JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Bu çalışma, seçici spinal manipülasyonun serebral palsili bebek sıçanların büyümesi ve gelişimi üzerindeki etkisini göstermekte ve spesifik prosedürü ve standardize protokolü vurgulamaktadır. Protokolü değerlendirmek için vücut ağırlığı ölçümü, Rotarod testi, Ayak hatası skoru, diğer davranış testleri ve büyüme hormonu tespiti yapıldı.

Özet

Serebral palsi (SP) prevalansı yüksek, özürlülük oranı yüksek ve tedavisi zor olan dirençli bir pediatrik hastalıktır. SP için şu anda çeşitli tedaviler kullanılmaktadır. Tedavi ilaç ve ilaç dışı tedaviyi içerir. Geleneksel Çin tıbbı eksternal terapi, ilaç dışı tedavide çok belirgin bir tedavi yöntemidir. Geleneksel Çin tıbbının dış terapilerinden biri olan masaj, serebral palsi tedavisinde kullanılır ve iyi bir etkinliğe, küçük yan etkilere ve güçlü çalışabilirliğe sahiptir. TCM dış tedavisinin bir parçası olarak, seçici spinal manipülasyon, serebral palsili bebek sıçanların büyümesini ve gelişmesini etkili bir şekilde teşvik edebilir. Ameliyat esas olarak dört aşamaya ayrıldı: ilk olarak, omurgaya ve omurganın her iki tarafına 1 dakika boyunca sürtünme yöntemi uygulandı. Bastırma ve yoğurma yöntemi 5 dk boyunca omurgaya, 5 dk boyunca omurganın her iki yanındaki kaslara uygulandı. İkinci olarak, omurgadaki hassas lokal akupunktur noktalarının 2 dakika süreyle bastırılması ve yoğrulması yapıldı. Üçüncü olarak, etkilenen uzuv 1 dakika boyunca büküm yöntemi ile tedavi edildi. Dördüncüsü, ovma yöntemi 1 dakika boyunca alından beynin arkasına kadar bir orta hatta uygulandı. Bu çalışma, serebral palsili bebek sıçanları tedavi etmek için seçici spinal manipülasyon kullanmayı amaçladı. Serebral palsili bebek sıçanların ağırlığı, Rotarod testi, Ayak hatası skoru ve büyüme hormonu, selektif spinal manipülasyonun serebral palsili bebek sıçanların büyüme ve gelişimi üzerindeki etkisini anlamak için tespit edildi. Sonuçlar, kilo alımını teşvik edebileceğini, denge yeteneğini ve motor fonksiyonu geliştirebileceğini, bebek serebral palsili sıçanların büyümesini ve gelişmesini teşvik edebileceğini, büyüme hormonu salgılanmasını teşvik edebileceğini ve sırtın hassas kısımlarının sıcaklığını artırabileceğini gösterdi.

Giriş

Serebral Palsi (SP), fetüste veya bebeklik döneminde beynin ilerleyici olmayan hasarının neden olduğu, anormal motor ve postüral gelişim1, yavaş kilo alımı 2,3,4 dahil gelişimsel bozukluklar ve motor disfonksiyon ile karakterize bir grup bozukluktur. Çin'de serebral palsi insidansı %2,48 ve prevalansı sırasıyla ‰2,46 (1-6 yaş)5'tir. Yabancı çalışmalar %2,4-%3,6 arasında bir prevalans bildirmiştir6. Serebral palsi, denge ve hareket bozukluklarının günlük yaşam aktivitelerini önemli ölçüde etkilediği çocuklarda önemli bir fiziksel yaralanma ve sakatlık nedenidir1. Serebral palsiye erken doğum, enfeksiyon, genetik, yenidoğan iskemisi ve hipoksisi, yenidoğan sarılığı ve diğer karmaşık ve çeşitli patojenik faktörlerden kaynaklanabilir7. Serebral palsi tedavisinin amacı fiziksel fonksiyonu ve yaşam kalitesini iyileştirmektir 8. Şu anda, serebral palsi için tedavi yöntemleri arasında derin beyin stimülasyonu9, robot yardımlı yürüyüş eğitimi10, el bileği ve ayak bileği akupunkturu11 ve masaj ile birlikte meridyen akupunkturu12 bulunmaktadır.

Geleneksel Çin tıbbı (TCM), CP13,14 için etkili bir tedavi olarak giderek daha fazla kullanılmaktadır. Masaj, bunun bir parçası olarak, aynı zamanda belirli bir rol oynar. Örneğin, seçici spinal manipülasyon, nöral gelişimi düzenlemek ve öğrenme ve hafıza fonksiyonunu iyileştirmek için DNA hidroksimetilasyon durumunu düzenleyebilir15. Serebral palsili bebek sıçanların tedavisinde, seçici spinal manipülasyon, inflamatuar sitokinler TNF-α ve IL-10 gen promotör bölgesi16'nın metilasyon seviyesini düzenleyerek korteks ve hipokampusun inflamatuar homeostazını iyileştirebilir ve serebral palsili bebek sıçanın denge yeteneğinde olumlu bir terapötik rol oynayabilir16. Seçici spinal manipülasyon, serebral palsili bebek sıçanların bilişsel işlevini iyileştirebilir17. Serebral palsili bebek sıçanların tedavisinde selektif spinal manipülasyon kullanılmış ve büyüme ve gelişmeleri üzerinde de terapötik etkileri olduğu görülmüştür18.

Bu çalışmanın amacı, selektif spinal manipülasyonun serebral palsili bebek sıçanların vücut ağırlığının ölçülmesi, Rotarod testi19, Ayak hatası skoru20,21 ve diğer davranış testleri ile büyüme hormonunun saptanması üzerine etkisini göstermek ve ilgili personel için araştırma fikirleri sunmaktır.

Protokol

Bu çalışma, Yunnan Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Deney Hayvanları Etik Kurulu tarafından onaylanmıştır. Hayvanlar üzerinde yapılan tüm deneysel işlemler, deney hayvanı indirgeme, optimizasyon ve değiştirme (No. R-06202018) 3R ilkesini izledi. Bu deneyde, ortalama vücut ağırlığı 250-300 g olan Spesifik patojen içermeyen (SPF) dereceli sağlıklı Sprague Dawley (SD) sıçanları (14 erkek ve 7 dişi) kullanıldı. Sıçanlar, Yunnan Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi'nin SPF hayvan odasında yetiştirildi, Sertifika numarası: SYXK(Yunnan)K2022-0004. Tüm sıçanlar, 22-26 ° C oda sıcaklığında ve% 40 -% 50 bağıl nemde doğal ışık kontrollü bir ortam ile 12 saatlik bir aydınlık / karanlık döngüsü altında barındırıldı. 1 haftalık adaptif beslenmeden sonra, erkek / kadın oranı 1: 2'de tutuldu. 1 hafta sonra gebe fareler tek bir kafese konuldu, normal şekilde beslendi, serbestçe yiyip içti. Doğal doğumdan sonra, gebe sıçanlardan doğan sağlıklı bebek sıçanlar seçildi. Bebek sıçanlar, seçici spinal manipülasyonun serebral palsili bebek sıçanların büyümesi ve gelişmesi üzerindeki etkisini gözlemlemek için Sham, Kontrol ve Tedavi gruplarına ayrıldı. Deney için her gruptan 6 erkek yavru seçildi. Tedavi grubu doğumdan sonraki 5. günden itibaren selektif spinal manipülasyon ile tedavi edildi ve tedavi 6 gün boyunca verildi ve ardından 1 gün istirahat edildi.

1. Serebral palsi modelinin oluşturulması

  1. Ameliyat için gerekli olan mikroskop, oftalmik makas, forseps, dikiş, cerrahi plaka, makas, pamuklu çubuk ve eldivenleri sterilize edin ve ameliyathaneye yerleştirin.
  2. Yaşamın üçüncü gününde bir yavruyu geçici olarak annesinden ayırın, tek bir çerçeveye yerleştirin ve steril ameliyathaneye taşıyın.
  3. Vücut ağırlığını ölçün. Çalışmaya vücut ağırlığı 7-9 g arasında değişen bebek sıçanları dahil edin ve vücut ağırlığına uymayanları hariç tutun. Bebek fareleri rastgele olarak Sham, Kontrol ve Tedavi gruplarına ayırın.
  4. % 2'lik bir konsantrasyonda izofluran ile anesteziyi indükleyin ve küçük bir hayvan inhalasyon gazı anestezi makinesi kullanarak% 1'de tutun.
    NOT: Bu deney esas olarak seçici spinal manipülasyonun serebral palsili bebek sıçanların büyümesi ve gelişmesi üzerindeki etkilerini gözlemlemek içindir. Modelleme sürecinde anestezi genel gereksinimlere uygun olarak gerçekleştirilmiştir ve ek analjezi gözlem sonuçlarını etkileyecektir.
    1. Küçük hayvan gazı anestezikini güç kaynağına bağlayın ve indüksiyon kutusuna bağlı valfi açın.
    2. Bebek fareyi indüksiyon kutusuna koyun, konsantrasyon ayar düğmesini çevirin ve anesteziyi indüklemek için izofluran konsantrasyonunu% 2'ye ayarlayın.
    3. Bebek sıçan bilinçsiz olduğunda, onu indüksiyon kutusundan çıkarın. Ameliyat plağına yerleştirin ve anestezi makinesinin 1. kanalını kapatın.
    4. Bebek fareyi sırtüstü yatırın. Anesteziyi korumak için anestezi inhalasyon maskesini sabitleyin.
    5. Anestezi inhalasyon maskesine bağlı kanalı açın. Konsantrasyon ayar düğmesini çevirerek ve izofluran konsantrasyonunu% 1'e ayarlayarak anesteziyi koruyun.
      NOT: Anesteziden sonra, bebek sıçanların ayak parmaklarını ve kuyruğunu zorla kaldırarak ve sıkıştırarak anestezik derinliği değerlendirin. Ayak parmakları ve kuyruk kaldırıldığında ve sıkıştırıldığında yanıt alınmaması, anestezi derinliğine ulaşıldığını doğrular.
  5. Bebek sıçanın boyun derisini% 75 alkol ile üç kez dezenfekte edin ve deri altı dokusunu ortaya çıkarmak için boyun derisinde uzunlamasına 1 cm'lik bir kesi yapın.
    NOT: Boyun derisinin uzunlamasına kesilmesi cilt defektine neden olmaz.
  6. Sol boynun derisini diseksiyon mikroskobu altında kesin ve sternohyoid kası ve sol sternomastoid kası kör bir şekilde ayırmak için oftalmik cımbız kullanın.
    1. Sol ana karotis arteri ve vagus sinirini bulun ve sol ortak karotis arteri ve vagus sinirini ayırın.
    2. Model grubunda, sol ana karotis arteri elektrikli pıhtılaşma kalemi ile kesin. Boyun kesisini temizleyin ve dikin.
    3. Sham grubunda, sol ortak karotis arteri vagus sinirinden ayırın.
  7. Ameliyattan sonra, bebek faresini 1 saat boyunca resüsitasyon için yüzüstü pozisyonda termostatik su banyosuna yerleştirin.
    NOT: Doğal iyileşmeden sonra, uzuvların ve tüm vücudun ten rengi kırmızıydı. Bebek sıçan uzuvlarını özerk bir şekilde hareket ettirebilir ve bağımsız olarak sürünebilir.
  8. Kontrol ve Tedavi gruplarının resüsitasyona tabi sıçanlarını yüzüstü pozisyonda 37 ° C'de kapalı bir inkübatöre yerleştirin. Hipoksiyi indüklemek için% 5 oksijen ve% 95 azot gazı karışımı ekleyin ve fareleri 2 saat sonra çıkarın.
  9. Hipoksi sürecini tamamlayan bebek fareyi hipoksi kutusundan çıkarın ve normal atmosferik oksijen içeriğine sahip bir kutuya yüzüstü pozisyonda yerleştirin. 1 saat boyunca 37 °C termostatik su banyosuna koyun. Tamamen iyileştikten sonra, bebek fareyi annenin kafesine geri aktarın.
    NOT: Doğal olarak iyileştikten sonra, uzuvların ve tüm vücudun ten rengi kırmızıydı. Bebek sıçan uzuvlarını özerk bir şekilde hareket ettirebilir ve bağımsız olarak emekleyebilir.
  10. Sham grubunun bebek faresini normal atmosferik oksijen içeriğine sahip bir kutuya yerleştirin ve kutuyu 1 saat boyunca 37 ° C termostatik su banyosuna yerleştirin. Tamamen iyileştikten sonra, bebek fareyi beslemek için annenin kafesine geri koyun.
    NOT: Doğal olarak iyileştikten sonra, uzuvların ve tüm vücudun ten rengi kırmızıydı. Bebek sıçan uzuvlarını özerk bir şekilde hareket ettirebilir ve bağımsız olarak emekleyebilir. Tüm operasyon süreci, Yunnan Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi SPF hayvan odasının özel ameliyathanesinde tamamlandı. Resüsitasyon ve hipoksi sırasında, operatör, yanlış duruştan kaynaklanan ölümü önlemek için bebek fareyi her zaman gözlemler. Emziren dişi sıçanlar, Spesifik Patojen İçermeyen (SPF) üreme yemi ile beslendi ve yavrular kendi kendine beslenebildiklerinde, yavrular sütten kesildi (doğum sonrası 21. gün) ve SPF bakım yemi ile beslendi.

2. Doğrultma refleks deneyi

  1. Doğumdan sonraki 4. günde ( modellemeden sonraki 2. gün), modelin başarılı olup olmadığını doğrulamak için doğrultma refleks deneyini gerçekleştirin (Şekil 1 ve Tablo 1).
    1. Bebek farenin kuyruğunu kaldırın, sırtını yatay bir tahtaya yaslayın ve karnını ve boynunu sabitlemek için başparmak ve işaret parmağını kullanın. Sıçanın normal pozisyonuna dönüp dönmediğini kontrol edin. Doğrultma refleksinin kaybı nedeniyle sıçanın anormal pozisyondan normal pozisyona dönememesi başarılı bir model olarak kaydedilmiştir16,22.
    2. Her bir yavru grubunun sırtüstü pozisyondan yüzüstü pozisyona geçmesi için geçen süreyi kaydedin. Başparmak ve işaret parmaklarının sırtüstü pozisyonda aynı anda serbest bırakıldığı zamanı kaydetmeye başlayın, bebek farenin yüzüstü pozisyona dönmesine izin verin ve ön ve arka pençeler yere yerleştirildiğinde kaydı durdurun. Bebek sıçan 20 saniyeden fazla normal pozisyona dönemezse, düzeltme süresini 20 saniye olarak kaydedin.

3. Operasyon öncesi hazırlık

  1. Modellemeden sonra, serebral palsili bebek fareyi annesinden ayırın ve çevreye uyum sağlaması için 2 dakika boyunca 22-26 ° C sabit oda sıcaklığındaki bir ameliyathaneye getirin.
  2. Avuç içini yumuşak ve yumuşak tutmak ve sıcaklığı 36-37 °C arasında tutmak için tek kullanımlık eldivenler giyin.
  3. Fareyi yavaşça sol elin avucuna yerleştirin. Farenin operatörün avucunun ortamına uyum sağlayabilmesi için karanlık bir görüş alanı oluşturmak için farenin gözlerini kapatmak için 2 dakika boyunca farenin gözlerini kapatmak için sol başparmağınızı bükün. Manipülasyon için sağ işaret ve orta parmakları kullanın.
    NOT: Bebek farenin gözlerini kapatmak karanlık bir ortam yaratabilir. Bu, deney sonuçlarını etkileyen güvensiz ve belirsiz ortam nedeniyle bebek faresinin tedirgin olmasını önleyecektir.

