JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Mevcut protokol, fare korkusunu azaltma, refahlarını garanti etme ve araştırmacılar için verimliliği artırma faydaları ile fareler için bir yakı uygulama yöntemini açıklamaktadır.

Özet

Yakı araştırmaları alanı, son yıllarda yayınlardaki hızlı artışla birlikte genişlemektedir. Yakı, periferik cilt sıcaklığında artış ve lokalize kızarıklık ile insan cildinde moxa'yı tutuşturan bir terapidir. Bu tedavi sırasında, haşlanmayı önlemek ve kolay manipülasyon için müdahale bölgelerini açığa çıkarmak için alıcı hareketsiz kalmalıdır; Bununla birlikte, yakı sırasında sabit bir duruş sağlamak hayvanlar için büyük bir zorluktur. Bu nedenle, fareler gibi küçük hayvanlarda yakı manipüle etmek, araştırmacılar için çeşitli zorluklara yol açabilir. Ek olarak, hayvanlar için rahatsız edici bir duruş, yakıya karşı korku ve dirence, yaralanma riskinin artmasına, hayvan refahının azalmasına ve daha az geçerli araştırma verisine yol açabilir. Hayvan refahını korumak ve deney sonuçları üzerindeki olumsuz etkileri en aza indirmek için verimli, rahat bir yakı yöntemine ihtiyaç vardır. Bununla birlikte, yakı yöntemleri oldukça değişkendir ve genellikle sınırlı etkinliğe sahiptir. Daha da önemlisi, rahatsız edici bir yakı duruşu, araştırma verilerini etkileyebilecek endişe, korku ve öfke ile gözlemlenenler gibi bir stres tepkisine neden olabilir. Bu nedenle, müdahale sırasında mümkün olan en az zararı veren hayvan yakısı için stratejiler gereklidir. Bu protokol, yakı müdahalesi için fare rahatsızlığını en aza indiren ve çalışma verimliliğini artıran bir fare bağlama yöntemi sunar. Farelerin bağlanması ve yakı uygulaması için temel stratejiler vurgulanır ve bağlama aletinin yapısı açıklanır.

Giriş

Yakı, geleneksel Çin tıbbında kullanılan harici bir tedavidir1. Formda kalmanın ve hastalıkları önlemenin ve iyileştirmenin bir yolu olarak yüzyıllardır yaygın olarak uygulanmaktadır 2,3. Bununla birlikte, yakı mekanizması açıklığa kavuşturulmayı beklemektedir; Bu nedenle, araştırmacılar etkilerini ve biyolojik mekanizmalarını keşfettikçe bu araştırma alanı son yıllarda genişlemiştir.

Yakı sırasında, en iyi sonuçların elde edilmesi için alıcının hareketsiz kalması gerekir4. Yakı tedavisi tipik olarak 15-30 dakika sürer 5,6. Bu nedenle, hayvanlar için, özellikle fareler ve sıçanlar gibi küçük hayvanlar (hayvan deneylerinde kullanım için elverişli) için yakı manipülasyonu araştırmacılar için büyük bir zorluk haline gelmiştir. Yakı cihazlarının çoğu klinik kullanım için uygundur ve hayvanlar için, özellikle fareler gibi küçük hayvanlar içinkullanılamaz 7,8,9. Bunun yanı sıra, insanlardan farklı olarak, hayvanlar emirleri zar zor yerine getirebilir ve bir süre sabit kalabilir. Hayvanlar için sabit ve rahatsız edici bir duruş, kaygı, korku, öfke, sinirlilik ve tedaviye direnç gibi pasif duygulara yol açarak yaralanma riskini artırabilir, hayvan refahını azaltabilir ve daha az geçerli araştırma verisine neden olabilir10. Bu sorunu çözmek için, önceki çalışmalarda, akupunktur, yakı ve masaj araştırmaları dahil olmak üzere harici geleneksel Çin tıbbı tedavilerini içeren hayvan deneyleri sırasında anestezikler uzun süreler boyunca uygulanmıştır 11,12,13. Bununla birlikte, fiziksel koşulların anestezi ile değiştiği ve çoğu klinik vakada, bilinçli durumdaki insanlara yakı uygulandığı göz önüne alındığında, anestezi araştırma verilerinin gerçekliğini etkileyebilir. Bu nedenle, hayvanları bilinçli ve rahat bir şekilde bağlamanın bir yöntemi zor hale gelir. Bu teknik sorunları çözmek için, fare yakısı için özel cihazlar tanıtıldı. Bu protokol, araştırmacılara hayvanlar üzerinde yakı tedavisi yapmalarında yardımcı olacak ve hayvanların sabit, bilinçli ve rahat kalmasını sağlayacak bir bağlama yöntemi sağlar.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Tüm deneyler, Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için Ulusal Sağlık Enstitüleri Rehberi'ne uygun olarak gerçekleştirildi ve Chengdu Üniversitesi TCM Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylandı. Laboratuvardaki hayvanların bakım ve bakımları Kaynaklar 14,15'e göre yapılmıştır. Test için 20-25 g ağırlığındaki yetişkin erkek C57BL / 6J fareleri kullanıldı. Tüm fareler, 24 ° C'de ve% 40 -% 50 nemde 12 saatlik bir aydınlık / karanlık döngüsünde, yiyecek ve suya ücretsiz erişim ile tutuldu. Aşağıdaki protokol, tipik laboratuvar muhafaza koşulları altında yakı prosedürlerini göstermektedir.

1. Ekipmanın hazırlanması

  1. Fare tethering (fare bağlantısı)
    1. Dikey bir plaka, dikey plaka tabanı ve ahşaptan yapılmış braketlerden oluşan bir fare bağlama cihazı hazırlayın.
      1. Sabit gövdeyi düz bir ahşap atel (uzunluk: 30 cm x genişlik: 3 cm x yükseklik: 3 cm) kullanarak oluşturun ve sabit cırt cırtlı kayışı (iki taraftan oluşur: bir kanca tarafı (4 cm x 3 cm) ve bir halka tarafı (10 cm x 3 cm)) esnekliği korurken fare gövdesinin bağlanmasına izin vermek için takın (bkz.
      2. Kanca tarafını ahşap atelinin sağ tarafına takmak için bir tutkal tabancası kullanın ve sol tarafa ilmek tarafının 1/4 uzunluğunu takın.
    2. Fareyi sabit yatağa yerleştirin ve farenin gövdesini bağlamak için sabit cırt cırtlı kayışı kullanın.
      NOT: Bağlama kemerinin kalbe baskı uygulayacak kadar sıkı olmadığından emin olun, bu farenin ölümüne yol açabilir. Fareyi gevşek ama sıkı bir şekilde bağlayın.
    3. Alt/üst uzuvları ahşap atelinin her iki tarafına tutturmak için bant kullanın ve kuyruğu ahşap atelinin yüzeyine tutturun.
  2. Fare yatağı rafının hazırlanması
    NOT: Raf, dikey bir ahşap plaka, ahşap taban plakası ve ahşap braketlerden oluşur. Braket, her bir fare yatağı için destek sağlayan L şeklinde bir paslanmaz çelik parçadan oluşur.
    1. Dikey plakayı taban plakasına takın ve bölme olarak kullanılan ahşap çubukları yerleştirmek için taban plakasında kare oluklar oluşturun (Şekil 1).
    2. Farelere başın üzerinde yakı uygulanıyorsa şeffaf, plastik bir kafa örtüsü hazırlayın.
      1. 1000 mL'lik bir şırınga kullanın ve iğneyi ve çekirdek çubuğunu çıkarın. Şırınga ceketini ikiye kesmek için bir kesici alet veya bıçak kullanın.
      2. Şırınga ceketinin her iki tarafını da seçin, baş ve kuyruğunu kesin ve orta kısmı (uzunluk: 4 cm) fare için baş örtüsü olarak bir kenara koyun.
      3. Bir matkap makinesi ile şırınga ceketinin ortasına bir delik (1 cm) açın ve deliğe bir moxa çubuğu yerleştirin. Kafa hareketini sınırlamak ve onu tutuşan moxa'dan korumak için farenin kafasının üzerine bir baş örtüsü yerleştirin.
    3. Farelere ön ayaklara yakı uygulanıyorsa, fare yatağının baş ucuna iki paralel ahşap şerit (uzunluk: 7 cm x genişlik: 1 cm) ve yatay bir çapraz parça (uzunluk: 7,5 cm x genişlik: 1 cm) takın (Şekil 2).
      NOT: Her paralel ahşap şerit ile fare yatağı arasındaki boşluk 1 cm olmalıdır. Braket sayısı ve dikey plakaların yüksekliği deneysel gereksinimlere göre belirlenebilir. Fareleri korkutmamak için bu adımlar nazikçe yapılmalıdır. Deneyden önce 1 hafta boyunca farelere uyarlanabilir eğitim verdiğinizden emin olun.
  3. Yakı çubuğu tutucusunun hazırlanması
    1. Manyetik bir metal dikdörtgen (uzunluk: 30 cm), bir braket tabanı (uzunluk: 5 cm x genişlik: 5 cm x yükseklik: 2 cm) ve ahşap küpler (uzunluk: 3 cm x genişlik: 1,5 cm x yükseklik: 1 cm) içeren yakı çubuğu tutucusunu hazırlayın, her birinin ortasında bir moxa çubuğu yerleştirilebilecek bir delik (çap: 0,55 cm) bulunur (bkz.
    2. Her küpün bir tarafına düz, ince bir mıknatıs (uzunluk: 3 cm × genişlik: 1,5 cm, kalınlık: 0,2 cm) takın. Moxa çubuklu küpler ve tutucu arasındaki manyetik çekim, moxa çubuklarının yüksekliğinin ayarlanmasına izin verir.
      NOT: Küp mıknatısların manyetik kutuplarının, tutucu mıknatısın kutbunun karşısında olduğundan emin olun.
  4. Yakı prosedürünün başlangıcını ve sonunu kaydetmek için, fare bağlama cihazının yanına kolayca okunabileceği bir zamanlama cihazı (Malzeme Tablosuna bakın) yerleştirin.
  5. Fareleri tutarken ve bağlarken çıplak veya ince eldivenli bir el kullanın. Yakı tedavisi sırasında ince eldivenli bir el de etkilidir.

2. Yakı prosedürü

  1. Laboratuvar eldivenlerini giyin. Yakı tedavisinden önce, akupunktur noktasını ortaya çıkarmak için yakı bölgesinde kürkü fare tıraş makinesi ile tıraş edin.
  2. Moxa çubuklarını (0,5 cm çapında ve 10 cm uzunluğunda) yakı çubuğu tutucusuna (manyetik metal dikdörtgen, braket tabanı ve moxa çubuğunun yerleştirilmesi için merkezlerinde delikler bulunan ahşap küplerden oluşur) yerleştirin ve bir çubuk tutucu yalnızca bir moxa çubuğunu barındırabilir, adım 1.3).
  3. Yakı sıcaklığını tespit etmek için, sıcaklık değişimini izlemek için akupunktur noktasına bir dijital termo-dedektör takın.
  4. Zamanlayıcıyı başlatın ve moxa çubuğunu ateşleyin; Deney için gereken sıcaklık değişimine bağlı olarak akupunktur noktasının derisi ile Moxa çubuğunun ışıklı ucu arasındaki mesafeyi sabitleyin veya kontrol edin.

3. Eşzamanlı fare yakısı

NOT: Fareler bir grup olarak yakı ile tedavi edilebilir. Fare yataklarını konumlandırmak için bir fare yatağı rafı kullanılır, böylece bir grup fare aynı anda tedavi edilebilir.

  1. Her bir fare yatağını rafa yerleştirin ve farelerin düşmesini önlemek için taban plakasına tahta bir çubuk yerleştirin (Şekil 3).
  2. Moxa çubuklarını (0,5 cm çapında ve 12 cm uzunluğunda) her bir fare yatağına denk gelen seviyelerde yakı çubuğu tutucusuna yerleştirin. Fare rafı ile çubuk tutucu arasındaki mesafeyi ayarlayın ve ardından moxa çubuklarını ateşleyin.
    NOT: Bu, farelerin rahat ve konforlu bir durumda yakı ile tedavi edilmesini sağlar. Yakı sırasında, fare rafı ile çubuk tutucu arasındaki mesafenin tüm fareler için tutarlı kaldığından emin olun.
  3. Modellemeden önce, yakının analjezide etkili olup olmayacağını belirlemek için termal geri çekilme eşiği (TWL) testine fare tepkilerini uygulayın.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

Tablo 1 , yakıya verilen tepkileri etkileyen farklı faktörleri özetlemektedir. Fare yakısının olumlu sonuçları, fare refahı ve olumlu etkilerin çoklu ölçümleri ile gösterilmiştir.

Daha sonra, yakı tekniği tam Freund'un adjuvan (CFA) ile indüklenen enjeksiyon prosedürleri ile eşleştirildiğinde elde edilen sonuçların spesifik örnekleri özetlenmiştir. Ağrı kesicide yakının etkinliğini değerlendirmek için termal ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Yakı tekniği, yorgunluk, uykusuzluk, ishal ve ağrı sendromu gibi birçok rahatsızlıkta etkilidir 20,21,22,23,24,25,26. Yakı tedavisinin birçok hastalık için sağladığı faydalar ile bu tekniğin mekanizması araştırmacıların dikkatini çekmi?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Açıklamalar

Yazarlar açıklayacak hiçbir şeyleri olmadığını beyan ederler.

Teşekkürler

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81704187, 8210152562), Sichuan Bilim ve Teknoloji Programı (2019YJ0587, 2018JY0482, 2019YJ0329), Sichuan Tıp Bilimleri Akademisi ve Sichuan Halk Hastanesi Araştırma Fonu (2018ZX05), Chengdu Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi (QNXZ2019034) Xinglin Scholars Araştırma Vakfı.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Complete Freund's Adjuvant (CFA)Sigma-AldrichSF588102
Glue gunDeli Group Co., Ltd.DL5041
Laboratory gloveBoci  Co., Ltd53625130323
Magnetic metal rectangle (thickness: 0.2 cm)Sitoo Stationery Co., Ltd1007908729
Moxa stickHanyi Airong factory5613
Steel sheetRizhan metal materials Co., Ltd1108
Syringe (1000 mL )Xinmin Fuda Co., Ltd796341
TimerBevoza Co., LtdKT003
Velcro beltMinnesota Mining and Manufacturing Co., Ltd3MSJ3550
Wooden cubeChuang Hing Wood Chip Co., Ltd2581457A
Wooden splintChuang Hing Wood Chip Co., Ltd3410968M
Wooden stickChuang Hing Wood Chip Co., Ltd2785476M
Wooden stripChuang Hing Wood Chip Co., Ltd2374652S

Referanslar

  1. Ebrary, I. Guide for the care and use of laboratory animals. NIH Publication. 327 (3), 963-965 (2011).
  2. Wang, M., et al. Mechanism of traditional chinese medicine in treating knee osteoarthritis. Journal of Pain Research. 13, 1421-1429 (2020).
  3. Wang, T., Xu, C., Pan, K., Xiong, H. Acupuncture and moxibustion for chronic fatigue syndrome in traditional Chinese medicine: A systematic review and meta-analysis. BMC Complementary and Alternative Medicine. 17 (1), 163(2017).
  4. Zimmermann, M. Ethical guidelines for investigations of experimental pain in conscious animals. Pain. 16 (2), 109-110 (1983).
  5. Zhou, W., et al. Effect of moxibustion and acupuncture on gastric mucosal cell apoptosis and expression of NF-κB, Bcl-2 in chronic atrophic gastritis rats. Acupuncture Research. 46 (4), 284-288 (2021).
  6. Wang, Y., et al. βEffect of moxibustion on -EP and Dyn levels of pain-related indicators in patients with rheumatoid arthritis. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2021, 6637554(2021).
  7. Huang, P., et al. Design of moxibustion device for experimental rabbits. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 39 (09), 1024-1026 (2019).
  8. Li, M., Sun, Z. An automatic moxibustion box with temperature control. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 39 (06), 649-650 (2019).
  9. Luo, Z., Zhang, C., Zhou, M., Chen, C. Manufacture and clinical application of a medical warm moxibustion instrument. Shanghai J Acu-mox. 37 (05), 596-598 (2018).
  10. Liang, Y. L., Sun, Y. H., Sun, Y. H., Sun, L. H., Jiang, H. T. Design and use of rat box for moxibustion experiment. Acupuncture Research. 36 (03), 224(2011).
  11. Meng, J., Fu, W., Zhu, G., Song, L. Effect of acupuncture on coronary collateral circulation function in dogs with experimental myocardial infarction. Acupuncture Research. 3 (1), 196-197 (1986).
  12. Tan, D. Experimental study on the effect of moxibustion at Neiguan point on the content of serum free fatty acid (FFA) in rabbits with acute myocardial ischemia. Liaoning Journal of Traditional Chinese Medicine. 6, 44-45 (1991).
  13. Seo, B., et al. Skeletal muscle regeneration with robotic actuation-mediated clearance of neutrophils. Science Translational Medicine. 13 (614), (2021).
  14. Bielitzki, J. T., Barbee, R. W., Garber, J. Guide for the care and use of laboratory animals. NIH Publication No 85-23(rev). 327 (3), 963-965 (2011).
  15. National Research Council (US), Institute for Laboratory Animal Research. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. National Research Council (US), Institute for Laboratory Animal Research. , National Academies Press. Washington (DC). (1996).
  16. Zuo, C., et al. Ipsi- and contralateral moxibustion generate similar analgesic effect on inflammatory pain. Evidence-based complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2019, 1807287(2019).
  17. Poulaki, S., Rassouli, O., Liapakis, G., Gravanis, A., Venihaki, M. Analgesic and anti-inflammatory effects of the synthetic neurosteroid analogue BNN27 during CFA-induced hyperalgesia. Biomedicines. 9 (9), 1185(2021).
  18. Duan, L., et al. Metabolomics analysis on mice with depression ameliorated by acupoint catgut embedding. Frontiers in Psychiatry. 12, 703516(2021).
  19. Wang, J., et al. Protection against doxorubicin-induced cardiotoxicity through modulating iNOS/ARG 2 balance by electroacupuncture at PC6. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2021, 6628957(2021).
  20. Chen, Y., Gao, X., Sun, C. Pricking and penetrating moxibustion therapy in patients with refractory insomnia: A randomized and controlled clinical trial. Journal of Traditional Chinese Medicine. 38 (5), 754-762 (2018).
  21. Liu, C., et al. Effectiveness and safety of fire-needle moxibustion on insomnia: Protocol for a systematic review and meta-analysis. Medicine. 98 (7), 14509(2019).
  22. Han, K., et al. Moxibustion for treating cancer-related fatigue: A multicenter, assessor-blinded, randomized controlled clinical trial. Cancer Medicine. 10 (14), 4721-4733 (2021).
  23. Bao, C., et al. Effect of mild moxibustion on intestinal microbiota and NLRP6 inflammasome signaling in rats with post-inflammatory irritable bowel syndrome. World Journal of Gastroenterology. 25 (32), 4696-4714 (2019).
  24. Chen, F., et al. Efficacy and safety of moxibustion for chronic low back pain: A systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. Complementary Therapies in Clinical Practice. 39, 101130(2020).
  25. Zhang, C., et al. The role of STIM1/ORAI1 channel in the analgesic effect of grain-sized moxibustion on inflammatory pain mice model. Life Sciences. 280, 119699(2021).
  26. Zhao, L., et al. Effectiveness of moxibustion treatment as adjunctive therapy in osteoarthritis of the knee: A randomized, double-blinded, placebo-controlled clinical trial. Arthritis Research & Therapy. 16 (3), 133(2014).
  27. Goldman, N., et al. Adenosine A1 receptors mediate local anti-nociceptive effects of acupuncture. Nature Neuroscience. 13 (7), 883-888 (2010).
  28. Torres-Rosas, R., et al. Dopamine mediates vagal modulation of the immune system by electroacupuncture. Nature Medicine. 20 (3), 291-295 (2014).
  29. Solovchuk, M., Deng, H., Sheu, T. Experimental and numerical study on the temperature elevation in tissue during moxibustion therapy. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine:eCAM. 2020, 7514302(2020).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

YakFare Ba lama Y ntemiHayvan RefahDeneysel Ara t rmaStres TepkisiTerapi TeknikleriPeriferik Cilt S caklM dahale StratejileriYak Etkinli iKayg ve Korku TepkileriAra t rma Verilerinin Ge erlili iRahats zl k AzaltmaPost r Y netimi

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır