مل / كجم.
4. يتم تطبيق الأيزوفلوران بنسبة 4٪ -5٪ ويتم تقليله إلى 3٪ بعد 1-2 دقيقة.
5. تقييم عمق التخدير ، والتأكد من أن الخنزير ليس لديه رد فعل الانسحاب استجابة لحافز ضار. كرر كل 5 دقائق.
   ملاحظة: في حالة وجود استجابة للألم ، قم بزيادة النسبة المئوية لإدارة الأيزوفلوران حتى يتم تحقيق عمق التخدير المناسب. انظر الخطوة 10 من هذا القسم للحصول على مزيد من التفاصيل حول تسكين الصيانة مع الكيتامين والهيدرومورفون. لا تدار أي مشلول. هذا يسمح لتقييم رد فعل الانسحاب. يستخدم قرصة الأنف كحافز ضار.
6. تنبيب الخنزير بمجرد تأكيد عمق التخدير الصحيح. استخدم منظار الحنجرة ذو الشفرة المسطحة مقاس 10 بوصات وحجم 9 أو 10 أنابيب قصبة هوائية للخنازير 40-50 كجم.
7. ضع مسبار مقياس التأكسج النبضي على اللسان (المفضل) أو الأذن واستهدف تشبع الأكسجين فوق 90٪.
   ملاحظة: يتم مراقبة درجة الحرارة عن طريق مسبار الأنف. يتم استخدام وسادة التدفئة للحفاظ على الحرارة الطبيعية.
8. للحفاظ على التخدير ، اضبط تدفق الأكسجين (20-40 مل / كجم) ومعدل غاز الاستنشاق (1٪ -3٪).
9. حافظ على إعدادات جهاز التنفس الصناعي بمعدل تنفس يتراوح بين 12 و 30 نفسا / دقيقة ، وتلفزيون 6-10 مل / كجم ، و PEEP 5 سم H 2 O ، وضغط الذروة 20 سم H₂O.
   ملاحظة: يتم استخدام جهاز التنفس الصناعي القياسي بالضغط الإيجابي على غرار وحدة العناية المركزة لإنشاء نظام مغلق للتخدير والتهوية. تتم مراقبة العناصر الحيوية وتسجيلها باستمرار على فترات 15 دقيقة. يتم سحب ABG كل 15-60 دقيقة ، اعتمادا على استقرار الحيوان. على الرغم من استهداف أجهزة التلفزيون بارتفاع يصل إلى 10 مل / كجم ، يتم تحقيق 6-8 مل / كجم. يقدم الشكل 1 نظرة عامة تخطيطية على تهوية الضغط السلبي (NPV) -ESLP لبروتوكول الزرع المطبق في المختبر.
10. حلق وغسل وإعداد موقع شق معقم باستخدام بوفيدون اليود.
    ملاحظة: بعد التخدير بالكيتامين/الأتروبين، يتضمن النظام المسكن إعطاء 3 ملغ/كغ من الكيتامين الوريدي بوزن 1 ساعة (في حدود 1-3 ملغ/كغ حسب معايير المريض) وهيدرومورفون 0.05 ملغ/كغ بالحقن العضلي ف 2 ساعة عن طريق خط وريدي يتم إدخاله طرفيا في وريد الأذن. أي مدة أطول بين الجرعات تؤدي إلى استجابة الألم الخارقة ، مثل ارتفاع معدل ضربات القلب وأنماط التنفس غير الطبيعية / حركة عضلات البطن.

