Стратегии прижигания для мышей

Резюме

Настоящий протокол описывает метод применения прижигания у мышей, преимущества которого заключаются в снижении пугливости мышей, обеспечении их благополучия и повышении эффективности для исследователей.

Аннотация

Область исследований прижигания расширяется, с быстрым ростом публикаций в последние годы. Прижигание – это терапия, которая воспламеняет моксу на коже человека, с повышением периферической температуры кожи и локальным покраснением. Во время этого лечения реципиент должен оставаться неподвижным, чтобы предотвратить ожоги и обнажить места вмешательства для легкой манипуляции; Тем не менее, поддержание фиксированной осанки во время прижигания является большой проблемой для животных. Таким образом, манипулирование прижиганием у мелких животных, таких как мыши, может привести к ряду трудностей для исследователей. Кроме того, неудобная для животных поза может привести к страху и устойчивости к прижиганию, повышенному риску травм, ухудшению благополучия животных и снижению достоверности данных исследований. Эффективный, удобный метод прижигания необходим для защиты благополучия животных и минимизации негативного воздействия на результаты экспериментов. Тем не менее, методы прижигания очень вариабельны и часто имеют ограниченную эффективность. Что еще более важно, неудобная поза прижигания может вызвать реакцию на стресс, подобную той, которая наблюдается при тревоге, страхе и гневе, что может повлиять на данные исследования. Поэтому необходимы стратегии прижигания животных, которые наносят наименьший вред во время вмешательства. Этот протокол вводит метод привязки мыши для вмешательства прижигания, сводя к минимуму дискомфорт мыши и повышая эффективность исследования. Выделены основные стратегии привязывания мышей и применения прижигания, а также описана структура инструмента для привязи.

Введение

Прижигание – это наружное лечение, используемое в традиционной китайской медицине¹. На протяжении веков он широко применялся как средство поддержания физической формы и профилактики и лечения болезней ^2,3. Тем не менее, механизм прижигания еще предстоит выяснить; Таким образом, эта область исследований расширилась в последние годы, поскольку исследователи изучают ее эффекты и биологические механизмы.

Во время прижигания реципиент должен оставаться неподвижным для достижения наилучших результатов⁴. Процедура прижигания обычно длится 15-30 мин ^5,6. Из-за этого манипуляции с прижиганием для животных, особенно мелких животных, таких как мыши и крысы (что благоприятно для использования в экспериментах на животных), стали большой проблемой для исследователей. Большинство устройств для прижигания подходят для клинического использования и не могут использоваться для животных, особенно для мелких животных, таких как мыши ^7,8,9. Кроме того, в отличие от человека, животные едва ли могут выполнять приказы и оставаться устойчивыми в течение некоторого времени. Фиксированная и неудобная поза для животных может привести к пассивным эмоциям, включая тревогу, страх, гнев, нервозность и сопротивление лечению, увеличивая риск травм, снижая благополучие животных и приводя к снижению достоверности исследовательских^{данных.} Чтобы решить эту проблему, в предыдущих исследованиях анестетики применялись в течение длительного времени во время экспериментов на животных с использованием внешних методов традиционной китайской медицины, ^{включая исследования} иглоукалывания, прижигания и массажа^. Однако, учитывая, что физические условия меняются под действием анестезии, и в большинстве клинических случаев прижигание вводится людям в сознании, анестезия может повлиять на достоверность данных исследования. Поэтому метод привязи животных осознанно и комфортно становится сложной задачей. Для решения этих технических проблем были внедрены специализированные устройства для прижигания мыши. Этот протокол обеспечивает метод привязки, который поможет исследователям в проведении лечения прижиганием животных, позволяя животным оставаться устойчивыми, сознательными и комфортными.

протокол

Все эксперименты проводились в соответствии с Руководством Национального института здравоохранения по уходу и использованию лабораторных животных и были одобрены Комитетом по уходу за животными и их использованию Университета Чэнду. Уход и содержание животных в лаборатории осуществлялись в соответствии со ссылками^14,15. Для исследования использовали взрослых самцов мышей C57BL/6J массой 20-25 г. Все мыши содержались в 12-часовом цикле свет/темнота при температуре 24 °C и влажности 40%-50%, со свободным доступом к пище и воде. В следующем протоколе описаны процедуры прижигания в типичных лабораторных условиях.

1. Подготовка оборудования

1. Модем мыши
   1. Подготовьте устройство для привязки мыши, состоящее из вертикальной пластины, вертикального основания пластины и кронштейнов из дерева.
      1. Соберите неподвижное тело с помощью прямой деревянной шины (длина: 30 см x ширина: 3 см x высота: 3 см) и прикрепите неподвижный ремень на липучке (который состоит из двух сторон: стороны крючка (4 см x 3 см) и стороны петли (10 см x 3 см)), чтобы обеспечить привязку корпуса мыши, сохраняя при этом гибкость (см. Таблицу материалов).
      2. С помощью клеевого пистолета прикрепите сторону крючка с правой стороны деревянной шины и прикрепите 1/4 длины петлевой стороны с левой стороны.
   2. Поместите мышь на неподвижную кровать и используйте фиксированный ремень на липучке, чтобы привязать туловище мыши.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Убедитесь, что ремень не настолько тугой, чтобы оказывать давление на сердце, что может привести к смерти мыши. Привяжите мышь свободно, но прочно.
   3. С помощью ленты прикрепите нижние/верхние конечности к обеим сторонам деревянной шины и прикрепите хвост к поверхности деревянной шины.
2. Подготовка стойки для лежанки для мыши
   ПРИМЕЧАНИЕ: Стойка состоит из вертикальной деревянной пластины, деревянной опорной плиты и деревянных кронштейнов. Кронштейн состоит из L-образного куска нержавеющей стали, который обеспечивает поддержку для каждой мышиной кровати.
   1. Прикрепите вертикальную пластину к опорной плите и создайте квадратные канавки в опорной плите, чтобы вставить деревянные палочки, используемые в качестве перегородок (Рисунок 1).
   2. Подготовьте прозрачный пластиковый чехол для головы, если мышам вводят прижигание над головой.
      1. Используйте шприц объемом 1000 мл и извлеките иглу и стержень. С помощью режущего инструмента или ножа разрежьте рубашку шприца пополам.
      2. Выберите любую сторону оболочки шприца, отрежьте голову и хвост и отложите среднюю часть (длина: 4 см) в качестве чехла для мыши.
      3. Просверлите отверстие (1 см) в центре рубашки шприца с помощью дрели-станка и поместите в отверстие палочку моксы. Наденьте на голову мыши головной убор, чтобы ограничить движение ее головы и защитить ее от воспламененной моксы.
   3. Прикрепите две параллельные деревянные полосы (длина: 7 см x ширина: 1 см) и горизонтальную крестовину (длина: 7,5 см x ширина: 1 см) к головному концу мышиной кровати, если мышам прижигают передние конечности (Рисунок 2).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Расстояние между каждой параллельной деревянной полосой и лежанкой для мыши должно составлять 1 см. Количество кронштейнов и высота вертикальных пластин могут быть определены на основе экспериментальных требований. Эти действия следует выполнять осторожно, чтобы не напугать мышей. Обязательно дайте мышам адаптивную тренировку за 1 неделю до эксперимента.
3. Подготовка держателя палочки для прижигания
   1. Подготовьте держатель палочки для прижигания, состоящий из магнитного металлического прямоугольника (длина: 30 см), основания кронштейна (длина: 5 см x ширина: 5 см x высота: 2 см) и деревянных кубиков (длина: 3 см x ширина: 1,5 см x высота: 1 см), каждый с отверстием (диаметр: 0,55 см) в центре, в которое можно поместить палочку моксы (см. Таблицу материалов).
   2. Прикрепите плоский тонкий магнит (длина: 3 см × ширина: 1,5 см, толщина: 0,2 см) к одной стороне каждого кубика. Магнитное притяжение между кубиками с палочками моксы и держателем позволяет регулировать высоту палочек моксы.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Убедитесь, что магнитные полюса кубических магнитов находятся напротив полюса магнита-держателя.
4. Чтобы записать начало и окончание процедуры прижигания, поместите устройство синхронизации (см. Таблицу материалов) рядом с устройством привязки мыши, чтобы его можно было легко прочитать.
5. Используйте голую руку или руку в тонких перчатках, когда держите мышей и привязывайте их. Рука в тонкой перчатке также эффективна во время процедуры прижигания.

2. Процедура прижигания

1. Наденьте лабораторные перчатки. Перед процедурой прижигания сбрейте шерсть с помощью бритвы мыши в месте прижигания, чтобы обнажить акупунктурную точку.
2. Вставьте палочки моксы (0,5 см в диаметре и 10 см в длину) в держатель палочки для прижигания (который состоит из магнитного металлического прямоугольника, основания кронштейна и деревянных кубиков с отверстиями в центрах для вставки палочки моксы, а на одном держателе палочки может поместиться только одна палочка мокса, шаг 1.3).
3. Чтобы определить температуру прижигания, прикрепите цифровой термодетектор к акупунктурной точке для отслеживания изменения температуры.
4. Запустите таймер и подожгите палочку моксы; Фиксируйте или контролируйте расстояние между кожей акупунктурной точки и освещенным концом палочки MOXA в зависимости от изменения температуры, необходимого для эксперимента.

3. Одновременное прижигание мыши

ПРИМЕЧАНИЕ: Мышей можно обрабатывать прижиганием как группу. Стойка для мышей используется для размещения мышиных лежаков таким образом, чтобы можно было одновременно лечить группу мышей.

1. Поместите каждую лежанку для мыши на стойку и вставьте деревянную палочку в опорную пластину, чтобы защитить мышей от падения (Рисунок 3).
2. Вставьте палочки моксы (0,5 см в диаметре и 12 см в длину) в держатель палочки для прижигания на уровнях, совпадающих с каждой кроватью для мыши. Отрегулируйте расстояние между стойкой для мыши и держателем для стиков, а затем подожгите палочки моксы.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Это позволяет лечить мышей с помощью прижигания в расслабленном, комфортном состоянии. Во время прижигания следите за тем, чтобы расстояние между штативом для мыши и держателем для стика оставалось одинаковым для всех мышей.
3. Перед моделированием проведите тест на реакцию мыши на порог теплового поглощения (TWL), чтобы определить, будет ли прижигание эффективным при анальгезии.

Результаты

В таблице 1 обобщены различные факторы, влияющие на реакцию на прижигание. На положительные результаты прижигания мышей указывают многочисленные показатели благополучия мышей и положительные эффекты.

Далее приводятся конкретные примеры рез?...

Обсуждение

Техника прижигания эффективна при многих расстройствах, таких как усталость, бессонница, диарея и болевой синдром 20,21,22,23,24,25,26. Обладая преим...

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Complete Freund's Adjuvant (CFA)	Sigma-Aldrich	SF588102
Glue gun	Deli Group Co., Ltd.	DL5041
Laboratory glove	Boci  Co., Ltd	53625130323
Magnetic metal rectangle (thickness: 0.2 cm)	Sitoo Stationery Co., Ltd	1007908729
Moxa stick	Hanyi Airong factory	5613
Steel sheet	Rizhan metal materials Co., Ltd	1108
Syringe (1000 mL )	Xinmin Fuda Co., Ltd	796341
Timer	Bevoza Co., Ltd	KT003
Velcro belt	Minnesota Mining and Manufacturing Co., Ltd	3MSJ3550
Wooden cube	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	2581457A
Wooden splint	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	3410968M
Wooden stick	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	2785476M
Wooden strip	Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd	2374652S