Strategie di moxibustione per i topi

Riepilogo

Il presente protocollo descrive un metodo di applicazione della moxibustione per i topi, con i vantaggi di ridurre la paura dei topi, garantire il loro benessere e migliorare l'efficienza per i ricercatori.

Abstract

Il campo della ricerca sulla moxibustione è in espansione, con un rapido aumento delle pubblicazioni negli ultimi anni. La moxibustione è una terapia che accende la moxa sulla pelle dell'uomo, con un aumento della temperatura cutanea periferica e arrossamenti localizzati. Durante questo trattamento, il ricevente deve rimanere fermo per evitare scottature ed esporre i siti di intervento per una facile manipolazione; Tuttavia, mantenere una postura fissa durante la moxibustione è una grande sfida per gli animali. Pertanto, la manipolazione della moxibustione in piccoli animali, come i topi, può portare a diverse difficoltà per i ricercatori. Inoltre, una postura scomoda per gli animali può portare a paura e resistenza alla moxibustione, aumento del rischio di lesioni, diminuzione del benessere degli animali e dati di ricerca meno validi. È necessario un metodo di moxibustione efficiente e confortevole per proteggere il benessere degli animali e ridurre al minimo gli effetti negativi sui risultati sperimentali. Tuttavia, i metodi di moxibustione sono molto variabili e spesso hanno un'efficacia limitata. Ancora più importante, una postura scomoda di moxibustione potrebbe causare una risposta allo stress, come quelle osservate con ansia, paura e rabbia, che potrebbero influenzare i dati della ricerca. Pertanto, sono necessarie strategie per la moxibustione animale che infliggano il minor danno possibile durante l'intervento. Questo protocollo introduce un metodo di tethering del topo per l'intervento di moxibustione, riducendo al minimo il disagio del topo e migliorando l'efficienza dello studio. Vengono evidenziate le strategie essenziali per il tethering dei topi e l'applicazione della moxibustione e viene descritta la struttura dello strumento di tethering.

Introduzione

La moxibustione è un trattamento esterno utilizzato nella medicina tradizionale cinese¹. È stato ampiamente applicato per secoli come mezzo per mantenersi in forma e prevenire e curare le malattie ^2,3. Tuttavia, il meccanismo della moxibustione rimane da chiarire; Pertanto, questo campo di ricerca si è ampliato negli ultimi anni man mano che i ricercatori ne esplorano gli effetti e i meccanismi biologici.

Durante la moxibustione, il ricevente deve rimanere fermo per ottenere i migliori risultati⁴. Il trattamento con moxibustione dura in genere 15-30 minuti ^5,6. Per questo motivo, la manipolazione della moxibustione per gli animali, in particolare per piccoli animali come topi e ratti (favorevole per l'uso negli esperimenti sugli animali), è diventata una grande sfida per i ricercatori. La maggior parte dei dispositivi di moxibustione sono adatti per uso clinico e non possono essere utilizzati per gli animali, in particolare per piccoli animali come i topi ^7,8,9. Oltre a questo, a differenza degli esseri umani, gli animali riescono a malapena a seguire gli ordini e a rimanere fermi per un po'. Una postura fissa e scomoda per gli animali può portare a emozioni passive, tra cui ansia, paura, rabbia, nervosismo e resistenza al trattamento, aumentando il rischio di lesioni, diminuendo il benessere degli animali e risultando in dati di ricerca meno validi¹⁰. Per risolvere questo problema, in studi precedenti, gli anestetici sono stati applicati per lunghi periodi durante esperimenti sugli animali che coinvolgono terapie esterne di medicina tradizionale cinese, tra cui agopuntura, moxibustione e ricerca sui massaggi 11,12,13. Tuttavia, dato che le condizioni fisiche cambiano con l'anestesia e, nella maggior parte dei casi clinici, la moxibustione viene somministrata a persone in stato cosciente, l'anestesia potrebbe influire sull'autenticità dei dati di ricerca. Pertanto, un metodo per legare gli animali in modo consapevole e confortevole diventa una sfida. Per risolvere questi problemi tecnici, sono stati introdotti dispositivi specializzati per la moxibustione del topo. Questo protocollo fornisce un metodo di legatura che aiuterà i ricercatori a eseguire il trattamento di moxibustione sugli animali, consentendo agli animali di rimanere fermi, coscienti e a proprio agio.

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Protocollo

Tutti gli esperimenti sono stati condotti seguendo la Guida del National Institutes of Health per la cura e l'uso degli animali da laboratorio e sono stati approvati dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali dell'Università di Chengdu. La cura e il mantenimento degli animali in laboratorio sono stati eseguiti seguendo i riferimenti ^14,15. Per il test sono stati utilizzati topi maschi adulti C57BL/6J, del peso di 20-25 g. Tutti i topi sono stati mantenuti con un ciclo luce/buio di 12 ore a 24 °C e 40%-50% di umidità, con libero accesso a cibo e acqua. Il seguente protocollo descrive le procedure di moxibustione in condizioni tipiche di stabulazione in laboratorio.

1. Preparazione dell'attrezzatura

1. Tethering del mouse
   1. Preparare un dispositivo di fissaggio del mouse composto da una piastra verticale, una base della piastra verticale e staffe in legno.
      1. Costruire il corpo fisso utilizzando una stecca di legno diritta (lunghezza: 30 cm x larghezza: 3 cm x altezza: 3 cm) e fissare la cintura fissa in velcro (che è composta da due lati: un lato del gancio (4 cm x 3 cm) e un lato dell'anello (10 cm x 3 cm)) per consentire il fissaggio del corpo del mouse mantenendo la flessibilità (vedi Tabella dei materiali).
      2. Usa una pistola per colla per fissare il lato del gancio sul lato destro della stecca di legno e attacca una lunghezza di 1/4 del lato dell'anello sul lato sinistro.
   2. Posiziona il mouse sul letto fisso e usa la cintura in velcro fissa per legare il busto del mouse.
      NOTA: Assicurarsi che la cinghia di fissaggio non sia sufficientemente tesa da esercitare una pressione sul cuore, che potrebbe portare alla morte del topo. Legare il mouse in modo lasco ma fermo.
   3. Usa del nastro adesivo per attaccare gli arti inferiori/superiori su entrambi i lati della stecca di legno e attacca la coda alla superficie della stecca di legno.
2. Preparazione della griglia per il letto del topo
   NOTA: Il rack comprende una piastra di legno verticale, una piastra di base in legno e staffe in legno. La staffa è costituita da un pezzo di acciaio inossidabile a forma di L, che fornisce supporto per ogni letto del mouse.
   1. Fissare la piastra verticale sulla piastra di base e creare scanalature quadrate nella piastra di base per inserire i bastoncini di legno usati come deflettori (Figura 1).
   2. Preparare un copritesta di plastica trasparente se ai topi viene somministrata la moxibustione sopra la testa.
      1. Utilizzare una siringa da 1000 ml e rimuovere l'ago e l'asta centrale. Utilizzare uno strumento da taglio o un coltello per tagliare a metà la camicia della siringa.
      2. Scegliere uno dei lati del rivestimento della siringa, tagliare la testa e la coda e mettere da parte la sezione centrale (lunghezza: 4 cm) come copricapo per il topo.
      3. Praticare un foro (1 cm) al centro della camicia della siringa con un trapano e posizionare un bastoncino di moxa nel foro. Posiziona un copricapo sulla testa del topo per limitare il movimento della testa e proteggerlo dalla moxa accesa.
   3. Attaccare due strisce di legno parallele (lunghezza: 7 cm x larghezza: 1 cm) e una traversa orizzontale (lunghezza: 7,5 cm x larghezza: 1 cm) all'estremità della testa del letto del topo se ai topi viene somministrata la moxibustione sugli arti anteriori (Figura 2).
      NOTA: Lo spazio tra ogni striscia di legno parallela e il letto del mouse deve essere di 1 cm. Il numero di staffe e l'altezza delle piastre verticali possono essere determinati in base ai requisiti sperimentali. Questi passaggi devono essere eseguiti delicatamente per evitare di terrorizzare i topi. Assicurati di dare ai topi un allenamento adattivo per 1 settimana prima dell'esperimento.
3. Preparazione del supporto per bastoncino da moxibustione
   1. Preparare il supporto per bastoncino da moxibustione composto da un rettangolo magnetico in metallo (lunghezza: 30 cm), una base per staffa (lunghezza: 5 cm x larghezza: 5 cm x altezza: 2 cm) e cubi di legno (lunghezza: 3 cm x larghezza: 1,5 cm x altezza: 1 cm), ciascuno con un foro (diametro: 0,55 cm) al centro in cui può essere posizionato un bastoncino di moxa (vedi Tabella dei materiali).
   2. Attacca un magnete piatto e sottile (lunghezza: 3 cm × larghezza: 1,5 cm, spessore: 0,2 cm) su un lato di ogni cubo. L'attrazione magnetica tra i cubetti con i bastoncini di moxa e il supporto permette di regolare l'altezza dei bastoncini di moxa.
      NOTA: Assicurarsi che i poli magnetici dei cubi magnetici siano opposti al polo del magnete di supporto.
4. Per registrare l'inizio e la fine della procedura di moxibustione, posizionare un dispositivo di cronometraggio (vedi Tabella dei materiali) vicino al dispositivo di tethering del mouse dove può essere facilmente letto.
5. Usa una mano nuda o con i guanti sottili quando tieni e leghi i topi. Una mano guantata sottile è efficace anche durante il trattamento di moxibustione.

2. Procedura di moxibustione

1. Indossare i guanti da laboratorio. Prima del trattamento di moxibustione, radere la pelliccia con il rasoio per topi nel sito di moxibustione per esporre il punto di agopuntura.
2. Inserire i bastoncini di moxa (0.5 cm di diametro e 10 cm di lunghezza) nel supporto del bastoncino di moxibustione (che comprende il rettangolo metallico magnetico, la base della staffa e i cubi di legno con fori al centro per l'inserimento del bastoncino di moxa, e un supporto per bastoncini può ospitare solo un bastoncino di moxa, passaggio 1.3).
3. Per accertare la temperatura di moxibustione, collegare un termorivelatore digitale al punto di agopuntura per monitorare la variazione di temperatura.
4. Avvia il timer e accendi il bastoncino di moxa; Fissa o controlla la distanza tra la pelle del punto di agopuntura e l'estremità illuminata del bastoncino di moxa a seconda della variazione di temperatura richiesta per l'esperimento.

3. Moxibustione simultanea del topo

NOTA: I topi possono essere trattati con la moxibustione in gruppo. Un supporto per topi viene utilizzato per posizionare i letti per topi in modo che un gruppo di topi possa essere trattato contemporaneamente.

1. Posizionare ogni letto per mouse sulla griglia e inserire un bastoncino di legno nella piastra di base per proteggere i topi dalla caduta (Figura 3).
2. Inserire i bastoncini di moxa (0,5 cm di diametro e 12 cm di lunghezza) nel supporto del bastoncino di moxibustione a livelli che coincidono con ogni letto del mouse. Regola la distanza tra il supporto del mouse e il supporto del bastoncino, quindi accendi i bastoncini di moxa.
   NOTA: Ciò consente ai topi di essere trattati con moxibustione in uno stato rilassato e confortevole. Durante la moxibustione, assicurarsi che la distanza tra il supporto per mouse e il supporto del bastoncino rimanga costante per tutti i mouse.
3. Prima della modellazione, eseguire il test delle risposte del topo alla soglia di ritiro termico (TWL) per determinare se la moxibustione sarebbe efficace nell'analgesia.

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Risultati

La tabella 1 riassume i diversi fattori che influenzano le risposte alla moxibustione. Gli esiti positivi della moxibustione del topo sono stati indicati da molteplici misure del benessere del topo e dagli effetti positivi.

Successivamente, vengono delineati esempi specifici di risultati ottenuti quando la tecnica di moxibustione è abbinata a procedure di iniezione complete indotte da adiuvante di Freund (CFA). Il test della soglia di ritiro ...

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Discussione

La tecnica della moxibustione è efficace per molti disturbi, come affaticamento, insonnia, diarrea e sindrome del dolore 20,21,22,23,24,25,26. Con i benefici del trattamento con moxibustione per molte malattie, il meccanismo di questa tecnica ha attirato l'...

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Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
Complete Freund's Adjuvant (CFA)	Sigma-Aldrich	SF588102
Glue gun	Deli Group Co., Ltd.	DL5041
Laboratory glove	Boci  Co., Ltd	53625130323
Magnetic metal rectangle (thickness: 0.2 cm)	Sitoo Stationery Co., Ltd	1007908729
Moxa stick	Hanyi Airong factory	5613
Steel sheet	Rizhan metal materials Co., Ltd	1108
Syringe (1000 mL )	Xinmin Fuda Co., Ltd	796341
Timer	Bevoza Co., Ltd	KT003
Velcro belt	Minnesota Mining and Manufacturing Co., Ltd	3MSJ3550
Wooden cube	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	2581457A
Wooden splint	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	3410968M
Wooden stick	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	2785476M
Wooden strip	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	2374652S