마우스를 위한 뜸 전략

요약

본 프로토콜은 생쥐에 대한 뜸 적용 방법을 설명하며, 생쥐에 대한 두려움을 줄이고, 생쥐의 복지를 보장하며, 연구자의 효율성을 향상시키는 이점이 있습니다.

초록

뜸 연구 분야는 최근 몇 년 동안 출판물이 급격히 증가함에 따라 확장되고 있습니다. 뜸은 인간의 피부에 뜸을 발화시키는 치료법으로, 말초 피부 온도가 상승하고 국소적으로 발적이 됩니다. 이 치료 동안 수혜자는 화상을 방지하고 쉽게 조작할 수 있도록 개입 부위를 노출시키기 위해 가만히 있어야 합니다. 그러나 뜸을 하는 동안 고정된 자세를 유지하는 것은 동물에게 큰 도전입니다. 따라서 쥐와 같은 작은 동물의 뜸을 조작하는 것은 연구자에게 몇 가지 어려움을 초래할 수 있습니다. 또한 동물의 불편한 자세는 뜸에 대한 두려움과 저항, 부상 위험 증가, 동물 복지 저하 및 유효한 연구 데이터 감소로 이어질 수 있습니다. 동물의 복지를 보호하고 실험 결과에 대한 부작용을 최소화하기 위해 효율적이고 편안한 뜸 방법이 필요합니다. 그러나 뜸 방법은 매우 다양하며 효능이 제한적인 경우가 많습니다. 더 중요한 것은 불편한 뜸 자세가 불안, 두려움 및 분노와 함께 관찰되는 것과 같은 스트레스 반응을 유발할 수 있으며, 이는 연구 데이터에 영향을 미칠 수 있습니다. 따라서 개입 중에 가능한 한 최소한의 해를 입히는 동물 뜸 전략이 필요합니다. 이 프로토콜은 뜸 개입을 위한 마우스 테더링 방법을 도입하여 마우스의 불편함을 최소화하고 연구 효율성을 향상시킵니다. 테더링 마우스와 뜸의 적용을 위한 필수 전략이 강조되고 테더링 기기의 구조가 설명됩니다.

서문

뜸은 중국 전통 의학에서 사용되는 외부 치료법입니다¹. 그것은 건강을 유지하고 질병을 예방하고 치료하는 수단으로 수세기 동안 널리 적용되어 왔습니다 ^2,3. 그러나 뜸의 메커니즘은 아직 밝혀지지 않았습니다. 따라서 이 연구 분야는 연구자들이 그 효과와 생물학적 메커니즘을 탐구함에 따라 최근 몇 년 동안 확장되었습니다.

뜸을 사용하는 동안 수혜자는 최상의 결과를 얻기 위해 가만히 있어야 합니다⁴. 뜸 치료는 일반적으로 15-30 분 동안 지속됩니다 ^5,6. 이 때문에 동물, 특히 생쥐와 쥐와 같은 작은 동물(동물 실험에 사용하기에 유리함)에 대한 뜸 조작은 연구자들에게 큰 도전이 되었습니다. 대부분의 뜸 장치는 임상용으로 적합하며 동물, 특히 마우스와 같은 작은 동물에게는 사용할 수 없습니다 ^7,8,9. 게다가 동물은 인간과 달리 명령을 거의 따르지 못하고 한동안 안정을 유지한다. 동물의 고정되고 불편한 자세는 불안, 두려움, 분노, 긴장, 치료에 대한 저항과 같은 수동적 감정으로 이어질 수 있으며, 부상 위험을 증가시키고 동물 복지를 감소시키며 타당성을 떨어뜨리는 결과를 초래할 수 있다¹⁰. 이 문제를 해결하기 위해 이전 연구에서는 침술, 뜸, 마사지 연구를 포함한 외부 전통 한의학 요법과 관련된 동물 실험에서 장기간 마취제를 적용했습니다 11,12,13. 그러나 마취에 따라 신체 상태가 변하고 대부분의 임상 사례에서 뜸이 의식 상태에 있는 사람들에게 투여된다는 점을 감안할 때 마취는 연구 데이터의 신뢰성에 영향을 미칠 수 있습니다. 따라서 동물을 의식적이고 편안하게 묶는 방법은 도전이 됩니다. 이러한 기술적 문제를 해결하기 위해 마우스 뜸을 위한 특수 장치가 도입되었습니다. 이 프로토콜은 연구자가 동물에 대한 뜸 치료를 수행하는 데 도움이 되는 테더링 방법을 제공하여 동물이 안정되고 의식이 있으며 편안하게 지낼 수 있도록 합니다.

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프로토콜

모든 실험은 미국 국립보건원(National Institutes of Health)의 실험실 동물 관리 및 사용 가이드(National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals)에 따라 수행되었으며, 청두 대학교 한의학 기관 동물 관리 및 사용 위원회(Chengdu University of TCM Institutional Animal Care and Use Committee)의 승인을 받았습니다. 실험실에서 동물의 관리 및 유지는 참고 문헌^14,15에 따라 수행되었습니다. 무게가 20-25g인 성인 수컷 C57BL/6J 마우스가 테스트에 사용되었습니다. 모든 마우스는 24°C 및 40%-50% 습도에서 12시간 라이트/다크 주기로 유지되었으며 음식과 물에 자유롭게 접근할 수 있었습니다. 다음 프로토콜은 일반적인 실험실 하우징 조건에서의 뜸 절차를 보여줍니다.

1. 장비 준비

1. 마우스 테더링
   1. 수직 플레이트, 수직 플레이트 베이스 및 나무로 만든 브래킷으로 구성된 마우스 테더링 장치를 준비합니다.
      1. 곧은 나무 부목(길이: 30cm x 너비: 3cm x 높이: 3cm)을 사용하여 고정 몸체를 구성하고 고정 벨크로 벨트(후크 면(4cm x 3cm)와 루프 면(10cm x 3cm)의 양면으로 구성)을 부착하여 유연성을 유지하면서 마우스 본체를 테더링할 수 있습니다( 재료 표 참조).
      2. 글루건을 사용하여 나무 부목의 오른쪽에 있는 고리 쪽을 부착하고 왼쪽에 루프 쪽의 1/4 길이를 부착합니다.
   2. 고정된 침대에 마우스를 놓고 고정된 벨크로 벨트를 사용하여 마우스의 몸통을 묶습니다.
      알림: 테더링 벨트가 마우스의 죽음으로 이어질 수 있는 심장에 압력을 가할 만큼 충분히 조이지 않았는지 확인하십시오. 마우스를 느슨하지만 단단히 묶습니다.
   3. 테이프를 사용하여 나무 부목의 양쪽에 하지/상지를 부착하고 꼬리를 나무 부목 표면에 부착합니다.
2. 마우스 베드 랙 준비
   알림: 랙은 수직 목재 플레이트, 목재 베이스 플레이트 및 목재 브래킷으로 구성됩니다. 브래킷은 각 마우스 베드를 지지하는 L자형 스테인리스 스틸 조각으로 구성됩니다.
   1. 수직 플레이트를 베이스 플레이트에 부착하고 베이스 플레이트에 사각형 홈을 만들어 배플로 사용되는 나무 막대기를 삽입합니다(그림 1).
   2. 쥐가 머리 위로 뜸을 투여하는 경우 투명한 플라스틱 머리 덮개를 준비하십시오.
      1. 1000mL 주사기를 사용하여 바늘과 심봉을 제거합니다. 절단 도구나 칼을 사용하여 주사기 재킷을 반으로 자릅니다.
      2. 주사기 재킷의 양쪽을 선택하고 머리와 꼬리를 자르고 중간 부분(길이: 4cm)을 마우스의 헤드 커버로 따로 설정합니다.
      3. 드릴 머신으로 주사기 재킷 중앙에 구멍(1cm)을 뚫고 구멍에 뜸 스틱을 놓습니다. 마우스의 머리 위에 헤드 커버를 씌워 머리의 움직임을 제한하고 발화된 뜸쑥으로부터 마우스를 보호합니다.
   3. 쥐가 앞다리에 뜸을 투여하는 경우 두 개의 평행한 나무 스트립(길이: 7cm x 너비: 1cm)과 수평 십자형(길이: 7.5cm x 너비: 1cm)을 마우스 침대의 머리 끝에 부착합니다(그림 2).
      알림: 각 평행한 나무 스트립과 마우스 침대 사이의 공간은 1cm여야 합니다. 브래킷의 수와 수직 플레이트의 높이는 실험 요구 사항에 따라 결정될 수 있습니다. 이 단계는 쥐를 겁에 질리게 하지 않도록 부드럽게 수행해야 합니다. 실험 1주일 전에 생쥐에게 적응형 훈련을 제공해야 합니다.
3. 뜸 스틱 홀더의 준비
   1. 뜸 스틱 홀더는 금속 자성 직사각형(길이: 30cm), 브래킷 베이스(길이: 5cm x 너비: 5cm x 높이: 2cm), 나무 큐브(길이: 3cm x 너비: 1.5cm x 높이: 1cm)로 구성되며, 각각 중앙에 뜸쑥 스틱을 넣을 수 있는 구멍(직경: 0.55cm)이 있습니다( 재료표 참조).
   2. 평평하고 얇은 자석(길이: 3cm×, 너비: 1.5cm, 두께: 0.2cm)을 각 큐브의 한쪽 면에 부착합니다. 뜸쑥 스틱이 있는 큐브와 홀더 사이의 자성 인력으로 인해 뜸쑥 스틱의 높이를 조정할 수 있습니다.
      알림: 큐브 자석의 자극이 홀더 자석의 극 반대쪽에 있는지 확인하십시오.
4. 뜸 절차의 시작과 끝을 기록하려면 마우스 테더링 장치 근처에 타이밍 장치( 재료 표 참조)를 쉽게 읽을 수 있는 위치에 놓습니다.
5. 마우스를 잡고 묶을 때 맨손이나 얇은 장갑을 낀 손을 사용하십시오. 장갑을 낀 손은 뜸 시술에도 효과적입니다.

2. 뜸의 시술

1. 실험실 장갑을 끼십시오. 뜸 치료 전에는 뜸 부위 에서 마우스 면 도기로 털을 깎아 경혈을 노출시킵니다.
2. 뜸쑥 스틱 홀더(직경 0.5cm, 길이 10cm)를 뜸쑥 스틱 홀더(자성 금속 직사각형, 브래킷 베이스, 뜸쑥 스틱 삽입을 위해 중앙에 구멍이 있는 나무 큐브로 구성, 하나의 스틱 홀더는 하나의 뜸쑥 스틱만 수용할 수 있음)에 삽입합니다.
3. 뜸 온도를 확인하려면 경혈에 디지털 온도 감지기를 부착하여 온도 변화를 모니터링합니다.
4. 타이머를 시작하고 뜸쑥 스틱에 불을 붙입니다. 실험에 필요한 온도 변화에 따라 경혈의 피부와 뜸쑥 스틱의 조명이 켜진 끝 부분 사이의 거리를 고정하거나 제어합니다.

3. 동시 마우스 뜸

참고: 마우스는 그룹으로 뜸으로 치료할 수 있습니다. 마우스 베드 랙은 마우스 베드를 배치하는 데 사용되어 마우스 그룹을 동시에 치료할 수 있습니다.

1. 각 마우스 베드를 랙에 놓고 나무 막대기를 베이스 플레이트에 삽입하여 마우스가 떨어지지 않도록 보호합니다(그림 3).
2. 뜸쑥 스틱(직경 0.5cm, 길이 12cm)을 각 마우스 베드와 일치하는 높이로 뜸 스틱 홀더에 삽입합니다. 마우스 랙과 스틱 홀더 사이의 거리를 조정한 다음 뜸쑥 스틱에 불을 붙입니다.
   참고: 이를 통해 마우스는 편안하고 편안한 상태에서 뜸으로 치료할 수 있습니다. 뜸을 사용하는 동안 마우스 랙과 스틱 홀더 사이의 거리가 모든 마우스에 대해 일정하게 유지되는지 확인하십시오.
3. 모델링하기 전에 열 인출 임계값(TWL) 테스트에 대한 마우스 반응을 수행하여 뜸이 진통제에 효과적인지 여부를 확인합니다.

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결과

표 1 은 뜸에 대한 반응에 영향을 미치는 다양한 요인을 요약한 것입니다. 생쥐 뜸의 긍정적인 결과는 생쥐 복지와 긍정적인 효과에 대한 여러 측정에 의해 나타났습니다.

다음으로, 뜸 기법을 완전한 Freund's adjuvant(CFA) 유도 주입 절차와 결합할 때 얻을 수 있는 결과의 구체적인 예가 요약됩니다. 통증 완화에 대한 뜸의 효능을 평가하기 위...

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토론

뜸 기법은 피로, 불면증, 설사, 통증 증후군과 같은 많은 질환에 효과적이다 20,21,22,23,24,25,26. 많은 질병에 대한 뜸 치료의 이점으로 인해이 기술의 메커니즘은 연구자들의 관심을 끌었습니다. 동?...

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자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Complete Freund's Adjuvant (CFA)	Sigma-Aldrich	SF588102
Glue gun	Deli Group Co., Ltd.	DL5041
Laboratory glove	Boci  Co., Ltd	53625130323
Magnetic metal rectangle (thickness: 0.2 cm)	Sitoo Stationery Co., Ltd	1007908729
Moxa stick	Hanyi Airong factory	5613
Steel sheet	Rizhan metal materials Co., Ltd	1108
Syringe (1000 mL )	Xinmin Fuda Co., Ltd	796341
Timer	Bevoza Co., Ltd	KT003
Velcro belt	Minnesota Mining and Manufacturing Co., Ltd	3MSJ3550
Wooden cube	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	2581457A
Wooden splint	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	3410968M
Wooden stick	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	2785476M
Wooden strip	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	2374652S