JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يصف البروتوكول الحالي طريقة تطبيق الكي للفئران ، مع فوائد تقليل الخوف من الفئران ، وضمان رفاهيتها ، وتحسين كفاءة الباحثين.

Abstract

يتوسع مجال أبحاث الكي ، مع زيادة سريعة في المنشورات في السنوات الأخيرة. الكي هو علاج يشعل الموكسا على جلد البشر ، مع زيادة درجة حرارة الجلد المحيطي والاحمرار الموضعي. خلال هذا العلاج ، يجب أن يظل المتلقي ثابتا لمنع الحروق وفضح مواقع التدخل لسهولة التلاعب ؛ ومع ذلك ، فإن الحفاظ على وضعية ثابتة أثناء الكي يمثل تحديا كبيرا للحيوانات. وبالتالي ، فإن التلاعب بالكي في الصغيرة ، مثل الفئران ، يمكن أن يؤدي إلى العديد من الصعوبات للباحثين. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أن يؤدي الموقف غير المريح للحيوانات إلى الخوف ومقاومة الكي ، وزيادة خطر الإصابة ، وانخفاض رفاهية ، وبيانات بحثية أقل صلة. هناك حاجة إلى طريقة فعالة ومريحة للكي لحماية رفاهية وتقليل الآثار الضارة على النتائج التجريبية. ومع ذلك ، فإن طرق الكي متغيرة للغاية وغالبا ما تكون فعاليتها محدودة. والأهم من ذلك ، أن وضعية الكي غير المريحة قد تسبب استجابة للتوتر ، مثل تلك التي لوحظت بالقلق والخوف والغضب ، مما قد يؤثر على بيانات البحث. لذلك ، هناك حاجة إلى استراتيجيات لتكسير التي تلحق أقل ضرر ممكن أثناء التدخل. يقدم هذا البروتوكول طريقة ربط الماوس للتدخل في الكي ، مما يقلل من انزعاج الفأر ويحسن كفاءة الدراسة. يتم تسليط الضوء على الاستراتيجيات الأساسية لربط الفئران وتطبيق الكي ، ويتم وصف هيكل أداة الربط.

Introduction

الكي هو علاج خارجي يستخدم في الطب الصينيالتقليدي 1. لقد تم تطبيقه على نطاق واسع لعدة قرون كوسيلة للحفاظ على اللياقة البدنية والوقاية من الأمراض وعلاجها2،3. ومع ذلك ، لا يزال يتعين توضيح آلية الكي ؛ وبالتالي ، فقد توسع هذا المجال من البحث في السنوات الأخيرة حيث يستكشف الباحثون آثاره وآلياته البيولوجية.

أثناء الكي ، يجب أن يظل المتلقي ثابتا حتى تحقق أفضلالنتائج 4. يستمر علاج الكي عادة لمدة 15-30 دقيقة 5,6. لهذا السبب ، أصبح التلاعب بالكي للحيوانات ، وخاصة الصغيرة مثل الفئران والجرذان (الملائمة للاستخدام في التجارب على) ، تحديا كبيرا للباحثين. معظم أجهزة الكي مناسبة للاستخدام السريري ولا يمكن استخدامها للحيوانات ، خاصة للحيوانات الصغيرة مثل الفئران7،8،9. إلى جانب ذلك ، على عكس البشر ، بالكاد يمكن للحيوانات اتباع الأوامر والبقاء ثابتة لفترة من الوقت. يمكن أن يؤدي الوضع الثابت وغير المريح للحيوانات إلى مشاعر سلبية ، بما في ذلك القلق والخوف والغضب والعصبية ومقاومة العلاج ، مما يزيد من خطر الإصابة ، ويقلل من رفاهية ، ويؤدي إلى بيانات بحثية أقل صحة10. لحل هذه المشكلة ، في الدراسات السابقة ، تم تطبيق التخدير لفترات طويلة أثناء التجارب على التي تنطوي على علاجات الطب الصيني التقليدي الخارجية ، بما في ذلك الوخز بالإبر ، والكي ، وأبحاث التدليك11،12،13. ومع ذلك ، نظرا لأن الظروف الجسدية تتغير مع التخدير ، وفي معظم الحالات السريرية ، يتم إعطاء الكي للأشخاص في حالات واعية ، فقد يؤثر التخدير على صحة بيانات البحث. لذلك ، تصبح طريقة ربط بوعي وراحة تحديا. لحل هذه المشكلات الفنية ، تم إدخال أجهزة متخصصة لتحكي الماوس. يوفر هذا البروتوكول طريقة ربط تساعد الباحثين في إجراء علاج الكي على ، مما يسمح للحيوانات بالبقاء ثابتة وواعية ومريحة.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