2. إدخال الخطوط الوريدية والشريانية المركزية

1. أدخل خطا مركزيا لإدارة السوائل والهيبارين.
   ملاحظة: يتم حساب إجمالي إعطاء السوائل الوريدية إلى 1 مل / كجم / ساعة ، ويتم إعطاء جرعات السوائل PRN للحفاظ على MAP >60 مم زئبق. يستخدم الخط المركزي أيضا لإدارة المنشطات والمضادات الحيوية ومثبطات الأوعية والمؤثرات العضلية. انظر الشكل 2 أ لتحديد موضع الخط.
   1. جهزي البشرة باستخدام محلول تحضير اليود البوفيدون واتركيه حتى يجف تماما. استخدم الكي الكهربائي لعمل شق خط الوسط 5-8 سم متمركز فوق القصبة الهوائية ويمتد بشكل جمجمي من الشق القصي.
   2. تقسيم الجلد والدهون تحت الجلد باستخدام الكي.
   3. قسم مستوى خط الوسط بين عضلات الشريط ، ثم قسم طبقات النسيج الضام لتحديد الحزمة السباتية اليسرى أو اليمنى داخل الأوعية الجانبية للقصبة الهوائية.
   4. احصل على التحكم القريب والبعيد في الوريد الوداجي باستخدام أربطة حريرية (مقاس 2-0) كحلقات وعاء.
   5. اربط ربطة العنق المحيطة بالجمجمة وتراجع لأعلى على ربطة العنق القريبة للتحكم في تدفق الدم.
   6. قم بعمل شق صغير في الوريد باستخدام مقص Metzenbaum (انظر جدول المواد) لاستيعاب خط مركزي ثنائي المنافذ ، 7 Fr (~ 1/3 محيط الوعاء).
   7. في الوقت نفسه ، حرر التوتر على حلقة الوعاء القريب ، وقم بقنية الوريد ، ثم اربطه لتأمين القنية في الوريد على عمق 10 سم.
   8. اغسل الخط بالهيبارين ، وقم بتوصيله بخط وريدي يحتوي على محلول ملحي طبيعي بنسبة 0.9٪ ، وقم بتطبيق السائل إذا كان الخنزير مستنفدا داخل الأوعية الدموية من الجفاف.
      ملاحظة: قفل الهيبارين أي منافذ غير مستخدمة.
   9. تطبيق 500 ملغ ميثيل بريدنيزون و1 غ سيفازولين الوريدي.
2. اتبع نفس التقنيات لقنية الشريان السباتي المشترك باستخدام خط شرياني 7 Fr لإدارة ضغط الدم بدقة.

3. شراء الرئة اليسرى

1. ضع الخنزير في وضع الاستلقاء الجانبي الأيمن.
2. إجراء بضع الصدر الأمامي الجانبي الأيسر (الشكل 2).
   1. جهزي البشرة باستخدام محلول تحضير اليود البوفيدون واتركيه حتى يجف تماما. ضع علامة على شق الصدر (20 سم) باستخدام المعالم التالية: استخدم الجس لتحديد طرف الكتف الأيسر ؛ وبالمثل ، حدد عملية الخنجري أدنى من القص مع الجس. قم بتوصيل الاثنين كما هو موضح في الشكل 2B.
   2. حقن ما مجموعه 10 مل من 0.25٪ بوبيفاكايين في الخط الجراحي وفراغين من الضلع أعلى وأسفل الشق.
   3. استخدم الكي الكهربائي لتشريح الجلد والطبقات تحت الجلد وطبقات العضلات. يجب تقسيم الظهرية العريضة. حدد الضلع الموجود أسفل الشق مباشرة وقم بالكي أعلى الضلع لكشف العضلات الوربية مع تجنب الحزمة الوعائية العصبية الوربية.
   4. استخدم مرقئ البعوض لثقب العضلات الوربية مباشرة فوق الضلع ، ثم تحسس داخل الصدر للالتصاقات باستخدام إصبع. ادفع الرئة بعيدا باستخدام شفط Yankauer أو إصبعك (انظر جدول المواد) أثناء الكي على طول الحافة العلوية للضلع لتمديد بضع الصدر.
      1. تمديد بضع الصدر إلى الأمام حتى 1 بوصة بعيدا عن القص. تمديد بضع الصدر الخلفي إلى العضلات المجاورة للعمود الفقري.
   5. أدخل مبعدة كولي القصية (انظر جدول المواد) لفتح بضع الصدر على نطاق واسع (10 سم) (الشكل 2 ج). اسحب الرئة لكشف الوريد النصفي الأيسر (الشكل 2 د).
   6. تشريح محيطي الوريد النصفي الأيسر باستخدام مقص Metzenbaum و Lauer غرامة. قم بتطويق الوعاء برباط حريري ، ثم قم بربطه ونقله (الشكل 2E). احتفظ بربطة عنق حريرية على الجذع القريب لمزيد من التحكم.
      ملاحظة: Lauer هو مشبك قائم الزاوية أو مشبك الاضطرابات الهضمية يستخدم لتشريح الأنسجة.
   7. تشريح الشريان الرئوي الأيسر (PA) والأوردة الرئوية اليسرى (PV). قم بتطويق الأوردة برباط حريري للتحكم (الشكل 2F).
      ملاحظة: PVs العليا صغيرة جدا ويتم ربطها بالخياطة عند نقاط فرعها أو جذعها المشترك ، اعتمادا على التشريح الفردي. القصبة الهوائية الرئيسية اليسرى عميقة في PA و LA (الأذين الأيسر) ، لذلك في بعض الأحيان ، لا يمكن تشريحها بسهولة حتى يتم تثبيت الشريان والأوردة ونقلها (الشكل 2G).
   8. تطبيق 5000 وحدة من الهيبارين الوريدي قبل 5 دقائق من تثبيت السلطة الفلسطينية.
      ملاحظة: يتم إعطاء الهيبارين 5000 وحدة IV أيضا قبل 5 دقائق من فك تثبيت السلطة الفلسطينية. لكل ساعة بعد ذلك ، يتم إعطاء 1000 وحدة من الهيبارين الوريدي.
   9. قم بتثبيت PA (DeBakey cross-clamp) ، والوريد الرئوي السفلي الأيسر (مشبك Satinsky) ، والقصبة الهوائية اليسرى (مشبك Spoon Potts) بشكل فردي (انظر جدول المواد). قلل أحجام المد والجزر إلى 5 مل / كجم بمجرد تثبيت القصبة الهوائية اليسرى.
   10. عبر السلطة الفلسطينية ، الوريد الرئوي السفلي الأيسر ، والشعب الهوائية اليسرى. اترك ما لا يقل عن 0.5 سم من سوار المناديل للخياطة. قسم الرباط الرئوي السفلي الأيسر وأزل الرئة اليسرى.
       ملاحظة: يمكن التخلص من الرئة اليسرى أو الاحتفاظ بها للتحكم في الأنسجة.

