JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

نقدم هنا طريقة قائمة على قياس التدفق الخلوي للتصور والقياس الكمي للعلامات المتعددة المرتبطة بالشيخوخة في الخلايا المفردة.

Abstract

يمكن أن تحفز أدوية العلاج الكيميائي تلف الحمض النووي الذي لا يمكن إصلاحه في الخلايا السرطانية ، مما يؤدي إلى موت الخلايا المبرمج أو الشيخوخة المبكرة. على عكس موت الخلايا الماصة ، فإن الشيخوخة هي آلية مختلفة اختلافا جوهريا تقيد انتشار الخلايا السرطانية. كشفت عقود من الدراسات العلمية عن الآثار المرضية المعقدة للخلايا السرطانية الشائخة في الأورام والبيئات الدقيقة التي تعدل الخلايا السرطانية والخلايا اللحمية. تشير الأدلة الجديدة إلى أن الشيخوخة هي عامل تنبؤ قوي أثناء علاج السرطان ، وبالتالي فإن الكشف السريع والدقيق عن الخلايا الشائخة في عينات السرطان أمر ضروري. تقدم هذه الورقة طريقة لتصور واكتشاف الشيخوخة الناجمة عن العلاج (TIS) في الخلايا السرطانية. عولجت خطوط الخلايا اللمفاوية الكبيرة المنتشرة بالخلايا البائية (DLBCL) باستخدام المافوسفاميد (MAF) أو الدونوروبيسين (DN) وتم فحصها بحثا عن علامة الشيخوخة ، β-galactosidase المرتبط بالشيخوخة (SA-β-gal) ، وعلامة تخليق الحمض النووي 5-ethynyl-2′-deoxyuridine (EdU) ، وعلامة تلف الحمض النووي gamma-H2AX (γH2AX). يمكن أن يساعد تصوير مقياس التدفق الخلوي في توليد صور أحادية الخلية عالية الدقة في فترة زمنية قصيرة لتصور العلامات الثلاثة في الخلايا السرطانية وتحديدها كميا في وقت واحد.

Introduction

يمكن لمجموعة متنوعة من المحفزات أن تؤدي إلى الشيخوخة الخلوية، مما يتسبب في دخول الخلايا في حالة من توقف دورة الخلية المستقرة. وتشمل هذه المحفزات تغييرات الإشارات الجوهرية أو الضغوط الخارجية. تشمل الإشارات الجوهرية تقصير التيلومير التدريجي ، والتغيرات في بنية التيلومير ، والتعديل اللاجيني ، واضطرابات البروتيوستاسيس ، وخلل الميتوكوندريا ، وتنشيط الجينات الورمية. تشمل الضغوط الخارجية إشارات تلف الالتهاب و / أو الأنسجة ، والإشعاع أو العلاج الكيميائي ، والحرمان الغذائي1،2،3،4. من بين الأنواع المتميزة من الشيخوخة ، فإن الأكثر شيوعا والمدروسة جيدا هي الشيخوخة التكرارية ، والشيخوخة التي يسببها الجين الورمي (OIS) ، والشيخوخة الناجمة عن الإشعاع ، والشيخوخة الناجمة عن العلاج (TIS). OIS هي استجابة خلوية حادة للأضرار السامة الجينية الناجمة عن الإجهاد التكراري الناتج عن تنشيط الجينات الورمية الشاذة ويمكن أن تمنع إلى حد ما التقدم المرضي من آفة ما قبل الورم إلى ورم كامل. يحدث TIS عندما يتم الضغط على الخلايا السرطانية بواسطة أدوية العلاج الكيميائي أو الإشعاع المؤين 5,6.

يعتبر الشيخوخة سيفا ذا حدين في علم الأمراض بسبب طبيعته الديناميكية للغاية. تم وصفه في البداية بأنه آلية مفيدة لقمع الورم لإزالة الخلايا التالفة من المجموعة المنتشرة للخلايا المنقسمة ، وحماية الوظيفة الطبيعية للأعضاء وتثبيط نمو الورم7،8،9. ومع ذلك ، فقد أشارت الأدلة الناشئة إلى جانب مظلم من الشيخوخة. تفرز الخلايا الشائخة السيتوكينات الالتهابية ، والمعروفة باسم النمط الظاهري الإفرازي المرتبط بالشيخوخة (SASP) ، مما يؤدي إلى التليف والأعضاء غير الوظيفية ويعزز بدء الورم وتقدمه10. علاوة على ذلك، تخضع الخلايا السرطانية الشائخة لإعادة برمجة الجينات والتعبير الجيني بالتوازي مع إعادة تشكيل الكروماتين وتنشيط استجابة مستمرة لتلف الحمض النووي (DDR)11،12، واكتساب خصائص جديدة للخلايا السرطانية الجذعية3. على الرغم من أن الأورام القادرة على الشيخوخة تستجيب بشكل أفضل للتدخل العلاجي مقارنة بالأورام غير القادرة على الشيخوخة13 ، إلا أن استمرار الخلايا الشائخة قد يؤدي إلى سوء التشخيص على المدى الطويل إذا لم يتم تحديدها والقضاء عليها بشكل فعال بواسطة الأدوية المحلل للسينوليك5. في كلتا الحالتين ، فإن الطريقة الموثوقة لتقييم الشيخوخة ذات أهمية سريرية كبيرة ، ليس فقط لتشخيص العلاج العلاجي ولكن أيضا لتطوير استراتيجيات جديدة تستهدف الخلايا الشائخة.

بغض النظر عن المحفزات المختلفة ، تظهر الخلايا الشائخة بعض السمات الشائعة ، بما في ذلك التشكل الموسع والمسطح ومتعدد النوى مع فجوات كبيرة ، ونوى موسعة بشكل كبير ، وتشكيل هيتيروكروماتين مرتبط بالشيخوخة H3K9me3 (SAHF) في النواة ، والتراكم المستمر لعلامات تلف الحمض النووي γH2AX البؤر ، وتنشيط p53-p21CIP1 و Rb-p16INK4a الآليات التنظيمية لدورة الخلية ، والقبض على دورة الخلية G1 المستقرة ، والحث الهائل ل SASP ، ونشاط β-galactosidase المرتبط بالشيخوخة (SA-β-gal)14. نظرا لعدم وجود علامة واحدة كافية لتحديد الشيخوخة ، فإن التلطيخ الأنزيمي لنشاط SA-β-gal ، والذي يعتبر المعيار الذهبي للكشف عن الشيخوخة ، عادة ما يتم دمجه مع تلطيخ كيميائي نسيجي مناعي ل H3K9me3 و Ki67 للكشف عن TIS15. ومع ذلك ، من الصعب تحديد SA-β-gal القائم على الكروموجينيك الكيميائي. هنا ، قمنا بدمج 5-dodecanoylaminofluorescein-di-β-D-galactopyranoside (C12FDG) للكشف عن SA-β-gal القائم على التألق (fSA-β-gal) مع تلطيخ الفلورسنت المناعي ل γH2AX و EdU-incorporated DNA لتحديد الخلايا الشائخة C12FDG + EdU-γH2AX + باستخدام نظام مقياس التدفق الخلوي المتقدم للتصوير ، والذي يجمع بين السرعة والحساسية والصور التفصيلية أحادية الخلية مع المعلومات المكانية التي لا يمكن توفيرها عن طريق قياس التدفق الخلوي والفحص المجهري. تتيح هذه الطريقة التوليد السريع للصور عالية الدقة مما يسمح بتحديد مواقع إشارات الفلورسنت وتحديدها كميا داخل الخلايا ، مع ترخيص التحليل السريع لعينات متعددة من خلال بناء خطوط أنابيب قياسية.

Protocol

1. خطوط الخلايا DLBCL مع مافوسفاميد أو علاج دونوروبيسين للحث على الشيخوخة الخلوية

ملاحظة: يعمل البروتوكول أيضا مع الخلايا السرطانية الملتصقة. اعتمادا على حجم الخلية ، × البذور 1-2 10 5 خلايا في بئر واحد من صفيحة من 6 آبار وتحتضن اللوحة في حاضنة5 ٪ CO2 ، 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها قبل العلاج. خطوات البروتوكول هي نفسها بالنسبة لخلايا التعليق ولكن مع استثناءين. أولا ، يجب إزالة الخلايا من اللوحة بعد الخطوة 3.4. ثانيا ، يتم تنفيذ خطوات الغسيل دون الطرد المركزي قبل التربسين.

  1. عد خلايا DLBCL والبذور 1 × 10 6 خلايا / مل في 4 مل من الوسط لكل بئر في لوحة زراعة6 آبار. زراعة خلايا DLBCL في RPMI-1640 المتوسطة مع استكمال 10٪ مصل البقر الجنين (FBS) و 100 U / مل البنسلين / الستربتومايسين.
  2. أضف MAF (5 ميكروغرام / مل) أو DN (20 نانوغرام / مل) إلى مزرعة الخلايا وهز اللوحة بلطف للخلط.
    ملاحظة: MAF و DN غير مستقرين. بعد الذوبان في DMSO ، يجب أن يكون محلول المخزون مذكورا وتخزينه عند -20 درجة مئوية. يجب تجنب دورات التجميد / الذوبان.
  3. احتضان اللوحة في حاضنة 5٪ CO2 ، 37 درجة مئوية لمدة 3 أيام.
  4. بعد حضانة لمدة 3 أيام ، اجمع خلايا DLBCL في أنابيب طرد مركزي معقمة سعة 15 مل وتدور عند 100 × جم ، 4 درجات مئوية لمدة 5 دقائق.
  5. تخلص من السوبرناتانت ، وأعد تعليق كريات الخلايا مع 4 مل من الوسط الطازج ، وأضف المعلقات مرة أخرى إلى اللوحة المكونة من 6 آبار.
  6. زراعة لوحة الخلية في حاضنة 5٪ CO2 ، 37 درجة مئوية لمدة يومين آخرين قبل الحصاد للتحليل.

2. إعداد حلول للتلطيخ (الجدول 1)

3. بقع خلايا DLBCL مع علامات الشيخوخة المختلفة

ملاحظة: يتم إعداد عينات الخلايا الملطخة بعلامات فردية (أي المحيط الهادئ الأزرق EdU أو C12FDG أو Alexa Fluor 647-γH2AX) لإنشاء مصفوفة تعويض لتصحيح امتداد التألق أثناء القياس. وعلى الرغم من الاقتراح الشديد، يمكن تعليق هذه الخطوة عندما يكون هناك تداخل قابل للحذف (قيمة معامل التعويض ≤ 0.1) لأطياف الانبعاثات بين مختلف الفلوروفورات. ومع ذلك ، يجب على المستخدمين تحديد خطوات التعويض الموحدة عند استخدام أدوات مختلفة وألواح الفلورسنت.

  1. أضف محلول EdU 10 mM بنسبة 1: 1000 إلى مزرعة خلايا DLBCL المتولدة من الخطوة 1.6 (تركيز EdU النهائي هو 10 ميكرومتر). هز الطبق بلطف لخلطه واحتضانه في حاضنة 5٪ CO2 ، 37 درجة مئوية لمدة 3 ساعات.
  2. أخرج الصفيحة من الحاضنة وأضف محلول الكلوروكين 100 mM إلى تركيز نهائي قدره 75 ميكرومتر (انظر المناقشة). هز الطبق بلطف لتخلط وتحضن في حاضنة 5٪ CO2 ، 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
  3. أخرج اللوحة من الحاضنة وأضف محلول 20 mM C 12 FDG عند 1: 1000 إلى تركيز C 12FDG النهائي البالغ 20ميكرومتر.
  4. أخرج اللوحة من الحاضنة وأضف محلول 100 mM 2-phenylethyl-β-D-thiogalactoside (PETG) في الساعة 1:50 لإيقاف تلطيخ fSA-β-gal (تركيز PETG النهائي 2 mM). قم بتدوير اللوحة بلطف للخلط.
  5. انقل الخلايا إلى أنابيب طرد مركزي معقمة سعة 15 مل وتدور عند 100 × جم ، 4 درجات مئوية لمدة 5 دقائق. تخلص من المادة الفائقة واغسل الخلايا ب 4 مل من المياه المالحة العازلة بالفوسفات (PBS).
  6. كرر خطوة غسيل PBS. تخلص من supernatant وأعد تعليق كريات الخلايا في 500 ميكرولتر من محلول تثبيت بارافورمالديهايد بنسبة 4٪.
  7. بعد 10 دقائق من الحضانة في درجة حرارة الغرفة ، جهاز طرد مركزي عند 250 × جم ، درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق. تخلص من supernatant واغسل الخلايا ب 4 مل من PBS.
  8. كرر خطوة غسيل PBS. تخلص من السوبرناتانت ، وأعد تعليق بيليه الخلية في 200 ميكرولتر من المخزن المؤقت لنفاذية الصابونين وانقل التعليق إلى أنبوب جديد 1.5 مل. بعد 10 دقائق من الحضانة في درجة حرارة الغرفة ، جهاز طرد مركزي عند 250 × جم ، درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق.
  9. تخلص من المادة الفائقة وأعد تعليق كريات الخلايا في 200 ميكرولتر من محلول الأجسام المضادة الأولية (1:500 γH2AX من الأجسام المضادة في محلول حضانة الأجسام المضادة). احتضان في 4 درجات مئوية بين عشية وضحاها في الظلام.
  10. جهاز طرد مركزي للأنابيب عند 250 × جم ، 4 درجات مئوية لمدة 5 دقائق. تخلص من السوبر ناتانت واغسله ب 100 ميكرولتر من محلول غسل الصابونين.
  11. كرر خطوة الغسيل مرتين إضافيتين. تخلص من السوبرناتانت وأعد تعليق كريات الخلايا في 500 ميكرولتر من كوكتيل الكشف عن EdU.
  12. احتضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة في الظلام. جهاز طرد مركزي عند 250 × جم ، درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق. تخلص من السوبر ناتانت واغسله ب 1 مل من محلول غسيل الصابونين.
  13. كرر خطوة الغسيل مرتين. تخلص من السوبرناتانت وأعد تعليق كريات الخلايا في 20-50 ميكرولتر من PBS. انتقل إلى القسم 4 لقياس العينة.

4. تصوير علامات الشيخوخة باستخدام نظام مقياس التدفق الخلوي للتصوير

  1. أفرغ زجاجة سائل النفايات. تحقق من مستويات الخرز السريع، والمعقم، والمنظف، ومزيل الفقاعات، والغمد، وكواشف الشطف (الماء منزوع الأيونات) لضمان وجود سوائل كافية قبل تشغيل الجهاز (انظر جدول المواد).
  2. قم بتشغيل الأداة وبرنامج التصوير (انظر واجهة البرنامج في الشكل 1A).
  3. انقر فوق الزر " بدء التشغيل" لتهيئة الموائع ومعايرة النظام.
    ملاحظة: يستغرق هذا الإجراء حوالي 45 دقيقة.
  4. اضبط التكبير على 40x ، واضبط سرعة الموائع على منخفضة ، وقم بتشغيل أشعة الليزر اللازمة في التجربة. قم بتشغيل ليزر 405 نانومتر و 488 نانومتر و 642 نانومتر لقياس أزرق EdU-pacific و C12FDG و Alexa Fluor 647-γH2AX (أو Alexa Fluor 647-Ki67) ، على التوالي. اضبط Ch6 للقناة المبعثرة ، و Ch1 و Ch9 ل brightfield.
  5. ابدأ بالعينة المتوقع أن يكون لها أعلى تألق لإعداد شدة الليزر. اقلب أنبوب العينة برفق لمزجه. افتح غطاء الأنبوب، وأدخل أنبوب العينة في الرصيف. انقر فوق تحميل للبدء.
  6. افتح مخططا مبعثرا وحدد المعالم Area_M01 Ratio_M01 Aspect للمحورين X وY، على التوالي. اضبط بوابة فوق نسبة العرض إلى الارتفاع تبلغ 0.5 لاستبعاد الثنائيات ومجاميع الخلايا أسفل الجانب الأيمن وعليه، ومجموعات خرزة السرعة على الجانب الأيسر (الشكل 1B).
  7. افتح مخطط رسم بياني وحدد ميزة التدرج RMS_M01_Ch01 للمحور X. اختر المجموعة المفردة واضبط البوابة للاختيار للخلايا المركزة (الشكل 1C).
    ملاحظة: سيستخدم نظام التصوير تلقائيا حبات السرعة لضبط التركيز البؤري للتصوير. ومع ذلك ، يوصى باختيار النصف الأيمن من ذروة الرسم البياني للسكان الأكثر تركيزا.
  8. افتح مخطط رسم بياني وحدد كثافة Raw Max Pixel للمحور X لكل قناة ألوان (Ch2 و7 و11). اضبط قوى الليزر (أي ليزر 488 نانومتر و 405 نانومتر و 642 نانومتر ل Ch2 و 7 و 11 ، على التوالي) ، بحيث يكون لكل فلوروكروم قيمة Raw Max Pixel بين 100 و 4000 لتجنب الإفراط في التشبع .
    ملاحظة: بالنسبة لهذه التجربة، يكون إعداد طاقة الليزر 50 ميجاوات و200 ميجاوات و50 ميجاوات لليزر 488 نانومتر و405 نانومتر و642 نانومتر على التوالي.
  9. اختر المجموعة المركزة لتسجيلها وانقر فوق اكتساب لقياس عينات DLBCL بإعدادات متسقة. عند تغيير العينات للقياس ، انقر فوق "رجوع" لاستعادة أنبوب العينة. اضغط على تحميل لتجاهل العينة.
  10. بعد قياس جميع العينات ، قم بإيقاف تشغيل الحقل الساطع وتشتت الليزر. قم بقياس عينات التحكم أحادية اللون لإنشاء مصفوفة تعويض.
  11. انقر فوق إيقاف التشغيل لإغلاق نظام التصوير.
  12. تحليل البيانات في برنامج تحليل الصور.
    1. استخدم أداة Spot Wizard الخاصة ببرنامج تحليل الصور لحساب بؤر γH2AX النووية وتحديدها تلقائيا في صور الخلايا الحية. حدد مجموعتين من الخلايا (واحدة ذات عدد نقاط مرتفع والأخرى ذات عدد نقاط منخفض) لتدريب معالج البقع على مزيد من التحليل التلقائي لعدد النقاط.

النتائج

تم إنشاء مصفوفة تعويض باستخدام برنامج تحليل الصور عن طريق تحميل البيانات المسجلة لعينات التحكم أحادية اللون. كما هو موضح في الشكل التكميلي S1 ، تم الكشف عن امتداد ضوئي لا يكاد يذكر (قيمة المعامل ≥ 0.1) من EdU إلى C12FDG بقيمة معامل المحادثة المتقاطعة 0.248 ، في حين أن المحادثة المتقاط...

Discussion

فحصت هذه الطريقة القدرة على دخول الشيخوخة لأربعة خطوط مختلفة من خلايا DLBCL عند العلاج الكيميائي ، مع التصوير الساطع المجال والقياس الكمي القائم على التدفق الخلوي. على مستوى الخلية الواحدة، نجحنا في اكتشاف المجموعات السكانية الشائخة الرئيسية C12FDG+EdU-Ki67+ في خلايا KARPAS422 وWSU-DLCL...

Disclosures

وليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإفصاح عنه.

Acknowledgements

تم دعم هذا العمل من خلال منحة إلى يونغ يو من جامعة يوهانس كيبلر لينز (BERM16108001).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Alexa Fluor 647 anti-H2A.X Phospho (Ser139) AntibodyBiolegend613407
Anti-Ki-67 Mouse Monoclonal Antibody (Alexa Fluor 647)Biolegend350509
C12FDG (5-Dodecanoylaminofluorescein Di-β-D-Galactopyranoside)Fisher Scientific11590276
Chloroquin -diphosphatSigma aldrichC6628
Cleanser (Coulter Clenz)Beckman Coulter8546929
Click-iT EdU Pacific Blue Flow Cytometry Assay KitThermo ScientificC10418
DaunorubicinMedchemexpressHY-13062A
Debubbler (70% Isopropanol)Millipore1.3704
Image Analysis software (Amnis IDEAS 6.3)LuminexCN-SW69-12
Instrument and imaging software (Amnis ImageStreamX Mk II Imaging Flow Cytometer System and INSPIRE software)Luminex100220
KARPASDSMZACC 31
mafosfamide cyclohexylamineNiomechD-17272
OCI-LY1DSMZACC 722
ParaformaldehydeFisher Scientific11473704
PETG (2-Phenylethyl-β-D-thiogalactosid) Sigma aldrichP4902
saponinSigma aldrich47036
SheathMilliporeBSS-1006-B
SpeedBead Kit for ImageStreamLuminex400041
Sterilizer (0.4-0.7% Hypochlorite)VWRJT9416-1
SU-DHL6DSMZACC 572
WSU-DLCL2DSMZACC 575

References

  1. Kuilman, T., Michaloglou, C., Mooi, W. J., Peeper, D. S. The essence of senescence. Genes and Development. 24 (22), 2463-2479 (2010).
  2. Di Micco, R., et al. Oncogene-induced senescence is a DNA damage response triggered by DNA hyper-replication. Nature. 444 (7119), 638-642 (2006).
  3. Milanovic, M., et al. Senescence-associated reprogramming promotes cancer stemness. Nature. 553 (7686), 96-100 (2018).
  4. Passos, J. F., et al. Feedback between p21 and reactive oxygen production is necessary for cell senescence. Molecular Systems Biology. 6 (1), 347 (2010).
  5. Lee, S., Schmitt, C. A. The dynamic nature of senescence in cancer. Nature Cell Biology. 21 (1), 94-101 (2019).
  6. Toussaint, O., et al. Stress-induced premature senescence or stress-induced senescence-like phenotype: one in vivo reality, two possible definitions. The Scientific World Journal. 2, 230-247 (2002).
  7. Collado, M., Blasco, M. A., Serrano, M. Cellular senescence in cancer and aging. Cell. 130 (2), 223-233 (2007).
  8. Munoz-Espin, D., et al. Programmed cell senescence during mammalian embryonic development. Cell. 155 (5), 1104-1118 (2013).
  9. Faget, D. V., Ren, Q., Stewart, S. A. Unmasking senescence: context-dependent effects of SASP in cancer. Nature Reviews Cancer. 19 (8), 439-453 (2019).
  10. Childs, B. G., Durik, M., Baker, D. J., van Deursen, J. M. Cellular senescence in aging and age-related disease: from mechanisms to therapy. Nature Medicine. 21 (12), 1424-1435 (2015).
  11. Chandra, T., et al. Global reorganization of the nuclear landscape in senescent cells. Cell Rep. 10 (4), 471-483 (2015).
  12. Rodier, F., et al. Persistent DNA damage signalling triggers senescence-associated inflammatory cytokine secretion. Nature Cell Biology. 11 (8), 973-979 (2009).
  13. Schleich, K., et al. H3K9me3-mediated epigenetic regulation of senescence in mice predicts outcome of lymphoma patients. Nature Communications. 11 (1), 3651 (2020).
  14. Di Micco, R., Krizhanovsky, V., Baker, D., d'Adda di Fagagna, F. Cellular senescence in ageing: from mechanisms to therapeutic opportunities. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 22 (2), 75-95 (2021).
  15. Fan, D. N., Schmitt, C. A. Detecting markers of therapy-induced senescence in cancer cells. Methods in Molecular Biology. 1534, 41-52 (2017).
  16. Schmitt, C. A., Lowe, S. W. Apoptosis and chemoresistance in transgenic cancer models. Journal of Molecular Medicine. 80 (3), 137-146 (2002).
  17. Dorr, J. R., et al. Synthetic lethal metabolic targeting of cellular senescence in cancer therapy. Nature. 501 (7467), 421-425 (2013).
  18. Fan, D. N. Y., Schmitt, C. A. Genotoxic stress-induced senescence. Methods in Molecular Biology. 1896, 93-105 (2019).
  19. Noppe, G., et al. Rapid flow cytometric method for measuring senescence associated beta-galactosidase activity in human fibroblasts. Cytometry A. 75 (11), 910-916 (2009).
  20. Biran, A., et al. Quantitative identification of senescent cells in aging and disease. Aging Cell. 16 (4), 661-671 (2017).
  21. Rossi, M., Abdelmohsen, K. The emergence of senescent surface biomarkers as senotherapeutic targets. Cells. 10 (7), 1740 (2021).
  22. Gonzalez-Gualda, E., Baker, A. G., Fruk, L., Munoz-Espin, D. A guide to assessing cellular senescence in vitro and in vivo. The FEBS Journal. 288 (1), 56-80 (2021).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

185 C12FDG EdU H2AX DLBCL

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved