Stratégies de moxibustion pour les souris

Résumé

Le présent protocole décrit une méthode d’application de la moxibustion pour les souris, avec les avantages de réduire la peur des souris, de garantir leur bien-être et d’améliorer l’efficacité pour les chercheurs.

Résumé

Le domaine de la recherche sur la moxibustion est en pleine expansion, avec une augmentation rapide des publications ces dernières années. La moxibustion est une thérapie qui enflamme le moxa sur la peau des humains, avec une augmentation de la température cutanée périphérique et des rougeurs localisées. Pendant ce traitement, le receveur doit rester immobile pour éviter les brûlures et exposer les sites d’intervention pour une manipulation facile ; Cependant, le maintien d’une posture fixe pendant la moxibustion est un grand défi pour les animaux. Ainsi, la manipulation de la moxibustion chez les petits animaux, comme les souris, peut entraîner plusieurs difficultés pour les chercheurs. De plus, une posture inconfortable pour les animaux peut entraîner la peur et la résistance à la moxibustion, un risque accru de blessure, une diminution du bien-être des animaux et des données de recherche moins valides. Une méthode de moxibustion efficace et confortable est nécessaire pour protéger le bien-être des animaux et minimiser les effets néfastes sur les résultats expérimentaux. Cependant, les méthodes de moxibustion sont très variables et ont souvent une efficacité limitée. Plus important encore, une posture de moxibustion inconfortable pourrait provoquer une réponse de stress, comme celles observées avec l’anxiété, la peur et la colère, ce qui pourrait influencer les données de recherche. Par conséquent, des stratégies de moxibustion animale qui infligent le moins de dommages possible pendant l’intervention sont nécessaires. Ce protocole introduit une méthode d’attache chez la souris pour l’intervention de moxibustion, minimisant l’inconfort de la souris et améliorant l’efficacité de l’étude. Les stratégies essentielles pour attacher les souris et l’application de la moxibustion sont mises en évidence, et la structure de l’instrument d’attache est décrite.

Introduction

La moxibustion est un traitement externe utilisé en médecine traditionnelle chinoise¹. Il a été largement utilisé pendant des siècles comme moyen de rester en forme et de prévenir et guérir les maladies ^2,3. Cependant, le mécanisme de la moxibustion reste à élucider ; Ainsi, ce domaine de recherche s’est élargi ces dernières années à mesure que les chercheurs explorent ses effets et ses mécanismes biologiques.

Lors de la moxibustion, le receveur doit rester immobile pour obtenir les meilleurs résultats⁴. Le traitement de moxibustion dure généralement de 15 à 30 minutes ^5,6. Pour cette raison, la manipulation de la moxibustion pour les animaux, en particulier les petits animaux tels que les souris et les rats (favorable à l’utilisation dans les expériences sur les animaux), est devenue un grand défi pour les chercheurs. La plupart des appareils de moxibustion conviennent à un usage clinique et ne peuvent pas être utilisés pour les animaux, en particulier pour les petits animaux tels que les souris ^7,8,9. En outre, contrairement aux êtres humains, les animaux peuvent à peine suivre les ordres et rester stables pendant un certain temps. Une posture fixe et inconfortable pour les animaux peut entraîner des émotions passives, notamment l’anxiété, la peur, la colère, la nervosité et la résistance au traitement, augmentant le risque de blessure, diminuant le bien-être des animaux et entraînant des données de recherche moins valides¹⁰. Pour résoudre ce problème, dans des études antérieures, des anesthésiques ont été appliqués pendant de longues périodes lors d’expériences sur des animaux impliquant des thérapies externes de médecine traditionnelle chinoise, y compris l’acupuncture, la moxibustion^{et la recherche} sur le massage. Cependant, étant donné que les conditions physiques changent avec l’anesthésie et que, dans la plupart des cas cliniques, la moxibustion est administrée à des personnes en état conscient, l’anesthésie peut avoir un impact sur l’authenticité des données de recherche. Par conséquent, une méthode pour attacher les animaux consciemment et confortablement est devenue un défi. Pour résoudre ces problèmes techniques, des dispositifs spécialisés pour la moxibustion de souris ont été introduits. Ce protocole fournit une méthode d’attache qui aidera les chercheurs à effectuer un traitement de moxibustion sur les animaux, permettant aux animaux de rester stables, conscients et confortables.