تم إجراء جميع التجارب وفقا لدليل المعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام المختبر وتمت الموافقة عليها من قبل لجنة رعاية واستخدام المؤسسية بجامعة تشنغدو للطب الصيني التقليدي. تم إجراء رعاية وصيانتها في المختبر باتباع المراجع14،15. تم استخدام الفئران الذكور C57BL / 6J البالغة ، التي تزن 20-25 جم ، للاختبار. تم الحفاظ على جميع الفئران في دورة إضاءة / ظلام مدتها 12 ساعة عند 24 درجة مئوية ورطوبة 40٪ -50٪ ، مع حرية الوصول إلى الطعام والماء. يصور البروتوكول التالي إجراءات الكي في ظل ظروف السكن المختبري النموذجية.

1. تحضير المعدات

  1. ربط الماوس
    1. قم بإعداد جهاز ربط الماوس يتكون من لوحة عمودية وقاعدة لوحة عمودية وأقواس مصنوعة من الخشب.
      1. قم ببناء الجسم الثابت باستخدام جبيرة خشبية مستقيمة (الطول: 30 سم × العرض: 3 سم × الارتفاع: 3 سم) وقم بتوصيل حزام الفيلكرو الثابت (الذي يتكون من جانبين: جانب خطاف (4 سم × 3 سم) وجانب حلقة (10 سم × 3 سم)) للسماح بربط جسم الماوس مع الحفاظ على المرونة (انظر جدول المواد).
      2. استخدم مسدس الغراء لربط جانب الخطاف على الجانب الأيمن من الجبيرة الخشبية وإرفاق 1/4 طول من جانب الحلقة على الجانب الأيسر.
    2. ضع الماوس على السرير الثابت ، واستخدم حزام الفيلكرو الثابت لربط جذع الماوس.
      ملاحظة: تأكد من أن حزام الربط ليس مشدودا بما يكفي للضغط على القلب ، مما قد يؤدي إلى موت الفأر. اربط الماوس بشكل فضفاض ولكن بحزم.
    3. استخدم شريطا لربط الأطراف السفلية / العلوية على جانبي الجبيرة الخشبية وإرفاق الذيل بسطح الجبيرة الخشبية.
  2. تحضير رف سرير الماوس
    ملاحظة: يتكون الحامل من صفيحة خشبية عمودية وصفيحة خشبية وأقواس خشبية. يتكون الحامل من قطعة من الفولاذ المقاوم للصدأ على شكل حرف L ، والتي توفر الدعم لكل سرير ماوس.
    1. قم بتوصيل اللوحة الرأسية بلوحة القاعدة ، وقم بإنشاء أخاديد مربعة في لوحة القاعدة لإدخال العصي الخشبية المستخدمة كحواجز (الشكل 1).
    2. قم بإعداد غطاء رأس بلاستيكي شفاف إذا تم إعطاء الفئران الكي فوق الرأس.
      1. استخدم حقنة سعة 1000 مل ، وقم بإزالة الإبرة والقضيب الأساسي. استخدم أداة قطع أو سكين لقطع سترة الحقنة إلى نصفين.
      2. اختر أي من جانبي سترة الحقنة ، واقطع الرأس والذيل ، واترك القسم الأوسط جانبا (الطول: 4 سم) كغطاء للرأس للماوس.
      3. احفر حفرة (1 سم) في وسط سترة الحقنة باستخدام آلة الحفر وضع عصا موكسا في الحفرة. ضع غطاء رأس فوق رأس الماوس للحد من حركة رأسه وحمايته من الموكسا المشتعلة.
    3. قم بإرفاق شريطين خشبيين متوازيين (الطول: 7 سم × العرض: 1 سم) وقطعة عرضية أفقية (الطول: 7.5 سم × العرض: 1 سم) بنهاية رأس سرير الفأر إذا تم إعطاء الفئران الكي على الأطراف الأمامية (الشكل 2).
      ملاحظة: يجب أن تكون المسافة بين كل شريط خشبي متوازي وسرير الماوس 1 سم. يمكن تحديد عدد الأقواس وارتفاع الألواح الرأسية بناء على المتطلبات التجريبية. يجب تنفيذ هذه الخطوات برفق لتجنب ترويع الفئران. تأكد من إعطاء الفئران تدريبا تكيفيا لمدة أسبوع واحد قبل التجربة.
  3. تحضير حامل عصا الكي
    1. قم بإعداد حامل عصا الكي الذي يتكون من مستطيل معدني مغناطيسي (الطول: 30 سم) ، وقاعدة قوس (الطول: 5 سم × العرض: 5 سم × الارتفاع: 2 سم) ، ومكعبات خشبية (الطول: 3 سم × العرض: 1.5 سم × الارتفاع: 1 سم) ، لكل منها ثقب (قطر: 0.55 سم) في المنتصف يمكن وضع عصا موكسا فيه (انظر جدول المواد).
    2. قم بتوصيل مغناطيس مسطح ورفيع (الطول: 3 سم × العرض: 1.5 سم ، السماكة: 0.2 سم) بجانب واحد من كل مكعب. يسمح الجذب المغناطيسي بين المكعبات بعصي الموكسا والحامل بضبط ارتفاع عصي الموكسا.
      ملاحظة: تأكد من أن الأقطاب المغناطيسية لمغناطيس المكعب مقابل عمود مغناطيس الحامل.
  4. لتسجيل بداية ونهاية إجراء الكي ، ضع جهاز توقيت (انظر جدول المواد) بالقرب من جهاز ربط الماوس حيث يمكن قراءته بسهولة.
  5. استخدم يدا عارية أو مرتدية قفازا رفيعا عند إمساك الفئران وربطها. اليد التي ترتدي القفازات الرقيقة فعالة أيضا أثناء علاج الكي الكي.

2. إجراء الكي

  1. ارتد قفازات المختبر. قبل علاج الكي الكي ، احلق الفراء عن طريق ماكينة حلاقة الفأر في موقع الكي لكشف نقطة الوخز بالإبر.
  2. أدخل عصي moxa (قطرها 0.5 سم وطولها 10 سم) في حامل عصا الكي (الذي يتكون من المستطيل المعدني المغناطيسي وقاعدة القوس والمكعبات الخشبية ذات الثقوب في مراكزها لإدخال عصا moxa ، ويمكن لحامل عصا واحد استيعاب عصا موكسا واحدة فقط ، الخطوة 1.3).
  3. للتأكد من درجة حرارة الكي ، قم بتوصيل كاشف حراري رقمي عند نقطة الوخز بالإبر لمراقبة تغير درجة الحرارة.
  4. ابدأ المؤقت وأشعل عصا moxa ؛ قم بإصلاح أو التحكم في المسافة بين جلد نقطة الوخز والطرف المضاء لعصا moxa اعتمادا على اختلاف درجة الحرارة المطلوبة للتجربة.

3. الكي المتزامن للفأر

ملاحظة: يمكن علاج الفئران بالكي كمجموعة. يتم استخدام رف سرير الماوس لوضع أسرة الفأر بحيث يمكن معالجة مجموعة من الفئران في وقت واحد.