4. إنهاء ESLP ، وتقسيم الرئة اليسرى ، والتنظيف بمحلول المنحل بالكهرباء

1. قم بتثبيت أنبوب التهوية بأقصى قدر من الإلهام ، وإنهاء التروية والتهوية ، وافصل الرئتين عن جهاز ESLP.
2. وزن الرئتين لتحديد كمية تشكيل وذمة.
   ملاحظة: الوذمة هي تورم الأنسجة بسبب تراكم السوائل الزائدة.
3. خذ خزعة الأنسجة من الفص الملحق ، وقسمها إلى ثلاث قطع متساوية ، وضع قطعة واحدة في كل مما يلي: جل درجة حرارة القطع المثلى (OCT) ، والفورمالين ، والتجميد المفاجئ في النيتروجين السائل.
   ملاحظة: عادة ما يتم اتباع هذه الخطوة في مختبر المؤلف. ثم يتم تخزين العينات لتحليلها في المستقبل: يتم الاحتفاظ بعينات OCT والعينات المجمدة في ثلاجة -80 درجة مئوية ، ويتم وضع العينات المخزنة بالفورمالين في حاوية محكمة الغلق وتخزينها في ثلاجات 4 درجات مئوية. يتم نشر تفاصيل بروتوكول ESLP المحدد وتحليل الأنسجة في مكان آخر¹⁶.
4. اقسم رئة المتبرع الأيسر عن الرئة اليمنى. اترك 1 سم من PA المانحة ، و 1 سم من القصبات الهوائية المانحة ، وكفة LA المانحة الكافية (~ 0.5 سم محيطيا) لخياطتها إلى LA المتلقي (الشكل 2H). اترك PV السفلي الأيسر و PVs العلوية اليسرى في استمرارية مع جدار LA المانح لتسهيل المفاغرة اللاحقة.
5. وزن الرئة اليسرى.
6. قم بتقليب المتبرع الأيسر PA باستخدام مصاصة قطرة متصلة بخط IV وشطف 500 مل من محلول حفظ الكهارل خارج الخلية ، منخفض البوتاسيوم ، قائم على ديكستران من خلال الأوعية الدموية الرئوية. قم بتأمين القنية في السلطة الفلسطينية بربطة عنق حريرية أثناء التدفق ، ثم حررها عند اكتمال التدفق.
   ملاحظة: تتعلق الخطوات المذكورة بجهاز ESLP المحدد المستخدم لهذا العمل وقد لا تكون قابلة للتطبيق مباشرة على الأجهزة الأخرى.

5. زرع الرئة اليسرى

1. أدخل رئة المتبرع في صدر المتلقي ، بدءا من الفص السفلي. لا تجبر الرئة على وضعها في مكانها.
   ملاحظة: قد يحتاج القفص الصدري السفلي إلى رفعه لأعلى لاستيعاب رئة المتبرع عن طريق الالتواء على المبعدة القصية. من الناحية المثالية ، يكون المتلقي أكبر ببضعة كيلوغرامات من المتبرع لتسهيل مطابقة الحجم.
2. قم بإجراء مفاغرة الشعب الهوائية أولا باستخدام 4-0 برولين على إبرة TF (الشكل 2I).
   ملاحظة: تعمل مفاغرة الجري من طرف إلى طرف بشكل جيد. قم بقص أي طول زائد من طرفي المفاغرة قبل الخياطة لتجنب الالتواء الناجم عن الأنسجة الزائدة عن الحاجة.
3. قم بإجراء مفاغرة LA الثانية باستخدام 6-0 برولين على إبر BV-1 باستخدام مفاغرة جارية من طرف إلى طرف. مرة أخرى ، قم بقص الأنسجة الزائدة لتجنب الالتواء.
   ملاحظة: LA قابل للتفتيت ويستفيد من إبرة BV-1 الصغيرة. قد تكون هناك حاجة لدغات أفقية على المتبرع لشراء الأنسجة الكافية وتصحيح الحجم غير المتطابق الناجم عن خياطة المتبرع IPV و SPV إلى فتحة IPV / LA المتلقي.
4. دمج SPVs المانحة في مفاغرة PV و LA السفلية للسماح بالتصريف الوريدي لفص الرئة العلوي الأيسر (الشكل 2J).
   ملاحظة: يبلغ قطر الأوردة الرئوية العلوية للفرع (SPVs) أقل من 0.5 سم. جذع SPV الشائع متغير في الطول وغير موجود بشكل روتيني ، مما يجعل المفاغرة المباشرة بين المتبرع والمتلقي SPVs خيارا سيئا.
5. أكمل مفاغرة PA ب 6-0 برولين على إبر BV-1 باستخدام مفاغرة جارية من طرف إلى طرف. مرة أخرى ، قم بقص الأنسجة الزائدة لتجنب الالتواء.
6. قم بإزالة مشبك الشعب الهوائية وقم بزيادة أجهزة التلفزيون لاستهداف 10 مل / كجم.
7. تأكيد الهيبارين ، وإدارة تحول البوتاسيوم (40 ملغ من فوروسيميد ، 10 وحدات من الأنسولين ، 100 مل من محلول سكر العنب 25 ٪) ، افتح المشبك PA جزئيا ، وإزالة الهواء ، وربط خياطة السلطة الفلسطينية. حرر مشبك PA بالكامل بعد 10 دقائق.
8. في هذه الأثناء ، قم بإزالة الهواء من لوس أنجلوس ، واربط الغرز ، وقم بإزالة مشبك LA.
9. خذ غاز الدم لإعادة التروية من الخط المركزي وخزعة أنسجة إعادة التروية من الفص الأوسط الأيسر.
   ملاحظة: لأخذ خزعة من الأنسجة ، استخدم ربطة عنق من الحرير مقاس 0 لتطويق جزء 1 سم من قمة الفص الأوسط ، واربطها لأسفل لإيقاع الأنسجة ، ثم اقطع الجزء المعزول بمقص Metzenbaum. قسم الخزعة إلى ثلاثة أجزاء متساوية وقم بإدارتها كما هو موضح سابقا.
10. إجراء تنظير القصبات في الرئة اليمنى واليسرى لتقييم مفاغرة الشعب الهوائية وشفط الإفرازات. أدخل منظار القصبات في الأنبوب الرغامي باستخدام وصلة محول.
    1. قم بتوصيل المنظار بالشفط. تقدم منظار القصبات إلى القصبات الهوائية اليسرى. فحص مفاغرة الشعب الهوائية (الشكل 2N). تقدم المنظار أسفل القصيبات وشفط أي سائل. كرر على الجانب الأيمن.
       ملاحظة: لا تسمح لتشبع الأكسجين بالانخفاض إلى أقل من 90٪. إذا انخفض التشبع إلى ما دون هذا المستوى ، فقم بإزالة النطاق واترك للخنزير بضع دقائق من التهوية المتواصلة للتعافي.
11. أدخل أنبوبا صدريا مرنا 20 Fr (الشكل 2L) ، وأغلق بضع الصدر في ثلاث طبقات (الشكل 2M) ، وعرضة الخنزير بمجرد استقرار غازات الدم الشرياني (ABGs) (الشكل 2O).
12. مراقبة الخنزير أكثر من 4 ساعات في وضعية الانبطاح. قم بإجراء تحليل ABG كل 30 دقيقة. تطبيق 1000 وحدة من الهيبارين كل ساعة بعد التروية.
    1. خذ عينة دم سعة 10 مل كل ساعة للطرد المركزي وتحليل مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) لعلامات الالتهاب¹⁶.
       ملاحظة: يتم تفصيل معلمات الطرد المركزي لاحقا.

6. تقييم الرئة اليسرى المعزولة

1. ضع الخنزير مستلقا وأعد تحضير القص باستخدام محلول تحضير اليود البوفيدون. إجراء بضع القص في خط الوسط لتقييم الرئة اليسرى المعزولة النهائي (الشكل 2P).
2. افتح غشاء الجنب الأيسر باستخدام مقص Metzenbaum وأخذ خزعة الأنسجة من الفص السفلي الأيسر كما هو موضح سابقا (ملاحظة إلى الخطوة 5.9).
3. افتح غشاء الجنب الفص الملحق وقم بتشريح الوريد المشترك باستخدام مقص Metzenbaum.
   ملاحظة: سيتم تثبيت هذا لاحقا.
4. خذ عينة دم من مفاغرة LA باستخدام إبرة 21 جرام. وجه الإبرة نحو الأوردة الرئوية اليسرى وبعيدا عن الأذين الأيسر الشائع أو جذع الفص الملحق.
5. افتح غشاء الجنب الأيمن لتوفير مساحة لمشابك الهيلار اليمنى (انظر جدول المواد). تشريح الرباط الرئوي السفلي الأيمن حتى الهيلوم. تأكد من إمكانية وضع المشبك حول الهيلوم بشكل أعلى وأسفل وأمامي.
   ملاحظة: هذا يضمن انسداد الهيلوم ، وكل الأوكسجين يعتمد على الرئة اليسرى. لن يتم تهوية الرئة اليمنى في هذا الوقت ، وهو ما يجب أن يكون واضحا من خلال نقص التضخم / الانكماش مع تنفس جهاز التنفس الصناعي. يمكن رفع الفص السفلي الأيمن من الصدر لتحقيق ذلك.
6. قم بتثبيت وريد الفص الملحق باستخدام مشبك DeBakey الأبهري المتقاطع (انظر جدول المواد) لسد أي تصريف فص ملحق في LA (الشكل 2Q).
7. قم بتثبيت الهيليوم الأيمن وأخذ عينات الدم التسلسلية التالية من مفاغرة PV اليسرى بإبرة 21 G موجهة نحو الرئة اليسرى: 0 دقيقة ، 1 دقيقة ، 2 دقيقة ، 5 دقائق ، و 10 دقائق بعد التثبيت.
   ملاحظة: يتم أخذ خمس عينات لمراقبة أي اتجاه في الضغط الجزئي للأكسجين (PaO₂) (الشكل 2R). يجب أن يظل PaO₂ مستقرا نسبيا لتمثيل وظيفة الرئة اليسرى المناسبة. توفر خمس عينات أيضا تأمينا لتقييم الجودة إذا كانت هناك مشكلة في تخثر أي عينات أو نشأت مشكلة في تحليل ABG.
8. عبور المفاغرة ، وإزالة الرئة اليسرى. انقل IVC لتسريع القتل الرحيم تحت التخدير عن طريق الاستنزاف.
   ملاحظة: إجمالي وقت التخدير للخنزير المتلقي هو 8 ساعات.
9. وزن رئة المتبرع لتقييم تكوين الوذمة وفحصها للتأكد من مظهرها العام. افحص PA والقصبات الهوائية وكفة LA بحثا عن علامات الجلطة أو غيرها من الأمراض داخل رئة المتبرع والمنصف المتلقي.
10. قم بإجراء تحليلات الغاز النهائية ، والطرد المركزي لعينات البيروسات ، وتخزين خزعات الأنسجة كما هو موضح سابقا (ملاحظة إلى الخطوة 4.3).
    ملاحظة: إعدادات الطرد المركزي هي: 112 × جم ، 9 تسارع ، 9 تباطؤ ، 4 درجات مئوية ، ومدة 15 دقيقة.

النتائج

جميع النتائج في سياق 4 ساعات من إعادة التروية بعد 12 ساعة من NPV-ESLP¹⁶. أثناء زراعة الرئة ، هناك العديد من النتائج السريرية التي يجب توقعها (الشكل 3). عادة ، سيبقى الخنزير مستقرا ديناميكيا بعد عملية زرع الرئة اليسرى الناجحة ولكنه قد يتطلب ضخ جرعة منخفضة من فينيليفرين ...

Discussion

يتم تضمين العديد من الخطوات الجراحية الحاسمة في هذا البروتوكول ، وهناك حاجة إلى استكشاف الأخطاء وإصلاحها لضمان نجاح عملية الزرع وتقييم الرئة. رئات الخنازير اليافعة حساسة بشكل لا يصدق مقارنة برئتي الإنسان البالغ ، لذلك يجب على جراح التشغيل توخي الحذر عند التعامل مع رئتي الخنازير. هذا صحيح...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
ABL 800 FLEX Blood Gas Analyzer	Radiometer	989-963
Adult-Pediatric Electrostatic Filter HME - Small	Covidien	352/5877
Allison Lung Retractor	Pilling	341679
Arterial Filter	SORIN GROUP	01706/03
Backhaus Towel Clamp	Pilling	454300
Bovine Serum Albumin	MP biomedicals	218057791
Biomedicus Pump	Maquet	BPX-80
Bronchoscope
Cable Ties – White 12”	HUASU International	HS4830001
Calcium Chloride	Fisher Scientific	C69-500G
Cooley Sternal Retractor	Pilling	341162
CUSHING Gutschdressing Forceps	Pilling	466200
Debakey-Metzenbaum Dissecting	Pilling	342202
Scissors	Pilling	342202
DeBakey Peripheral Vascular Clamp	Pilling	353535
Debakey Straight Vascular Tissue Forceps	Pilling	351808
D-glucose	Sigma-Aldrich	G5767-500G
Drop sucker
Endotracheal Tube 9.0mm CUFD	Mallinckrodt	9590E
Flow Transducer	BIO-PROBE	TX 40
Infusion Pump	Baxter	AS50
Inspire 7 M Hollow Fiber Membrane Oxygenator	SORIN GROUP	K190690
Intercept Tubing Connector 3/8" x 1/2"	Medtronic	6013
Intercept Tubing 1/4" x 1/16" x 8'	Medtronic	3108
Intercept Tubing 3/8" x 3/32" x 6'	Medtronic	3506
Laryngoscope	N/A	N/A	Custom-made with 10-inch blade
Metzenbaum Dissecting Scissors	Pilling	460420
Medical Carbon Dioxide Tank	Praxair	5823115
Medical Oxygen Tank	Praxair	2014408
Medical Nitrogen Tank	Praxair	NI M-K
Mosquito Clamp	Pilling	181816
Harken Auricle Clamp
Organ Chamber	Tevosol
PlasmaLyte A	Baxter	TB2544
Poole Suction Tube	Pilling	162212
Potassium Phosphate	Fischer Scientific	P285-500G
PERFADEX Plus	XVIVO	19811
Satinsky Clamp	Pilling	354002
Scale	TANITA	KD4063611
Silicon Support Membrane	Tevosol
Sodium Bicarbonate	Sigma-Aldrich	792519-1KG
Sodium Chloride 0.9%	Baxter	JB1324
Sorin XTRA Cell Saver	SORIN GROUP	75221
Sternal Saw	Stryker	6207
Surgical Electrocautery Device	Kls Martin	ME411
TruWave Pressure Transducer	Edwards	VSYPX272
Two-Lumen Central Venous Catheter 7fr X2	Arrowg+ard	CS-12702-E
Vorse Tubing Clamp	Pilling	351377
Willauer-Deaver Retractor	Pilling	341720
Yankauer Suction Tube	Pilling	162300
0 ETHIBOND Green 1X36" Endo Loop 0	ETHICON	D8573
0 PDS II CP-1 2x27”	ETHICON	Z467H
1 VICRYL MO-4 1x18”	ETHICON	J702D
2-0 SILK Black 12" x 18" Strands	ETHICON	SA77G
4-0 PROLENE Blue TF 1x24”	ETHICON	8204H
6-0 PROLENE Blue BV 2x30”	ETHICON	M8776
21-Gauge Needle