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Protocole

Toutes les expériences ont été menées conformément au Guide des National Institutes of Health pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire et ont été approuvées par le Comité institutionnel de soin et d’utilisation des animaux de l’Université de Chengdu. Les soins et l’entretien des animaux en laboratoire ont été effectués conformément aux références^{14 et 15}. Des souris C57BL/6J mâles adultes, pesant de 20 à 25 g, ont été utilisées pour le test. Toutes les souris ont été maintenues sur un cycle lumière/obscurité de 12 heures à 24 °C et 40 % à 50 % d’humidité, avec un accès libre à la nourriture et à l’eau. Le protocole suivant décrit les procédures de moxibustion dans des conditions de logement de laboratoire typiques.

1. Préparation de l’équipement

1. Connexion de la souris
   1. Préparez un dispositif de connexion de souris composé d’une plaque verticale, d’une base de plaque verticale et de supports en bois.
      1. Construisez le corps fixe à l’aide d’une attelle droite en bois (longueur : 30 cm x largeur : 3 cm x hauteur : 3 cm) et fixez la ceinture velcro fixe (qui est composée de deux côtés : un côté crochet (4 cm x 3 cm) et un côté boucle (10 cm x 3 cm)) pour permettre l’attache du corps de la souris tout en conservant sa souplesse (voir tableau des matériaux).
      2. À l’aide d’un pistolet à colle, fixez le côté crochet sur le côté droit de l’attelle en bois et fixez une longueur de 1/4 du côté de la boucle sur le côté gauche.
   2. Placez la souris sur le lit fixe et utilisez la ceinture velcro fixe pour attacher le torse de la souris.
      REMARQUE : Assurez-vous que la courroie d’attache n’est pas assez serrée pour exercer une pression sur le cœur, ce qui pourrait entraîner la mort de la souris. Attachez la souris sans serrer mais fermement.
   3. Utilisez du ruban adhésif pour fixer les membres inférieurs/supérieurs de chaque côté de l’attelle en bois et fixez la queue à la surface de l’attelle en bois.
2. Préparation du support souris-lit
   REMARQUE : Le support comprend une plaque de bois verticale, une plaque de base en bois et des supports en bois. Le support se compose d’une pièce en acier inoxydable en forme de L, qui fournit un support pour chaque lit de souris.
   1. Fixez la plaque verticale sur la plaque de base et créez des rainures carrées dans la plaque de base pour insérer des bâtons de bois utilisés comme chicanes (Figure 1).
   2. Préparez un couvre-chef en plastique transparent si les souris reçoivent de la moxibustion au-dessus de la tête.
      1. À l’aide d’une seringue de 1000 ml, on retire l’aiguille et la tige du noyau. À l’aide d’un outil coupant ou d’un couteau, coupez la gaine de la seringue en deux.
      2. Choisissez l’un ou l’autre côté de la gaine de la seringue, coupez la tête et la queue et mettez la partie centrale de côté (longueur : 4 cm) comme couvre-chef pour la souris.
      3. Percez un trou (1 cm) au centre de l’enveloppe de la seringue à l’aide d’une perceuse et placez un bâtonnet de moxa dans le trou. Placez un couvre-chef sur la tête de la souris pour limiter ses mouvements et la protéger du moxa enflammé.
   3. Fixez deux bandes de bois parallèles (longueur : 7 cm x largeur : 1 cm) et une traverse horizontale (longueur : 7,5 cm x largeur : 1 cm) à l’extrémité tête du lit de souris si les souris reçoivent de la moxibustion sur les membres antérieurs (Figure 2).
      REMARQUE : L’espace entre chaque bande de bois parallèle et le lit de la souris doit être de 1 cm. Le nombre de supports et la hauteur des plaques verticales peuvent être déterminés sur la base des exigences expérimentales. Ces étapes doivent être effectuées en douceur pour éviter de terrifier les souris. Assurez-vous de donner à des souris un entraînement adaptatif pendant 1 semaine avant l’expérience.
3. Préparation du support de bâtonnet de moxibustion
   1. Préparez le porte-bâtonnet de moxibustion composé d’un rectangle métallique magnétique (longueur : 30 cm), d’une base de support (longueur : 5 cm x largeur : 5 cm x hauteur : 2 cm) et de cubes en bois (longueur : 3 cm x largeur : 1,5 cm x hauteur : 1 cm), chacun avec un trou (diamètre : 0,55 cm) au centre dans lequel un bâton de moxa peut être placé (voir tableau des matériaux).
   2. Fixez un aimant plat et fin (longueur : 3 cm × largeur : 1,5 cm, épaisseur : 0,2 cm) sur un côté de chaque cube. L’attraction magnétique entre les cubes avec des bâtonnets de moxa et le support permet de régler la hauteur des bâtonnets de moxa.
      REMARQUE : Assurez-vous que les pôles magnétiques des aimants cubiques sont opposés au pôle de l’aimant du support.
4. Pour enregistrer le début et la fin de la procédure de moxibustion, placez un dispositif de chronométrage (voir Tableau des matériaux) près du dispositif de connexion de la souris où il peut être facilement lu.
5. Utilisez une main nue ou légèrement gantée lorsque vous tenez et attachez les souris. Une main finement gantée est également efficace lors du traitement de moxibustion.

2. Procédure de moxibustion

1. Mettez les gants de laboratoire. Avant le traitement de moxibustion, rasez la fourrure à l’aide d’un rasoir à souris au site de moxibustion pour exposer le point d’acupuncture.
2. Insérez des bâtonnets de moxa (0,5 cm de diamètre et 10 cm de longueur) dans le porte-bâton de moxa (qui comprend le rectangle métallique magnétique, la base du support et des cubes en bois avec des trous en leur centre pour l’insertion de bâtonnets de moxa, et un porte-bâton ne peut accueillir qu’un seul bâton de moxa, étape 1.3).
3. Pour déterminer la température de moxibustion, fixez un thermodétecteur numérique au point d’acupuncture pour surveiller la variation de température.
4. Démarrez la minuterie et allumez le bâton de moxa ; Fixez ou contrôlez la distance entre la peau de l’acupoint et l’extrémité éclairée du bâtonnet de moxa en fonction de la variation de température requise pour l’expérience.

3. Moxibustion simultanée de souris

REMARQUE : Les souris peuvent être traitées par moxibustion en groupe. Un support de lit de souris est utilisé pour positionner les lits de souris de manière à ce qu’un groupe de souris puisse être traité simultanément.

1. Placez chaque lit de souris sur le support et insérez un bâton en bois dans la plaque de base pour protéger les souris contre les chutes (Figure 3).
2. Insérez des bâtonnets de moxa (0,5 cm de diamètre et 12 cm de longueur) dans le porte-bâton de moxibustion à des niveaux qui coïncident avec chaque lit de souris. Ajustez la distance entre le support de souris et le porte-bâton, puis allumez les bâtons de moxa.
   REMARQUE : Cela permet aux souris d’être traitées avec la moxibustion dans un état détendu et confortable. Pendant la moxibustion, assurez-vous que la distance entre le support de souris et le porte-bâton reste constante pour toutes les souris.
3. Avant la modélisation, effectuez les réponses de souris au test du seuil de retrait thermique (TWL) pour déterminer si la moxibustion serait efficace dans l’analgésie.

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Résultats

Le tableau 1 résume les différents facteurs qui affectent les réponses à la moxibustion. Les résultats positifs de la moxibustion chez la souris ont été indiqués par de multiples mesures du bien-être de la souris et des effets positifs.

Ensuite, des exemples spécifiques de résultats obtenus lorsque la technique de moxibustion est associée à des procédures d’injection complètes induites par l’adjuvant de Freund (CFA) sont pr?...

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Discussion

La technique de moxibustion est efficace pour de nombreux troubles, tels que la fatigue, l’insomnie, la diarrhée et le syndrome de la douleur 20,21,22,23,24,25,26. Avec les avantages du traitement par moxibustion pour de nombreuses maladies, le mécanisme...

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matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
Complete Freund's Adjuvant (CFA)	Sigma-Aldrich	SF588102
Glue gun	Deli Group Co., Ltd.	DL5041
Laboratory glove	Boci  Co., Ltd	53625130323
Magnetic metal rectangle (thickness: 0.2 cm)	Sitoo Stationery Co., Ltd	1007908729
Moxa stick	Hanyi Airong factory	5613
Steel sheet	Rizhan metal materials Co., Ltd	1108
Syringe (1000 mL )	Xinmin Fuda Co., Ltd	796341
Timer	Bevoza Co., Ltd	KT003
Velcro belt	Minnesota Mining and Manufacturing Co., Ltd	3MSJ3550
Wooden cube	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	2581457A
Wooden splint	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	3410968M
Wooden stick	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	2785476M
Wooden strip	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	2374652S