  1. ضع كل سرير فأر على الرف وأدخل عصا خشبية في لوحة القاعدة لحماية الفئران من السقوط (الشكل 3).
  2. أدخل أعواد moxa (قطرها 0.5 سم وطولها 12 سم) في حامل عصا الكي عند المستويات التي تتزامن مع كل سرير فأر. اضبط المسافة بين رف الماوس وحامل العصا ، ثم أشعل عصي moxa.
    ملاحظة: هذا يسمح للفئران بعلاج الكي في حالة مريحة ومريحة. أثناء الكي ، تأكد من أن المسافة بين رف الماوس وحامل العصا تظل ثابتة لجميع الفئران.
  3. قبل النمذجة ، قم بإجراء استجابات الفأر لاختبار عتبة الانسحاب الحراري (TWL) لتحديد ما إذا كان الكي سيكون فعالا في التسكين.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

يلخص الجدول 1 العوامل المختلفة التي تؤثر على الاستجابات للكي الكهربائي. تمت الإشارة إلى النتائج الإيجابية لتكسير الفئران من خلال مقاييس متعددة لرفاهية الفئران والآثار الإيجابية.

بعد ذلك ، يتم تحديد أمثلة محددة للنتائج التي تم الحصول عليها عند إ?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

تقنية الكي فعالة في العديد من الاضطرابات ، مثل التعب والأرق والإسهال ومتلازمة الألم20،21،22،23،24،25،26. مع فوائد علاج الكي للعديد من الأمراض ، جذب?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

يعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

تم دعم هذا العمل من خلال منح من المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (81704187 ، 8210152562) ، وبرنامج سيتشوان للعلوم والتكنولوجيا (2019YJ0587 ، 2018JY0482 ، 2019YJ0329) ، وأكاديمية سيتشوان للعلوم الطبية وصندوق أبحاث مستشفى سيتشوان الشعبي (2018ZX05) ، ومؤسسة أبحاث علماء Xinglin التابعة لجامعة تشنغدو للطب الصيني التقليدي (QNXZ2019034).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Complete Freund's Adjuvant (CFA)Sigma-AldrichSF588102
Glue gunDeli Group Co., Ltd.DL5041
Laboratory gloveBoci  Co., Ltd53625130323
Magnetic metal rectangle (thickness: 0.2 cm)Sitoo Stationery Co., Ltd1007908729
Moxa stickHanyi Airong factory5613
Steel sheetRizhan metal materials Co., Ltd1108
Syringe (1000 mL )Xinmin Fuda Co., Ltd796341
TimerBevoza Co., LtdKT003
Velcro beltMinnesota Mining and Manufacturing Co., Ltd3MSJ3550
Wooden cubeChuang Hing Wood Chip Co., Ltd2581457A
Wooden splintChuang Hing Wood Chip Co., Ltd3410968M
Wooden stickChuang Hing Wood Chip Co., Ltd2785476M
Wooden stripChuang Hing Wood Chip Co., Ltd2374652S

References

  1. Ebrary, I. Guide for the care and use of laboratory animals. NIH Publication. 327 (3), 963-965 (2011).
  2. Wang, M., et al. Mechanism of traditional chinese medicine in treating knee osteoarthritis. Journal of Pain Research. 13, 1421-1429 (2020).
  3. Wang, T., Xu, C., Pan, K., Xiong, H. Acupuncture and moxibustion for chronic fatigue syndrome in traditional Chinese medicine: A systematic review and meta-analysis. BMC Complementary and Alternative Medicine. 17 (1), 163(2017).
  4. Zimmermann, M. Ethical guidelines for investigations of experimental pain in conscious animals. Pain. 16 (2), 109-110 (1983).
  5. Zhou, W., et al. Effect of moxibustion and acupuncture on gastric mucosal cell apoptosis and expression of NF-κB, Bcl-2 in chronic atrophic gastritis rats. Acupuncture Research. 46 (4), 284-288 (2021).
  6. Wang, Y., et al. βEffect of moxibustion on -EP and Dyn levels of pain-related indicators in patients with rheumatoid arthritis. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2021, 6637554(2021).
  7. Huang, P., et al. Design of moxibustion device for experimental rabbits. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 39 (09), 1024-1026 (2019).
  8. Li, M., Sun, Z. An automatic moxibustion box with temperature control. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 39 (06), 649-650 (2019).
  9. Luo, Z., Zhang, C., Zhou, M., Chen, C. Manufacture and clinical application of a medical warm moxibustion instrument. Shanghai J Acu-mox. 37 (05), 596-598 (2018).
  10. Liang, Y. L., Sun, Y. H., Sun, Y. H., Sun, L. H., Jiang, H. T. Design and use of rat box for moxibustion experiment. Acupuncture Research. 36 (03), 224(2011).
  11. Meng, J., Fu, W., Zhu, G., Song, L. Effect of acupuncture on coronary collateral circulation function in dogs with experimental myocardial infarction. Acupuncture Research. 3 (1), 196-197 (1986).
  12. Tan, D. Experimental study on the effect of moxibustion at Neiguan point on the content of serum free fatty acid (FFA) in rabbits with acute myocardial ischemia. Liaoning Journal of Traditional Chinese Medicine. 6, 44-45 (1991).
  13. Seo, B., et al. Skeletal muscle regeneration with robotic actuation-mediated clearance of neutrophils. Science Translational Medicine. 13 (614), (2021).
  14. Bielitzki, J. T., Barbee, R. W., Garber, J. Guide for the care and use of laboratory animals. NIH Publication No 85-23(rev). 327 (3), 963-965 (2011).
  15. National Research Council (US), Institute for Laboratory Animal Research. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. National Research Council (US), Institute for Laboratory Animal Research. , National Academies Press. Washington (DC). (1996).
  16. Zuo, C., et al. Ipsi- and contralateral moxibustion generate similar analgesic effect on inflammatory pain. Evidence-based complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2019, 1807287(2019).
  17. Poulaki, S., Rassouli, O., Liapakis, G., Gravanis, A., Venihaki, M. Analgesic and anti-inflammatory effects of the synthetic neurosteroid analogue BNN27 during CFA-induced hyperalgesia. Biomedicines. 9 (9), 1185(2021).
  18. Duan, L., et al. Metabolomics analysis on mice with depression ameliorated by acupoint catgut embedding. Frontiers in Psychiatry. 12, 703516(2021).
  19. Wang, J., et al. Protection against doxorubicin-induced cardiotoxicity through modulating iNOS/ARG 2 balance by electroacupuncture at PC6. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2021, 6628957(2021).
  20. Chen, Y., Gao, X., Sun, C. Pricking and penetrating moxibustion therapy in patients with refractory insomnia: A randomized and controlled clinical trial. Journal of Traditional Chinese Medicine. 38 (5), 754-762 (2018).
  21. Liu, C., et al. Effectiveness and safety of fire-needle moxibustion on insomnia: Protocol for a systematic review and meta-analysis. Medicine. 98 (7), 14509(2019).
  22. Han, K., et al. Moxibustion for treating cancer-related fatigue: A multicenter, assessor-blinded, randomized controlled clinical trial. Cancer Medicine. 10 (14), 4721-4733 (2021).
  23. Bao, C., et al. Effect of mild moxibustion on intestinal microbiota and NLRP6 inflammasome signaling in rats with post-inflammatory irritable bowel syndrome. World Journal of Gastroenterology. 25 (32), 4696-4714 (2019).
  24. Chen, F., et al. Efficacy and safety of moxibustion for chronic low back pain: A systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. Complementary Therapies in Clinical Practice. 39, 101130(2020).
  25. Zhang, C., et al. The role of STIM1/ORAI1 channel in the analgesic effect of grain-sized moxibustion on inflammatory pain mice model. Life Sciences. 280, 119699(2021).
  26. Zhao, L., et al. Effectiveness of moxibustion treatment as adjunctive therapy in osteoarthritis of the knee: A randomized, double-blinded, placebo-controlled clinical trial. Arthritis Research & Therapy. 16 (3), 133(2014).
  27. Goldman, N., et al. Adenosine A1 receptors mediate local anti-nociceptive effects of acupuncture. Nature Neuroscience. 13 (7), 883-888 (2010).
  28. Torres-Rosas, R., et al. Dopamine mediates vagal modulation of the immune system by electroacupuncture. Nature Medicine. 20 (3), 291-295 (2014).
  29. Solovchuk, M., Deng, H., Sheu, T. Experimental and numerical study on the temperature elevation in tissue during moxibustion therapy. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine:eCAM. 2020, 7514302(2020).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved