تعزيز نمو ونمو الفئران المصابة بالشلل الدماغي الرضع باستخدام التلاعب الانتقائي بالعمود الفقري

Summary

توضح هذه الدراسة تأثير التلاعب الانتقائي بالعمود الفقري على نمو وتطور الفئران الرضع المصابة بالشلل الدماغي ، مع التركيز على الإجراء المحدد والبروتوكول الموحد. تم إجراء قياس وزن الجسم ، واختبار روتارود ، ودرجة خطأ القدم ، والاختبارات السلوكية الأخرى ، والكشف عن هرمون النمو لتقييم البروتوكول.

Abstract

الشلل الدماغي (CP) هو مرض أطفال مقاوم للحرارة مع انتشار مرتفع ومعدل إعاقة مرتفع وعلاج صعب. تستخدم حاليا مجموعة متنوعة من العلاجات للشلل الدماغي. يتضمن العلاج العلاج بالعقاقير وغير الدوائية. العلاج الخارجي للطب الصيني التقليدي هو طريقة علاج مميزة للغاية في العلاج غير الدوائي. كأحد العلاجات الخارجية للطب الصيني التقليدي ، يستخدم التدليك في علاج الشلل الدماغي وله فعالية جيدة وآثار جانبية صغيرة وقابلية تشغيل قوية. كجزء من العلاج الخارجي للطب الصيني التقليدي ، يمكن أن يؤدي التلاعب الانتقائي بالعمود الفقري إلى تعزيز نمو وتطور الفئران الرضع المصابة بالشلل الدماغي بشكل فعال. تم تقسيم العملية بشكل أساسي إلى أربع خطوات: أولا ، تم تطبيق طريقة الفرك على العمود الفقري وجانبي العمود الفقري لمدة 1 دقيقة. تم تطبيق طريقة الضغط والعجن على العمود الفقري لمدة 5 دقائق ، والعضلات على جانبي العمود الفقري لمدة 5 دقائق. ثانيا ، تم إجراء الضغط على نقاط الوخز بالإبر المحلية الحساسة في العمود الفقري لمدة دقيقتين والضغط عليها. ثالثا ، تم علاج الطرف المصاب بطريقة الالتواء لمدة 1 دقيقة. رابعا ، تم تطبيق طريقة الاحتكاك على خط الوسط من الجبهة إلى الجزء الخلفي من الدماغ لمدة 1 دقيقة. تهدف هذه الدراسة إلى استخدام التلاعب الانتقائي بالعمود الفقري لعلاج الفئران الرضع المصابين بالشلل الدماغي. تم الكشف عن الوزن واختبار روتارود ودرجة خطأ القدم وهرمون النمو للفئران الرضع المصابة بالشلل الدماغي لفهم تأثير التلاعب الانتقائي بالعمود الفقري على نمو وتطور الفئران الرضع المصابة بالشلل الدماغي. أظهرت النتائج أنه يمكن أن يعزز زيادة الوزن ، وتحسين القدرة على التوازن والوظيفة الحركية ، وتعزيز نمو وتطور الفئران المصابة بالشلل الدماغي الرضع ، وتعزيز إفراز هرمون النمو ، وزيادة درجة حرارة الأجزاء الحساسة من الظهر.

Introduction

الشلل الدماغي (CP) ، الناجم عن تلف غير تدريجي للدماغ في الجنين أو الطفولة ، هو مجموعة من الاضطرابات التي تتميز بالتطور الحركي والوضعي^{غير الطبيعي 1} ، واضطرابات النمو بما في ذلك زيادة الوزن البطيئة^2،3،4 ، والخلل الحركي. معدل الإصابة بالشلل الدماغي في الصين هو 2.48٪ ، ومعدل الانتشار 2.46 ‰ (1-6 سنوات) ⁵ ، على التوالي. أفادت الدراسات الأجنبية بانتشار 2.4٪ -3.6٪ ⁶. الشلل الدماغي هو سبب رئيسي للإصابة الجسدية والإعاقة عند الأطفال ، من بينها اضطرابات التوازن والحركة التي تؤثر بشكل كبير على أنشطة الحياة اليومية¹. يمكن أن يحدث الشلل الدماغي بسبب الولادة المبكرة ، والعدوى ، وعلم الوراثة ، ونقص تروية الأطفال حديثي الولادة ، واليرقان الوليدي ، وغيرها من العوامل المسببة للأمراض المعقدة والمتنوعة⁷. الهدف من علاج الشلل الدماغي هو تحسين الوظيفة البدنية ونوعية الحياة ⁸. حاليا ، تشمل طرق علاج الشلل الدماغي التحفيز العميق للدماغ⁹ ، وتدريب المشي بمساعدة^{الروبوت 10} ، والوخز بالإبر في الرسغ والكاحل¹¹ ، والوخز بالإبر الزوال جنبا إلى جنب مع التدليك¹².

تم استخدام الطب الصيني التقليدي (TCM) بشكل متزايد كعلاج فعال للشلل الدماغي^13،14. التدليك ، كجزء منه ، يلعب أيضا دورا معينا. على سبيل المثال ، يمكن أن ينظم التلاعب الانتقائي بالعمود الفقري حالة هيدروكسي ميثيل الحمض النووي لتنظيم التطور العصبي وتحسين وظيفة التعلم^{والذاكرة 15}. في علاج الفئران الرضيعة المصابة بالشلل الدماغي ، قد يؤدي التلاعب الانتقائي بالعمود الفقري إلى تحسين التوازن الالتهابي للقشرة والحصين عن طريق تنظيم مستوى مثيلة السيتوكينات الالتهابية TNF-α و IL-10 المنطقة¹⁶ ولعب دور علاجي إيجابي في قدرة التوازن للفئران الرضيعة المصاب بالشلل الدماغي¹⁶. يمكن أن يؤدي التلاعب الانتقائي بالعمود الفقري إلى تحسين الوظيفة المعرفية للفئران الرضع المصابة بالشلل الدماغي¹⁷. تم استخدام التلاعب الانتقائي بالعمود الفقري في علاج الفئران الرضع المصابة بالشلل الدماغي ، ولوحظ أن له أيضا تأثيرات علاجية على نموهم وتطورهم¹⁸.

الغرض من هذه الدراسة هو توضيح تأثير التلاعب الانتقائي بالعمود الفقري على نمو وتطور الفئران الرضع المصابة بالشلل الدماغي من خلال قياس وزن الجسم ، واختبار روتارود¹⁹ ، ودرجة خطأ^{القدم 20،21} ، والاختبارات السلوكية الأخرى والكشف عن هرمون النمو ، وتقديم أفكار بحثية للموظفين المعنيين.

Protocol

تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة أخلاقيات التجريبية بجامعة يونان للطب الصيني التقليدي. اتبعت جميع العمليات التجريبية على مبدأ 3R لتقليل التجريبية وتحسينها واستبدالها (رقم R-06202018). تم استخدام فئران Sprague Dawley (SD) الصحية (14 ذكرا و 7 إناث) من درجة محددة خالية من مسببات الأمراض (SPF) بمتوسط وزن جسم 250-300 جم في هذه التجربة. تم تربية الفئران في غرفة SPF بجامعة يوننان للطب الصيني التقليدي ، رقم الشهادة: SYXK (Yunnan) K2022-0004. تم إيواء جميع الفئران تحت دورة ضوئية / مظلمة مدتها 12 ساعة مع بيئة طبيعية يتم التحكم فيها بالضوء عند درجة حرارة الغرفة من 22 إلى 26 درجة مئوية ورطوبة نسبية تتراوح بين 40٪ و 50٪. بعد أسبوع واحد من التغذية التكيفية ، تم الحفاظ على نسبة الذكور إلى الإناث عند 1: 2. بعد أسبوع واحد ، تم إيواء الفئران الحامل في قفص واحد ، وإطعامها بشكل طبيعي ، وتناول الطعام والشرب بحرية. بعد الولادة الطبيعية ، تم اختيار الفئران الرضع الأصحاء المولودين للفئران الحامل. تم تقسيم الفئران الرضع إلى مجموعات الشام والتحكم والعلاج لمراقبة تأثير التلاعب الانتقائي بالعمود الفقري على نمو وتطور الفئران الرضع المصابة بالشلل الدماغي. من كل مجموعة ، تم اختيار 6 صغار ذكور للتجربة. تم علاج مجموعة العلاج بالتلاعب الانتقائي بالعمود الفقري من اليوم^الخامس بعد الولادة ، وتم إعطاء العلاج لمدة 6 أيام تليها الراحة لمدة يوم واحد.

1. إنشاء نموذج الشلل الدماغي

1. تعقيم المجهر ومقص العيون والملقط والخياطة والصفيحة الجراحية والمقص ومسحات القطن والقفازات اللازمة للجراحة ووضعها في غرفة العمليات.
2. افصل الجرو مؤقتا عن والدته في اليوم الثالث من الحياة ، وضعه في إطار واحد ، وانقله إلى غرفة العمليات المعقمة.
3. قياس وزن الجسم. قم بتضمين الفئران الرضع التي يتراوح وزنها من 7-9 جم في الدراسة ، واستبعد أولئك الذين لم يتوافقوا مع وزن الجسم. قسم الفئران الرضع بشكل عشوائي إلى مجموعات الشام والتحكم والعلاج.
4. تحفيز التخدير باستخدام الأيزوفلوران بتركيز 2٪ والحفاظ على التخدير عند 1٪ باستخدام آلة تخدير غاز استنشاق الصغيرة.
   ملاحظة: تهدف هذه التجربة بشكل أساسي إلى مراقبة آثار التلاعب الانتقائي بالعمود الفقري على نمو وتطور الفئران الرضع المصابة بالشلل الدماغي. تم إجراء التخدير وفقا للمتطلبات العامة أثناء عملية النمذجة ، وسيؤثر التسكين الإضافي على نتائج الملاحظة.
   1. قم بتوصيل مخدر غاز الصغيرة بمصدر الطاقة وافتح الصمام المتصل بصندوق الحث.
   2. ضع الجرذ الرضيع في صندوق الحث ، وأدر مقبض ضبط التركيز ، واضبط تركيز الأيزوفلوران على 2٪ للحث على التخدير.
   3. عندما يكون الجرذ الرضيع فاقدا للوعي ، أخرجه من صندوق الحث. ضعه على لوحة العمليات وأغلق القناة 1 لآلة التخدير.
   4. ضع الفئران الرضيعة ضعيفة. إصلاح قناع استنشاق التخدير للحفاظ على التخدير.
   5. افتح القناة المتصلة بقناع استنشاق التخدير. حافظ على التخدير عن طريق تدوير مقبض ضبط التركيز وضبط تركيز الأيزوفلوران إلى 1٪.
      ملاحظة: بعد التخدير ، قم بتقييم عمق التخدير عن طريق رفع أصابع القدم والذيل بالقوة والضغط عليها. يؤكد عدم الاستجابة عند رفع أصابع القدم والذيل وضغطهما على عمق التخدير قد وصل.
5. تطهير جلد رقبة الجرذ الرضيع ثلاث مرات بالكحول بنسبة 75٪ وقطع شق طولي بطول 1 سم على جلد الرقبة لكشف الأنسجة تحت الجلد.
   ملاحظة: الشق الطولي لجلد الرقبة لا يسبب عيبا في الجلد.
6. قم بقص جلد الرقبة اليسرى تحت مجهر تشريح ، واستخدم ملاقط العين لفصل العضلات القصية الكريمة عن العضلة القصية اليسرى بشكل صريح.
   1. ابحث عن الشريان السباتي المشترك الأيسر والعصب المبهم ، وافصل الشريان السباتي المشترك الأيسر عن العصب المبهم.
   2. في مجموعة النماذج، اقطع الشريان السباتي المشترك الأيسر بقلم تخثر كهربائي. نظف وخياطة شق الرقبة.
   3. في مجموعة الشام ، افصل الشريان السباتي المشترك الأيسر عن العصب المبهم.
7. بعد العملية ، ضع الجرذ الرضيع في حمام مائي ثرموستاتي في وضع الانبطاح للإنعاش لمدة 1 ساعة.
   ملاحظة: بعد الشفاء الطبيعي ، كان لون بشرة الأطراف والجسم كله أحمر الأحمر. يمكن للفأر الرضيع تحريك أطرافه بشكل مستقل والزحف بشكل مستقل.
8. ضع الفئران التي تم إنعاشها من مجموعات التحكم والعلاج في حاضنة مغلقة عند 37 درجة مئوية في وضع الانبطاح. أدخل مزيجا من 5٪ أكسجين و 95٪ غاز النيتروجين للحث على نقص الأكسجة ، وإزالة الفئران بعد ساعتين.
9. قم بإزالة الجرذ الرضيع الذي أكمل عملية نقص الأكسجة من صندوق نقص الأكسجة وضعه في وضع الانبطاح في صندوق به محتوى طبيعي من الأكسجين في الغلاف الجوي. ضعها في حمام مائي ترموستاتي 37 درجة مئوية لمدة 1 ساعة. بعد الشفاء التام ، انقل الجرذ الرضيع مرة أخرى إلى قفص الأم.
   ملاحظة: بعد التعافي بشكل طبيعي ، كان لون بشرة الأطراف والجسم كله أحمر. يمكن للفئران الرضيعة تحريك أطرافها بشكل مستقل ويمكنها الزحف بشكل مستقل.
10. ضع الجرذ الرضيع من مجموعة الشام في صندوق واحد يحتوي على محتوى طبيعي من الأكسجين في الغلاف الجوي ، وضع الصندوق في حمام مائي حراري 37 درجة مئوية لمدة 1 ساعة. بعد الشفاء التام ، أعد الجرذ الرضيع إلى قفص الأم لإطعامه.
    ملاحظة: بعد التعافي بشكل طبيعي ، كان لون بشرة الأطراف والجسم كله أحمر. يمكن للفئران الرضيعة تحريك أطرافها بشكل مستقل ويمكنها الزحف بشكل مستقل. تم الانتهاء من عملية العملية بأكملها في غرفة العمليات الخاصة بغرفة SPF بجامعة يونان للطب الصيني التقليدي. أثناء الإنعاش ونقص الأكسجة ، يراقب المشغل الجرذ الرضيع في جميع الأوقات لمنع الوفاة الناجمة عن الموقف غير السليم. تم تغذية إناث الفئران المرضعة بعلف تربية خال من مسببات الأمراض (SPF) ، وعندما تمكنت الجراء من التغذية الذاتية ، تم فطام الجراء (يوم ما بعد الولادة 21) وإطعامها بعلف صيانة SPF.

2. تصحيح تجربة الانعكاس

1. في^{اليوم الرابع} بعد الولادة^{(اليوم الثاني} بعد النمذجة) ، قم بإجراء تجربة الانعكاس الصحيح للتحقق مما إذا كان النموذج ناجحا (الشكل 1 والجدول 1).
   1. ارفع ذيل الجرذ الرضيع ، وأريح ظهره على لوح أفقي ، واستخدم الإبهام والسبابة لتأمين بطنه ورقبته. تحقق مما إذا كان بإمكان الجرذ العودة إلى وضعه الطبيعي. يتم تسجيل عدم قدرة الفئران على العودة إلى الوضع الطبيعي من الوضع غير الطبيعي بسبب فقدان منعكس الصحيح كنموذج ناجح^16،22.
   2. سجل الوقت الذي تستغرقه كل مجموعة من الجراء للتحول من وضعية الاستلقاء إلى وضعية الانبطاح. ابدأ في تسجيل الوقت الذي يتم فيه تحرير أصابع الإبهام والسبابة في وقت واحد في وضع الاستلقاء ، والسماح للفأر الرضيع بالتحول إلى وضع الانبطاح ، وإيقاف التسجيل عند وضع الكفوف الأمامية والخلفية على الأرض. إذا لم يتمكن الجرذ الرضيع من العودة إلى الوضع الطبيعي لأكثر من 20 ثانية ، فسجل وقت التصحيح على أنه 20 ثانية.

3. التحضير قبل العملية

1. بعد النمذجة ، افصل الجرذ الرضيع المصاب بالشلل الدماغي عن والدته وأحضره إلى غرفة العمليات بدرجة حرارة غرفة ثابتة تتراوح من 22 إلى 26 درجة مئوية لمدة دقيقتين للتكيف مع البيئة المحيطة.
2. ارتد قفازات يمكن التخلص منها للحفاظ على راحة اليد خفيفة وناعمة ودرجة الحرارة بين 36-37 درجة مئوية.
3. ضع الجرذ برفق في راحة اليد اليسرى. ثني الإبهام الأيسر لتغطية عيون الجرذ لمدة دقيقتين لتشكيل مجال رؤية مظلم حتى يتمكن الجرذ من التكيف مع بيئة راحة المشغل. استخدم السبابة اليمنى والأصابع الوسطى للتلاعب.
   ملاحظة: يمكن أن يؤدي تغطية عيون الجرذ الرضيع إلى خلق بيئة مظلمة. سيمنع هذا الفئران الرضيعة من الانزعاج بسبب البيئة غير الآمنة وغير المؤكدة التي تؤثر على النتائج التجريبية.

4. تقسيم الفئران إلى مجموعات التحكم والعلاج

1. في اليوم الثاني بعد النمذجة (P5) ، تحقق من النموذج عن طريق اختبار الانعكاس التصحيحي وقسم الفئران الرضيعة بشكل عشوائي إلى مجموعات التحكم والعلاج. إجراء معالجة انتقائية للعمود الفقري على الفئران الرضع في مجموعة العلاج.
2. ضع الجرذ الرضيع في وضع الانبطاح. تأكد من أن العمود الفقري دائما على مستوى مستقيم (الشكل 2 أ).
3. قم بتدليك العمود الفقري وجانبي العمود الفقري لمدة 1 دقيقة باستخدام طريقة الفرك ، واستخدم طريقة الضغط والعجن على العمود الفقري والعضلات على جانبي العمود الفقري لمدة 5 دقائق.
   1. قم بتدليك العمود الفقري والجلد على كلا الجانبين باستخدام طريقة الفرك لإرخاء الجرذ الرضيع وتخفيف توتره تماما. تأكد من أن تواتر الاحتكاك هو 100-120 مرة / دقيقة لمدة دقيقة واحدة بعد أن يكون الجرذ الرضيع هادئا وبدون تحريض.
      1. استخدم السبابة اليمنى والإصبع الأوسط والبنصر كسطح تلامس ، وقم بحركة فرك دائرية على الجلد السطحي للعمود الفقري العنقي والعمود الفقري الصدري والعمود الفقري القطني من الرأس إلى الذيل دون إزعاج الأنسجة تحت الجلد.
      2. باستخدام السبابة اليمنى والإصبع الأوسط والإصبع الدائري كأسطح تلامس ، قم بإجراء حركة دائرية على سطح الجلد للعضلة شبه المنحرفة ، وعضلة الألوية السطحية ، والعضلة المعينية العنقية ، والعضلة المعينية الصدرية ، والعضلة الظهرية العريضة ، والعضلات المائلة الخارجية بالترتيب من الرأس إلى الذيل وفقا للمعيار التشريحي للحيوان²³ ، دون إزعاج الأنسجة تحت الجلد.
   2. عالج العمود الفقري أولا بالضغط والعجن لمدة 5 دقائق ، متبوعا بالضغط على العضلات على جانبي العمود الفقري وعجانها لمدة 5 دقائق.
      1. ضع طريقة العجن على العمود الفقري بتردد 120 مرة / دقيقة لمدة 5 دقائق. استخدم السبابة اليمنى أو الأصابع الوسطى كسطح تلامس. من الرأس إلى الذيل ، قم بإجراء العجن الدائري على الجلد السطحي للفقرات العنقية والصدرية والقطنية ، جنبا إلى جنب مع الضغط لأسفل (1.77 ± 0.54 نيوتن). تأكد من وصول القوة إلى فقرات عنق الرحم والفقرات الصدرية والفقرات القطنية والأربطة فوق الشوكية.
      2. ضع طريقة الضغط والعجن على العضلات على جانبي العمود الفقري بتردد 120 مرة / دقيقة لمدة 5 دقائق. استخدم السبابة اليمنى أو الإصبع الأوسط كسطح تلامس. وفقا للمعيار التشريحي الحيواني²³ ، اضغط على سطح الجلد شبه المنحرف ، والألوية السطحية ، والرقبة المعينية ، والصدرية المعينية ، والظهرية العريضة ، وعضلات البطن المائلة الخارجية في حركة عجن مستديرة من الرأس إلى الذيل ، بقوة 1.77 ± 0.54 نيوتن ، بحيث تصل القوة إلى شبه المنحرف ، الألوية السطحية ، الرقبة المعينية ، الصدرية المعينية ، العضلة الظهرية العريضة ، وعضلات البطن المائلة الخارجية (الشكل 2 ب) ²³.
4. اضغط على نقاط الوخز بالإبر الشوكي الحساسة (مثل Ganshu و Xinshu و Pishu و Shenshu و Feishu²⁴) بتردد 100-120 مرة / دقيقة لمدة دقيقتين. باستخدام السبابة اليمنى أو الإصبع الأوسط كسطح تلامس ، قم بإجراء العجن الدائري والضغط لأسفل (1.77 ± 0.54 نيوتن) على الجلد السطحي لنقاط الوخز بالإبر الموضعية (مثل Ganshu و Xinshu و Pishu و Shenshu و Feishu) في الفئران الرضع المصابة بالشلل الدماغي.
   ملاحظة: تم اختيار نقاط الوخز بالإبر وفقا ل "خريطة نقطة الوخز بالإبر الحيوانية" التي صاغها فرع أبحاث الوخز بالإبر التجريبي التابع لجمعية الوخز بالإبر الصينية) (الشكل 3) ²⁵.
5. تحفيز الطرف المصاب محليا بطريقة الالتواء بتردد 25 مرة / دقيقة لمدة 1 دقيقة.
   1. باستخدام الإبهام الأيمن والسبابة ، اضغط على الطرف المصاب بالجرذ الرضيع المصاب بالشلل الدماغي ، مع ممارسة قوة متناظرة على الإصبعين. تأكد من أن القوة لطيفة وأن الحركة خفيفة ولطيفة. فرك الباسطة الصحيحة carpi radialis ، الباسطة الدنيا الشائعة ، الباسطة carpi ulnaris ، الكتائب ، المفصل بين الكتائب ، العضلة المعدية ، العضلة شبه الوترية ، عظم مشط القدم ، والمفصل بين مشط القدم للفئران الرضيع ذهابا وإيابا.
6. تطبيق طريقة الفرك على خط الوسط من الجبهة إلى الجزء الخلفي من الدماغ بتردد 100-120 مرة / دقيقة لمدة 1 دقيقة. استخدم السبابة الأيمن كسطح تلامس ، واستخدم طريقة الفرك على خط وهمي من الجبهة إلى منتصف الدماغ الخلفي للفأر الرضيع (أي سطر واحد من Baihui و Fengfu و Dazhui) (الشكل 3).
   ملاحظة: يتم تطبيق التدليك بشكل أساسي على الجلد. إنها حركة دائرية على سطح جلد رأس الجرذ الرضيع المصاب بالشلل الدماغي. لا يحتاج إلى دفع حركة العضلات تحت الجلد لفأر رضيع مصاب بالشلل الدماغي.
7. في نهاية الإجراء ، اترك الجرذ الرضيع بمفرده لمدة 30 دقيقة قبل إعادته إلى قفص الفئران الأم.
   ملاحظة: مع تقدم العمر ، يصبح شعر الفئران الصغيرة كثيفا ، لذلك من الضروري إزالة الشعر الخلفي لجميع مجموعات الفئران الرضع أثناء عملية التدليك لتجنب التأثير على التأثير التجريبي.

5. الكشف عن درجة حرارة نقاط الوخز بالإبر المحلية

1. استخدم جهاز تصوير حراري بالأشعة تحت الحمراء للكشف عن درجة حرارة منطقة نقطة الوخز بالإبر المحلية قبل العملية وبعدها.
   1. قبل تدليك العمود الفقري الانتقائي ، قم بتوصيل واجهة Type-C للهاتف المحمول بواجهة USB لجهاز التصوير بالأشعة تحت الحمراء باستخدام كابل بيانات ، وقم بتشغيل زر الطاقة.
   2. انقر تحليل للدخول إلى محطة الهاتف المحمول الخاصة بالبرنامج ، وحدد صورة للدخول إلى وضع الصورة ، وانقر فوق صورة في وضع الصورة في الزاوية اليمنى السفلية.
   3. ركز الكاميرا على مناطق الوخز بالإبر في نقاط الوخز بالإبر Dazhui و Xinshu و Shenshu (الشكل 3) على ظهر الجرذ الرضيع لالتقاط لقطات درجة الحرارة. انقر الصورة لإكمال التقاط الصورة وحفظها بتنسيق JPG.
   4. قم بتوصيل الكمبيوتر بكابل بيانات وقم بتحميل الصورة المحفوظة على جهاز كمبيوتر مثبت عليه برنامج Fotric لتحليله.
      1. افتح برنامج Fotric على جهاز الكمبيوتر ، وافتح الملف المحلي ، وابحث عن موقع الصورة.
      2. حدد مساحة عمل Thermogram ، وحدد الصورة المراد تحليلها ، وادخل إلى واجهة التحليل.
      3. في شاشة التحليل ، حدد الصورة في مربع الصورة الحرارية على اليمين وافتح القفل.
      4. حدد وظيفة التكبير/التصغير ، واضبط حجم الصورة الحرارية والمربع الأيسر صورة الخلفية لتتزامن ، وقم بإيقاف تشغيل ملف قفل على اليمين.
      5. ابحث عن مستطيل القياس التعيين في شريط الأدوات في الأعلى وحدد نقطة الوخز المراد اكتشافها في الشكل.
      6. انقر فوق تقرير على اليمين لتسجيل قيمة درجة الحرارة.

6. الكشف عن وظيفة التوازن الحركي للفئران الرضع المصابة بالشلل الدماغي

1. استخدم اختبار Rotarod السلوكي¹⁹ للكشف عن الوظيفة الحركية للفئران في مجموعات الشام والتحكم والعلاج^{في اليوم} 61 بعد الولادة.
   1. إعدادات المعلمة: ابدأ مفتاح الطاقة ، وحدد قم بالتجربة للدخول إلى الخطوة التالية ، وحدد إيجابي ، والجرذان ، والتوقيت 5 دقائق للدخول إلى الخطوة التالية ، وحدد وقت التصحيح: 10 ثوان ، السرعة: 10 دورة في الدقيقة.
   2. بعد ذلك ، ضع الفئران على مضمار الجري وابدأ الاختبار بالنقر فوق تشغيل بعد أن تقف بثبات. اضبط حالة تشغيل كل تشغيل على ON. قم بتدريب كل فأر مرة واحدة لمدة 5 دقائق ، ثم ابدأ في إجراء الاختبار ثلاث مرات.
   3. بعد التدريب ، ضع الفئران الصغيرة على مسار الجري الدوتارود. بعد أن يصبح مستقرا ، انقر فوق تشغيل ، واضبط حالة التشغيل على ON. في نهاية 5 دقائق ، حدد التاريخ لتسجيل وقت وسرعة سقوط كل فأر من مسار الجري الدوتارود لأول مرة ، أي بيانات وقت التشغيل.
2. استخدم اختبار خطأ القدم^20،21 لتقييم الوظيفة الحركية المتوازنة للطرف الأمامي الأيمن لمجموعات الشام والتحكم والعلاج^{في اليوم} 61 بعد الولادة.
   1. ضع الفئران الصغيرة في نهاية البداية من السلم الأفقي وسجل مقطع فيديو لها وهم يعبرونها إلى الطرف الآخر (بطول 100 سم ، والمسافة بين كل سلم 2 سم). بعد جلسة تدريبية واحدة ، قم بإجراء الاختبار الرسمي ثلاث مرات لكل فأر بفاصل 5 دقائق.
   2. راقب الطرف الأمامي الأيمن عندما يعبر السلم باستخدام التشغيل منخفض السرعة لتسجيل النتيجة ، كما هو موضح في معيار التسجيل (الجدول 2).

7. النشاف الغربي

1. إجراء تحليل النشاف الغربي لعينات الأنسجة كما هو موضح^{سابقا 26}.
   ملاحظة: تم تحديد كمية المحللة وفقا لحجم كتلة الأنسجة. كانت الأجسام المضادة المستخدمة على النحو التالي: الجسم المضاد الأولي المضاد لهرمون النمو (0.5 ميكروغرام [0.5 نانوغرام / حارة]) ؛ الأجسام المضادة لمستقبلات هرمون النمو (1/1000) ؛ المرجع الداخلي المضاد للأجسام المضادة للأكتين (1/2000) للأجسام المضادة الأولية. الماعز المضاد للأرانب IgG H&L (HRP) (1/10000) للأجسام المضادة الثانوية.

8. الكشف عن قوة اليد

1. ارتد الجهاز المستخدم للكشف عن قوة التلاعب على اليد المستخدمة للتدليك. قم بتركيب الإصبع المستخدم لتدليك الجرذ الرضيع بشريحة المستشعر الخاصة بالجهاز ، وقم بتشغيل زر الطاقة .
2. قم بتوصيل واجهة القرص الصلب التي تخزن برنامج الاختبار اليدوي بالكمبيوتر ، وأدخل عنوان IP المخصص للمختبر اليدوي في مربع إدخال URL .
3. قم بتثبيت عميل SpringVR على الكمبيوتر ، وانقر للدخول إلى واجهة المجموعة ، وحدد نمط الإصبع في الزاوية اليمنى السفلية لاختبار قوة التلاعب.
4. حدد خيار الضغط وانقر فوق ابدأ لبدء تسجيل القوة اليدوية للمشغل أثناء التشغيل. سيقوم البرنامج تلقائيا بتسجيل شدة التلاعب وإنشاء جدول بيانات على القرص المحلي حيث سيتم العثور على البيانات الموجودة في اسم الملف PressureSensor .

9. إحصائيات البيانات

ملاحظة: تم استخدام برنامج SPSS26.0 للتحليل الإحصائي ، و Graphpad Prism9.0.0 لإنتاج المخططات الشريطية ، و Image J لتحليل القيمة الرمادية لنطاقات البروتين.

1. تحليل وعرض جميع البيانات كمتوسط ± انحراف معياري (متوسط ± SD).
   ملاحظة: كان معيار الاختبار α = 0.05 ، واعتبر P ≤ 0.05 ذا دلالة إحصائية. تم استخدام اختبار فيشر لأن البيانات تم تحليلها عن طريق تحليل التباين والطبيعية ومطابقتها لخصائص التوزيع الطبيعي وتجانس التباين.

النتائج

يمكن أن يعزز التلاعب الانتقائي بالعمود الفقري زيادة وزن الجسم لدى الفئران الرضع المصابة بالشلل الدماغي.
أثناء العلاج ، تم قياس وزن الجسم في أيام ما بعد الولادة 3 و 14 و 28 و 42 و 61 (الشكل 4 ، الجدول 3). في اليوم الثالث بعد الولادة ، كان وزن جسم...

Discussion

نظرا لأن نقص التروية ونقص الأكسجة من العوامل المسببة للأمراض المهمة للشلل الدماغي ، فإن الطريقة المعترف بها دوليا لإنشاء نموذج الشلل الدماغي يتم الجمع بين نقص الأكسجة لإعداد نموذج الشلل الدماغي^{16،28،29،30...}

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
96-well plates	Beijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD	11510	Determination of protein concentration
Anti-beta Actin antibody	Abacm	Ab8227	Dilution: 1/2000
Anti-Growth Hormone antibody	Abacm	Ab126882	0.5 µg (0.5 ng/lane)
Anti-Growth Hormone receptor antibody	Abacm	Ab202964	Dilution: 1/1000
Basic operating microscope	Shanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTD	SM-101	The common carotid artery was isolated under microscope during modeling
BCA developer	Biyuntian Biological Engineering Co., LTD	P0010	Determination of protein concentration
Chemiluminescence imaging system	Shanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., LTD	100240073	Protein banding imaging
Direct-load Color Prestained Marker	Beijing Kangrunchengye Biotechnology Co., LTD (GenStar)	M221	Western Blot
DK-30Automatic snow ice maker	Henan Brothers instrument equipment Co., LTD	SHDX0023	Ice-making
ECL luminescent substrate kit	Beijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD	BL520B	Convert latent images in exposed film into visible images
Electric-heated thermostatic water bath	TAISITE INSTRUMENT	DK-98-II	The young rats were resuscitated after modeling
Electronic scales	Kunshan YoukeWEI ELECTRONIC Technology Co. LTD	CN-LQC10002	The body weight of the young rats was measured
German small white electric coagulation pen hemostat	Haohang	L55×W125×H37	It was used to coagulate the left common carotid artery
Glove	Jiangsu YANGzi LiDE Medical Device Co. LTD	Q/320684 YZYL001-2017	For massage operation
Glycine	Beijing Soleibao Technology Co., Ltd.	Cat#G8200	Electrophoretic solution, Configure the transfer fluid
Goat Anti-RabbitIgG H&L (HRP)	Abacm	Ab6721	Dilution: 1/10000
Intelligent laboratory ultra-pure water machine	Chongqing huachuag water treatment engineering co.,LTD	N/A	Filtration (15 L)
Isoflurane	Shandong Ante Animal Husbandry Technology Co. LTD	15198	Anesthesia was maintained by induction in young rats
LinkIR	FOTIRC	V1.3.2.134	Infrared image analysis software
Low temperature high speed tissue grinder	Wuhan Servicebio technology CO.,LTD	SKZ3F20200191	Tissue grinding
Methanol	Guangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd	20220519	Configure the transfer fluid
Mini-PROTEAN Tetra	Bole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd	552BR 233193	Electrophoresis
Multiskan Spectrum Microplate Spectrophotometer	TECAN	Spark	The absorbance and concentration of tissue protein were detected
Pressure-sensing smart gloves	Jinan Super Sense Intelligent Technology Co. LTD	Miiglove	It is used to measure the manipulative strength of the operator
PVDF membrane	MerckMillipore Corporation	IPVH00010	Western Blot
Refrigerated centrifuge	Hettich Precision Technology (Zhuhai) Co., LTD	MIKRO 220R	Centrifuge
Research three-in-one thermal imager	FOTIRC	226S (384 x 288)	Temperature measurement
RIPA lysate	Beijing Solaibao Technology Co., LTD (Solarbio)	R0010	Lytic tissue
SHA-CA digital display water bath thermostatic oscillator	Changzhou Aohua Instrument Co. LTD	SHA-CA	Young rats were used in hypoxia
Six-rat fatigue rotarod apparatus	Shanghai Duoyi Industry Co., LTD	DO01104RT703	CP motor function was detected
Skim milk powder	Guangzhou Saiguo Biotechnology Co., LTD (BIOFROXX)	1172GR500	Confining liquid
SPF breeding feed	SPF(Beijing)biotechnology co.,Ltd.	A1EC30005A1S4285266	Lactating female rats were fed
SPF maintenance feed	SPF(Beijing)biotechnology co.,Ltd.	A1EC30005A1S4285267	The pups were fed after weaning
Surgical plate	Shanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTD	51002	The model operating table was established in young rats
TS-200 Orbital shaker	Haimen Qilin Bell Manufacturing Co., Ltd.	TS-8S	Gel fixation
Tween 80	MedChemExpress	HY-Y1819	Configure TBST
ZS-MV Portable anesthesia machine	ZHONGSHI SCIENCE &TECHNOLOGY	ZS-MV-I	Anesthesia was induced and maintained in experimental animals