JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Abstract

البربارين (BBR) هو قلويد إيزوكينولين معزول من القبط الصيني ويمتلك أنشطة دوائية قيمة ، بما في ذلك مضاد للالتهابات ومضاد للأورام وتخفيف العديد من مضاعفات داء السكري من النوع 2 (T2DM). ومع ذلك ، فإن دور BBR في تنظيم إصابة الأوتار السكرية لا يزال غير مفهوم جيدا. في هذه الدراسة ، تم إنشاء نموذج الفئران ل T2DM ، وتم تقييم موت الخلايا المبرمج للخلايا والالتهام الذاتي في أنسجة الأوتار بعد علاج BBR من خلال مقايسة dUTP بوساطة TdT (TUNEL) والتحليل الكيميائي المناعي. تم الحصول على الخلايا الليفية الوتارية من وتر العرقوب في الفئران ، وتم تقييم دور BBR في تنظيم موت الخلايا المبرمج الخلوي ، وإنتاج السيتوكينات الالتهابية ، وتنشيط الالتهام الذاتي باستخدام قياس التدفق الخلوي ، وتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الفعلي (qRT-PCR) ، وتحليل اللطخة الغربية. لقد أظهرنا أن علاج BBR زاد بشكل كبير من تنشيط الالتهام الذاتي ويقلل من موت الخلايا المبرمج في أنسجة الأوتار لفئران T2DM. في الخلايا الليفية الوترية ، قمع BBR موت الخلايا المبرمج للخلايا الناجم عن ارتفاع الجلوكوز (HG) وإنتاج السيتوكينات المسببة للالتهابات. أدى علاج HG إلى انخفاض تنشيط الالتهام الذاتي في الخلايا الليفية الوترية ، بينما أعاد BBR تنشيط الالتهام الذاتي. والأهم من ذلك ، أن التثبيط الدوائي للالتهام الذاتي بواسطة 3-MA أضعف التأثيرات الوقائية ل BBR ضد إصابة الخلايا الليفية في الأوتار التي يسببها HG. مجتمعة ، تظهر النتائج الحالية أن BBR يساعد في تخفيف إصابة الأوتار السكرية عن طريق تنشيط الالتهام الذاتي للأرومات الليفية الوترية.

Introduction

مرض السكري (داء السكري ، DM) هو اضطراب استقلابي جهازي يتميز بارتفاع السكر في الدم1. في الوقت الحاضر ، أصبح مرض السكري أحد الأمراض الرئيسية التي تهدد صحة الإنسان ومتوسط العمرالمتوقع 2. أكثر من 90٪ من الحالات هي مرض السكري من النوع 2 ، وهو مرض استقلابي يتميز بالتهاب مزمن3 ، ومقاومة الأنسولين4 ، وتلف خلايا β الجزيرة5 ، ويتزايد انتشاره كل عام في جميع أنحاء العالم.

يجلب مرض السكري من النوع 2 سلسلة من المضاعفات الخطيرة ، والتي لها آثار خطيرة على نظام القلب والأوعية الدموية6 ، والعين7 ، والكلى7 ، والأعصاب8 ، مما يعرض مرضى السكري لخطر الإعاقات المتعددة وحتى المخاطر الصحية التي تهدد الحياة. كانت هناك دراسات قليلة حول الجهاز العضلي الهيكلي ، خاصة حول التغيرات المرضية في أوتار السكري. في السنوات الأخيرة ، زاد معدل الإصابة باعتلال الأوتار المزمن بشكل كبير. يمكن للأوتار تنظيم قدرتها ديناميكيا على تخزين الطاقة وتوصيلها9،10. في أنسجة الأوتار ، تلعب الخلايا الليفية الوترية دورا مهما في تعديل تكيف الأوتار وإصلاح الأوتار بعد الإصابة9،11. في الوقت الحاضر ، لا تزال وظيفة الخلايا الليفية الوتارية على إصابة الأوتار غير واضحة.

باعتباره قلويد إيزوكينولين ، يمارس BBR تأثيرات دوائية في مجموعة متنوعة من العمليات الفسيولوجية ، بما في ذلك خفض نسبة الجلوكوز في الدم ، وخفض الدهون ، وخفض الكوليسترول ، والتأثيرات المضادة للالتهابات ، والتأثيرات المضادة للبكتيريا ، وإزالة أنواع الأكسجين التفاعلية ، وضعف الجهاز العصبي12،13. يمكن أن يزيد BBR من امتصاص الجلوكوز واستخدامه في الأنسجة الدهنية وخلايا العضلات الهيكلية ، وينظم التعبير عن مستقبلات الأنسولين في خلايا الكبد والعضلات الهيكلية ، ويزيد من التعبير عن مستقبلات LDL في الكبد ، ويقلل من مستويات الكوليسترول والسكر في البلازما14. على الرغم من أن BBR يمتلك أنشطة دوائية قيمة في التخفيف من العديد من مضاعفات DM15،16،17 ، إلا أن دور BBR في تنظيم إصابة الأوتار السكرية لا يزال غير مفهوم جيدا.

يجب أن يحدث الالتهام الذاتي على المستوى الأساسي في معظم الأنسجة لسحب العضيات التالفة وتوفير المستقلبات للحفاظ على التوازن الأيضي18،19. يعمل الالتهام الذاتي كدور حاسم في صحة الخلايا β ، ويرتبط ضعف الالتهام الذاتي بخلل وظيفي للخلايا β وتطور مرض السكري20،21. أظهرت الدراسات الناشئة أن تنشيط الالتهام الذاتي الناجم عن BBR يساهم في تحسين اعتلال الكلية السكري22. بناء على النتائج المذكورة أعلاه ، استكشفنا ما إذا كان BBR مفيدا في التخفيف من إصابة الأوتار السكرية من خلال تنظيم الالتهام الذاتي. أظهرت النتائج الحالية أن BBR قلل من إصابة الخلايا الليفية في الأوتار التي يسببها HG والاستجابة الالتهابية. قلل HG من تنشيط الالتهام الذاتي للأرومات الليفية الوترية ، في حين أن علاج BBR أعاد تنشيط الالتهام الذاتي وأدى إلى زيادة لاحقة في صلاحية الخلايا الليفية الوترية وتقليل السيتوكينات المسببة للالتهابات.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة أخلاقيات البحث في مستشفى يوييانغ للطب الصيني التقليدي والغربي المتكامل ، جامعة شنغهاي للطب الصيني التقليدي. تمت الموافقة على جميع التجارب على من قبل لجنة الأخلاقيات التابعة لمستشفى Yueyang للطب الصيني التقليدي والغربي المتكامل ، جامعة شنغهاي للطب الصيني التقليدي (رقم IACUC: YYLAC-2019-1). تم شراء ذكور فئران ويستار (200-240 جم ، 8 أسابيع) من مركز مختبر شنغهاي SLAC.

1. نموذج الفئران من T2DM

  1. الحفاظ على ذكور فئران الويستار (200-240 جم ، 8 أسابيع) في بيئة يتم التحكم فيها بالمناخ مع دورة ضوء / ظلام 12 ساعة (20 ± 2 درجة مئوية ورطوبة نسبية 50٪ -60٪). توفير الغذاء والماء حسب الطلب خلال الفترة التجريبية.
  2. ابذل جهودا لتقليل معاناة ، بما في ذلك التعامل اللطيف والتنظيف اليومي للأقفاص والمراقبة.
  3. قم بتعيين الفئران بشكل عشوائي إلى 3 مجموعات: المجموعة الضابطة (ن = 5) ، ومجموعة نموذج DM (ن = 5) ، ونموذج السكري المعالج بمجموعة BBR (ن = 5).
  4. إنشاء نموذج DM للفئران وفقا للوصف السابق23.
    1. يجب إعطاء الفئران بحقنة واحدة في الوريد من الستربتوزوتوسين (STZ) المذاب في مخزن سترات الصوديوم المحضر حديثا (وزن / حجم: 2٪) بجرعة 30 مجم / كغ. حقن المجموعة الضابطة داخل الصفاق بحجم متساو من المخزن المؤقت لسترات سترات الصوديوم بدون STZ.
    2. قم بتقييم نسبة الجلوكوز في الدم باستخدام محلل غازات الدم. استخدم الفئران بمستوى الجلوكوز في الدم المحدد (≥16.7 مليمول / لتر ، بشكل مستمر لمدة 10 أيام) لنموذج T2DM.
    3. بعد أسبوع واحد ، قسم الفئران T2DM بشكل عشوائي إلى مجموعتين (ن = 5 من كل مجموعة): الفئران أو الفئران غير المعالجة التي تدار 200 مجم / كجم / يوم من BBR عن طريق التزقيم لمدة 4 أسابيع.

2. الخلايا الليفية الأولية للأوتار

  1. التضحية بالفئران تحت التخدير من خلال الحقن داخل الصفاق من الباربيتورات (40 ملغ/كغ) والحصول على وتر العرقوب كما ذكرت سابقا24.
  2. عزل الخلايا الليفية الوتارية من أنسجة الأوتار25.
    1. قم بتقطيع أنسجة الأوتار يدويا وضعها في DMEM التي تحتوي على 0.2٪ من الكولاجيناز من النوع الثاني. حرك بقوة لمدة 3 ساعات عند 37 درجة مئوية.
    2. قم بإزالة الوسط عن طريق الطرد المركزي وأضف DMEM الذي يحتوي على 10٪ FBS و 1٪ بنسلين / ستربتومايسين إلى الأنسجة المهضومة.
    3. قم بتصفية أنسجة الأوتار بواسطة مصفاة 100 ميكرومتر ، واسكب المحلول المصفى في ألواح مكونة من 6 آبار ، وحافظ على الخلايا الليفية الوترية في حاضنة رطبة عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيدالكربون 2.

3. فحص صلاحية الخلية

ملاحظة: تم استخدام اختبار مجموعة عد الخلايا -8 (CCK-8) لقياس صلاحية الخلية وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.

  1. بعد التربسين ، قم بوضع الخلايا الليفية الوتر في ألواح 96 بئرا (4 × 103 خلايا / بئر) ثم عالجها بجرعات مختلفة من الجلوكوز (0 و 5 و 10 و 20 و 30 و 50 مليمتر) في وجود أو عدم وجود BBR (0 و 5 و 10 و 20 و 40 و 80 ميكرومتر) لمدة 48 ساعة.
    ملاحظة: تم إذابة الجلوكوز و BBR في DMEM.
  2. أضف محلول CCK-8 (10 ميكرولتر) إلى كل بئر ، واحتضن الخلايا لمدة ساعتين أخريين عند 37 درجة مئوية.
  3. بعد ذلك ، قم بقياس امتصاص كل بئر باستخدام قارئ صفيحة دقيقة بطول موجي 450 نانومتر.

4. تحليل موت الخلايا المبرمج للخلايا

ملاحظة: تم استخدام مقايسة قياس التدفق الخلوي بروبيديوم (PI) والملحق V-FITC لتحليل معدل موت الخلايا المبرمج للأرومات الليفية الوترية.

  1. زرع الخلايا الليفية الوتر (5 × 105 خلايا) في ألواح 6 آبار في DMEM لمدة 24 ساعة.
  2. استنشق وتخلص من DMEM من كل بئر. عالج الخلايا ب DMEM الطازج الذي يحتوي على HG (30 ملليمتر) في وجود أو عدم وجود BBR (20 ميكرومتر) لمدة 24 ساعة.
  3. افصل الخلايا التي تحتوي على 0.25٪ تربسين في 1x PBS ، وحصاد الخلايا باستخدام PBS ، وأجهزة الطرد المركزي عند 2000 × جم لمدة 5 دقائق.
  4. أعد تعليق الخلايا في مخزن مؤقت ملزم (جدول المواد) وصمة عار ب 10 ميكرولتر من الملحق المترافق FITC V و 5 ميكرولتر من PI في الظلام لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة (RT).
  5. ثم قم بتحليل الخلايا بواسطة مقياس التدفق الخلوي.

5. تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي (qRT-PCR)

  1. احصد الخلايا الليفية في الأوتار وتجانسها باستخدام مجموعة استخراج الحمض النووي الريبي (جدول المواد) وفقا لتوصيات الشركة المصنعة.
  2. قم بإجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي باستخدام النسخ العكسي لفيروس سرطان الدم الفئران من مولوني والبادئات Oligo (dT) (جدول المواد).
  3. قم بإجراء qRT-PCR باستخدام SYBR green qPCR Mix على نظام PCR في الوقت الفعلي. ظروف الدورة هي التمسخ عند 95 درجة مئوية لمدة 10 دقائق و 45 دورة عند 95 درجة مئوية لمدة 20 ثانية ، و 55 درجة مئوية لمدة 20 ثانية ، و 72 درجة مئوية لمدة 30 ثانية.
    ملاحظة: للحصول على تفاصيل حول الاشعال ل IL-1β و IL-6 و IL-10 ، راجع جدول المواد. تم استخدام β-أكتين كجين مرجعي.
  4. احسب مستوى التعبير النسبي باستخدام صيغة 2-ΔΔCT ، كما هو موضح سابقا26 .

6. تحليل اللطخة الغربية

  1. بعد العلاج ب HG (30 mM) في وجود أو عدم وجود BBR (20 ميكرومتر) لمدة 24 ساعة ، قم بتحليل الخلايا الليفية الوتارية باستخدام RIPA buffer (جدول المواد) ، وحدد تركيز البروتين الكلي باستخدام مقايسة حمض البيسنكونينيك.
  2. افصل كميات مكافئة من البروتينات (50 ميكروغراما) من كل عينة بنسبة 10٪ SDS-PAGE في RT ثم انقلها إلى أغشية فلوريد البولي فينيلدين (PVDF) عند 4 درجات مئوية لمدة ساعتين.
  3. قم بسد الأغشية في 5٪ من الحليب المجفف الخالي من الدسم في TBST ثم احتضن طوال الليل عند 4 درجات مئوية باستخدام الأجسام المضادة الأولية التالية: الأجسام المضادة المضادة ل LC3B (1: 1500) ، ومضاد ل p62 (1: 2000) ، ومضاد β أكتين (1: 3500).
  4. بعد غسلها باستخدام TBST ، احتضن الأغشية بالأجسام المضادة الثانوية المترافقة H & L HRP المضادة للأرانب (1: 5000) في RT لمدة 1 ساعة.
  5. استخدم مجموعة التلألؤ الكيميائي ECL لتصور البقع المحددة وتحديد المخططات الشعاعية الذاتية عن طريق قياس الكثافة.

7. التحليل الكيميائي المناعي (IHC)

  1. قطع أنسجة وتر القدم المضمنة في البارافين إلى أقسام بسمك 6 ميكرومتر.
  2. بعد تثبيت الأقسام في 4٪ فورمالين ، احتضان الأقسام بجسم مضاد مضاد ل LC3 (1: 200) طوال الليل عند 4 درجات مئوية.
  3. بعد الغسيل ثلاث مرات باستخدام 10 ملي مولار PBS (الرقم الهيدروجيني 7.4 مع Tween 20) ، احتضان جميع الأقسام بجسم مضاد ثانوي مضاد مضاد للأرانب HRP (1: 1000) لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية وصمة عار ب DAB والهيماتوكسيلين لمدة 60 دقيقة في RT.
  4. قم بتصوير الشرائح الملطخة بتكبير 20x باستخدام مجهر مقلوب.

8. اختبار TUNEL

ملاحظة: تم تحليل موت الخلايا المبرمج في أنسجة الأوتار باستخدام مجموعة مقايسة TUNEL وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.

  1. قطع أنسجة وتر القدم المضمنة في البارافين إلى أقسام بسمك 6 ميكرومتر.
  2. قم بإزالة البارافين من الأقسام الموجودة في الزيلين وإعادة ترطيبها في سلسلة متدرجة من الإيثانول.
  3. بعد الغمر بنسبة 3٪ بيروكسيد الهيدروجين في RT ، احتضان الأقسام بخليط تفاعل TUNEL لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية.
  4. قم بمضاد تلطيخ النوى باستخدام DAPI. راقب الخلايا الملطخة تحت المجهر الفلوري (20x) وحدد النسبة المئوية للخلايا الإيجابية ل TUNEL.

9. التحليل الإحصائي

  1. استخدام تطبيقات البرامج المناسبة لإجراء التحليل الإحصائي
    ملاحظة: هنا ، يتم تقديم البيانات كمتوسط ± الانحراف المعياري (SD) لثلاث تجارب مستقلة. تم إجراء التحليلات الإحصائية باستخدام SPSS 23.0. تم إجراء اختبار t للطالب لمقارنة الاختلافات بين المجموعات ، وتم إجراء تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) لتحليلات مجموعات متعددة. كان الفرق معتدا به إحصائيا عندما < p 0.05.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

لتقييم الدور الدوائي ل BBR في تخفيف إصابة الأوتار السكرية ، تم تقييم موت الخلايا المبرمج الخلوي وتنشيط الالتهام الذاتي في أنسجة أوتار القدم لفئران DM في وجود أو عدم وجود BBR. أظهر الشكل 1 أ أن مستوى البروتين في LC3 (علامة الالتهام الذاتي) قد انخفض في أنسجة الأوت?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

إصابة الأوتار هي من المضاعفات الشائعة لدى المرضى الذين يعانون من DM27. تلعب الخلايا الليفية الأوتار دورا مهما في عملية التئام الجروح28،29. كشفت الدراسة الحالية من أن أ) زاد BBR من تنشيط الالتهام الذاتي وانخفاض موت الخلايا المبرمج ?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإعلان عن صلتهم بمحتوى هذه المقالة.

Acknowledgements

تم تمويل هذه الدراسة من قبل مشروع خطة عمل شنغهاي لمدة ثلاث سنوات لزيادة تسريع تطوير الطب الصيني التقليدي [ZY (2018-2020) -CCCX-4005]

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
1% penicillin/streptomycinSigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA516104-M
anti-LC3BAbcam, CA, USAab48394
anti-p62Abcamab91526
anti-β-actin antibodyAbcamab8227
Binding bufferBD Biosciences556454
DMEMThermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA11965092
EVOS XL Core microscopeThermo Fisher ScientificAMEX1000
Goat anti-rabbit H&L HRP-conjugated secondary antibodiesAbcamab205718
Leukemiavirus reverse transcriptaseClontech639574
Male Wistar ratsShanghai SLAC Laboratory Animal Co., Ltd200–240 g, 8 weeks
Oligo (dT)18 PrimerTaKaRa3806
PrimersShanghai Sangon BiotechSynthesized primers for IL-1β, IL-6 and IL-10
RIPA Lysis BufferThermo Fisher Scientific20-188
RNA extraction kit (Trizol)TaKaRa9108Q
StepOne Realtime PCR SystemThermo Fisher Scientific4376357
TUNEL assay kitThermo Fisher ScientificC10245

References

  1. Cho, S. B., Kim, S. C., Chung, M. G. Identification of novel population clusters with different susceptibilities to type 2 diabetes and their impact on the prediction of diabetes. Scientific Reports. 9 (1), 3329(2019).
  2. Diamant, A. L., Babey, S. H., Hastert, T. A., Brown, E. R. Diabetes: the growing epidemic. Policy Brief (UCLA Center for Health Policy Research. , 1-12 (2007).
  3. Zhang, H., Qi, R., Zeng, Y., Tsao, R., Mine, Y. Chinese sweet leaf tea (Rubus suavissimus) mitigates LPS-induced low-grade chronic inflammation and reduces the risk of metabolic disorders in a C57BL/6J mouse model. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 68 (1), 138-146 (2019).
  4. Tian, S., Wang, M., Liu, C., Zhao, H., Zhao, B. Mulberry leaf reduces inflammation and insulin resistance in type 2 diabetic mice by TLRs and insulin Signalling pathway. BMC Complementary and Alternative Medicine. 19 (1), 326(2019).
  5. Butler, A. E., Janson, J., Soeller, W. C., Butler, P. C. Increased beta-cell apoptosis prevents adaptive increase in beta-cell mass in mouse model of type 2 diabetes: evidence for role of islet amyloid formation rather than direct action of amyloid. Diabetes. 52 (9), 2304-2314 (2003).
  6. Ramirez-Farias, C., et al. Effect of inulin on the human gut microbiota: stimulation of Bifidobacterium adolescentis and Faecalibacterium prausnitzii. British Journal of Nutrition. 101 (4), 541-550 (2009).
  7. Zhang, Y., et al. Treatment of type 2 diabetes and dyslipidemia with the natural plant alkaloid berberine. The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 93 (7), 2559-2565 (2008).
  8. Turnbaugh, P. J., Backhed, F., Fulton, L., Gordon, J. I. Diet-induced obesity is linked to marked but reversible alterations in the mouse distal gut microbiome. Cell Host & Microbe. 3 (4), 213-223 (2008).
  9. Jamil, S., et al. Angiopoietin-like 4 enhances the proliferation and migration of tendon fibroblasts. Medicine & Science in Sports & Exercise. 49 (9), 1769-1777 (2017).
  10. Bohm, S., Mersmann, F., Tettke, M., Kraft, M., Arampatzis, A. Human achilles tendon plasticity in response to cyclic strain: effect of rate and duration. Journal of Experimental Biology. 217, 4010-4017 (2014).
  11. Mousavizadeh, R., et al. Cyclic strain alters the expression and release of angiogenic factors by human tendon cells. PLoS One. 9 (5), 97356(2014).
  12. Dong, H., Zhao, Y., Zhao, L., Lu, F. The effects of berberine on blood lipids: a systemic review and meta-analysis of randomized controlled trials. Planta Medica. 79 (6), 437-446 (2013).
  13. Dong, H., Wang, N., Zhao, L., Lu, F. Berberine in the treatment of type 2 diabetes mellitus: a systemic review and meta-analysis. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2012, 591654(2012).
  14. Pirillo, A., Catapano, A. L. Berberine, a plant alkaloid with lipid- and glucose-lowering properties: From in vitro evidence to clinical studies. Atherosclerosis. 243 (2), 449-461 (2015).
  15. Sun, S. F., et al. Renoprotective effect of berberine on type 2 diabetic nephropathy in rats. Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 42 (6), 662-670 (2015).
  16. Zhai, J., et al. Berberine protects against diabetic retinopathy by inhibiting cell apoptosis via deactivation of the NFkappaB signaling pathway. Molecular Medicine Reports. 22 (5), 4227-4235 (2020).
  17. Zhang, J. H., et al. Effects of Berberine on diabetes and cognitive impairment in an animal model: The mechanisms of action. The American Journal of Chinese Medicine. 49 (6), 1399-1415 (2021).
  18. Jandrey, E. H. F., et al. A key pathway to cancer resilience: The role of autophagy in glioblastomas. Frontiers in Oncology. 11, 652133(2021).
  19. Kroemer, G., Levine, B. Autophagic cell death: the story of a misnomer. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 9 (12), 1004-1010 (2008).
  20. Hoshino, A., et al. Inhibition of p53 preserves Parkin-mediated mitophagy and pancreatic beta-cell function in diabetes. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (8), 3116-3121 (2014).
  21. Jung, H. S., et al. Loss of autophagy diminishes pancreatic beta cell mass and function with resultant hyperglycemia. Cell Metabolism. 8 (4), 318-324 (2008).
  22. Zhang, M., et al. Highly bioavailable berberine formulation ameliorates diabetic nephropathy through the inhibition of glomerular mesangial matrix expansion and the activation of autophagy. European Journal of Pharmacology. 873, 172955(2020).
  23. Jia, Y., Xu, B., Xu, J. Effects of type 2 diabetes mellitus on the pharmacokinetics of berberine in rats. Pharmaceutical Biology. 55 (1), 510-515 (2017).
  24. Sakamoto, K., et al. Involvement of Na+/Ca2+ exchanger in migration and contraction of rat cultured tendon fibroblasts. Journal of Physiology. 587, 5345-5359 (2009).
  25. Mendias, C. L., Gumucio, J. P., Lynch, E. B. Mechanical loading and TGF-beta change the expression of multiple miRNAs in tendon fibroblasts. Journal of Applied Physiology. 113 (1), 56-62 (2012).
  26. Livak, K. J., Schmittgen, T. D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method. Methods. 25 (4), 402-408 (2001).
  27. Oliver, T. I., Mutluoglu, M. Diabetic Foot Ulcer. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing. , (2020).
  28. Zeng, T., et al. Endothelial cell-derived small extracellular vesicles suppress cutaneous wound healing through regulating fibroblasts autophagy. Clinical science. 133 (9), London, England. (2019).
  29. Sardone, F., et al. Collagen VI-NG2 axis in human tendon fibroblasts under conditions mimicking injury response. Matrix Biology. 55, 90-105 (2016).
  30. de Oliveira, A. R., et al. Effect of photobiomodulation and exercise on early remodeling of the Achilles tendon in streptozotocin-induced diabetic rats. PLoS One. 14 (2), 0211643(2019).
  31. Wu, Y. F., et al. High glucose alters tendon homeostasis through downregulation of the AMPK/Egr1 pathway. Scientific Reports. 7, 44199(2017).
  32. Garcia-Bailo, B., et al. E in the prevention of type 2 diabetes mellitus: modulation of inflammation and oxidative stress. Biologics. 5, 7-19 (2011).
  33. Hudgens, J. L., et al. Platelet-rich plasma activates proinflammatory signaling pathways and induces oxidative stress in tendon fibroblasts. American Journal of Sports Medicine. 44 (8), 1931-1940 (2016).
  34. Chen, H., et al. Berberine attenuates apoptosis in rat retinal Muller cells stimulated with high glucose via enhancing autophagy and the AMPK/mTOR signaling. Biomedicine & Pharmacotherapy. 108, 1201-1207 (2018).
  35. Li, G., et al. Antifibrotic cardioprotection of berberine via downregulating myocardial IGF-1 receptor-regulated MMP-2/MMP-9 expression in diabetic rats. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 315 (4), 802-813 (2018).
  36. Yerra, V. G., Kalvala, A. K., Sherkhane, B., Areti, A., Kumar, A. Adenosine monophosphate-activated protein kinase modulation by berberine attenuates mitochondrial deficits and redox imbalance in experimental diabetic neuropathy. Neuropharmacology. 131, 256-270 (2018).
  37. Zhou, G., Yan, M., Guo, G., Tong, N. Ameliorative effect of berberine on neonatally induced type 2 diabetic neuropathy via modulation of BDNF, IGF-1, PPAR-gamma, and AMPK expressions. Dose Response. 17 (3), 1559325819862449(2019).
  38. Zhu, L., Han, J., Yuan, R., Xue, L., Pang, W. Berberine ameliorates diabetic nephropathy by inhibiting TLR4/NF-kappaB pathway. Biological Research. 51 (1), 9(2018).
  39. Han, Y., et al. Pharmacokinetics and pharmacological activities of berberine in diabetes mellitus treatment. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2021, 9987097(2021).
  40. Habtemariam, S. Berberine pharmacology and the gut microbiota: A hidden therapeutic link. Pharmacological Research. 155, 104722(2020).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

2 TUNEL QRT PCR

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved