Estratégias de moxabustão para camundongos

Resumo

O presente protocolo descreve um método de aplicação de moxabustão para camundongos, com os benefícios de reduzir o medo do camundongo, garantir seu bem-estar e melhorar a eficiência para os pesquisadores.

Resumo

O campo da pesquisa em moxabustão está se expandindo, com um rápido aumento de publicações nos últimos anos. A moxabustão é uma terapia que inflama a moxa na pele dos humanos, com aumento da temperatura periférica da pele e vermelhidão localizada. Durante este tratamento, o receptor deve permanecer imóvel para evitar queimaduras e expor os locais de intervenção para fácil manipulação; No entanto, manter uma postura fixa durante a moxabustão é um grande desafio para os animais. Assim, manipular a moxabustão em pequenos animais, como camundongos, pode levar a várias dificuldades para os pesquisadores. Além disso, uma postura desconfortável para os animais pode levar ao medo e resistência à moxabustão, aumento do risco de lesões, diminuição do bem-estar animal e dados de pesquisa menos válidos. Um método de moxabustão eficiente e confortável é necessário para proteger o bem-estar animal e minimizar os efeitos adversos nos resultados experimentais. No entanto, os métodos de moxabustão são altamente variáveis e geralmente têm eficácia limitada. Mais importante, uma postura de moxabustão desconfortável pode causar uma resposta ao estresse, como as observadas com ansiedade, medo e raiva, o que pode influenciar os dados da pesquisa. Portanto, são necessárias estratégias de moxabustão animal que causem o menor dano possível durante a intervenção. Este protocolo introduz um método de amarração de camundongo para intervenção de moxabustão, minimizando o desconforto do camundongo e melhorando a eficiência do estudo. Estratégias essenciais para amarração de camundongos e aplicação de moxabustão são destacadas, e a estrutura do instrumento de amarração é descrita.

Introdução

A moxabustão é um tratamento externo usado na medicina tradicional chinesa¹. Tem sido amplamente aplicado há séculos como meio de manter a forma e prevenir e curar doenças ^2,3. No entanto, o mecanismo de moxabustão ainda precisa ser elucidado; Assim, esse campo de pesquisa se expandiu nos últimos anos, à medida que os pesquisadores exploram seus efeitos e mecanismos biológicos.

Durante a moxabustão, o receptor deve permanecer imóvel para que os melhores resultados sejam alcançados⁴. O tratamento da moxabustão geralmente dura de 15 a 30 minutos ^5,6. Por causa disso, a manipulação da moxabustão para animais, especialmente pequenos animais, como camundongos e ratos (favoráveis para uso em experimentos com animais), tornou-se um grande desafio para os pesquisadores. A maioria dos dispositivos de moxabustão é adequada para uso clínico e não pode ser usada em animais, especialmente em animais pequenos, como camundongos ^7,8,9. Além disso, ao contrário dos seres humanos, os animais mal conseguem seguir ordens e permanecer estáveis por um tempo. Uma postura fixa e desconfortável para os animais pode levar a emoções passivas, incluindo ansiedade, medo, raiva, nervosismo e resistência ao tratamento, aumentando o risco de lesões, diminuindo o bem-estar animal e resultando em dados de pesquisa menos válidos¹⁰. Para resolver esse problema, em estudos anteriores, os anestésicos foram aplicados por longos períodos durante experimentos com animais envolvendo terapias externas da medicina tradicional chinesa, incluindo acupuntura, moxabustão e pesquisa de massagem 11,12,13. No entanto, dado que as condições físicas mudam com a anestesia e, na maioria dos casos clínicos, a moxabustão é administrada a pessoas em estado de consciência, a anestesia pode afetar a autenticidade dos dados da pesquisa. Portanto, um método de amarrar animais de forma consciente e confortável torna-se um desafio. Para resolver esses problemas técnicos, foram introduzidos dispositivos especializados para moxabustão de camundongos. Este protocolo fornece um método de amarração que ajudará os pesquisadores a realizar o tratamento de moxabustão em animais, permitindo que os animais permaneçam estáveis, conscientes e confortáveis.

Protocolo

Todos os experimentos foram realizados seguindo o Guia dos Institutos Nacionais de Saúde para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório e foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade de TCM de Chengdu. Os cuidados e a manutenção dos animais em laboratório foram realizados seguindo as Referências^14,15. Camundongos C57BL/6J machos adultos, pesando 20-25 g, foram usados para o teste. Todos os camundongos foram mantidos em um ciclo claro/escuro de 12 h a 24 °C e 40%-50% de umidade, com livre acesso a comida e água. O protocolo a seguir descreve os procedimentos de moxabustão em condições típicas de alojamento de laboratório.

1. Preparação do equipamento

1. Amarração do mouse
   1. Prepare um dispositivo de amarração de mouse que consiste em uma placa vertical, base de placa vertical e suportes de madeira.
      1. Construa o corpo fixo usando uma tala reta de madeira (comprimento: 30 cm x largura: 3 cm x altura: 3 cm) e prenda o cinto de velcro fixo (que é composto de dois lados: um lado de gancho (4 cm x 3 cm) e um lado de laço (10 cm x 3 cm)) para permitir a amarração do corpo do mouse, mantendo a flexibilidade (consulte a Tabela de Materiais).
      2. Use uma pistola de cola para prender o lado do gancho no lado direito da tala de madeira e prenda 1/4 do comprimento do lado do laço no lado esquerdo.
   2. Coloque o mouse na cama fixa e use o cinto de velcro fixo para amarrar o torso do mouse.
      NOTA: Certifique-se de que o cinto de amarração não esteja apertado o suficiente para exercer pressão sobre o coração, o que pode levar à morte do mouse. Amarre o mouse frouxamente, mas com firmeza.
   3. Use fita adesiva para prender os membros inferiores/superiores em ambos os lados da tala de madeira e prenda a cauda na superfície da tala de madeira.
2. Preparação do rack de cama de rato
   NOTA: O rack é composto por uma placa de madeira vertical, placa de base de madeira e suportes de madeira. O suporte consiste em uma peça de aço inoxidável em forma de L, que fornece suporte para cada cama de mouse.
   1. Prenda a placa vertical na placa de base e crie ranhuras quadradas na placa de base para inserir palitos de madeira usados como defletores (Figura 1).
   2. Prepare uma cobertura de cabeça de plástico transparente se os camundongos receberem moxabustão acima da cabeça.
      1. Use uma seringa de 1000 mL e remova a agulha e a haste central. Use uma ferramenta de corte ou faca para cortar a capa da seringa ao meio.
      2. Escolha um dos lados da capa da seringa, corte a cabeça e a cauda e coloque a seção do meio de lado (comprimento: 4 cm) como cobertura para o mouse.
      3. Faça um furo (1 cm) no centro da capa da seringa com uma furadeira e coloque um bastão de moxa no orifício. Coloque uma cobertura sobre a cabeça do mouse para limitar o movimento da cabeça e protegê-lo da moxa inflamada.
   3. Prenda duas tiras de madeira paralelas (comprimento: 7 cm x largura: 1 cm) e uma travessa horizontal (comprimento: 7,5 cm x largura: 1 cm) na extremidade da cabeça da cama do rato se os camundongos receberem moxabustão nos membros anteriores (Figura 2).
      NOTA: O espaço entre cada tira de madeira paralela e a cama do rato deve ser de 1 cm. O número de suportes e a altura das placas verticais podem ser determinados com base nos requisitos experimentais. Essas etapas devem ser executadas com cuidado para evitar aterrorizar os ratos. Certifique-se de dar treinamento adaptativo aos ratos por 1 semana antes do experimento.
3. Preparação do suporte do bastão de moxabustão
   1. Prepare o suporte do bastão de moxabustão composto por um retângulo magnético de metal (comprimento: 30 cm), uma base de suporte (comprimento: 5 cm x largura: 5 cm x altura: 2 cm) e cubos de madeira (comprimento: 3 cm x largura: 1.5 cm x altura: 1 cm), cada um com um orifício (diâmetro: 0.55 cm) no centro no qual um bastão de moxa pode ser colocado (consulte a Tabela de Materiais).
   2. Prenda um ímã plano e fino (comprimento: 3 cm × largura: 1,5 cm, espessura: 0,2 cm) em um lado de cada cubo. A atração magnética entre os cubos com palitos de moxa e o suporte permite ajustar a altura dos bastões de moxa.
      NOTA: Certifique-se de que os pólos magnéticos dos ímãs cúbicos estejam opostos ao pólo do ímã do suporte.
4. Para registrar o início e o fim do procedimento de moxabustão, coloque um dispositivo de temporização (consulte a Tabela de Materiais) próximo ao dispositivo de amarração do mouse, onde possa ser facilmente lido.
5. Use a mão nua ou com luvas finas ao segurar e amarrar os ratos. Uma mão com luvas finas também é eficaz durante o tratamento de moxabustão.

2. Procedimento de moxabustão

1. Coloque as luvas de laboratório. Antes do tratamento de moxabustão, raspe o pelo com um barbeador de rato no local da moxabustão para expor o ponto de acupuntura.
2. Insira bastões de moxa (0.5 cm de diâmetro e 10 cm de comprimento) no suporte do bastão de moxabustão (que compreende o retângulo de metal magnético, a base do suporte e os cubos de madeira com orifícios em seus centros para inserção do bastão de moxa, e um suporte de bastão só pode acomodar um bastão de moxa, etapa 1.3).
3. Para determinar a temperatura de moxabustão, conecte um termodetector digital no ponto de acupuntura para monitorar a variação de temperatura.
4. Inicie o cronômetro e acenda o bastão de moxa; Fixe ou controle a distância entre a pele do ponto de acupuntura e a extremidade iluminada do bastão de moxa, dependendo da variação de temperatura necessária para o experimento.

3. Moxabustão simultânea de camundongos

NOTA: Os camundongos podem ser tratados com moxabustão como um grupo. Um rack de cama de rato é usado para posicionar as camas de rato de modo que um grupo de ratos possa ser tratado simultaneamente.

1. Coloque cada cama de mouse no rack e insira um bastão de madeira na placa de base para proteger os mouses de cair (Figura 3).
2. Insira palitos de moxa (0,5 cm de diâmetro e 12 cm de comprimento) no suporte do bastão de moxabustão em níveis que coincidam com cada cama de rato. Ajuste a distância entre o rack do mouse e o suporte do bastão e, em seguida, acenda os bastões de moxa.
   NOTA: Isso permite que os camundongos sejam tratados com moxabustão em um estado relaxado e confortável. Durante a moxabustão, certifique-se de que a distância entre o rack do mouse e o suporte do stick permaneça consistente para todos os mouses.
3. Antes de modelar, conduza as respostas do camundongo ao teste do limiar de retirada térmica (TWL) para determinar se a moxabustão seria eficaz na analgesia.

Resultados

A Tabela 1 resume os diferentes fatores que afetam as respostas à moxabustão. Os resultados positivos da moxabustão de camundongos foram indicados por várias medidas de bem-estar de camundongos e efeitos positivos.

A seguir, são descritos exemplos específicos de resultados obtidos quando a técnica de moxabustão é combinada com procedimentos completos de injeção induzida por adjuvante de Freund (CFA). O teste do limiar de retirada t?...

Discussão

A técnica de moxabustão é eficaz para muitos distúrbios, como fadiga, insônia, diarreia e síndrome da dor 20,21,22,23,24,25,26. Com os benefícios do tratamento da moxabustão para muitas doenças, o mecanismo dessa técnica tem atraído a atenção do...

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
Complete Freund's Adjuvant (CFA)	Sigma-Aldrich	SF588102
Glue gun	Deli Group Co., Ltd.	DL5041
Laboratory glove	Boci  Co., Ltd	53625130323
Magnetic metal rectangle (thickness: 0.2 cm)	Sitoo Stationery Co., Ltd	1007908729
Moxa stick	Hanyi Airong factory	5613
Steel sheet	Rizhan metal materials Co., Ltd	1108
Syringe (1000 mL )	Xinmin Fuda Co., Ltd	796341
Timer	Bevoza Co., Ltd	KT003
Velcro belt	Minnesota Mining and Manufacturing Co., Ltd	3MSJ3550
Wooden cube	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	2581457A
Wooden splint	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	3410968M
Wooden stick	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	2785476M
Wooden strip	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	2374652S