ESLP için Juvenil Domuz Modelinde Sol Akciğer Ortotopik Transplantasyonu

Özet

Bu protokol, ESLP araştırmalarında kullanılmak üzere tasarlanmış ortotopik sol akciğer allotransplantasyonunun bir juvenil domuz modelini açıklamaktadır. Anestezi ve cerrahi tekniklerin yanı sıra kritik adımlar ve sorun gidermeye odaklanılır.

Özet

Akciğer nakli, dünya çapında yılda 4.600'den fazla akciğer nakli ile son dönem akciğer hastalığı için altın standart tedavidir. Bununla birlikte, akciğer nakli, mevcut donör organların yetersizliği ile sınırlıdır. Bu nedenle, yüksek bekleme listesi ölüm oranı vardır. Ex situ akciğer perfüzyonu (ESLP) bazı merkezlerde donör akciğer kullanım oranlarını %15-20 oranında artırmıştır. ESLP, marjinal donör akciğerlerini değerlendirmek ve yenilemek için bir yöntem olarak uygulanmıştır ve genişletilmiş kriterli donör (ECD) akciğerlerinin transplantasyonunu takiben kabul edilebilir kısa ve uzun vadeli sonuçlar göstermiştir. Devam eden in vitro araştırma bulgularını doğrulamak için büyük hayvan (in vivo) transplantasyon modelleri gereklidir. İnsanlar ve domuzlar arasındaki anatomik ve fizyolojik farklılıklar önemli teknik ve anestezik zorluklar doğurmaktadır. Kolayca tekrarlanabilir bir nakil modeli, mevcut ESLP stratejilerinin in vivo olarak doğrulanmasına ve donör akciğer fonksiyonunu iyileştirmek için tasarlanmış çeşitli müdahalelerin klinik öncesi değerlendirmesine izin verecektir. Bu protokol, ortotopik sol akciğer allotransplantasyonunun bir domuz modelini tanımlar. Bu, anestezik ve cerrahi teknikleri, özelleştirilmiş bir cerrahi kontrol listesini, sorun gidermeyi, modifikasyonları ve yaklaşımın yararlarını ve sınırlamalarını içerir.

Giriş

Akciğer nakli, son dönem akciğer hastalığı için önde gelen uzun vadeli tedavidir. Dünya çapında yılda 4.600'den fazla akciğer nakli gerçekleştirilmektedir¹. Bununla birlikte, akciğer nakli şu anda önemli sınırlamalara sahiptir. Birincisi, organ ihtiyacı mevcut bağışçıları gölgede bırakmaya devam ediyor. 2012'den bu yana akciğer nakli oranlarının her yıl artmasına rağmen, nakil için daha fazla adayın listelenmesi, donör sayısındaki artış ve kurtarılan organların daha iyi kullanılmasının birleşik etkileri nedeniyle, nakil bekleme listesi mortalitesi önemli ölçüde azalmamıştır². Organ kalitesi endişeleri, bildirilen organ kullanım oranlarının %20-30 kadar düşük olmasıyla bir başka önemli sınırlamayı temsil ^{etmektedir3,4,5}. Son olarak, akciğer transplantasyonunun postoperatif sonuçlarındaki eğilimler tatmin edici olmaktan uzaktır ve uzun vadeli greft ve hasta sonuçları hala diğer solid organ transplantasyonlarının gerisinde kalmaktadır².

Gelişmekte olan bir teknoloji olan ex situ akciğer perfüzyonu (ESLP), bu sınırlamaları hafifletme potansiyeline sahiptir. ESLP, marjinal donör akciğerlerini değerlendirmek ve yenilemek için bir yöntem olarak giderek daha fazla uygulanmaktadır ve genişletilmiş kriterli donör (ECD) akciğerlerinin transplantasyonunu takiben kabul edilebilir kısa ve uzun vadeli sonuçlar göstermiştir^6,7,8,9,10. Sonuç olarak, ESLP bazı merkezlerde kullanım oranlarını %15-%20 oranında artırmıştır6,7,8,9,10,11.

Uygun ESLP araştırması, in vitro bulguların in vivo olarak doğrulanmasını gerektirir; bununla birlikte, ESLP^12,13,14,15 için domuz akciğer nakli modelleri hakkında sınırlı literatür bulunmaktadır. Ayrıca, mevcut literatür, hemodinamik olarak oldukça kararsız olabilen akciğer nakli için Yorkshire domuzlarının anestezik yönetimi ile ilgili yetersiz ayrıntılar sunmaktadır^12,13,14,15. Kolayca tekrarlanabilir bir model oluşturmak, mevcut ESLP stratejilerinin in vivo olarak doğrulanmasına ve akciğer iskemi-reperfüzyon hasarını azaltmak için çeşitli müdahalelerin klinik öncesi değerlendirmesine izin verecektir. Bu çalışmanın amacı, ESLP ile birlikte kullanılmak üzere ortotopik sol akciğer allotransplantasyonunun domuz modelini tanımlamaktır. Protokol, anestezi ve cerrahi tekniklerin açıklamalarını, özel bir cerrahi kontrol listesini ve sorun giderme deneyimi ve protokol değişiklikleriyle ilgili ayrıntıları içerir. Bu çalışmada sol akciğer domuz nakli modelinin sınırlamaları ve yararları da tartışılmıştır. Bu makale, 35-50 kg'lık Yorkshire domuzlarında domuz akciğerlerinin geri alınma sürecini özetlemediği gibi, ESLP'nin kurulmasını ve sonlandırılmasını da kapsamamaktadır. Bu protokol sadece alıcı nakli operasyonunu ele alır.

Protokol

Tüm prosedürler, Kanada Hayvan Bakımı Konseyi'nin yönergelerine ve laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımına ilişkin kılavuza uygun olarak gerçekleştirildi. Protokoller, Alberta Üniversitesi'nin kurumsal hayvan bakım komitesi tarafından onaylandı. Bu protokol 35-50 kg arasındaki dişi yavru Yorkshire domuzlarında uygulanmıştır. Domuzlar patojen içermeyen, gıda sınıfı örneklerdir. Edmonton, AB, Kanada'daki (https://srtc.ualberta.ca) Domuz Araştırma ve Teknoloji Merkezi'nden satın alınırlar. ESLP prosedürlerine dahil olan tüm bireyler uygun biyogüvenlik eğitimi almıştır.

1. Ameliyat öncesi hazırlıklar ve anestezi

NOT: Domuzlar ameliyattan önce gece boyunca en fazla 12 saat aç bırakılır.

1. Ameliyathanede alıcı domuz için prezervatif olarak intramüsküler ketamin (20 mg / kg) ve atropin (0.05 mg / kg) enjeksiyonları uygulayın.
2. Normotermiyi korumak için domuzu ısıtılmış bir ameliyat masasına sırtüstü yatırın ve maske indüksiyonuna devam edin.
3. Oksijen akış hızını hayvan ağırlığına ve anestezik sisteme göre titre edin.
   NOT: Oksijen akışı 20-40 mL/kg olmalıdır.
4. İzofluranı %4-5 oranında uygulayın ve 1-2 dakika sonra %3'e düşürün.
5. Anestezi derinliğini değerlendirin, domuzun zararlı bir uyarana yanıt olarak geri çekilme refleksi olmadığından emin olun. Her 5 dakikada bir tekrarlayın.
   NOT: Bir ağrı yanıtı varsa, uygun anestezi derinliğine ulaşılana kadar izofluran uygulama yüzdesini arttırın. Ketamin ve hidromorfon ile idame analjezisi hakkında daha fazla ayrıntı için bu bölümün 10. adımına bakın. Felçli uygulanmaz. Bu, bir geri çekilme refleksinin değerlendirilmesine izin verir. Burun tutam, zararlı bir uyaran olarak kullanılır.
6. Doğru anestezi derinliği onaylandıktan sonra domuzu entübe edin. 40-50 kg'lık domuzlar için özel bir 10 inç, düz bıçaklı laringoskop ve 9 veya 10 boyutunda endotrakeal tüpler kullanın.
7. Dile (tercih edilen) veya kulağa bir nabız oksimetresi probu yerleştirin ve %90'ın üzerinde bir oksijen satürasyonunu hedefleyin.
   NOT: Sıcaklık bir burun sondası ile izlenir. Normotermiyi korumak için bir ısıtma yastığı kullanılır.
8. Anesteziyi sürdürmek için oksijen akışını (20-40 mL/kg) ve inhalan gaz oranını (%1-%3) ayarlayın.
9. Ventilatör ayarlarını 12-30 nefes/dk solunum hızında, 6-10 mL/kg TV'de, 5 cm H₂O PEEP'te ve 20 cm H₂O Tepe Basıncında tutun.
   NOT: Anestezi ve ventilasyon için kapalı bir sistem oluşturmak için standart bir YBÜ tipi pozitif basınçlı ventilatör kullanılır. Hayati değerler 15 dakikalık aralıklarla sürekli olarak izlenir ve kaydedilir. ABG'ler, hayvanın stabilitesine bağlı olarak her 15-60 dakikada bir çekilir. TV'ler 10 mL/kg'a kadar hedeflense de 6-8 mL/kg'a ulaşılır. Şekil 1 , laboratuvarda uygulanan nakil protokolü için negatif basınçlı ventilasyon (NPV)-ESLP'ye şematik bir genel bakış sağlar.
10. Povidon iyot kullanarak insizyon bölgesini tıraş edin, yıkayın ve aseptik olarak hazırlayın.
    NOT: Ketamin / Atropin ile sedasyonun ardından, analjezik rejim, 3 mg / kg Ketamin IV q 1 saat (hasta parametrelerine bağlı olarak 1-3 mg / kg aralığında) ve Hidromorfon 0.05 mg / kg IM q 2 saat periferik olarak yerleştirilmiş bir IV hattı yoluyla uygulanmasını içerir. Dozlar arasındaki daha uzun süre, yüksek kalp atış hızı ve anormal solunum paternleri / karın kası hareketi gibi çığır açan ağrı tepkisine neden olur.

2. Santral venöz ve arteriyel hatların yerleştirilmesi

1. Sıvı ve heparin uygulaması için merkezi bir hat yerleştirin.
   NOT: Toplam IV sıvı uygulaması 1 mL / kg / s olarak hesaplanır ve bir MAP >60 mmHg'yi korumak için sıvı bolusları PRN uygulanır. Merkezi hat ayrıca steroidler, antibiyotikler, vazopresörler ve inotropları uygulamak için kullanılır. Çizgi konumlandırma için Şekil 2A'ya bakın.
   1. Cildi bir povidon iyot hazırlama solüsyonu kullanarak hazırlayın ve tamamen kurumasını bekleyin. Elektrokoter kullanarak trakea üzerinde ortalanmış 5-8 cm'lik bir orta hat kesisi yapın ve sternal çentikten kraniyal olarak uzanın.
   2. Cildi ve deri altı yağını koter kullanarak bölün.
   3. Orta hat düzlemini kayış kasları arasında bölün ve ardından trakeanın lateralindeki sol veya sağ karotis intravasküler demetini tanımlamak için bağ dokusu katmanlarını bölün.
   4. Damar halkaları olarak ipek bağlar (boyut 2-0) kullanarak juguler venin proksimal ve distal kontrolünü elde edin.
   5. Kraniyal çevreleyen bağı bağlayın ve kan akışını kontrol etmek için proksimal bağ üzerinde yukarı doğru geri çekin.
   6. İki portlu, 7 Fr merkezi çizgiyi (damarın çevresinin ~1/3'ü) yerleştirmek için Metzenbaum makası (Malzeme Tablosuna bakınız) kullanarak damarda küçük bir kesi yapın.
   7. Eşzamanlı olarak, proksimal damar halkasındaki gerilimi serbest bırakın, damarı kanül edin ve ardından kanülü damarda 10 cm derinlikte sabitlemek için bağlayın.
   8. Hattı heparinle yıkayın,% 0.9 normal salin içeren bir IV hattına bağlayın ve domuz dehidrasyondan intravasküler olarak tükenmişse sıvı uygulayın.
      NOT: Heparin, kullanılmayan tüm bağlantı noktalarını kilitler.
   9. 500 mg metilprednizon ve 1 g sefazolin IV uygulayın.
2. Doğru kan basıncı yönetimi için 7 Fr arteriyel çizgi kullanarak ortak karotis arteri kanüle etmek için aynı teknikleri izleyin.

3. Sol akciğer alımı

1. Domuzu sağ lateral dekübit pozisyonunda konumlandırın.
2. Sol anterolateral torakotomi yapın (Şekil 2).
   1. Cildi bir povidon iyot hazırlama solüsyonu kullanarak hazırlayın ve tamamen kurumasını bekleyin. Aşağıdaki işaretleri kullanarak torakotomi insizyonunu (20 cm) işaretleyin: sol kürek kemiğinin ucunu tanımlamak için palpasyon kullanın; Aynı şekilde, sternumdan daha düşük olan ksifoid süreci palpasyonla tanımlayın. İkisini Şekil 2B'de gösterildiği gibi bağlayın.
   2. İnsizyon hattına ve insizyonun üstünde ve altında iki kaburga boşluğuna toplam 10 mL% 0.25 bupivakain enjekte edin.
   3. Cildi, deri altı katmanlarını ve kas katmanlarını incelemek için elektrokoter kullanın. Latissimus dorsi bölünmelidir. İnsizyonun hemen altındaki kaburgayı tanımlayın ve interkostal nörovasküler demetten kaçınırken interkostal kasları ortaya çıkarmak için kaburganın üstüne koterize edin.
   4. Kaburganın hemen üzerindeki interkostal kasları delmek için bir sivrisinek hemostatı kullanın ve ardından bir parmak kullanarak yapışıklıklar için göğsün içinde hissedin. Torakotomiyi uzatmak için kaburganın üst kenarı boyunca koterize ederken bir Yankauer emme veya parmak kullanarak akciğeri itin ( Malzeme Tablosuna bakın).
      1. Torakotomiyi sternumdan 1 inç uzağa kadar öne doğru uzatın. Torakotomiyi posteriordan paraspinal kaslara uzatın.
   5. Torakotomiyi geniş (10 cm) açmak için bir Cooley sternal ekartör takın (Malzeme Tablosuna bakın) (Şekil 2C). Sol hemi-azygot veni ortaya çıkarmak için akciğeri geri çekin (Şekil 2D).
   6. Metzenbaum makası ve ince bir Lauer kullanarak sol hemiazigos damarını çevresel olarak inceleyin. Kabı ipek bağlarla çevreleyin ve ardından bağlayın ve geçirin (Şekil 2E). Daha fazla kontrol için proksimal güdük üzerinde ipek bir kravat tutun.
      NOT: Lauer, doku diseksiyonu için kullanılan dik açılı bir kelepçe veya çölyak kelepçesidir.
   7. Sol pulmoner arteri (PA) ve sol pulmoner venleri (PV) diseke edin. Kontrol için damarları ipek bağlarla çevreleyin (Şekil 2F).
      NOT: Üstün PV'ler çok küçüktür ve bireysel anatomiye bağlı olarak dal noktalarında veya ortak gövdelerinde sütür bağlanır. Sol ana gövde bronş PA ve LA'ya (sol atriyum) derindir, bu nedenle bazen arter ve venler klemplenip kesilene kadar kolayca diseke edilemez (Şekil 2G).
   8. PA'yı klemplemeden 5 dakika önce 5000 ünite heparin IV uygulayın.
      NOT: Heparin 5000 ünite IV, PA'nın kelepçesini açmadan 5 dakika önce de uygulanır. Bundan sonraki her saat için 1000 ünite IV heparin uygulanır.
   9. PA (DeBakey çapraz kelepçe), sol inferior pulmoner ven (Satinsky kelepçesi) ve sol bronşları (Spoon Potts kelepçesi) ayrı ayrı kelepçeleyin (bkz. Sol bronş klemplendikten sonra tidal hacimleri 5 mL / kg'a düşürün.
   10. PA, sol inferior pulmoner ven ve sol bronştan transekt. Dikmek için en az 0,5 cm doku manşeti bırakın. Sol inferior pulmoner bağı bölün ve sol akciğeri çıkarın.
       NOT: Sol akciğer kontrol histolojisi için atılabilir veya saklanabilir.

4. ESLP'nin sonlandırılması, sol akciğerin bölünmesi ve elektrolit solüsyonu ile yıkama

1. Ventilasyon tüpünü maksimum inspirasyonda kelepçeleyin, perfüzyon ve ventilasyonu sonlandırın ve akciğerleri ESLP cihazından ayırın.
2. Ödem oluşum miktarını belirlemek için akciğerleri tartın.
   NOT: Ödem, fazla sıvı birikmesine bağlı doku şişmesidir.
3. Aksesuar lobun doku biyopsisini alın, üç eşit parçaya bölün ve aşağıdakilerin her birine bir parça yerleştirin: optimum kesme sıcaklığı (OCT) jeli, formalin ve sıvı nitrojen içinde dondurun.
   NOT: Bu adım genellikle yazarın laboratuvarında izlenir. Numuneler daha sonra gelecekteki analizler için saklanır: OCT ve snap-dondurulmuş numuneler -80 °C'lik bir dondurucuda tutulur ve formalinle saklanan numuneler uygun şekilde kapatılmış bir kaba yerleştirilir ve 4 °C'lik buzdolaplarında saklanır. Spesifik ESLP protokolü ve doku analizinin ayrıntıları başka bir yerde yayınlanmaktadır¹⁶.
4. Sol donör akciğeri sağ akciğerden ayırın. Alıcı LA'ya dikmek için 1 cm donör PA, 1 cm donör bronş ve yeterli donör LA manşeti (çevresel olarak ~ 0.5 cm) bırakın (Şekil 2H). Daha sonraki anastomozları kolaylaştırmak için sol inferior PV'yi ve sol superior PV'leri donör LA duvarı ile süreklilik içinde bırakın.
5. Sol akciğeri tartın.
6. Bir IV hattına bağlı bir damla emici kullanarak donör sol PA'yı kanüle edin ve 500 mL hücre dışı, düşük potasyumlu, dekstran bazlı elektrolit koruma solüsyonunu akciğer damar sistemi boyunca antegrad olarak yıkayın. Yıkama sırasında PA'daki kanülü ipek bir bağ ile sabitleyin ve yıkama tamamlandığında bırakın.
   NOT: Bahsedilen adımlar, bu çalışma için kullanılan belirli ESLP cihazıyla ilgilidir ve diğer cihazlara doğrudan uygulanamayabilir.

5. Sol akciğer nakli

1. Donör akciğerini alt lobdan başlayarak alıcının göğsüne yerleştirin. Akciğeri yerine oturtmaya zorlamayın.
   NOT: Sternal ekartör üzerinde tork uygulanarak donör akciğeri barındırmak için alt göğüs kafesinin yukarı doğru kaldırılması gerekebilir. İdeal olarak, alıcı, bir boyut eşleşmesini kolaylaştırmak için donörden birkaç kilogram daha büyüktür.
2. Bronşiyal anastomozu önce bir TF iğnesinde 4-0 prolen kullanarak gerçekleştirin (Şekil 2I).
   NOT: Çalışan, uçtan uca bir anastomoz iyi çalışır. Gereksiz dokunun neden olduğu bükülmeyi önlemek için dikişten önce iki anastomoz ucundaki fazla uzunluğu kesin.
3. Koşan, uçtan uca bir anastomoz kullanarak BV-1 iğnelerinde 6-0 prolene ile LA anastomozunu ikinci kez gerçekleştirin. Yine, bükülmeyi önlemek için fazla dokuyu kesin.
   NOT: LA gevrektir ve küçük BV-1 iğnesinden yararlanır. Yeterli doku satın almak ve donör IPV ve SPV'nin alıcı IPV/LA açıklığına dikilmesinden kaynaklanan uyumsuz boyutu düzeltmek için donör üzerinde yatay ısırıklar gerekebilir.
4. Sol üst akciğer lobu venöz drenajına izin vermek için donör SPV'leri inferior PV ve LA anastomozuna dahil edin (Şekil 2J).
   NOT: Dal superior pulmoner venlerin (SPV'ler) çapı 0,5 cm'den azdır. Ortak SPV gövdesinin uzunluğu değişkendir ve rutin olarak mevcut değildir, bu da verici ve alıcı SPV'ler arasında doğrudan anastomozu zayıf bir seçenek haline getirir.
5. PA anastomozunu BV-1 iğnelerinde 6-0 prolene ile uçtan uca bir anastomoz kullanarak tamamlayın. Yine, bükülmeyi önlemek için fazla dokuyu kesin.
6. Bronşiyal kelepçeyi çıkarın ve TV'leri hedef 10 mL/kg'a yükseltin.
7. Heparinizasyonu onaylayın, bir potasyum kayması uygulayın (40 mg furosemid, 10 ünite insülin, 100 mL% 25 dekstroz çözeltisi), PA kelepçesini kısmen açın, havayı alın ve PA sütürünü bağlayın. PA cl'yi tamamen serbest bırakınamp 10 dakika sonra.
8. Bu arada, LA'nın havasını alın, dikişleri bağlayın ve LA kelepçesini çıkarın.
9. Santral hattan reperfüzyon kan gazı ve sol orta lobdan reperfüzyon doku biyopsisi alın.
   NOT: Doku biyopsisi almak için, orta lob tepesinin 0 cm'lik bir kısmını çevrelemek için 1 numara ipek bir kravat kullanın, dokuyu tuzağa düşürmek için bağlayın ve ardından izole edilen kısmı Metzenbaum makasıyla kesin. Biyopsiyi üç eşit parçaya bölün ve daha önce tarif edildiği gibi yönetin.
10. Bronşiyal anastomozu değerlendirmek ve sekresyonları aspire etmek için sol ve sağ akciğer bronkoskopisi yapın. Bir adaptör bağlantısı kullanarak endotrakeal tüpe bir bronkoskop yerleştirin.
    1. Kapsamı emmeye bağlayın. Bronkoskopu sol bronşun içine ilerletin. Bronşiyal anastomozu inceleyin (Şekil 2N). Kapsamı bronşiyollerden aşağı doğru ilerletin ve herhangi bir sıvıyı emdirin. Sağ tarafta tekrarlayın.
       NOT: Oksijen doygunluğunun %90'ın altına düşmesine izin vermeyin. Doygunluklar bu seviyenin altına düşerse, dürbünü çıkarın ve domuzun iyileşmesi için birkaç dakika kesintisiz havalandırmaya izin verin.
11. 20 Fr dövülebilir bir göğüs tüpü yerleştirin (Şekil 2L), torakotomiyi üç kat halinde kapatın (Şekil 2M) ve arteriyel kan gazları (ABG'ler) stabil olur olmaz domuzu yüzüstü yatırın (Şekil 2O).
12. Domuzu yüzüstü pozisyonda 4 saatten fazla izleyin. Her 30 dakikada bir ABG analizi yapın. Reperfüzyondan sonra her saat başı 1000 ünite heparin uygulayın.
    1. İnflamatuar belirteçlerin santrifüj ve enzime bağlı immünosorbent testi (ELISA) analizi için her saat 10 mL kan örneği alın¹⁶.
       NOT: Santrifüj parametreleri daha sonra detaylandırılmıştır.

6. İzole Sol Akciğer Değerlendirmesi

1. Domuzu sırtüstü yatırın ve povidon iyot hazırlama solüsyonu kullanarak sternumu yeniden hazırlayın. Son izole sol akciğer değerlendirmesi için orta hat sternotomi yapın (Şekil 2P).
2. Metzenbaum makasını kullanarak sol plevrayı açın ve daha önce tarif edildiği gibi sol alt lobdan doku biyopsisi alın (adım 5.9'a NOT).
3. Aksesuar lob plevrasını açın ve Metzenbaum makası kullanarak ortak damarı inceleyin.
   NOT: Bu daha sonra sıkıştırılacaktır.
4. 21 G'lik bir iğne kullanarak LA anastomozundan bir kan örneği alın. İğneyi sol pulmoner venlere doğru ve ortak sol atriyum veya aksesuar lob gövdesinden uzağa yönlendirin.
5. Sağ hiler kelepçeler için yer açmak için sağ plevrayı açın (bkz. Sağ inferior pulmoner ligamenti hiluma kadar diseke edin. Bir kelepçenin hilumun etrafına üstün, alt ve ön olarak yerleştirilebildiğinden emin olun.
   NOT: Bu, hilusun tıkanmasını ve tüm oksijenasyonun sol akciğere bağlı olmasını sağlar. Sağ akciğer şu anda havalanmayacaktır, bu da ventilatör solunumlarında şişirme/söndürme eksikliği ile belirgin olmalıdır. Bunu başarmak için sağ alt lob göğüsten kaldırılabilir.
6. Herhangi bir aksesuar lob drenajını LA'ya tıkamak için bir DeBakey aort çapraz klemp (Malzeme Tablosuna bakın) kullanarak aksesuar lob damarını kelepçeleyin (Şekil 2Q).
7. Sağ hilyumu klempleyin ve sol akciğere doğru yönlendirilmiş 21 G'lik bir iğne ile sol PV anastomozundan aşağıdaki seri kan örneklerini alın: klemplemeden 0 dk, 1 dk, 2 dk, 5 dk ve 10 dk sonra.
   NOT: Kısmi oksijen basıncındaki (PaO₂) herhangi bir eğilimi izlemek için beş numune alınır (Şekil 2R). PaO₂ , uygun sol akciğer fonksiyonunu temsil etmek için nispeten stabil kalmalıdır. Beş numune ayrıca, herhangi bir numunenin pıhtılaşması ile ilgili bir sorun olması veya ABG analizi ile ilgili bir sorun ortaya çıkması durumunda bir kalite değerlendirmesinin sigortasını sağlar.
8. Anastomozları kesin ve sol akciğeri çıkarın. Anestezi altında kan kaybı yoluyla ötenaziyi hızlandırmak için IVC'yi transekt edin.
   NOT: Alıcı domuz için toplam anestezi süresi 8 saattir.
9. Ödem oluşumunu değerlendirmek için donör akciğerini tartın ve genel görünüm açısından inceleyin. PA, bronş ve LA manşetini donör akciğerde ve alıcı mediastende pıhtı veya başka bir patoloji belirtileri açısından inceleyin.
10. Son gaz analizlerini yapın, perfüzat örneklerini santrifüjleyin ve doku biyopsilerini daha önce açıklandığı gibi saklayın (adım 4.3'e NOT).
    NOT: Santrifüj ayarları şunlardır: 112 x g, 9 hızlanma, 9 yavaşlama, 4 °C ve 15 dakika süre.

Sonuçlar

Tüm sonuçlar, 12 saatlik NPV-ESLP^16'yı takiben 4 saatlik reperfüzyon bağlamındadır. Akciğer eksplantı sırasında, tahmin edilmesi gereken birkaç klinik sonuç vardır (Şekil 3). Tipik olarak, başarılı bir sol akciğer eksplantasyonunu takiben domuz hemodinamik olarak stabil kalacaktır, ancak cerrahiye vazodilatör yanıt nedeniyle düşük dozda fenilefrin infüzyonu (doz aralığı: 2-10 mg / s) gerektirebilir. Kalp hızı yaklaşık 100-120 bpm'yi he...

Tartışmalar

Bu protokolde birkaç kritik cerrahi adım yer almaktadır ve başarılı transplantasyon ve akciğer değerlendirmesi sağlamak için sorun giderme gereklidir. Juvenil domuz akciğerleri, yetişkin insan akciğerlerine kıyasla inanılmaz derecede hassastır, bu nedenle ameliyat eden cerrah domuz akciğerlerini tutarken dikkatli olmalıdır. Bu, özellikle 12 saatlik bir ESLP çalışmasından sonra geçerlidir, çünkü organ sıvı hacmini almış olacak ve aşırı manipülasyondan kaynaklanan yaralanmalara duyarlı ...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
ABL 800 FLEX Blood Gas Analyzer	Radiometer	989-963
Adult-Pediatric Electrostatic Filter HME - Small	Covidien	352/5877
Allison Lung Retractor	Pilling	341679
Arterial Filter	SORIN GROUP	01706/03
Backhaus Towel Clamp	Pilling	454300
Bovine Serum Albumin	MP biomedicals	218057791
Biomedicus Pump	Maquet	BPX-80
Bronchoscope
Cable Ties – White 12”	HUASU International	HS4830001
Calcium Chloride	Fisher Scientific	C69-500G
Cooley Sternal Retractor	Pilling	341162
CUSHING Gutschdressing Forceps	Pilling	466200
Debakey-Metzenbaum Dissecting	Pilling	342202
Scissors	Pilling	342202
DeBakey Peripheral Vascular Clamp	Pilling	353535
Debakey Straight Vascular Tissue Forceps	Pilling	351808
D-glucose	Sigma-Aldrich	G5767-500G
Drop sucker
Endotracheal Tube 9.0mm CUFD	Mallinckrodt	9590E
Flow Transducer	BIO-PROBE	TX 40
Infusion Pump	Baxter	AS50
Inspire 7 M Hollow Fiber Membrane Oxygenator	SORIN GROUP	K190690
Intercept Tubing Connector 3/8" x 1/2"	Medtronic	6013
Intercept Tubing 1/4" x 1/16" x 8'	Medtronic	3108
Intercept Tubing 3/8" x 3/32" x 6'	Medtronic	3506
Laryngoscope	N/A	N/A	Custom-made with 10-inch blade
Metzenbaum Dissecting Scissors	Pilling	460420
Medical Carbon Dioxide Tank	Praxair	5823115
Medical Oxygen Tank	Praxair	2014408
Medical Nitrogen Tank	Praxair	NI M-K
Mosquito Clamp	Pilling	181816
Harken Auricle Clamp
Organ Chamber	Tevosol
PlasmaLyte A	Baxter	TB2544
Poole Suction Tube	Pilling	162212
Potassium Phosphate	Fischer Scientific	P285-500G
PERFADEX Plus	XVIVO	19811
Satinsky Clamp	Pilling	354002
Scale	TANITA	KD4063611
Silicon Support Membrane	Tevosol
Sodium Bicarbonate	Sigma-Aldrich	792519-1KG
Sodium Chloride 0.9%	Baxter	JB1324
Sorin XTRA Cell Saver	SORIN GROUP	75221
Sternal Saw	Stryker	6207
Surgical Electrocautery Device	Kls Martin	ME411
TruWave Pressure Transducer	Edwards	VSYPX272
Two-Lumen Central Venous Catheter 7fr X2	Arrowg+ard	CS-12702-E
Vorse Tubing Clamp	Pilling	351377
Willauer-Deaver Retractor	Pilling	341720
Yankauer Suction Tube	Pilling	162300
0 ETHIBOND Green 1X36" Endo Loop 0	ETHICON	D8573
0 PDS II CP-1 2x27”	ETHICON	Z467H
1 VICRYL MO-4 1x18”	ETHICON	J702D
2-0 SILK Black 12" x 18" Strands	ETHICON	SA77G
4-0 PROLENE Blue TF 1x24”	ETHICON	8204H
6-0 PROLENE Blue BV 2x30”	ETHICON	M8776
21-Gauge Needle