Estrategias de moxibustión para ratones

Resumen

El presente protocolo describe un método de aplicación de moxibustión para ratones, con los beneficios de reducir el miedo de los ratones, garantizar su bienestar y mejorar la eficiencia para los investigadores.

Resumen

El campo de la investigación de la moxibustión se está expandiendo, con un rápido aumento de publicaciones en los últimos años. La moxibustión es una terapia que enciende la moxa en la piel de los seres humanos, con un aumento de la temperatura periférica de la piel y enrojecimiento localizado. Durante este tratamiento, el receptor debe permanecer quieto para evitar quemaduras y exponer los sitios de intervención para facilitar la manipulación; Sin embargo, mantener una postura fija durante la moxibustión es un gran desafío para los animales. Por lo tanto, la manipulación de la moxibustión en animales pequeños, como ratones, puede generar varias dificultades para los investigadores. Además, una postura incómoda para los animales puede provocar miedo y resistencia a la moxibustión, un mayor riesgo de lesiones, una disminución del bienestar animal y menos datos de investigación válidos. Se necesita un método de moxibustión eficiente y cómodo para proteger el bienestar animal y minimizar los efectos adversos en los resultados experimentales. Sin embargo, los métodos de moxibustión son muy variables y, a menudo, tienen una eficacia limitada. Más importante aún, una postura incómoda de moxibustión podría causar una respuesta al estrés, como las observadas con ansiedad, miedo e ira, lo que podría influir en los datos de la investigación. Por lo tanto, se requieren estrategias para la moxibustión animal que inflijan el menor daño posible durante la intervención. Este protocolo introduce un método de anclaje de ratón para la intervención de moxibustión, minimizando las molestias en ratones y mejorando la eficiencia del estudio. Se destacan las estrategias esenciales para atar ratones y la aplicación de moxibustión, y se describe la estructura del instrumento de anclaje.

Introducción

La moxibustión es un tratamiento externo utilizado en la medicina tradicional china¹. Se ha aplicado ampliamente durante siglos como un medio para mantenerse en forma y prevenir y curar enfermedades ^2,3. Sin embargo, el mecanismo de la moxibustión aún no se ha dilucidado; Por lo tanto, este campo de investigación se ha expandido en los últimos años a medida que los investigadores exploran sus efectos y mecanismos biológicos.

Durante la moxibustión, el receptor debe permanecer quieto para que se logren los mejores resultados⁴. El tratamiento con moxibustión suele durar entre 15 y 30 minutos ^5,6. Debido a esto, la manipulación de la moxibustión para animales, especialmente animales pequeños como ratones y ratas (favorables para su uso en experimentos con animales), se ha convertido en un gran desafío para los investigadores. La mayoría de los dispositivos de moxibustión son adecuados para uso clínico y no se pueden utilizar para animales, especialmente para animales pequeños como ratones ^7,8,9. Además de esto, a diferencia de los seres humanos, los animales apenas pueden seguir órdenes y permanecer estables durante un tiempo. Una postura fija e incómoda para los animales puede provocar emociones pasivas, como ansiedad, miedo, ira, nerviosismo y resistencia al tratamiento, lo que aumenta el riesgo de lesiones, disminuye el bienestar animal y da lugar^{a datos de} investigación menos válidos. Para resolver este problema, en estudios previos, se han aplicado anestésicos durante períodos prolongados durante experimentos con animales que involucran terapias externas de medicina tradicional china, incluyendo la acupuntura, la moxibustión y la investigación de masajes 11,12,13. Sin embargo, dado que las condiciones físicas cambian con la anestesia y, en la mayoría de los casos clínicos, la moxibustión se administra a personas en estados conscientes, la anestesia podría afectar la autenticidad de los datos de la investigación. Por lo tanto, un método para atar a los animales consciente y cómodamente se convierte en un desafío. Para resolver estos problemas técnicos, se han introducido dispositivos especializados para la moxibustión del ratón. Este protocolo proporciona un método de anclaje que ayudará a los investigadores a realizar el tratamiento de moxibustión en animales, permitiendo que los animales permanezcan estables, conscientes y cómodos.

Protocolo

Todos los experimentos se llevaron a cabo siguiendo la Guía de los Institutos Nacionales de Salud para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio y fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Medicina Tradicional China de Chengdu. El cuidado y mantenimiento de los animales en el laboratorio se realizó siguiendo las Referencias ^14,15. Para la prueba se utilizaron ratones machos adultos C57BL/6J, con un peso de 20-25 g. Todos los ratones se mantuvieron en un ciclo de luz/oscuridad de 12 h a 24 °C y 40%-50% de humedad, con libre acceso a alimentos y agua. El siguiente protocolo describe los procedimientos de moxibustión en condiciones típicas de alojamiento de laboratorio.

1. Preparación del equipo

1. Anclaje a red del ratón
   1. Prepare un dispositivo de anclaje del mouse que consta de una placa vertical, una base de placa vertical y soportes hechos de madera.
      1. Construya el cuerpo fijo con una férula recta de madera (largo: 30 cm x ancho: 3 cm x alto: 3 cm) y fije el cinturón de velcro fijo (que se compone de dos lados: un lado de gancho (4 cm x 3 cm) y un lado de lazo (10 cm x 3 cm)) para permitir el amarre del cuerpo del mouse mientras se mantiene la flexibilidad (consulte la tabla de materiales).
      2. Use una pistola de pegamento para sujetar el lado del gancho en el lado derecho de la férula de madera y fije una longitud de 1/4 del lado del lazo en el lado izquierdo.
   2. Coloque el mouse en la cama fija y use el cinturón de velcro fijo para atar el torso del mouse.
      NOTA: Asegúrese de que el cinturón de sujeción no esté lo suficientemente apretado como para ejercer presión sobre el corazón, lo que podría provocar la muerte del ratón. Ata el ratón sin apretar pero con firmeza.
   3. Use cinta adhesiva para sujetar las extremidades inferiores o superiores a cada lado de la férula de madera y sujete la cola a la superficie de la férula de madera.
2. Preparación del estante para la cama del ratón
   NOTA: El bastidor consta de una placa de madera vertical, una placa base de madera y soportes de madera. El soporte consta de una pieza de acero inoxidable en forma de L, que proporciona soporte para cada cama de ratón.
   1. Fije la placa vertical a la placa base y cree ranuras cuadradas en la placa base para insertar palos de madera utilizados como deflectores (Figura 1).
   2. Prepare una cubierta de plástico transparente para la cabeza si a los ratones se les administra moxibustión por encima de la cabeza.
      1. Use una jeringa de 1000 ml y retire la aguja y la varilla del núcleo. Use una herramienta de corte o un cuchillo para cortar la cubierta de la jeringa por la mitad.
      2. Elija cualquiera de los lados de la funda de la jeringa, corte la cabeza y la cola, y deje la sección central a un lado (longitud: 4 cm) como cubierta para la cabeza del ratón.
      3. Taladre un agujero (1 cm) en el centro de la cubierta de la jeringa con una máquina perforadora y coloque un palito de moxa en el agujero. Coloque una cubierta sobre la cabeza del ratón para limitar su movimiento de cabeza y protegerlo de la moxa encendida.
   3. Fije dos tiras de madera paralelas (largo: 7 cm x ancho: 1 cm) y un travesaño horizontal (largo: 7,5 cm x ancho: 1 cm) en el extremo de la cabeza de la cama del ratón si a los ratones se les administra moxibustión en las extremidades delanteras (Figura 2).
      NOTA: El espacio entre cada tira de madera paralela y la cama del ratón debe ser de 1 cm. El número de soportes y la altura de las placas verticales se pueden determinar en función de los requisitos experimentales. Estos pasos deben realizarse con cuidado para evitar aterrorizar a los ratones. Asegúrese de dar a los ratones entrenamiento adaptativo durante 1 semana antes del experimento.
3. Preparación del soporte del palo de moxibustión
   1. Prepare el soporte del palo de moxibustión compuesto por un rectángulo metálico magnético (longitud: 30 cm), una base de soporte (largo: 5 cm x ancho: 5 cm x alto: 2 cm) y cubos de madera (largo: 3 cm x ancho: 1,5 cm x alto: 1 cm), cada uno con un agujero (diámetro: 0,55 cm) en el centro en el que se puede colocar un palo de moxa (ver Tabla de materiales).
   2. Coloque un imán plano y delgado (largo: 3 cm × ancho: 1,5 cm, grosor: 0,2 cm) a un lado de cada cubo. La atracción magnética entre los cubos con palitos de moxa y el soporte permite ajustar la altura de los palitos de moxa.
      NOTA: Asegúrese de que los polos magnéticos de los imanes cúbicos estén opuestos al polo del imán del soporte.
4. Para registrar el comienzo y el final del procedimiento de moxibustión, coloque un dispositivo de cronometraje (consulte la Tabla de materiales) cerca del dispositivo de anclaje del mouse donde se pueda leer fácilmente.
5. Use una mano desnuda o con guantes finos cuando sostenga y ate a los ratones. Una mano con guantes finos también es eficaz durante el tratamiento de moxibustión.

2. Procedimiento de moxibustión

1. Ponte los guantes de laboratorio. Antes del tratamiento con moxibustión, afeita el pelaje con una afeitadora de ratón en el sitio de la moxibustión para exponer el punto de acupuntura.
2. Inserte los palitos de moxa (0,5 cm de diámetro y 10 cm de longitud) en el soporte del palo de moxibustión (que comprende el rectángulo metálico magnético, la base del soporte y los cubos de madera con orificios en sus centros para la inserción del palo de moxa, y un soporte de palo solo puede acomodar un palo de moxa, paso 1.3).
3. Para determinar la temperatura de moxibustión, conecte un termodetector digital en el punto de acupuntura para monitorear la variación de temperatura.
4. Enciende el temporizador y enciende el palo de moxa; Fije o controle la distancia entre la piel del punto de acupuntura y el extremo iluminado de la barra de moxa en función de la variación de temperatura requerida para el experimento.

3. Moxibustión simultánea del ratón

NOTA: Los ratones pueden ser tratados con moxibustión como un grupo. Un estante para camas de ratones se utiliza para colocar las camas de ratones de modo que un grupo de ratones pueda ser tratado simultáneamente.

1. Coloque cada cama de ratón en el estante e inserte un palo de madera en la placa base para proteger a los ratones de la caída (Figura 3).
2. Inserte los palos de moxa (0,5 cm de diámetro y 12 cm de longitud) en el soporte del palo de moxibustión a niveles que coincidan con cada cama de ratón. Ajuste la distancia entre el estante del mouse y el soporte del palo, y luego encienda los palos de moxa.
   NOTA: Esto permite que los ratones sean tratados con moxibustión en un estado relajado y cómodo. Durante la moxibustión, asegúrese de que la distancia entre el soporte del ratón y el soporte del palo sea constante para todos los ratones.
3. Antes de modelar, realice las respuestas del ratón a la prueba del umbral de extracción térmica (TWL) para determinar si la moxibustión sería efectiva en la analgesia.

Resultados

En la Tabla 1 se resumen los diferentes factores que afectan a las respuestas a la moxibustión. Los resultados positivos de la moxibustión en ratones han sido indicados por múltiples medidas de bienestar y efectos positivos en ratones.

A continuación, se describen ejemplos específicos de los resultados obtenidos cuando la técnica de moxibustión se combina con procedimientos completos de inyección inducida por adyuvante de Freund (CFA)....

Discusión

La técnica de moxibustión es eficaz para muchos trastornos, como la fatiga, el insomnio, la diarrea y el síndrome de dolor 20,21,22,23,24,25,26. Con los beneficios del tratamiento con moxibustión para muchas enfermedades, el mecanismo de esta técnica ha...

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
Complete Freund's Adjuvant (CFA)	Sigma-Aldrich	SF588102
Glue gun	Deli Group Co., Ltd.	DL5041
Laboratory glove	Boci  Co., Ltd	53625130323
Magnetic metal rectangle (thickness: 0.2 cm)	Sitoo Stationery Co., Ltd	1007908729
Moxa stick	Hanyi Airong factory	5613
Steel sheet	Rizhan metal materials Co., Ltd	1108
Syringe (1000 mL )	Xinmin Fuda Co., Ltd	796341
Timer	Bevoza Co., Ltd	KT003
Velcro belt	Minnesota Mining and Manufacturing Co., Ltd	3MSJ3550
Wooden cube	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	2581457A
Wooden splint	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	3410968M
Wooden stick	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	2785476M
Wooden strip	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	2374652S