4. Sıçanların Kontrol ve Tedavi gruplarına ayrılması

  1. Modellemeden sonraki ikinci gün (P5), modeli doğrultma refleks testi ile doğrulayın ve bebek sıçanları rastgele Kontrol ve Tedavi gruplarına bölün. Tedavi grubunun bebek sıçanlarında seçici spinal manipülasyon gerçekleştirin.
  2. Bebek fareyi yüzüstü pozisyona getirin. Omurganın her zaman düz bir seviyede tutulduğundan emin olun (Şekil 2A).
  3. Sürtünme yöntemi ile omurgaya ve omurganın her iki tarafına 1 dakika masaj yapın ve 5 dakika boyunca omurgaya ve omurganın her iki yanındaki kaslara bastırma ve yoğurma yöntemini kullanın.
    1. Bebek fareyi rahatlatmak ve gerginliğini tamamen azaltmak için sürtünme yöntemini kullanarak her iki taraftaki omurgaya ve cilde masaj yapın. Bebek sıçan sessiz ve ajitasyon olmadan 1 dakika boyunca sürtünme sıklığının 100-120 kez / dak olduğundan emin olun.
      1. Temas yüzeyi olarak sağ işaret parmağını, orta parmağı ve yüzük parmağını kullanın ve deri altı dokusunu rahatsız etmeden servikal omurga, torasik omurga ve lomber omurganın yüzey derisi üzerinde baştan kuyruğa dairesel bir sürtünme hareketi yapın.
      2. Temas yüzeyleri olarak sağ işaret parmağı, orta parmak ve yüzük parmağı ile trapezius kası, yüzeysel gluteus kası, servikal eşkenar dörtgen kas, pektoral eşkenar dörtgen kas, latissimus dorsi kası ve dış eğik kasın cilt yüzeyinde hayvan anatomik standardınagöre baştan kuyruğa doğru dairesel hareket gerçekleştirin 23, deri altı dokusunu rahatsız etmeden.
    2. Omurgayı önce 5 dakika presleyerek ve yoğurarak, ardından omurganın her iki yanındaki kasları 5 dakika boyunca bastırarak ve yoğurarak tedavi edin.
      1. Yoğurma yöntemini omurgaya 5 dk boyunca 120 kez/dk sıklıkta uygulayın. Temas yüzeyi olarak sağ işaret veya orta parmakları kullanın. Baştan kuyruğa, servikal, torasik ve bel omurlarının yüzey derisi üzerinde aşağı doğru bastırma (1.77 ± 0.54 N) ile birlikte dairesel yoğurma yapın. Kuvvetin servikal omurlara, torasik omurlara, bel omurlarına ve supraspinöz bağlara ulaştığından emin olun.
      2. Bastırma ve yoğurma yöntemini omurganın her iki yanındaki kaslara 120 kez/dk frekansında 5 dk süreyle uygulayın. Temas yüzeyi olarak sağ işaret parmağını veya orta parmağı kullanın. Hayvan anatomik standardı23'e göre, trapezius, yüzeysel gluteus, eşkenar dörtgen boyun, eşkenar dörtgen pektoralis, latissimus dorsi ve dış eğik karın kaslarının deri yüzeyini baştan kuyruğa yuvarlak bir yoğurma hareketiyle, 1.77 ± 0.54 N'lik bir kuvvetle bastırın, böylece kuvvet trapezius, yüzeysel gluteus, eşkenar dörtgen boyun, eşkenar dörtgen pektoralis, latissimus dorsi ve eksternal oblik karın kasları (Şekil 2B)23.
  4. Hassas spinal akupunktur noktası noktalarını (Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu ve Feishu24 gibi) 2 dakika boyunca 100-120 kez / dk frekansında bastırın ve yoğurun. Temas yüzeyi olarak sağ işaret parmağını veya orta parmağı kullanarak, serebral palsili bebek sıçanlarda lokal akupunktur noktalarının (Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu ve Feishu gibi) yüzey derisi üzerinde dairesel yoğurma ve aşağı doğru bastırma (1.77 ± 0.54 N) gerçekleştirin.
    NOT: Akupunktur noktaları, Çin Akupunktur Derneği Deneysel Akupunktur Araştırma Şubesi tarafından formüle edilen "Hayvan Akupunktur Noktası Haritası"na göre seçilmiştir) (Şekil 3)25.
  5. Etkilenen uzuvu, 1 dakika boyunca 25 kez / dk frekansında büküm yöntemiyle lokal olarak uyarın.
    1. Sağ başparmağınız ve işaret parmağınızla, serebral palsili bebek farenin etkilenen uzvunu sıkıştırın ve iki parmağa simetrik kuvvet uygulayın. Kuvvetin yumuşak olduğundan ve hareketin hafif ve yumuşak olduğundan emin olun. Sağ ekstansör carpi radialis, ekstansör digitorum ortak, ekstansör carpi ulnaris, falanks, interfalangeal eklem, gastroknemius kası, semitendinosus kası, metatarsal kemik ve bebek sıçanın intermetatarsal eklemini ileri geri ovalayın.
  6. Ovma yöntemini alnın orta hattına beynin arkasına 100-120 kez/dk frekansında 1 dk süreyle uygulayın. Temas yüzeyi olarak sağ işaret parmağını kullanın ve bebek farenin alnından arka beyninin ortasına kadar hayali bir çizgiye (yani bir Baihui, Fengfu ve Dazhui çizgisi) sürtünme yöntemini kullanın (Şekil 3).
    NOT: Masaj esas olarak cilde uygulanır. Serebral palsili bebek farenin başının cilt yüzeyinde dairesel bir harekettir. Serebral palsili bir bebek sıçanın deri altı kas hareketini sürmesine gerek yoktur.
  7. İşlemin sonunda, bebek fareyi anne fare kafesine geri koymadan önce 30 dakika yalnız bırakın.
    NOT: Yaşla birlikte, bebek sıçanların kılları kalınlaşır, bu nedenle deneysel etkiyi etkilememek için masaj işlemi sırasında tüm bebek sıçan gruplarının arka kıllarını çıkarmak gerekir.

5. Lokal akupunktur noktalarının sıcaklığının tespit edilmesi

  1. İşlemden önce ve sonra yerel akupunktur noktası alanının sıcaklığını tespit etmek için bir kızılötesi termal kamera kullanın.
    1. Seçici omurga masajından önce, cep telefonunun Type-C arayüzünü bir veri kablosuyla kızılötesi görüntüleme cihazının USB arayüzüne bağlayın ve Güç düğmesini açın.
    2. Yazılımın cep telefonu terminaline girmek için Analiz Et'e tıklayın, fotoğraf moduna girmek için Fotoğraf'ı seçin ve sağ alt köşedeki Resim Modunda Resim'e tıklayın.
    3. Sıcaklık çekimleri yapmak için kamerayı bebek farenin arkasındaki Dazhui, Xinshu ve Shenshu akupunktur noktalarının (Şekil 3) akupunktur noktası bölgelerine odaklayın. Görüntü yakalamayı tamamlamak için Fotoğraf'a tıklayın ve JPG formatında kaydedin .
    4. Bilgisayarı bir veri kablosuyla bağlayın ve kaydedilen görüntüyü analiz için Fotric yazılımının yüklü olduğu bir bilgisayara yükleyin.
      1. PC'de Fotric yazılımını açın, Yerel Dosyayı açın ve görüntünün konumunu bulun.
      2. Termogram çalışma alanını seçin, analiz edilecek görüntüyü seçin ve analiz arayüzüne girin.
      3. Analiz ekranında, sağdaki Termal görüntü kutusundaki resmi seçin ve Kilidi açın.
      4. Yakınlaştırma İşlevini seçin, Termal görüntünün ve sol kutu Arka Plan görüntüsünün boyutunu çakışacak şekilde ayarlayın ve sağdaki Kilidi kapatın.
      5. Üstteki araç çubuğunda Ölçüm dikdörtgenini ayarla'yı bulun ve şekilde algılanacak akupunktur noktasını işaretleyin.
      6. Sıcaklık değerini kaydetmek için sağdaki Rapor'a tıklayın.

6. Serebral palsili bebek sıçanların motor denge fonksiyonunun saptanması

  1. Doğumdan sonraki 61. günde Sham, Kontrol ve Tedavi gruplarındaki sıçanların motor fonksiyonunu tespit etmek için Davranışsal Rotarod testini19 kullanın.
    1. Parametre ayarları: Güç anahtarını başlatın, bir sonraki adıma geçmek için Deney yap'ı seçin, sonraki adıma girmek için Pozitif, Sıçanlar, Zamanlama 5 dakika'yı seçin ve Acc süresi: 10 s, Hız: 10 rpm'yi seçin.
    2. Ardından, fareleri koşu parkuruna yerleştirin ve sağlam durduktan sonra Çalıştır'a tıklayarak teste başlayın. Her çalıştırmanın çalışma durumunu AÇIK olarak ayarlayın. Her fareyi 5 dakika boyunca bir kez eğitin ve ardından testi üç kez yapmaya başlayın.
    3. Eğitimden sonra, bebek fareleri rotarod koşu parkuruna yerleştirin. Kararlı hale geldikten sonra Çalıştır'a tıklayın ve çalışma durumunu AÇIK olarak ayarlayın. 5 dakikanın sonunda, rotarod koşu parkurundan ilk kez düşen her bir sıçanın zamanını ve hızını, yani Çalışma süresi verilerini kaydetmek için Tarih'i seçin.
  2. Doğumdan sonraki 61. günde Sham, Kontrol ve Tedavi gruplarının sağ ön ayağının denge motor fonksiyonunu değerlendirmek için Ayak hatası testi 20,21'i kullanın.
    1. Bebek fareleri yatay merdivenin başlangıç ucuna yerleştirin ve diğer uca (100 cm uzunluğunda ve her merdiven arasındaki mesafe 2 cm'dir) geçerken bir video kaydedin. Bir eğitim seansından sonra, resmi testi her sıçan için 5 dakikalık aralıklarla üç kez gerçekleştirin.
    2. Puanlama standardında gösterildiği gibi, bir skor yapmak için düşük hızlı oynatma kullanarak hayvan merdiveni geçtiğinde sağ ön ayağı gözlemleyin (Tablo 2).

7. Batı lekeleme

  1. Daha önce tarif edildiği gibi doku örneklerinin western blotlama analizini yapın26.
    NOT: Lizat miktarı doku bloğunun boyutuna göre belirlendi. Kullanılan antikorlar aşağıdaki gibidir: birincil anti-Büyüme Hormonu antikoru (0.5 μg [0.5 ng/lan]); anti-Büyüme Hormonu reseptör antikoru (1/1000); primer antikorlar için dahili referans anti-beta Aktin antikoru (1/2000); İkincil antikor için keçi anti-RabbitIgG H&L (HRP) (1/10000).

8. Elin gücünü tespit etmek

  1. Masaj için kullanılan eldeki manipülasyon kuvvetini tespit etmek için kullanılan cihazı takın. Bebek faresine masaj yapmak için kullanılan parmağınızı cihazın sensör çipi ile takın ve Güç düğmesini açın.
  2. Manuel test yazılımını depolayan sabit disk arayüzünü bilgisayara bağlayın ve URL giriş kutusuna manuel test cihazının özel IP adresini girin.
  3. SpringVR istemcisini bilgisayara kurun, toplama arayüzüne girmek için tıklayın ve manipülasyon kuvvetini test etmek için sağ alt köşedeki Parmak Desenini seçin.
  4. Basınç seçeneğini seçin ve çalışma sırasında operatörün manuel kuvvetini kaydetmeye başlamak için Başlat'a tıklayın. Yazılım, manipülasyonun yoğunluğunu otomatik olarak kaydedecek ve PressureSensor dosya adındaki verilerin bulunacağı yerel diskte bir veri tablosu oluşturacaktır.

9. Veri istatistikleri

NOT: İstatistiksel analizler için SPSS26.0 yazılımı, çubuk grafik üretimi için Graphpad Prism9.0.0 ve protein bantlarının gri değer analizi için Image J yazılımı kullanılmıştır.

  1. Tüm verileri ortalama ± standart sapma (Mean ± SD) olarak analiz edin ve sunun.
    NOT: Test standardı α = 0.05 idi ve P ≤ 0.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi. Verilerin varyans ve normallik analizi ile analiz edilmesi ve normal dağılım özelliklerine ve varyans homojenliğine uygun olması nedeniyle Fisher testi kullanılmıştır.

Sonuçlar

Seçici spinal manipülasyon, serebral palsili bebek sıçanlarda vücut ağırlığı artışını teşvik edebilir.
Tedavi sırasında vücut ağırlığı doğum sonrası 3, 14, 28, 42 ve 61. günlerde ölçüldü (Şekil 4, Tablo 3). Doğumdan sonraki üçüncü günde, Sham grubunun vücut ağırlığı 5.53 ± 0.035 g ve Kontrol grubunun vücut ağırlığı 3.15 ± 0.43 g idi. Tedavi grubunun vücut ağırlığı 4...

Tartışmalar

İskemi ve hipoksi serebral palsinin önemli patojenik faktörleri olduğundan, serebral palsi modelini oluşturmak için uluslararası kabul görmüş yöntem hipoksi ile birleştirilerek serebral palsi modelihazırlanır 16,28,29,30. Serebral palsi geliştiğinde, büyüme hormonu salgılanması31 seviyesi ile ilişkili olabilecek kilo...

Açıklamalar

Yazarların bu çalışma kapsamında rekabet eden herhangi bir finansal veya diğer çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82374614) Genel Programı, Yunnan Eyaleti Bilim ve Teknoloji Departmanı Büyük Biyomedikal Projesi (202102AA100016), Yunnan Eyaleti Bilim ve Teknoloji Bölümü Uygulamalı Temel Araştırma Ortak Büyük Projesi - Yunnan Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi (201901AI070004), Yunnan Eyaleti Kolej ve Üniversitelerinde Ensefalopatinin Önlenmesi ve Tedavisi için Akupunktur, Yakı ve Masaj Anahtar Laboratuvarı (2019YGZ04), Yunnan Eyaleti Bilim ve Teknoloji Bölümü tarafından desteklenmektedir - Yunnan Eyaleti Temel Araştırma Programı Gençlik Projesi (202101AU070002), Yunnan Eyaleti Eğitim Bölümü Bilim Araştırma Fonu Yüksek Lisans Programı, (2023Y0433); Yunnan Eyaleti Eğitim Departmanı Bilimsel Araştırma Vakfı, (2023Y0462).

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
96-well platesBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD11510Determination of protein concentration
Anti-beta Actin antibodyAbacmAb8227Dilution: 1/2000
Anti-Growth Hormone antibodyAbacmAb1268820.5 µg (0.5 ng/lane)
Anti-Growth Hormone receptor antibodyAbacmAb202964Dilution: 1/1000
Basic operating microscopeShanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTDSM-101The common carotid artery was isolated under microscope during modeling
BCA developerBiyuntian Biological Engineering Co., LTDP0010Determination of protein concentration
Chemiluminescence imaging systemShanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., LTD100240073Protein banding imaging
Direct-load Color Prestained MarkerBeijing Kangrunchengye Biotechnology Co., LTD (GenStar)M221Western Blot
DK-30Automatic snow ice makerHenan Brothers instrument equipment Co., LTDSHDX0023Ice-making
ECL luminescent substrate kitBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTDBL520BConvert latent images in exposed film into visible images
Electric-heated thermostatic water bathTAISITE INSTRUMENTDK-98-IIThe young rats were resuscitated after modeling
Electronic scalesKunshan YoukeWEI ELECTRONIC Technology Co. LTDCN-LQC10002The body weight of the young rats was measured
German small white electric coagulation pen hemostatHaohangL55×W125×H37It was used to coagulate the left common carotid artery
GloveJiangsu YANGzi LiDE Medical Device Co. LTDQ/320684 YZYL001-2017For massage operation
GlycineBeijing Soleibao Technology Co., Ltd.Cat#G8200Electrophoretic solution, Configure the transfer fluid
Goat Anti-RabbitIgG H&L (HRP) AbacmAb6721Dilution: 1/10000
Intelligent laboratory ultra-pure water machineChongqing huachuag water treatment engineering co.,LTDN/AFiltration (15 L)
IsofluraneShandong Ante Animal Husbandry Technology Co. LTD15198Anesthesia was maintained by induction in young rats
LinkIRFOTIRCV1.3.2.134Infrared image analysis software
Low temperature high speed tissue grinderWuhan Servicebio technology CO.,LTDSKZ3F20200191Tissue grinding
MethanolGuangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd20220519Configure the transfer fluid
Mini-PROTEAN TetraBole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd552BR 233193Electrophoresis
Multiskan Spectrum Microplate SpectrophotometerTECANSparkThe absorbance and concentration of tissue protein were detected
Pressure-sensing smart glovesJinan Super Sense Intelligent Technology Co. LTDMiigloveIt is used to measure the manipulative strength of the operator
PVDF membraneMerckMillipore Corporation IPVH00010 Western Blot
Refrigerated centrifugeHettich Precision Technology (Zhuhai) Co., LTDMIKRO 220RCentrifuge
Research three-in-one thermal imagerFOTIRC226S (384 x 288)Temperature measurement
RIPA lysateBeijing Solaibao Technology Co., LTD (Solarbio)R0010Lytic tissue
SHA-CA digital display water bath thermostatic oscillatorChangzhou Aohua Instrument Co. LTDSHA-CAYoung rats were used in hypoxia
Six-rat fatigue rotarod apparatusShanghai Duoyi Industry Co., LTDDO01104RT703CP motor function was detected
Skim milk powderGuangzhou Saiguo Biotechnology Co., LTD (BIOFROXX)1172GR500Confining liquid
SPF breeding feedSPF(Beijing)biotechnology co.,Ltd.A1EC30005A1S4285266Lactating female rats were fed
SPF maintenance feedSPF(Beijing)biotechnology co.,Ltd.A1EC30005A1S4285267The pups were fed after weaning
Surgical plateShanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTD51002The model operating table was established in young rats
TS-200 Orbital shakerHaimen Qilin Bell Manufacturing Co., Ltd.TS-8SGel fixation
Tween 80MedChemExpressHY-Y1819Configure TBST 
ZS-MV Portable anesthesia machineZHONGSHI SCIENCE &TECHNOLOGYZS-MV-IAnesthesia was induced and maintained in experimental animals

Referanslar

  1. Paul, S., Nahar, A., Bhagawati, M., Kunwar, A. J. A review on recent advances of cerebral palsy. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. , 2622310 (2022).
  2. Şimşek, T. T., Tuç, G. Examination of the relation between body mass index, functional level and health-related quality of life in children with cerebral palsy. Turk Pediatri Arsivi. 49 (2), 130-137 (2014).
  3. Dahlseng, M. O., et al. Feeding problems, growth and nutritional status in children with cerebral palsy. Acta Paediatrica. 101 (1), 92-98 (2012).
  4. Fogarasi, A., et al. The purple n study: Objective and perceived nutritional status in children and adolescents with cerebral palsy. Disability and Rehabilitation. 44 (22), 6668-6675 (2022).
  5. Xiaojie, L., et al. Epidemiological characteristics of cerebral palsy in twelve province in China. Chinese Journal of Practical Pediatrics Clinical. 33 (5), 378-383 (2018).
  6. Kakooza-Mwesige, A., et al. Prevalence of cerebral palsy in Uganda: A population-based study. The Lancet. Global Health. 5 (12), e1275-1282 (2017).
  7. Korzeniewski, S. J., Slaughter, J., Lenski, M., Haak, P., Paneth, N. The complex aetiology of cerebral palsy. Nature Reviews. Neurology. 14 (9), 528-543 (2018).
  8. Vargus-Adams, J. N., Martin, L. K. Domains of importance for parents, medical professionals and youth with cerebral palsy considering treatment outcomes. Child: Care, Health and Development. 37 (2), 276-281 (2011).
  9. Koy, A., et al. Quality of life after deep brain stimulation of pediatric patients with dyskinetic cerebral palsy: A prospective, single-arm, multicenter study with a subsequent randomized double-blind crossover (stim-cp). Movement Disorders. 37 (4), 799-811 (2022).
  10. Pool, D., Valentine, J., Taylor, N. F., Bear, N., Elliott, C. Locomotor and robotic assistive gait training for children with cerebral palsy. Developmental Medicine and Child Neurology. 63 (3), 328-335 (2021).
  11. Li, J., et al. Evaluating the effects of 5-hz repetitive transcranial magnetic stimulation with and without wrist-ankle acupuncture on improving spasticity and motor function in children with cerebral palsy: A randomized controlled trial. Frontiers In Neuroscience. 15, 771064 (2021).
  12. Chen, K., Shu, S., Yang, M., Zhong, S., Xu, F. Meridian acupuncture plus massage for children with spastic cerebral palsy. American Journal of Translational Research. 13 (6), 6415-6422 (2021).
  13. Gao, J., et al. Rehabilitation with a combination of scalp acupuncture and exercise therapy in spastic cerebral palsy. Complementary Therapies in Clinical Practice. 35, 296-300 (2019).
  14. Chen, Z., et al. Effects of traditional Chinese medicine combined with modern rehabilitation therapies on motor function in children with cerebral palsy: A systematic review and meta-analysis. Frontiers In Neuroscience. 17, 1097477 (2023).
  15. Zhang, Y., et al. Tuina massage improves cognitive functions of hypoxic-ischemic neonatal rats by regulating genome-wide DNA hydroxymethylation levels. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: ECAM. 2019, 1282085 (2019).
  16. Zhang, P., et al. Chinese tuina protects against neonatal hypoxia-ischemia through inhibiting the neuroinflammatory reaction. Neural Plasticity. 2020, 8828826 (2020).
  17. Niu, F., et al. Spinal tuina improves cognitive impairment in cerebral palsy rats through inhibiting pyroptosis induced by nlrp3 and caspase-1. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: ECAM. 2021, 1028909 (2021).
  18. Bowen, Z., Guangyi, X., Qian, Z., Xueping, H., Xiantao, T. Time-dose effect of spinal manipulation on growth and motor function in infant rat with cerebral palsy. Shi Zhen National Medicine and National Medicine. 28 (09), 2274-2277 (2017).
  19. Yang, L. J., Cui, H. Olig2 knockdown alleviates hypoxic-ischemic brain damage in newborn rats. Histology and Histopathology. 36 (6), 675-684 (2021).
  20. Martins, L. A., Schiavo, A., Xavier, L. L., Mestriner, R. G. The foot fault scoring system to assess skilled walking in rodents: A reliability study. Frontiers in Behavioral Neuroscience. 16, 892010 (2022).
  21. Li, S., et al. Plxna2 knockdown promotes m2 microglia polarization through mtor/stat3 signaling to improve functional recovery in rats after cerebral ischemia/reperfusion injury. Experimental Neurology. 346, 113854 (2021).
  22. Wei, W., et al. Neuroprotective effect of verbascoside on hypoxic-ischemic brain damage in neonatal rat. Neuroscience Letters. 711, 134415 (2019).
  23. Taiyi, W., Ziyu, H. . Anatomical Atlas of Experimental Animals in Chinese and English. , (2000).
  24. Na, X. . Study on the sensitization rule of dorsal acupoints in children with spastic cerebral palsy based on infrared thermal imaging technology and the effect of massage intervention. , (2021).
  25. China Association for Acupuncture and Moxibustion. Names and localization of commonly used acupoints in laboratory animals Part 2: Rats. Acupuncture Research. 46 (04), 351-352 (2021).
  26. Yinghua, S., Xiantao, T. Effect of spinal manipulation on the expression of growth hormone and its receptor protein in hypothalamus of infant rat with cerebral palsy. Sichuan Traditional Chinese Medicine. 39 (02), 55-59 (2021).
  27. Qi, H., et al. Effect of spinal manipulation on learning and memory in infant rat with cerebral palsy and its mechanism. Guide to Traditional Chinese Medicine. 24 (11), 36-39 (2018).
  28. Tai, W. -. C., Burke, K. A., Dominguez, J. F., Gundamraj, L., Turman, J. E. Growth deficits in a postnatal day 3 rat model of hypoxic-ischemic brain injury. Behavioural Brain Research. 202 (1), 40-49 (2009).
  29. Huang, L., et al. Animal models of hypoxic-ischemic encephalopathy: Optimal choices for the best outcomes. Reviews In the Neurosciences. 28 (1), 31-43 (2017).
  30. Lyu, H., et al. A new hypoxic-ischemic encephalopathy model in neonatal rats. Heliyon. 7 (12), e08646 (2021).
  31. Hegazi, M. A., et al. Growth hormone/insulin-like growth factor-1 axis: A possible non-nutritional factor for growth retardation in children with cerebral palsy. Jornal de Pediatria. 88 (3), 267-274 (2012).
  32. Boboc, I. K. S., et al. A preclinical systematic review and meta-analysis of behavior testing in rat models of ischemic stroke. Life. 13 (2), 567 (2023).
  33. Lubrich, C., Giesler, P., Kipp, M. Motor behavioral deficits in the cuprizone model: Validity of the rotarod test paradigm. International Journal of Molecular Sciences. 23 (19), 11342 (2022).
  34. Tan, Y., et al. Vof-16 knockout improves the recovery from hypoxic-ischemic brain damage of neonatal rats. Brain Research. 1748, 147070 (2020).
  35. Xiantao, T., Pengyue, Z., Xinghe, Z. Construction and application of selective spinal manipulation in the treatment of children with cerebral palsy. China's Scientific and Technological Achievements. 23 (9), 1-2 (2022).
  36. Matos, L. C., Machado, J., Greten, H. J., Monteiro, F. J. Changes of skin electrical potential in acupoints from ren mai and du mai conduits during qigong practice: Documentation of a clinical phenomenon. Journal of Bodywork and Movement Therapies. 23 (4), 713-720 (2019).
  37. Levkovets, I. L., Kiryanova, V. V. Systemic and pathogenetic approach: A new look at traditional Chinese medicine. Voprosy Kurortologii, Fizioterapii, I Lechebnoi Fizicheskoi Kultury. 99 (1), 80-88 (2022).
  38. Efferth, T., Xu, A. -. L., Lee, D. Y. W. Combining the wisdoms of traditional medicine with cutting-edge science and technology at the forefront of medical sciences. Phytomedicine: International Journal of Phytotherapy and Phytopharmacology. 64, 153078 (2019).
  39. Zhang, Z., et al. Correlated sensory and sympathetic innervation between the acupoint bl23 and kidney in the rat. Frontiers In Integrative Neuroscience. 14, 616778 (2020).
  40. Zhu, X., et al. Effects of electroacupuncture at st25 and bl25 in a sennae-induced rat model of diarrhoea-predominant irritable bowel syndrome. Acupuncture In Medicine: Journal of the British Medical Acupuncture Society. 35 (3), 216-223 (2017).
  41. Gimarc, K., Yandow, S., Browd, S., Leibow, C., Pham, K. Combined selective dorsal rhizotomy and single-event multilevel surgery in a child with spastic diplegic cerebral palsy: A case report. Pediatric Neurosurgery. 56 (6), 578-583 (2021).
  42. Zhang, W. -. B., Wang, Y. -. P., Li, H. -. Y. Analysis on correlation between meridians and viscera in book the yellow emperor's internal classic. Acupuncture Research. 43 (7), 424-429 (2018).
  43. Wang, Y. -. P., Hou, X. -. S. Discussion on the classification of acupoints. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 39 (10), 1069-1072 (2019).
  44. Chen, R. -. X., Kang, M. -. F. Clinical application of acupoint heat-sensitization. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 27 (3), 199-202 (2007).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

Serebral PalsiBebek S anlarSe ici Spinal Manip lasyonGeleneksel in T bbTCM Harici TerapiMasaj TerapisiKilo Al mMotor FonksiyonB y me HormonuRotarod TestiAyak Hata SkoruTedavi Etkinli i

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır